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Rab7表达载体的构建及功能鉴定 预览
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作者 李舒康 刘强 +2 位作者 李海霞 景海霞 李慎秋 《中国麻风皮肤病杂志》 2019年第5期257-259,272共4页
目的:构建人Rab7与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达载体,研究其对黑素代谢的影响。方法:分离人外周血淋巴细胞,提取细胞总RNA,逆转录成cDNA,以特异性引物扩增Rab7片段,酶切后连接至EGFP-C1载体并转化至感受态大肠杆菌中,测序分析以确... 目的:构建人Rab7与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达载体,研究其对黑素代谢的影响。方法:分离人外周血淋巴细胞,提取细胞总RNA,逆转录成cDNA,以特异性引物扩增Rab7片段,酶切后连接至EGFP-C1载体并转化至感受态大肠杆菌中,测序分析以确定表达载体构建正确。将构建成功的重组质粒转染A375细胞,检测细胞黑素合成酶的表达水平和黑素含量的变化情况。结果:EGFP-Rab7重组质粒经测序鉴定构建正确。重组质粒转染A375细胞后,细胞中的酪氨酸酶(TYR)和酪氨酸酶相关蛋白1(TYPR1)表达水平和细胞黑素含量高于空载质粒组。结论:本研究成功构建了EGFP-Rab7融合表达载体,其可增加细胞中的黑素合成酶表达水平和细胞黑素含量。 展开更多
关键词 Rab7 融合表达载体 亚细胞定位 黑素代谢
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版纳微型猪近交系B4GALNT2基因真核表达载体构建及亚细胞定位分析 预览
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作者 王淑燕 宋雪 +6 位作者 王配 霍海龙 张霞 张永云 李罗刚 王雪飞 霍金龙 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期215-220,共6页
【目的】研究异种器官移植免疫排斥相关基因B4GALNT2的亚细胞定位情况。【方法】以版纳微型猪近交系(BMI)为试验对象,通过RT-PCR方法获得B4GALNT2基因cDNA序列,运用分子克隆技术构建B4GALNT2和报告基因EGFP的重组真核表达载体pEGFP-C1-B... 【目的】研究异种器官移植免疫排斥相关基因B4GALNT2的亚细胞定位情况。【方法】以版纳微型猪近交系(BMI)为试验对象,通过RT-PCR方法获得B4GALNT2基因cDNA序列,运用分子克隆技术构建B4GALNT2和报告基因EGFP的重组真核表达载体pEGFP-C1-B4GALNT2,将其转染猪肾上皮细胞PK15进行瞬时表达,同时用MitoTracker和Hoechst33342荧光染料分别对线粒体和细胞核染色,通过EGFP示踪检测B4GALNT2在PK15细胞中的表达和定位。【结果】成功构建了BMIB4GALNT2基因的绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-C1-B4GALNT2,转染PK15细胞后主要在细胞质中检测到绿色荧光蛋白的表达,试验结果与PSORT Ⅱ server网站的预测一致。【结论】B4GALNT2蛋白主要定位于细胞质,揭示该蛋白主要在细胞质中发挥其功能作用。 展开更多
关键词 版纳微型猪近交系 β1 4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(B4GALNT2) Sda抗原 真核表达 亚细胞定位
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丹参3个R2R3-MYB转录因子的亚细胞定位和自激活活性分析 预览
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作者 丁恺 麻鹏达 +3 位作者 贾彦彦 裴天林 白朕卿 梁宗锁 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期586-594,共9页
R2R3-MYB转录因子能够有效调控丹参酚酸类物质的积累。将丹参的SmMYB33、SmMYB54和SmMYB93与拟南芥的R2R3-MYB进行比对,找到拟南芥中与丹参3个转录因子亲缘关系最近的功能已知的转录因子,根据这些功能已知的转录因子,对丹参3个转录因子... R2R3-MYB转录因子能够有效调控丹参酚酸类物质的积累。将丹参的SmMYB33、SmMYB54和SmMYB93与拟南芥的R2R3-MYB进行比对,找到拟南芥中与丹参3个转录因子亲缘关系最近的功能已知的转录因子,根据这些功能已知的转录因子,对丹参3个转录因子的功能进行预测。构建含有绿色荧光报告基因的载体pA7-GFP-SmMYB33、pA7-GFP-SmMYB54和pA7-GFP-SmMYB93,使用基因枪方法将载体分别转化洋葱表皮细胞进行亚细胞定位分析,结果表明3个转录因子主要定位在细胞核,绿色荧光也有少部分出现在细胞质中。构建酵母表达载体pDEST-GBKT7-SmMYB33、pDEST-GBKT7-SmMYB54和pDESTGBKT7-SmMYB93用于酵母自激活活性分析,结果表明SmMYB33有自激活活性,SmMYB54和SmMYB93没有自激活活性。 展开更多
关键词 丹参 R2R3-MYB转录因子 二级结构分析 亚细胞定位 自激活活性分析
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银杏GbERF1转录因子基因的克隆及亚细胞定位分析 被引量:2
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作者 李泽宏 袁红慧 +3 位作者 程华 李琳玲 冯如 程水源 《北方园艺》 北大核心 2018年第3期92-100,共9页
ERF是植物中一类重要的转录因子,广泛参与植物对生物和非生物胁迫的响应。以3年生银杏苗为试材,采用RT-PCR与RACE-PCR方法,研究了银杏ERF基因序列,以期深入了解银杏药用成分合成代谢的分子机理。结果表明:GbERF1含有长度为1 314bp的完... ERF是植物中一类重要的转录因子,广泛参与植物对生物和非生物胁迫的响应。以3年生银杏苗为试材,采用RT-PCR与RACE-PCR方法,研究了银杏ERF基因序列,以期深入了解银杏药用成分合成代谢的分子机理。结果表明:GbERF1含有长度为1 314bp的完整开放阅读框,编码437个氨基酸。蛋白序列分析显示,GbERF1蛋白含有2段ERF家族的特殊位点。GbERF1蛋白序列与北美云杉(ADE75663.1)序列的相似性为97%。系统进化树分析,GbERF1与北美云杉、狭叶羽扇豆的序列可划归为同一分支。实时荧光定量PCR结果显示,GbERF1主要在银杏根和叶中表达,逆境胁迫处理后显示,该基因在乙烯、紫外诱导处理下,表达量大幅度提升,随后下降,但仍高于对照组,干旱诱导处理下表达量先升高后降低,矮壮素(CCC)诱导下表达量变化不太明显。烟草叶片下表皮细胞亚细胞定位结果表明GbERF1定位于细胞核。 展开更多
关键词 银杏 ERF转录因子 荧光定量分析 亚细胞定位
查耳酮异构酶在葡萄果实发育过程中的表达及亚细胞定位研究
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作者 王慧玲 王伟 +4 位作者 闫爱玲 孙磊 张国军 王晓玥 徐海英 《园艺学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1477-1485,共9页
以‘赤霞珠’葡萄果实为材料,利用制各好的葡萄查耳酮异构酶(CHI;EC5.5.1.6)CHI多克隆抗体,采用RT-PCR、蛋白质印记杂交和胶体金免疫电镜技术对葡萄果实发育过程中CHI基因、蛋白表达及亚细胞定位进行了研究。结果表明:CHI基因... 以‘赤霞珠’葡萄果实为材料,利用制各好的葡萄查耳酮异构酶(CHI;EC5.5.1.6)CHI多克隆抗体,采用RT-PCR、蛋白质印记杂交和胶体金免疫电镜技术对葡萄果实发育过程中CHI基因、蛋白表达及亚细胞定位进行了研究。结果表明:CHI基因和蛋白的表达随着果实发育有着明显的变化,在果实发育早期和转色期表达量较高,同果实中总类黄酮含量的积累变化一致;胶体金免疫定位显示在果实发育早期CHI主要分布于葡萄果皮细胞的细胞质中,在液泡及质体中也有少量分布;在转色期主要定位于细胞质、质体和细胞核中,其数量明显增多。在成熟果实中,主要存在于细胞质,少量存在于质体和液泡中。 展开更多
关键词 葡萄 查尔酮异构酶 类黄酮 亚细胞定位
猪流行性腹泻病毒NSP1蛋白在细胞器中定位特性 预览
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作者 季朝阳 张莎 +4 位作者 石达 陈建飞 时洪艳 张鑫 冯力 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第10期842-844,共3页
为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)非结构蛋白1(NSP1)在Vero E6细胞中的分布和亚细胞定位情况,本研究采用RT-PCR方法扩增NSP1基因,并将其克隆至真核表达载体pAcGFP-C1中构建重组质粒pAcGFPNSP1。将pAcGFP-NSP1转染至Vero E6细胞中进行... 为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)非结构蛋白1(NSP1)在Vero E6细胞中的分布和亚细胞定位情况,本研究采用RT-PCR方法扩增NSP1基因,并将其克隆至真核表达载体pAcGFP-C1中构建重组质粒pAcGFPNSP1。将pAcGFP-NSP1转染至Vero E6细胞中进行瞬时表达,并收集转染后48 h的细胞进行western blot检测。通过激光共聚焦显微镜观察NSP1在细胞中的定位情况。结果表明,NSP1在Vero E6细胞中表达,其主要定位于细胞质中,与细胞中的线粒体、内质网、高尔基体均呈现高度共定位。本研究在Vero E6细胞中表达了PEDV NSP1蛋白,并首次对其亚细胞定位进行了解析,为进一步了解病毒的复制及其致病机制的研究提供了依据。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 NSP1 VERO E6细胞 亚细胞定位
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Identification and characterization of two cleavage fragments from the Aquareovirus nonstructural protein NS80
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作者 Qingxiu Chen Jie Zhan +2 位作者 Fuxian Zhang Hong Guo Qin Fang 《中国病毒学:英文版》 CAS CSCD 2016年第4期314-323,共10页
Aquareovirus species vary with respect to pathogenicity,and the nonstructural protein NS80 of aquareoviruses has been implicated in the regulation of viral replication and assembly,which can form viral inclusion bodie... Aquareovirus species vary with respect to pathogenicity,and the nonstructural protein NS80 of aquareoviruses has been implicated in the regulation of viral replication and assembly,which can form viral inclusion bodies(VIBs) and recruit viral proteins to its VIBs in infected cells.NS80 consists of 742 amino acids with a molecular weight of approximately 80 kDa.Interestingly,a short specific fragment of NS80 has also been detected in infected cells.In this study,an approximately58-kDa product of NS80 was confirmed in various infected and transfected cells by immunoblotting analyses using α-NS80 C.Mutational analysis and time course expression assays indicated that the accumulation of the 58-kDa fragment was related to time and infection dose,suggesting that the fragment is not a transient intermediate of protein degradation.Moreover,another smaller fragment with a molecular mass of approximately 22 kDa was observed in transfected and infected cells by immunoblotting with a specific anti-FLAG monoclonal antibody or α-NS80 N,indicating that the 58-kDa polypeptide is derived from a specific cleavage site near the amino terminus of NS80.Additionally,different subcellular localization patterns were observed for the 22-kDa and 58-kDa fragments in an immunofluorescence analysis,implying that the two cleavage fragments of NS80 function differently in the viral life cycle.These results provide a basis for additional studies of the role of NS80 played in replication and particle assembly of the Aquareovirus. 展开更多
关键词 AQUAREOVIRUS nonstructural protein NS80 cleavage fragments subcellular localization functional analysis
拟南芥AtRAC在盐胁迫应答中的功能研究 预览 被引量:2
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作者 翟先芝 杨虹伟 +4 位作者 杨皓 刘志斌 王健美 杨毅 李旭锋 《四川大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期416-422,共7页
本实验所研究的拟南芥AtRAC含有两个RING结构域和三个蛋白激酶C保守区域1结构域即C1结构域.通过体外泛素化证明了AtRAC具有E3连接酶活性,亚细胞定位实验结果表明AtRAC定位在细胞核中.组织特异性分析表明AtRAC在根中的表达量很高,但是在... 本实验所研究的拟南芥AtRAC含有两个RING结构域和三个蛋白激酶C保守区域1结构域即C1结构域.通过体外泛素化证明了AtRAC具有E3连接酶活性,亚细胞定位实验结果表明AtRAC定位在细胞核中.组织特异性分析表明AtRAC在根中的表达量很高,但是在茎、叶和花中的表达量较低,而且AtRAC的表达受到NaCl胁迫的诱导.进一步对atrac突变体的分析表明,在NaCl处理下,突变体atrac的萌发率降低,侧根数目也降低.初步研究表明拟南芥AtRAC可能是一个与盐胁迫应答相关的基因. 展开更多
关键词 E3连接酶 亚细胞定位 表达谱分析 组织特异性 盐胁迫
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葡萄赤霉素受体基因VvGID1A的分离、亚细胞定位及表达分析 被引量:14
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作者 王西成 吴伟民 +4 位作者 房经贵 钱亚明 王晨 宋长年 赵密珍 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期839-848,共10页
以‘藤稔’葡萄(Vitis vinifera×V.labrusca‘Fujiminori’)的花序、茎尖、叶片以及果实为试材,应用RT-PCR结合RACE技术克隆得到GID1A同源基因全长cDNA序列,命名为VvGID1A(基因登录号:JQ669511),全长1681bp,含有1个1035bp的... 以‘藤稔’葡萄(Vitis vinifera×V.labrusca‘Fujiminori’)的花序、茎尖、叶片以及果实为试材,应用RT-PCR结合RACE技术克隆得到GID1A同源基因全长cDNA序列,命名为VvGID1A(基因登录号:JQ669511),全长1681bp,含有1个1035bp的开放阅读框,编码344个氨基酸,该氨基酸序列还包含两个激素敏感酯酶家族保守的结构域HGG和GXSXG。系统进化分析表明,VvGID1A与蒺藜苜蓿、棉花和拟南芥之间的一致性分别为70.25%、70.08%和68.21%。荧光定量RT-PCR结果表明,VvGID1A在葡萄花序、老叶和卷须中表达水平高于茎尖和幼叶,而在GA处理果实中的表达水平低于未处理的对照样品。瞬时表达载体的构建及洋葱表皮细胞转化后,洋葱表皮细胞的瞬时表达结果显示,该基因的表达产物定位在细胞核上。 展开更多
关键词 葡萄 赤霉素 VvGID1A 亚细胞定位 表达水平
利用植物悬浮培养细胞进行蛋白质快速定位分析的方法 预览 被引量:2
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作者 赵蒙晴 高野哲夫 柳参奎 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期389-393,共5页
稳定遗传表达分析是一种植物中常用的整体解析基因的方式。有多种转化方式可供选择,也可根据所需要的获得的转基因植物材料选择受体材料。但是由于稳定遗传转化周期较长且大部分材料不适合于进行荧光观察,所以在一些基因的研究中逐渐... 稳定遗传表达分析是一种植物中常用的整体解析基因的方式。有多种转化方式可供选择,也可根据所需要的获得的转基因植物材料选择受体材料。但是由于稳定遗传转化周期较长且大部分材料不适合于进行荧光观察,所以在一些基因的研究中逐渐被瞬时表达分析系统。虽然瞬时表达分析用时短,但是转化效率受到多方面的限制,转化材料无法保存。目前由于植物悬浮培养细胞材料均一,增殖迅速并且可以满足大批量研究需求逐渐成为植物研究中的热点材料。以此同时,在亚细胞定位方面,悬浮培养细胞还是良好的应用材料。采用农杆菌介导法进行植物悬浮培养细胞的转化中方法较为成熟,但是获得纯净的转基因细胞系的转化周期较长。在本研究中针对上述问题我们建立了一种转化时间短,转化效率高的植物悬浮培养细胞稳定遗传转化体系。同时将这个体系应用到基因的亚细胞定位当中进行蛋白质快速定位分析。 展开更多
关键词 悬浮培养细胞 稳定遗传转化 高效 快速 GFP 亚细胞定位
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The role of hepatitis B virus X protein is related to its differential intracellular localization
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作者 Jingwei Ma Tucheng Sunt +2 位作者 Sujin Park Guanxin Shen Junwei Liu 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2011年第8期583-588,共6页
长期的肝炎 B 病毒(HBV ) 感染强烈与 hepatocellular 癌被联系了。HBV 编码 oncogenic 肝炎 B 病毒 X 蛋白质(HBx ) ,它是通过和主机因素的直接、间接的相互作用调制信号 transduction,抄写,房间周期进步,蛋白质降级, apoptosis... 长期的肝炎 B 病毒(HBV ) 感染强烈与 hepatocellular 癌被联系了。HBV 编码 oncogenic 肝炎 B 病毒 X 蛋白质(HBx ) ,它是通过和主机因素的直接、间接的相互作用调制信号 transduction,抄写,房间周期进步,蛋白质降级, apoptosis,和基因稳定性的一个多功能的管理者。HBx 的 subcellular 本地化主要是细胞质的,与在原子核的小部分。另外, HBx 表示高级导致反常 mitochondrial 分布。HBx 的动态分发能对在 HBV 生命周期的不同阶段的 HBx 的多重功能重要。这短评论作为它的细胞内部的本地化的功能给出 HBx 的微分角色的概述。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 蛋白质降解 本地化 细胞内 细胞周期进展 遗传稳定性 亚细胞定位 线粒体分布
‘藤稔’葡萄VvGAI基因的克隆、亚细胞定位及时空表达分析 被引量:19
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作者 杨光 曹雪 +3 位作者 房经贵 宋长年 王晨 王西成 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期 1883-1892,共10页
以‘藤稔’葡萄(Fitisvinifera×V.labrusca‘Fujiminori’)的茎、叶、花和果为试材,采用RT-PCR结合RACE技术,克隆获得1个推测为葡萄赤霉素响应因子VvGAI基因的cDNA序列,全长2295b口,其编码590个氨基酸。该基因在GenBank基因... 以‘藤稔’葡萄(Fitisvinifera×V.labrusca‘Fujiminori’)的茎、叶、花和果为试材,采用RT-PCR结合RACE技术,克隆获得1个推测为葡萄赤霉素响应因子VvGAI基因的cDNA序列,全长2295b口,其编码590个氨基酸。该基因在GenBank基因数据库的登录号为HQ834311。序列分析表明:VvGAI与杨树、拟南芥、水稻的同源基因的氨基酸序列相似性分别为68.56%、62.79%和54.16%。半定量与定量PCR结果都表明,VvGAI在葡萄茎尖、叶、花和果等营养与生殖器官中均有表达,但在茎尖中的表达最高,是一个与快速生长和分裂关系密切的基因。50mg·L^-1赤霉素处理后,各阶段果实中VvGAI表达量趋势与对照基本一致,但水平低于对照,其中幼果中表达量最高。洋葱表皮细胞的瞬时表达显示,VvGAI蛋白定位于细胞核。 展开更多
关键词 葡萄 VvGAI 克隆 表达 亚细胞定位
苹果MdGA20ox1基因的克隆、亚细胞定位及表达分析 被引量:9
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作者 姜志昂 孙建设 +1 位作者 彭建营 邵建柱 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2373-2381,共9页
以苹果砧木SH40[(Malus×domestica)×Mhonanensis]为试材,采用RT-PCR结合RACE技术从SH40茎尖中克隆得到一个赤霉素合成关键酶基因(GA20一氧化酶基因),命名为MdGA200xl,其cDNA全长1579bp,编码392个氨基酸。该基因在GenB... 以苹果砧木SH40[(Malus×domestica)×Mhonanensis]为试材,采用RT-PCR结合RACE技术从SH40茎尖中克隆得到一个赤霉素合成关键酶基因(GA20一氧化酶基因),命名为MdGA200xl,其cDNA全长1579bp,编码392个氨基酸。该基因在GenBank登录号为KC493633。氨基酸序列同源性分析表明:MdGA200xl与玉米、拟南芥、梨等植物GA200x具有55.9%~96.7%的相似性。洋葱表皮细胞瞬时表达显示,MdGA200xl蛋白定位于细胞核与细胞质膜。植株生长量测定和相对定量表达结果表明,MdGA200xl基因在砧木SH28、SH40和M26自根苗的表达呈先下降再上升然后下降的趋势,这与其生长动态基本一致。嘎啦/SH28的植株生长量和MdGA200xl表达量最高,嘎啦/M26次之,嘎啦/SH40最低,初步表明该基因的表达有与苹果植株矮化程度呈负相关的趋势。MdGA200xl在嘎啦/SH40和嘎啦/SH28不同组织中的表达模式一致,且半矮化类型砧木SH28嫁接‘嘎啦’,其茎尖、幼叶、成熟叶和枝皮中的表达量均高于矮化类型SH40嫁接‘嘎啦’。 展开更多
关键词 苹果 砧木 MdGA20ox1 克隆 表达 亚细胞定位
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