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Mitsraria sp.1412产壳聚糖酶的分离纯化及性质研究 预览
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作者 尹雅洁 谭光迅 胡远亮 《湖北师范大学学报:自然科学版》 2019年第1期70-75,共6页
以实验室选育的Mitsuariasp.1412菌株发酵产壳聚糖酶,采用硫酸铵分级沉淀,表明沉淀饱和度为60%~90%效果较好,壳聚糖酶纯化倍数达1.85倍。然后依次采用离心超滤、离子交换层析和SephadexG-200凝胶柱层析进行纯化。SDS-PAGE凝胶电泳检测表... 以实验室选育的Mitsuariasp.1412菌株发酵产壳聚糖酶,采用硫酸铵分级沉淀,表明沉淀饱和度为60%~90%效果较好,壳聚糖酶纯化倍数达1.85倍。然后依次采用离心超滤、离子交换层析和SephadexG-200凝胶柱层析进行纯化。SDS-PAGE凝胶电泳检测表明,产物仅有一条清晰的条带,显示该壳聚糖酶的分子量为33.6kD.酶学性质结果表明,该酶的最适反应pH和温度分别为5.5、50℃,并且该酶在pH5.0~8.0和35~45℃范围内,稳定性良好。酶最大反应速度Vmax为2.8μmol/min,常数Km为168.4mmol/L.对该酶的酶解产物进行分析发现其酶解产物为壳二糖和壳三糖。 展开更多
关键词 壳聚糖 壳聚糖酶 分离纯化 酶学性质 SephadexG-200凝胶柱层析 SDS-PAGE凝胶电泳
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盐法结合两步分级沉淀法提取辣木籽蛋白质工艺优化
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作者 赵琼 陈越 +3 位作者 施亚楠 赵存朝 王雪峰 黄艾祥 《食品工业》 CAS 北大核心 2019年第8期19-24,共6页
以脱脂辣木籽粉为原料,分析辣木籽盐提液中蛋白质的酸碱沉淀条件,在单因素试验基础上结合响应面法优化辣木籽蛋白质的提取工艺条件,通过SDS-PAGE凝胶电泳试验测定该条件下蛋白质提取物的分子量分布情况。结果表明,辣木籽蛋白质的酸沉pH... 以脱脂辣木籽粉为原料,分析辣木籽盐提液中蛋白质的酸碱沉淀条件,在单因素试验基础上结合响应面法优化辣木籽蛋白质的提取工艺条件,通过SDS-PAGE凝胶电泳试验测定该条件下蛋白质提取物的分子量分布情况。结果表明,辣木籽蛋白质的酸沉pH为4.3、碱沉pH为11.0,盐法结合两步分级沉淀法提取辣木籽蛋白质的最佳工艺条件为:NaCl浓度0.2 mol/L、料液比1︰64 g/mL、温度30℃、水浴浸提时间90 min,在此条件下辣木籽蛋白质提取率为65.19%,蛋白质纯度达到86.57%。电泳图显示该蛋白质提取物中酸沉蛋白和碱沉蛋白的分子量在15 kDa、35 kDa、40~60 kDa都有分布,但分子量在25 kDa、35~40 kDa存在较大差异。研究结果为辣木籽蛋白质的进一步开发利用提供参考。 展开更多
关键词 辣木籽蛋白质 盐法 酸碱沉淀 SDS-PAGE凝胶电泳
正常和早熟雄性河蟹副性腺蛋白和血淋巴中17β-雌二醇及睾酮浓度的比较 预览
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作者 潘颖 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期35-39,共5页
采用常规生物技术方法,比较分析和测定正常(体质量20~30g)和早熟(95~130g)雄性河蟹Eriocheir sinensis的副性腺蛋白和血淋巴中17β-雌二醇和睾酮浓度的差异。结果表明,正常雄性河蟹和早熟雄性河蟹的副性腺中蛋白质的种类无明显... 采用常规生物技术方法,比较分析和测定正常(体质量20~30g)和早熟(95~130g)雄性河蟹Eriocheir sinensis的副性腺蛋白和血淋巴中17β-雌二醇和睾酮浓度的差异。结果表明,正常雄性河蟹和早熟雄性河蟹的副性腺中蛋白质的种类无明显差异,但是,早熟雄性河蟹副性腺中分子量在66.4~97.2kDa的蛋白表达量明显少于正常雄性河蟹。早熟雄性河蟹血淋巴中睾酮和17β-雌二醇的浓度显著低于正常雄性河蟹。分子量在66.4~97.2kDa间的河蟹副性腺蛋白质、睾酮及17β-雌二醇含量低可能是雄性河蟹性早熟的重要原因之一。 展开更多
关键词 河蟹 性早熟 副性腺 血淋巴 SDSPAGE凝胶电泳
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鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的SDS-PAGE凝胶电泳比较研究
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作者 高建蓉 胡祖良 +3 位作者 施静妮 唐尹萍 刘焱文 胡春玲 《中国药师》 CAS 2017年第9期1543-1544,1563共3页
目的:探讨鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的差异,为鳖甲药材的临床用药提供依据。方法:运用SDS-PAGE技术,对生鳖甲与醋鳖甲活性部位进行分析比较;采用MTT比色法测定生鳖甲与醋鳖甲对HSC-T6增殖的影响。结果:炮制后的醋鳖甲所含成分... 目的:探讨鳖甲炮制前后抗肝纤维化活性部位的差异,为鳖甲药材的临床用药提供依据。方法:运用SDS-PAGE技术,对生鳖甲与醋鳖甲活性部位进行分析比较;采用MTT比色法测定生鳖甲与醋鳖甲对HSC-T6增殖的影响。结果:炮制后的醋鳖甲所含成分增多,一级谱带相对分子质量降低,导致小分子肽类物质产生;生鳖甲和醋鳖甲均具有抗肝纤维化的作用,但醋鳖甲的药效优于生鳖甲。结论:鳖甲炮制前后活性部位明显差异,为临床选择用药及进一步活性成分研究提供依据。 展开更多
关键词 鳖甲 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 活性部位
Separation and Purification of GST-glycerol-3 -phosphate Dehydrogenase 预览
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作者 Hongmei ZHAO Shihai LI Yasuo WATANABE 《农业生物技术:英文版》 CAS 2016年第5期44-45,共2页
In order to investigate the expression of glycerol-3-phosphate dehydrogenase by GCY1 gene in recombinant Saccharomyces cerevisiae,induction culture of the S.cerevisiaestrain was performed with SD-URA 2% galactose,3 &#... In order to investigate the expression of glycerol-3-phosphate dehydrogenase by GCY1 gene in recombinant Saccharomyces cerevisiae,induction culture of the S.cerevisiaestrain was performed with SD-URA 2% galactose,3 × YP + 6% glucose,SC-URA 2% galactose,and SC-URA 2% galactose + 5% Na Cl glycerol-3-phosphate dehydrogenase,the cultured S.cerevisiaewas comminuted followed by full-automatic high-speed purification,and SDS-PAGE gel electrophoresis was performed for molecular weight of the GST fusion protein.The results showed that after shaking culture of the S.cerevisiae containing GCY1 at 25 ℃,the OD values of its 3 × YP + 6% glucose culture and SC-URA 2% galactose + 5% Na Cl culture were 8.75 and 7.35,respectively.It was shown by purification with a Profinia low-pressure liquid chromatograph that only the S.cerevisiae cultured in SC-URA 2% galactose + 5% Na Cl medium expressed glycerol-3-phosphate dehydrogenase,the molecular weight of which was detected as 65 ku by SDS-PAGE gel electrophoresis. 展开更多
关键词 磷酸脱氢酶 酶的纯化 SDS-PAGE 重组酿酒酵母 NACL介质 GST融合蛋白 分离 诱导培养
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蚕丝丝素肽的制备及其自由基清除性能的研究 预览
6
作者 张凯 宋希雨 谢孔良 《丝绸》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1-6,共6页
丝素肽是蚕丝蛋白的基本组成成分,在纺织品功能整理和生物技术领域有重要的潜在应用。采用三元溶剂溶解法和蛋白酶Alcalase水解法将蚕丝水解制得一定相对分子质量的丝素肽,以茚三酮比色法和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-P... 丝素肽是蚕丝蛋白的基本组成成分,在纺织品功能整理和生物技术领域有重要的潜在应用。采用三元溶剂溶解法和蛋白酶Alcalase水解法将蚕丝水解制得一定相对分子质量的丝素肽,以茚三酮比色法和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定Alcalase蛋白酶法水解丝素的水解度及制得的丝素肽的相对分子质量分布。通过正交试验,确定的Alcalase酶法水解家蚕丝最佳工艺为:蚕丝丝素质量分数4%,酶与底物质量比为2.0%,p H值8,水解温度55℃,时间6 h。酶水解最佳工艺下水解产物的水解度为18.3%,得到的丝素肽相对分子质量分布在5-14 k D。文章研究了丝素肽对2,2-联苯基-1-苦基肼自由基(DPPH)的清除性能,其对DPPH自由基的清除率为50%时,丝素肽的质量-体积浓度为1.85 mg/m L,丝素肽表现出良好的自由基清除功能。研究为开发丝素肽功能材料提供了一定的理论基础。 展开更多
关键词 丝素蛋白 水解度 茚三酮比色法 SDSPAGE凝胶电泳 自由基消除
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菜籽分离蛋白分子质量分布及酶解条件的研究 预览 被引量:4
7
作者 高瑀珑 郑锐 +3 位作者 王玉梅 王立峰 鞠兴荣 袁建 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第6期38-45,共8页
以脱脂“双低”油菜籽为原料,利用碱溶解酸沉淀法提取菜籽分离蛋白;用SDS—PAGE凝胶电泳研究菜籽蛋白的分子质量的组成;以水解度和氮回收率为考察指标,用响应面分析法拟合了Alcalase 2.4L酶解菜籽蛋白成菜籽肽的二次多项数学模型... 以脱脂“双低”油菜籽为原料,利用碱溶解酸沉淀法提取菜籽分离蛋白;用SDS—PAGE凝胶电泳研究菜籽蛋白的分子质量的组成;以水解度和氮回收率为考察指标,用响应面分析法拟合了Alcalase 2.4L酶解菜籽蛋白成菜籽肽的二次多项数学模型,优化了酶解菜籽分离蛋白的工艺参数。SDS—PAGE凝胶电泳研究表明利用碱溶解酸沉淀提取的菜籽分离蛋白主要是2s清蛋白。响应面分析法研究的试验结果表明,酶的使用量、pH、酶解温度、酶的使用量与pH的交互作用对Alcalase 2.4L酶解菜籽蛋白的水解度和氮回收率的影响均显著(P〈0.05)。通过求解菜籽肽的二次多项数学模型的逆矩阵方程,可得Alcalase 2.4L水解菜籽分离蛋白的最佳条件为:酶的使用量0.05Au/g,pH9.0,酶解温度54℃;在此酶解条件下,菜籽分离蛋白浓度为5%时,水解5h,所得的水解度和氮回收率分别为35.12%及52.96%。 展开更多
关键词 菜籽分离蛋白 SDSPAGE电泳 酶解 水解度 氮回收率 响应面法
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几种SDS-PAGE凝胶电泳染色方法的比较 预览 被引量:6
8
作者 林方养 杨耀东 +3 位作者 万婕 谢志皓 马子龙 吴翼 《安徽农业科学》 CAS 2014年第8期2295-2296,共2页
[目的]对几种SDS-PAGE凝胶电泳染色方法进行比较.[方法]从凝胶背景颜色、染色时间及灵敏度的角度对6种SDS-PAGE凝胶电泳快速染脱色方法进行比较研究,并对适用于椰子和油棕总蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳的实用方法进行总结.[结果]方法F最陕速... [目的]对几种SDS-PAGE凝胶电泳染色方法进行比较.[方法]从凝胶背景颜色、染色时间及灵敏度的角度对6种SDS-PAGE凝胶电泳快速染脱色方法进行比较研究,并对适用于椰子和油棕总蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳的实用方法进行总结.[结果]方法F最陕速,条带清晰,染料及试剂都较少,是一种经济、快速、安全、实用的染色方法,整个过程仅需1h左右.[结论]试验比较了几种SDS-PAGE凝胶电泳染色方法,对进一步开展椰子和油棕蛋白质组学研究具有重要意义. 展开更多
关键词 SDS-PAGE凝胶电泳 染色方法 比较
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大豆粕蛋白酶酶解条件和产物分析研究 预览 被引量:6
9
作者 刘文斌 王恬 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期 47-50,共4页
以水解度为衡量指标,通过正交试验设计,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和As1.398蛋白酶酶解大豆粕的最佳水解条件进行了筛选.试验结果表明:木瓜蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH7.0、温度60℃、时间5 h、酶浓度5%.胰蛋白酶水解大豆粕的最佳条件... 以水解度为衡量指标,通过正交试验设计,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和As1.398蛋白酶酶解大豆粕的最佳水解条件进行了筛选.试验结果表明:木瓜蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH7.0、温度60℃、时间5 h、酶浓度5%.胰蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH7.0、温度50℃、时间7 h、酶浓度5%;As1.398蛋白酶水解大豆粕的最佳条件为pH6.5、温度50℃、时间7 h、酶浓度5%.对酶解产物进行超滤和SDS-PAGE电泳分析表明,因酶解条件不同,大豆粕酶解产物中蛋白质和肽的组成及其数量也不同;酶的种类不同,大豆粕酶解产物组成也不同;大豆粕水解度越高,其酶解产物中小分子肽数量越多. 展开更多
关键词 大豆粕 蛋白酶 酶解条件 酶解产物 SDS-PAGE电泳
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大豆种子贮藏蛋白11S和7S组分的研究 预览 被引量:13
10
作者 黄丽华 麻浩 +1 位作者 王显生 崔国贤 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期 20-23,共4页
利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了我国122份大豆品种种子贮藏蛋白组分11S和7S的含量及11S/7S比值.11S在两种球蛋白中所占百分含量为40.67%~72.07%,平均值为60.84%,7S为27.93%~59.33%,平均值为39.16%,两者含量呈显著负相关(r=-0.95**... 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了我国122份大豆品种种子贮藏蛋白组分11S和7S的含量及11S/7S比值.11S在两种球蛋白中所占百分含量为40.67%~72.07%,平均值为60.84%,7S为27.93%~59.33%,平均值为39.16%,两者含量呈显著负相关(r=-0.95**);11S/7S比值范围为0.69~2.58,平均值为1.61,且与种子的总蛋白量、脂肪含量无显著相关. 展开更多
关键词 大豆种子 贮藏蛋白 11S组分 7S组分 含量 比值 聚丙烯酰胺凝胶电泳
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SDS-PAGE凝胶电泳法对不同种鹿茸蛋白质差异化研究 被引量:7
11
作者 朱云飞 初正云 李洪江 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2017年第6期48-51,共4页
目的:利用电泳方法研究市场上药典规定品种的鹿茸饮片及其混淆品中蛋白质的差异,为鹿茸的免疫鉴定技术研究提供研究依据。方法:采用蛋白溶解液法提取各鹿茸蛋白,以牛血清蛋白为对照,利用Bradford法测定鹿茸水溶性蛋白的浓度,利用SDS-P... 目的:利用电泳方法研究市场上药典规定品种的鹿茸饮片及其混淆品中蛋白质的差异,为鹿茸的免疫鉴定技术研究提供研究依据。方法:采用蛋白溶解液法提取各鹿茸蛋白,以牛血清蛋白为对照,利用Bradford法测定鹿茸水溶性蛋白的浓度,利用SDS-PAGE凝胶电泳法分析花鹿茸、马鹿、新西兰赤鹿及驯鹿的蛋白差异。结果:用7.5%分离胶系统分离花鹿茸、新西兰马鹿、马鹿及驯鹿的水溶性蛋白,四者蛋白条带有差异。结论:利用SDSPAGE凝胶电泳法考察不同品种鹿茸的蛋白差异,为不同品种鹿茸的定性研究提供依据和研究基础。 展开更多
关键词 鹿茸 水溶性蛋白 Bradford法 SDS-PAGE凝胶电泳法
地特胰岛素高分子蛋白质定性和定量分析 被引量:2
12
作者 辛中帅 苑方圆 +1 位作者 吕萍 梁成罡 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1033-1037,共5页
目的: 探索和建立地特胰岛素高分子蛋白质的定性和定量分析测定方法。 方法: 采用Tricine SDS-PAGE凝胶电泳有效地分离地特胰岛素中的高分子蛋白质组分,确定高分子蛋白质的主要组成形式;采用分子排阻色谱法分离地特胰岛素单体以及... 目的: 探索和建立地特胰岛素高分子蛋白质的定性和定量分析测定方法。 方法: 采用Tricine SDS-PAGE凝胶电泳有效地分离地特胰岛素中的高分子蛋白质组分,确定高分子蛋白质的主要组成形式;采用分子排阻色谱法分离地特胰岛素单体以及高分子蛋白质,并对高分子蛋白质进行准确定量。 结果: 确定了地特胰岛素中高分子蛋白质的主要形式为二聚体和寡聚体,建立的分子排阻色谱法可准确地测定地特胰岛素中高分子蛋白质的含量,并考察了高分子蛋白质产生的主要因素以及国内外产品的高分子蛋白质含量。 结论: 建立的方法可快速有效地对地特胰岛素高分子蛋白质进行定性和定量分析,可作为地特胰岛素的质量研究和质控分析方法。 展开更多
关键词 地特胰岛素 高分子蛋白质 二聚体 寡聚体 Tricine聚丙烯酰胺凝胶电泳 分子排阻色谱法
猪皮胶原蛋白在模拟腌肉制品中的应用 预览
13
作者 赵颖 郝立静 《中国食品添加剂》 CAS 2019年第5期96-100,共5页
为探讨猪皮胶原蛋白在肉制品中的应用价值,通过蒸煮损失率测定、质构测定、感官评价和凝胶电泳等分析方法,综合评价猪皮胶原蛋白对模拟腌肉制品品质的影响。实验结果表明:将猪皮胶原蛋白、TGase添加到模拟腌肉制品中,随着出品率不断提高... 为探讨猪皮胶原蛋白在肉制品中的应用价值,通过蒸煮损失率测定、质构测定、感官评价和凝胶电泳等分析方法,综合评价猪皮胶原蛋白对模拟腌肉制品品质的影响。实验结果表明:将猪皮胶原蛋白、TGase添加到模拟腌肉制品中,随着出品率不断提高,模拟腌肉制品的硬度(p<0.01)、弹性(p<0.01)和咀嚼度(p<0.05)逐渐下降,黏聚性和回复性先降低在回升。结合质构结果和感官评价可得出样品质构强度由大到小依次排序为:2号>3号>4号>5号>1号>6号,其对应的出品率分别为122.7%>128.7%>133.7%>138.7%>122.5%>143.7%。所有组别的模拟腌肉制品a*值差异不显著。经SDS-PAGE变性凝胶电泳分析,TGase可使模拟腌肉制品中的肉蛋白与猪皮胶原蛋白发生交联,形成了新的蛋白质分子。因此,添加猪皮胶原蛋白和TGase,可以提高模拟腌肉制品的出品率,改善出品率增加所造成的质构和口感不佳,同时降低蒸煮损失率。 展开更多
关键词 猪皮胶原蛋白 谷氨酰胺转胺酶 TPA a^*值 SDS-PAGE变性凝胶电泳
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优化海兔肝蛋白质组提取与分离技术 预览 被引量:9
14
作者 李志丹 包晓东 +1 位作者 黄慧英 黄河清 《厦门大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B05期 194-197,共4页
为了提高海兔肝脏蛋白质组的提取及研究效率,本文描述和比较了3种提取海兔肝脏蛋白质组的方法:裂解液浸泡-超速离心,丙酮-TCA沉淀-裂解液浸泡,裂解液浸泡-丙酮-TCA-裂解液溶解.然后采用常规SDS-PAGE双向电泳对提取出的蛋白质进行... 为了提高海兔肝脏蛋白质组的提取及研究效率,本文描述和比较了3种提取海兔肝脏蛋白质组的方法:裂解液浸泡-超速离心,丙酮-TCA沉淀-裂解液浸泡,裂解液浸泡-丙酮-TCA-裂解液溶解.然后采用常规SDS-PAGE双向电泳对提取出的蛋白质进行检验,用Melanie 4 Trial软件分析电泳图谱,通过对蛋白质分辨率和斑点总数的比较,选出一种更适合海兔肝蛋白质的提取方法.结果表明采用丙酮-TCA沉淀-裂解液浸泡法提取海兔肝蛋白质所得的双向电泳图谱不论从蛋白质斑点分辨率还是总数上都优于其他两种方法,更适合提取分离海兔肝脏蛋白质. 展开更多
关键词 海兔肝 SDS-PAGE双向电泳 提取与分离 优化分离 蛋白质组
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