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Akt1通过磷酸化泛素结合酶E2S增强胶质瘤放化疗抵抗的实验研究
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作者 胡力 沈红 +5 位作者 刘利 谢春成 王海洋 刘琴芳 翁长江 林志国 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期194-199,共6页
目的 探讨Akt1增强胶质瘤放、化疗抵抗的机制.方法 通过免疫荧光实验检测正常星形细胞和4种恶性胶质瘤细胞(U87、U251、SF767以及U373)中泛素结合酶E2S(UBE2S)的表达情况;通过Western blot实验检测PTEN基因突变型和野生型胶质瘤细胞... 目的 探讨Akt1增强胶质瘤放、化疗抵抗的机制.方法 通过免疫荧光实验检测正常星形细胞和4种恶性胶质瘤细胞(U87、U251、SF767以及U373)中泛素结合酶E2S(UBE2S)的表达情况;通过Western blot实验检测PTEN基因突变型和野生型胶质瘤细胞中UBE2S的表达差异;构建激活型Akt1载体,分别与UBE2S野生型或T152位点突变型载体共表达,观察PTEN/Akt信号通路对UBE2S的作用,以及UBE2S过表达后对非同源末端连接复合物的影响;采用流式细胞仪检测稳定敲低UBE2S的U87胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性.结果 与正常星形细胞相比,胶质瘤细胞高表达UBE2S蛋白;PTEN突变型的胶质瘤细胞UBE2S的表达较野生型更稳定.构建激活型Akt1磷酸化UBE2S的T152位点,可促进UBE2S的稳定表达.UBE2S与Ku70、Ku80相互作用能促进Ku70的表达(P =0.009).免疫印迹结果显示,敲低UBE2S的表达后,Ku70、Ku80和DNA-PKcs的表达量显著降低(P〈0.001).流式细胞检测结果显示,UBE2S敲低可增强胶质瘤对放、化疗的敏感性(P〈0.001).结论 UBE2S在恶性胶质瘤中高表达;Akt1可磷酸化UBE2S的T152位点,从而增强UBE2S的稳定性;敲低UBE2S能降低非同源末端连接复合物介导的DNA修复效率,从而增强胶质瘤细胞对放、化疗的敏感性. 展开更多
关键词 神经胶质瘤 化放疗 泛素结合酶E2S PTEN/Akt信号通路
UBE2C regulates proliferation and invasion of neuroblastoma: An experimental study
2
作者 Li Feng 《海南医科大学学报(英文版)》 2018年第11期5-8,共4页
Objective:To study the regulatory effect of ubiquitin-conjugating enzyme 2C (UBE2C) on the proliferation and invasion of neuroblastoma.Methods: SH-SY5Y neuroblastoma cell lines were cultured and randomly divided into ... Objective:To study the regulatory effect of ubiquitin-conjugating enzyme 2C (UBE2C) on the proliferation and invasion of neuroblastoma.Methods: SH-SY5Y neuroblastoma cell lines were cultured and randomly divided into UBE2C-siRNA group and NC-siRNA group that were transfected with UBE2C siRNA and NC siRNA respectively. 24 h after siRNA transfection, the RNA in the cells was extracted, and fluorescence quantitative PCR reaction was used to detect the mRNA expression of pro-proliferation genes YB-1, CyclinD1, CDK4, Aurora-A and Ki-67, anti-proliferation genes LC3, Beclin1, GRP78, IRE1α, PERK and ATF6 as well as invasion genes KLF4, RIPK3, HIF-1α, Integrinβ1 and MMP9.Results: YB-1, CyclinD1, CDK4, Aurora-A, Ki-67, KLF4, RIPK3, HIF-1α, Integrinβ1 and MMP9 mRNA expression in UBE2C-siRNA group of cells were significantly lower than those in NC-siRNA group whereas LC3, Beclin1, GRP78, IRE1α, PERK and ATF6 mRNA expression were significantly higher than those in NC-siRNA group.Conclusions: Inhibition of the UBE2C gene can regulate the expression of proliferation and invasion genes in neuroblastoma to hinder cell proliferation and invasion. 展开更多
关键词 NEUROBLASTOMA Ubiquitin-conjugating ENZYME 2C PROLIFERATION INVASION
泛素结合酶基因生物信息学与功能分析 预览 被引量:4
3
作者 姚杨 苏杰 +2 位作者 魏迪 朱星枚 成碧萍 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第11期1156-1159,共4页
目的:生物信息学的发展为通过在线软件预测新基因的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息。文中利用生物信息学方法预测泛素结合酶2S( ubiquitin-conjugating enzyme 2S, UBE2S)生物学功能。方法以人肝癌HepG2细胞为材料,从构建... 目的:生物信息学的发展为通过在线软件预测新基因的相关信息提供了众多有重要价值的参考信息。文中利用生物信息学方法预测泛素结合酶2S( ubiquitin-conjugating enzyme 2S, UBE2S)生物学功能。方法以人肝癌HepG2细胞为材料,从构建的cDNA文库基因组中筛选和克隆了UBE2S基因。利用NCBI的BLAST在线分析工具分别对GenBank的非冗余核酸数据库和非冗余蛋白质数据库序列进行比对分析;采用NCBI ORF finder在线分析工具预测开放阅读框;利用ExPASy在线工具ProtParam统计基因中各种氨基酸含量,并预测理论分子量和等电点;应用ProtScale程序进行蛋白质的疏水性分析;蛋白质亚细胞定位采用在线工具( nibb.ac.jp/form.html)预测,通过NCBI数据库GenBank分析蛋白质保守结构域;采用Protfun在线工具预测UBE2S的功能分类;采用同源模型服务软件SWISS-MODEL预测UBE2S的三维结构;采用MEGA5.05软件进行系统进化树的构建。结果 UBE2S基因编码241个氨基酸,预测相对分子质量为23770,理论等电点为8.81。跨膜结构域分析表明,UBE2S蛋白不含跨膜位点;亚细胞定位预测,UBE2S蛋白具有生长因子、离心通道、结构蛋白功能的概率为8.904、0.313和0.291。同源性比较分析结果表明,其碱基序列与已经报道的其他12个物种的相似率为90%~97%,且符合种属之间的进化关系。结论 UBE2S蛋白结构和功能的分析不仅丰富了其家族基因信息,还将为后续肝癌发生发展的分子机制实验研究奠定基础。 展开更多
关键词 肝癌 生物信息学分析
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胶孢炭疽菌泛素结合酶基因CgUBC2的RNAi突变体获得与功能分析
4
作者 苏初连 康浩 +3 位作者 杨石有 蒲金基 夏杨 张贺 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期125-131,共7页
为了研究胶孢炭疽菌泛素结合酶基因CgUBC2的功能以及与致病相关基因间的关联性。利用RNAi技术构建沉默载体pSilent-1:CgUBC2,通过PEG介导法获得突变体菌株,实时荧光定量PCR法分析其侵染寄主过程中的差异表达,以及与PG、ECH、LIP、PKS、... 为了研究胶孢炭疽菌泛素结合酶基因CgUBC2的功能以及与致病相关基因间的关联性。利用RNAi技术构建沉默载体pSilent-1:CgUBC2,通过PEG介导法获得突变体菌株,实时荧光定量PCR法分析其侵染寄主过程中的差异表达,以及与PG、ECH、LIP、PKS、HMT、Sin3P、NRPS 7个致病相关基因的关联性。通过特异性引物检测鉴定、表达量分析,获得CgUBC2的RNAi突变体为pSilent-1:CgUBC2-1和pSilent-1:CgUBC2-2,侵染过程中突变体菌株CgUBC2基因表达量、7个致病相关基因的表达量显著低于野生型菌株。成功获得胶孢炭疽菌泛素结合酶基因CgUBC2的RNAi沉默突变体,CgUBC2参与侵染寄主的过程、正向调控7个致病相关基因和致病力。 展开更多
关键词 胶孢炭疽菌 泛素结合酶基因CgUBC2 RNAi突变体
泛素/26S蛋白酶体途径在水稻中的生物学功能研究进展
5
作者 徐丹丹 孙帆 +3 位作者 王银晓 石英尧 王文生 傅彬英 《中国农业科技导报》 CSCD 北大核心 2018年第1期25-33,共9页
生物体内的蛋白质降解方式有两种,一种不需要能量,一种需要能量。而泛素/26S蛋白酶体途径便是目前已知的依赖ATP、高效、有高度选择性的蛋白降解途径。它介导了真核生物中80%~85%的蛋白质降解,几乎参与到植物生长发育的各个环节,是植... 生物体内的蛋白质降解方式有两种,一种不需要能量,一种需要能量。而泛素/26S蛋白酶体途径便是目前已知的依赖ATP、高效、有高度选择性的蛋白降解途径。它介导了真核生物中80%~85%的蛋白质降解,几乎参与到植物生长发育的各个环节,是植物体内蛋白高效专一降解最重要、最精细的调控机制之一。概述了泛素蛋白酶体途径,重点阐述了泛素结合酶E2和泛素连接酶E3的蛋白结构及其在水稻生长发育、激素信号传导、生物和非生物胁迫响应中的生物学功能及机制,并对进一步研究进行了展望,将有助于揭示泛素/26S蛋白酶体途径在水稻生长发育中的精细调控过程,并为水稻抗逆育种提供了指导和借鉴。 展开更多
关键词 泛素蛋白酶体途径 水稻 泛素结合酶E2 泛素连接酶E3 生物学功能
UBE2C基因调节神经母细胞瘤增殖、侵袭的实验研究 预览
6
作者 冯力 《海南医学院学报》 CAS 2018年第11期1062-1064,1068共4页
目的:研究泛素偶联酶2C(UBE2C)对神经母细胞瘤增殖、侵袭的调节作用。方法:培养SHSY5Y神经母细胞瘤细胞株并随机分为UBE2C-siRNA组和NC-siRNA组,分别转染UBE2C的siRNA和NC的siRNA。转染siRNA后24小时,抽提细胞内的RNA并通过荧光定量... 目的:研究泛素偶联酶2C(UBE2C)对神经母细胞瘤增殖、侵袭的调节作用。方法:培养SHSY5Y神经母细胞瘤细胞株并随机分为UBE2C-siRNA组和NC-siRNA组,分别转染UBE2C的siRNA和NC的siRNA。转染siRNA后24小时,抽提细胞内的RNA并通过荧光定量PCR反应测定促增殖基因YB-1、CyclinD1、CDK4、Aurora-A、Ki-67及增殖抑制基因LC3、Beclin1、GRP78、IRE1α、PERK、ATF6及侵袭基因KLF4、RIPK3、HIF-1α、Integrinβ1、MMP9的mRNA表达量。结果:UBE2C-siRNA组细胞中YB-1、CyclinD1、CDK4、Aurora-A、Ki-67、KLF4、RIPK3、HIF-1α、Integrinβ1、MMP9的mRNA表达量显著低于NC-siRNA组,LC3、Beclin1、GRP78、IRE1α、PERK、ATF6的mRNA表达量显著高于NC-siRNA组。结论:抑制UBE2C基因能够调节神经母细胞瘤内增殖及侵袭基因的表达,进而阻碍细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤 泛素偶联酶2C 增殖 侵袭
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泛素结合酶E2s在胆囊癌患者中的高表达及意义
7
作者 曹进 张景涛 +4 位作者 刘中砚 李新平 徐国利 王芳涛 范跃祖 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期1321-1324,共4页
目的探讨泛素结酶E2s(UBE2S)在胆囊癌中表达及临床意义。方法应用免疫组织化学检测UBE2S在85例胆囊癌、28例胆囊癌前病变及15例胆囊良性病变蜡块组织表达,以Western blot检测胆囊良恶性病变新鲜组织加以验证,并分析其临床意义。结果... 目的探讨泛素结酶E2s(UBE2S)在胆囊癌中表达及临床意义。方法应用免疫组织化学检测UBE2S在85例胆囊癌、28例胆囊癌前病变及15例胆囊良性病变蜡块组织表达,以Western blot检测胆囊良恶性病变新鲜组织加以验证,并分析其临床意义。结果UBE2S在胆囊癌组织中表达显著高于胆囊癌前病变[染色指数(SI):4.082±3.413比2.607±2.025,P=0.021]和良性病变(SI:4.082±3.413比2.067±1.335,P=0.001),在新鲜胆囊癌组织中表达亦高于良性病变(Western blot灰度值:0.734±0.181比0.197±0.099,P=0.002)。UBE2S表达与肿瘤分化程度(x^2=6.978,P=0.031)、肝转移(x^2=8.155,P=0.004)显著相关。UBE2S表达(P=0.024)和肿瘤分化程度(P=0.000)、Nevin分期(P=0.040)、R0切除(P=0.011)是影响胆囊癌患者预后的独立因素;UBE2S高表达胆囊癌患者生存期较短(P=0.011)。结论UBE2S高表达是胆囊癌患者不良预后的独立因素。 展开更多
关键词 泛素结合酶E2s 胆囊癌 生存期
WSSV感染对中国明对虾bantam及其候选靶基因的影响 预览
8
作者 李旭鹏 孔杰 +2 位作者 孟宪红 栾生 罗坤 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第6期106-113,共8页
Bantam能够调控细胞增殖、细胞凋亡等过程,影响生物的免疫过程。本研究利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术对感染WSSV的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)肝胰腺和鳃组织内bantam表达水平进行检测,发现感染WSSV后6、12、24和48 h,... Bantam能够调控细胞增殖、细胞凋亡等过程,影响生物的免疫过程。本研究利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术对感染WSSV的中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)肝胰腺和鳃组织内bantam表达水平进行检测,发现感染WSSV后6、12、24和48 h,中国明对虾肝胰腺中的bantam表达水平分别是对照组的(0.16±0.03)(P<0.05)、(0.63±0.26)、(0.32±0.06)(P<0.05)和(0.41±0.13)倍;中国明对虾鳃中的bantam表达水平分别是对照组的(0.30±0.17)(P<0.05)、(1.88±0.26)(P<0.01)、(0.84±0.36)和(0.51±0.25)倍。利用mi Randa软件进一步对中国明对虾bantam靶基因进行预测分析,评分最高的靶基因是泛素缀合酶E2。中国明对虾泛素缀合酶E2包含UBCc功能域。多序列比对显示,UBCc功能域氨基酸残基序列在不同物种间保守性较高。进化树分析显示,分类学地位相近的物种的泛素缀合酶E2聚为一类。q RT-PCR检测感染WSSV的中国明对虾肝胰腺和鳃中的泛素缀合酶E2表达水平,结果显示,在感染WSSV后6、12、24和48 h,中国明对虾肝胰腺中泛素缀合酶E2的表达水平分别是对照组的(0.54±0.10)、(1.19±0.62)、(3.69±0.51)(P<0.01)和(1.94±0.07)(P<0.05)倍;中国明对虾鳃中泛素缀合酶E2的表达水平分别是对照组的(0.22±0.05)、(1.34±0.38)、(4.29±0.52)(P<0.01)和(1.28±0.79)倍。研究表明,bantam和泛素缀合酶E2的表达都受WSSV侵染的影响,可能与中国明对虾和WSSV之间的互作相关。但bantam和泛素缀合酶E2表达水平的变化是对虾抵抗WSSV侵染过程的免疫反应,还是宿主基因被病毒胁迫后的结果,需要进一步验证。 展开更多
关键词 中国明对虾 WSSV bantam 泛素缀合酶E2 表达
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泛素偶联酶2C促进肺癌细胞增殖和迁移与抑制细胞衰老
9
作者 郭纪伟 武艳 +4 位作者 金丹 杜静 宫凯凯 苗双 杨丽娟 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期649-658,共10页
泛素偶联酶2C与多种肿瘤细胞的增殖密切相关,但其与肺癌发生和发展的关系尚不明确。本研究以肺癌A549细胞为材料,通过RT-PCR、Western印迹、免疫荧光、SA-β-Gal细胞衰老染色、细胞划痕和Trans-well实验,阐明UBE2C与肺癌细胞的增殖、衰... 泛素偶联酶2C与多种肿瘤细胞的增殖密切相关,但其与肺癌发生和发展的关系尚不明确。本研究以肺癌A549细胞为材料,通过RT-PCR、Western印迹、免疫荧光、SA-β-Gal细胞衰老染色、细胞划痕和Trans-well实验,阐明UBE2C与肺癌细胞的增殖、衰老和迁移能力的关系。结果显示,UBE2C在肺癌细胞中的表达明显高于正常细胞。利用基因修饰技术瞬时过表达或靶向沉默UBE2C后,在肺癌A549细胞中,UBE2C的mRNA和蛋白质水平显著增加3.5倍或减少0.5倍,显著促进或抑制细胞增殖,进而减少或增加细胞的凋亡率。过表达UBE2C后,显著抑制细胞衰老;但沉默UBE2C后,则增加细胞衰老。此外,过表达UBE2C后,下调转移相关基因E-钙黏着蛋白的mRNA和蛋白质表达水平,且上调波形蛋白基因的表达水平,进而促进肺癌细胞的迁移。但靶向敲除UBE2C后,上调E-钙黏着蛋白,同时下调波形蛋白表达水平,进而抑制肺癌细胞的迁移。本研究的开展将明确UBE2C在肺癌中的作用及其机制,为以UBE2C为靶点,提高病人生存期提供了理论基础。 展开更多
关键词 泛素偶联酶2C 细胞增殖 细胞衰老 细胞迁移 肺癌
泛素结合酶E2C与肿瘤的关系研究进展 预览 被引量:3
10
作者 王少冰(综述) 王芳(审校) 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第5期543-548,共6页
越来越多的证据提示肿瘤细胞内紊乱的泛素化过程调控了肿瘤的发生发展。泛素结合酶E2C( ubiquitin-conjugating enzymeE2C, UBE2C)是泛素结合酶家族的重要成员,是细胞有丝分裂中期向后期转变的关键调节分子。近年来, UBE2 C与肿瘤... 越来越多的证据提示肿瘤细胞内紊乱的泛素化过程调控了肿瘤的发生发展。泛素结合酶E2C( ubiquitin-conjugating enzymeE2C, UBE2C)是泛素结合酶家族的重要成员,是细胞有丝分裂中期向后期转变的关键调节分子。近年来, UBE2 C与肿瘤的关系研究较多,文中就该分子在肿瘤中的表达情况、对肿瘤发生发展的影响及内在机制的研究现状作一综述。 展开更多
关键词 泛素结合酶 UBE2C 有丝分裂 肿瘤
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泛素化及其在肿瘤中的作用 被引量:1
11
作者 高孝家 杨慧 +2 位作者 吴林 周福祥 周云峰 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2015年第3期188-191,共4页
泛素化过程是内源性蛋白质降解的主要途径之一,因此参与泛素化过程的泛素交联酶UbE2D3会影响细胞内某些蛋白及核酸的含量、活性进而影响其生物效应。在肿瘤细胞中,这种作用显得尤其关键,可参与部分癌症因子的修饰与降解,从而影响肿... 泛素化过程是内源性蛋白质降解的主要途径之一,因此参与泛素化过程的泛素交联酶UbE2D3会影响细胞内某些蛋白及核酸的含量、活性进而影响其生物效应。在肿瘤细胞中,这种作用显得尤其关键,可参与部分癌症因子的修饰与降解,从而影响肿瘤的生物学行为。研究表明,在乳腺癌中UbE2D3与人类端粒酶逆转录酶( hTERT)、放射敏感性、侵袭性等相关。 展开更多
关键词 泛素化 肿瘤 辐射耐受性 泛素蛋白连接酶D3 人类端粒酶逆转录酶
凡纳滨对虾泛素交联酶E2基因的克隆及表达分析 预览 被引量:2
12
作者 李传香 薛淑霞 +2 位作者 刘逸尘 耿绪云 孙金生 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期661-668,共8页
首先在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)转录组测序的基础上,应用RT-PCR方法获得了凡纳滨对虾泛素交联酶E2(UE2)基因的开放阅读框序列。该序列长为447 bp,编码148个氨基酸,理论相对分子量为16.84 kD,等电点为4.90。同源性比对和系... 首先在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)转录组测序的基础上,应用RT-PCR方法获得了凡纳滨对虾泛素交联酶E2(UE2)基因的开放阅读框序列。该序列长为447 bp,编码148个氨基酸,理论相对分子量为16.84 kD,等电点为4.90。同源性比对和系统进化分析显示,不同物种的 UE2基因具有较高的同源性,其中凡纳滨对虾与中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)的同源性最高并聚为一支。半定量RT-PCR分析表明, UE2基因在所检测的组织中均有表达;实时定量PCR分析表明, UE2基因在肝胰腺和肠中的表达量最高,在心脏、鳃、胃和肌肉组织中的表达量略低,在血淋巴中的表达量最低。原核表达分析结果显示, PCR?T7/NT-Topo TA-UE2表达载体在1.0 mmol/L IPTG、37℃诱导3 h条件下可获得纯度较高的分子量约17 kD的蛋白。利用亲和层析的方法将蛋白进行纯化用以制备抗体。研究结果将为深入研究UE2基因在对虾白斑综合症病毒侵染过程中的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 泛素交联酶E2 组织表达 原核表达
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泛素结合酶RAD6的结构与功能研究进展 预览 被引量:1
13
作者 覃碧 邓治 +1 位作者 刘长仁 李德军 《热带农业科学》 2013年第2期36-41,共6页
泛素复合体对蛋白的修饰可以改变蛋白定位、活性和稳定性。泛素结合酶E2在其中起关键作用。RAD6是典型的泛素结合酶.在泛素复合体组装、DNA损伤修复、调控基因表达和细胞周期等生理过程中具有重要作用。本文综述了RAD6蛋白的结构、与... 泛素复合体对蛋白的修饰可以改变蛋白定位、活性和稳定性。泛素结合酶E2在其中起关键作用。RAD6是典型的泛素结合酶.在泛素复合体组装、DNA损伤修复、调控基因表达和细胞周期等生理过程中具有重要作用。本文综述了RAD6蛋白的结构、与其互作的泛素蛋白连接酶E3及其功能研究进展,并展望其在作物研究中的应用。 展开更多
关键词 泛素 泛素结合酶E2 RAD6 结构 功能
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普通油茶泛素结合酶UBE2-J2的cDNA序列及蛋白质结构分析 预览 被引量:2
14
作者 林萍 姚小华 +3 位作者 曹永庆 龙伟 王开良 滕建华 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第6期744-751,共8页
泛素结合酶(E2)是泛素/26S蛋白酶体途径中3个关键酶之一,在靶蛋白识别、与泛素连接酶(E3)互作等蛋白的泛素依赖性水解和N-末端规则依赖性水解途径的关键环节中起重要作用。采用Sdexa测序技术获得了1条普通油茶E2的全长cDNA序列,... 泛素结合酶(E2)是泛素/26S蛋白酶体途径中3个关键酶之一,在靶蛋白识别、与泛素连接酶(E3)互作等蛋白的泛素依赖性水解和N-末端规则依赖性水解途径的关键环节中起重要作用。采用Sdexa测序技术获得了1条普通油茶E2的全长cDNA序列,命名为UBE2一J2,该基因编码239AA,与其它物种的E2具有较高的一致性和相似性;同源建模的结果表明:普通油茶UBE2-J2蛋白具有泛素结合酶催化位点(UBCc),第8~122位氨基酸碱基为其泛素结合酶基因家族的保守区域,第75~122位氨基酸残基区域中有17个可与泛素形成硫酯键中间产物的残基,其中,87位的半胱氨酸残基是该酶活性中心位点,另有5个残基是与E3酶相互作用的位点。UBE2.J2具有C端延伸结构,故普通油茶UBE2-J2蛋白属于II类E2基因家族成员。 展开更多
关键词 普通油茶 泛素结合酶 Solexa测序 生物信息学
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巴西橡胶树HbUBC22基因克隆与表达分析 预览 被引量:4
15
作者 覃碧 《中国农学通报》 CSCD 2013年第19期1-8,共8页
泛素蛋白酶体途径(UPP)广泛参与植物生长发育相关过程的调控,巴西橡胶树UPP关键酶-泛素结合酶UBC/E2基因的克隆及其表达分析,将为进一步研究UPP在橡胶树中的功能奠定基础。本研究通过同源克隆法,根据巴西橡胶树UBC22同源EST序列进行... 泛素蛋白酶体途径(UPP)广泛参与植物生长发育相关过程的调控,巴西橡胶树UPP关键酶-泛素结合酶UBC/E2基因的克隆及其表达分析,将为进一步研究UPP在橡胶树中的功能奠定基础。本研究通过同源克隆法,根据巴西橡胶树UBC22同源EST序列进行拼接设计特异引物,利用RT-PCR扩增从橡胶树中克隆UBC22基因,利用生物信息学的方法对基因的结构进行分析,进一步采用Q-PCR技术分析基因表达模式,并在大肠杆菌中表达目标蛋白。将克隆的基因命名为HbUBC22,该基因的开放阅读框(ORF)共807bp,编码268个氨基酸,编码蛋白含有1个保守的UBC结构域和半胱氨酸催化位点。HbUBC22蛋白与蓖麻、杨树、油茶和葡萄的UBC蛋白同源性最高,分别为89%、85%、85%和81%。HbUBC22受乙烯利和茉莉酸甲酯诱导显著上调表达。经IPTG诱导后,HbUBC22能够在大肠杆菌中表达出目标蛋白。通过对HbUBC22的克隆及其序列分析可知,该基因属于泛素结合酶UBC/E2家族成员,以上研究结果为进一步研究HbUBC22的生物学功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 泛素结合酶 HbUBC22 基因克隆 表达分析
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老年宫颈癌E2-EPF表达与肿瘤深肌层浸润及盆腔淋巴结转移关系的研究 预览 被引量:5
16
作者 胡鸿飞 汪峰 +3 位作者 夏世金 骞军平 郑绮明 胡艳 《成都医学院学报》 CAS 2012年第3期371-374,共4页
目的了解老年宫颈癌E2-EPF表达水平与肿瘤深肌层浸润及盆腔淋巴结转移发生的关系,为老年宫颈癌转移的早期防治提供依据。方法选择2010年1月至2012年1月住院老年宫颈癌患者36例,手术切除获取癌组织标本,用实时荧光定量PCR检测癌组织中E2-... 目的了解老年宫颈癌E2-EPF表达水平与肿瘤深肌层浸润及盆腔淋巴结转移发生的关系,为老年宫颈癌转移的早期防治提供依据。方法选择2010年1月至2012年1月住院老年宫颈癌患者36例,手术切除获取癌组织标本,用实时荧光定量PCR检测癌组织中E2-EPF mRNA的表达水平,探讨E2-EPF表达水平与肿瘤深肌层浸润及盆腔淋巴结转移发生的关系。结果 36例病例中发现肿瘤深肌层浸润19例,占52.8%,盆腔淋巴结转移10例,占27.8%。深肌层浸润组E2-EPF mRNA平均表达水平为无深肌层浸润组的2.14倍,盆腔淋巴结转移组E2-EPF mRNA平均表达水平为无盆腔淋巴结转移组的1.72倍,均具有统计学差异(P〈0.05)。结论 E2-EPF在发生转移的老年宫颈癌组织中高表达,E2-EPF信号通路可望成为宫颈癌防治的新靶点。 展开更多
关键词 老年 宫颈癌 E2-EPF泛素结合酶 淋巴结转移
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植物泛素化系统 预览 被引量:1
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作者 杜秋丽 李莉 《济宁学院学报》 2011年第3期 52-55,共4页
植物生长发育的许多过程都受到泛素-蛋白酶体途径的调控.泛素-蛋白酶体途径包括两个连续的过程:泛素化系统将底物蛋白泛素化;26s蛋白酶体降解泛素化的靶蛋白.其中泛素化系统对底物的泛素化是通过三种关键酶即泛素活化酶、泛素结合酶和... 植物生长发育的许多过程都受到泛素-蛋白酶体途径的调控.泛素-蛋白酶体途径包括两个连续的过程:泛素化系统将底物蛋白泛素化;26s蛋白酶体降解泛素化的靶蛋白.其中泛素化系统对底物的泛素化是通过三种关键酶即泛素活化酶、泛素结合酶和泛素连接酶的连接级联反应完成的.这三类酶通过泛素介导的蛋白质选择性降解参与植物光形态建成、配子体发育、花发育、种子发育、激素的信号转导、抗逆、抗虫等方面的调控. 展开更多
关键词 泛素蛋白酶体途径 泛素化系统 E1泛素活化酶 E2泛素结合酶 E3泛素连接酶
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羧基末端结合蛋白CtBP2与泛素结合酶UBE2Ⅰ的相互作用 被引量:1
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作者 叶晓霞 石彦 +2 位作者 霍克克 陈东 吴民华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期1783-1788,共6页
目的筛选并确定人羧基末端结合蛋白CtBP2的相互作用蛋白。方法用酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵蛋白筛选人肝cDNA文库,获得与之相互作用的候选蛋白,采用酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验确认相互作用的特异性,最后利用荧光蛋白融合表达... 目的筛选并确定人羧基末端结合蛋白CtBP2的相互作用蛋白。方法用酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵蛋白筛选人肝cDNA文库,获得与之相互作用的候选蛋白,采用酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验确认相互作用的特异性,最后利用荧光蛋白融合表达技术和荧光显微镜观察确认CtBP2与其相互作用蛋白的亚细胞共定位情况。结果酵母双杂交筛选获得了41个与Bd-CtBP2相互作用的阳性克隆,编码10个不同的蛋白,其中有4个克隆编码泛素结合酶UBE2Ⅰ的不同片段。从人肝cDNA文库中扩增获得UBE2Ⅰ的全长编码序列,酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验证实CtBP2与UBE2Ⅰ能够特异性结合。亚细胞定位研究表明GFP-CtBP2弥散分布于细胞核,DsRed-UBE2Ⅰ不均匀分布于细胞核,有部分点状聚集。两者共转染时能够呈点状共定位于细胞核。结论人CtBP2能够在细胞核内与UBE2Ⅰ特异性相互作用,是UBE2Ⅰ的靶蛋白。 展开更多
关键词 羧基末端结合蛋白 酵母双杂交 泛素结合酶UBE2 免疫共沉淀 亚细胞共定位
泛素结合酶E2-EPF高表达质粒的构建及对绒癌细胞JEG-3生长功能的初步探讨 预览 被引量:1
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作者 梁静 卞美璐 《中日友好医院学报》 2011年第3期 156-159,共4页
目的:构建泛素结合酶E2-EPF高表达质粒,初步探讨E2-EPF在绒癌细胞增殖中的作用。方法:基因克隆技术构建pcDNA(3.1+)-E2-EPF高表达质粒,通过瞬时转染将质粒导入绒癌细胞JEG-3中,使E2-EPF高表达;流式细胞仪检测及细胞增殖实验初步研... 目的:构建泛素结合酶E2-EPF高表达质粒,初步探讨E2-EPF在绒癌细胞增殖中的作用。方法:基因克隆技术构建pcDNA(3.1+)-E2-EPF高表达质粒,通过瞬时转染将质粒导入绒癌细胞JEG-3中,使E2-EPF高表达;流式细胞仪检测及细胞增殖实验初步研究E2-EPF高表达对绒癌细胞生长速率的影响。结果:E2-EPF高表达质粒构建成功,瞬时转染后细胞E2-EPFmRNA升高约8.4倍,JEG-3细胞的生长速率显著高于对照组(P〈0.05),处于G2-M期和S期细胞显著增加。结论:E2-EPF参与细胞的生长调控,促进E2-EPF表达可以加速绒癌细胞JEG-3的生长速率。 展开更多
关键词 泛素结合酶E2-EPF 质粒 绒癌细胞JEG-3 细胞增殖
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条斑紫菜泛素结合酶基因的cDNA序列克隆与分析 预览 被引量:10
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作者 易乐飞 刘楚吾 +1 位作者 王萍 周向红 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期719-726,共8页
泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin—proteasomes system,UPS)是真核生物重要的翻译后修饰系统,参与了许多重要的生理反应,同时也参与了蛋白质的质量控制和细胞的稳态维持,因此研究条斑紫菜UPS有助于阐明条斑紫菜在逆境胁迫下通过UPS... 泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin—proteasomes system,UPS)是真核生物重要的翻译后修饰系统,参与了许多重要的生理反应,同时也参与了蛋白质的质量控制和细胞的稳态维持,因此研究条斑紫菜UPS有助于阐明条斑紫菜在逆境胁迫下通过UPS降解异常蛋白和调节蛋白的生物学活性。泛素结合酶(ubiquitin—conjugating enzyme,E2)是UPS的重要组成部分。根据电子克隆结果指导RT-PCR实验,成功克隆了条斑紫菜泛素结合酶基因(PyE2)的cDNA序列(Gen Bankaccession:FJ232910)。该cDNA序列含有长444nt的完整ORF,编码蛋白(PyE2)的分子量16.6ku,长147AA。PyE2与其它物种的E2具有高度的一致性和相似性,反映出应在进化上相当保守。PyE2含有应活性位点的保守序列及半胱氨酸残基,其三维结构与人的Ⅰ类晓高度一致。PyE2不含C端和N端延伸结构,所以在条斑紫菜晓家族中属于Ⅰ类E2。 展开更多
关键词 条斑紫菜 泛素结合酶 克隆 生物信息学
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