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基于细胞的抗单增李斯特菌单域重链抗体的筛选及鉴定 被引量:1
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作者 陈奇 万翠香 +3 位作者 涂追 谭强来 熊勇华 陶勇 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1816-1821,共6页
【目的】获得针对单增李斯特菌的特异性单域重链抗体,并对筛选过程中特异性克隆的富集规律进行分析,为筛选具有种属特异性的噬菌体展示抗体提供参考。【方法】采用固相筛选技术,以热灭活的单增李斯特菌菌体为抗原,通过四轮常规筛选和一... 【目的】获得针对单增李斯特菌的特异性单域重链抗体,并对筛选过程中特异性克隆的富集规律进行分析,为筛选具有种属特异性的噬菌体展示抗体提供参考。【方法】采用固相筛选技术,以热灭活的单增李斯特菌菌体为抗原,通过四轮常规筛选和一轮消减筛选,从驼源天然噬菌体展示文库中筛选针对单增李斯特菌的单域重链抗体。采用Phage-ELISA法,对后四轮筛选洗脱物中随机挑选的噬菌体进行鉴定,阳性克隆进行基因测序及结合特异性分析。通过多序列比对分析将获得的基因序列进行分组和统计。【结果】成功筛选到2株单增李斯特菌特异性的单域重链抗体。【结论】在优化的筛选条件下,基于全细胞的筛选方法能够获得特异性识别单增李斯特菌的单域重链抗体,消减筛选对于去除非特异性克隆是有效的和必要的。 展开更多
关键词 噬菌体抗体库 单增李斯特菌 消减筛选法 单域重链抗体
全细胞差减筛选法在噬菌体展示文库筛选中的应用 被引量:3
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作者 吴红珍 张林波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期 243-245,250,共4页
全细胞差减筛选法是近年来在细胞筛选的基础上发展起来的一项筛选技术,其利用成对的细胞,即两种不同状态的细胞对噬菌体展示文库进行差减筛选,主要用于筛选新的抗原表位、受体、配体、新型疫苗、肿瘤细胞的靶向活性肽、靶向基因载体... 全细胞差减筛选法是近年来在细胞筛选的基础上发展起来的一项筛选技术,其利用成对的细胞,即两种不同状态的细胞对噬菌体展示文库进行差减筛选,主要用于筛选新的抗原表位、受体、配体、新型疫苗、肿瘤细胞的靶向活性肽、靶向基因载体及受体或酶的激动剂或抑制剂等。本文就其筛选的原理、优缺点、优化及其在噬菌体展示文库筛选中的应用作一综述。 展开更多
关键词 全细胞 差减筛选 噬菌体展示文库
基于特异性结合多肽ZS-1的肺癌新肿瘤标志物的筛选 预览 被引量:3
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作者 王素军 潘雪刁 +3 位作者 臧林泉 王桂香 石磊 谢海棠 《中国临床药理学与治疗学》 CSCD 2010年第12期1353-1357,共5页
目的:利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-1(EHMALTYPFRPP)从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,并进行初步确认,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法:本实验以ZS-1为探针,通过将偶联生物素的多肽ZS-... 目的:利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-1(EHMALTYPFRPP)从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,并进行初步确认,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法:本实验以ZS-1为探针,通过将偶联生物素的多肽ZS-1固化在亲和素处理的酶标板,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过三轮减性筛选后,挑取与ZS-1特异性结合的噬菌体单克隆、扩增、纯化,再通过PCR技术扩增、产物纯化后,进行DNA测序,测序结果经过生物信息学分析,随后采用组织芯片技术对相关生物大分子进行了检测。结果:通过生物信息学分析首次发现与ZS-1结合的肺癌细胞膜受体蛋白为KIAA1199,随后以KIAA199抗体检测人肺癌组织芯片证实,KIAA1199的阳性检出率为32.8%。结论:从人类肺癌cDNA噬菌体展示文库中筛选出潜在的肺癌肿瘤标志物KIAA1199,为肺癌的早期诊治奠定基础。 展开更多
关键词 多肽ZS-1 CDNA文库 减性筛选 肺癌 肿瘤标志物
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利用肺癌特异性结合多肽ZS-6筛选肺癌相关标志物 预览 被引量:5
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作者 冯文彬 潘雪刁 +4 位作者 周捷 石磊 罗军强 李询 臧林泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 44-47,共4页
目的利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-6从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法以生物素标记的十二肽ZS-6为探针,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过四轮减性筛选后... 目的利用本实验室已获得的与肺癌特异性结合的十二肽ZS-6从人类肺癌cDNA文库中筛选出肺癌相关标志物,为肺癌的临床早期诊断和靶向治疗奠定基础。方法以生物素标记的十二肽ZS-6为探针,筛选人类肺癌cDNA噬菌体展示文库,经过四轮减性筛选后,挑取与ZS-6特异性结合的噬菌体单克隆、扩增、纯化,再通过PCR技术扩增、产物纯化后,进行DNA测序,测序结果经过生物信息学分析。结果筛选出18个与ZS-6特异性结合的噬菌体克隆,测序结果显示其中1个为未知功能的新基因,其余的均已确定为肿瘤相关基因。结论从人类肺癌cDNA噬菌体展示文库中筛选出潜在的肺癌肿瘤标志物,为肺癌的早期诊治奠定基础。 展开更多
关键词 多肽ZS-6 CDNA文库 减性筛选 肺癌 肿瘤标志物
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