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一株新城疫病毒F基因的克隆及其遗传进化分析 预览
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作者 徐萍 徐小博 +2 位作者 TATIANA Fotina 王三虎 赵坤 《湖北农业科学》 2019年第15期132-135,共4页
从新乡市某养鸡场的疑似新城疫病鸡群中分离到1株新城疫病毒,并对该病毒分离株进行F基因的扩增、序列测定和遗传进化分析。结果表明,该新城疫病毒分离株的F基因全长为1662bp,F蛋白裂解位点区的氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,具备强毒... 从新乡市某养鸡场的疑似新城疫病鸡群中分离到1株新城疫病毒,并对该病毒分离株进行F基因的扩增、序列测定和遗传进化分析。结果表明,该新城疫病毒分离株的F基因全长为1662bp,F蛋白裂解位点区的氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,具备强毒株的特征;同源性分析表明,该新城疫病毒分离株与国内外流行的基因Ⅶ型强毒株之间的同源性较高,为87.5%~97.7%,其中与国内流行的基因Ⅶd型的参考毒株同源性最高,为95.4%~97.7%,而与现用疫苗株LaSota、Clone-30、B1、Mukteswar等同源性较低,84.2%~86.6%;系统进化树分析表明,该新城疫病毒分离株与基因Ⅶd型参考毒株FJ882014、FJ608335和GU227738处在同一个进化分支上,亲缘关系最近。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 克隆 序列分析 遗传进化
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猪蛋白质二硫化物异构酶A4基因克隆及密码子偏好性分析 预览 被引量:1
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作者 张小丹 牛熙 +8 位作者 许瑶 阮亦麒 李大鹏 冉雪琴 王嘉福 吴娟 杨镜 田兰 龙艳霞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第4期1074-1085,共12页
试验旨在研究猪蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase A4,PDIA4)基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子使用的差异。试验以香猪子宫组织为试验材料,采用RT-PCR方法扩增获得猪PDIA4基因,参考从NCBI数据库中下载的18个... 试验旨在研究猪蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase A4,PDIA4)基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子使用的差异。试验以香猪子宫组织为试验材料,采用RT-PCR方法扩增获得猪PDIA4基因,参考从NCBI数据库中下载的18个不同物种PDIA 4基因序列,对猪PDIA4基因的密码子使用特性及其与其他物种密码子的使用差异和进化关系进行分析,同时对猪PDIA 4基因与4个模式生物密码子使用偏性进行比较。结果表明,猪PDIA 4基因编码区长1 941 bp,共编码646个氨基酸。与NCBI数据库公布的野猪PDIA 4基因(GenBank登录号:NM_001267834.1)的相似性达99%。猪PDIA 4基因偏好使用G/C结尾的密码子,27种密码子为猪PDIA 4基因的偏好密码子(RSCU>1),其中使用频率最高的前3个密码子分别为CTG(RSCU=3.69)、GCC(RSCU=2.31)和CGC(RSCU=2.29)。比较19个物种PDIA 4基因发现,不同物种间PDIA 4基因的有效密码子数(ENc)、密码子适应指数(CAI)、GC含量以及T、C、A、G、G+C在密码子第3位含量(T3s、C3s、A3s、G3s、GC3s)均存在差异,且密码子偏好以G/C结尾;聚类分析发现,基于CDS序列的系统进化树更符合19个物种的真实分类系统。在密码子使用频率上,猪PDIA 4基因与小鼠基因组间密码子使用偏好程度更为接近,故小鼠更适合作为猪PDIA 4基因的遗传转化和异源表达的受体系统。 展开更多
关键词 PDIA4基因 克隆 密码子偏好性
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芽孢杆菌N1碱性蛋白酶的克隆表达及酶学性质
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作者 陈秀娟 周成 +1 位作者 龚劲松 史劲松 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期685-694,共10页
【背景】蛋白酶广泛应用于制革行业中,酶法脱毛对环境污染较小,但蛋白酶对化学试剂的不稳定性及胶原降解活性限制了其工业应用。【目的】克隆芽孢杆菌(Bacillussp.)N1基因组的碱性蛋白酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,并对重组酶... 【背景】蛋白酶广泛应用于制革行业中,酶法脱毛对环境污染较小,但蛋白酶对化学试剂的不稳定性及胶原降解活性限制了其工业应用。【目的】克隆芽孢杆菌(Bacillussp.)N1基因组的碱性蛋白酶基因,实现其在大肠杆菌中的异源表达,并对重组酶酶学性质及脱毛作用进行研究。【方法】利用基因组文库法克隆获得蛋白酶基因aprG,构建重组大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)pLysS/pET-28a-aprG。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达该重组酶,以福林酚显色法对其酶学性质进行研究,并将AprG作用于羊皮、兔皮和羽毛。【结果】克隆得到蛋白酶基因aprG,并实现其在大肠杆菌中的表达。重组酶AprG最适反应温度为50°C,最适反应pH为10.0。各种金属离子对AprG活性影响较小,且AprG对表面活性剂和氧化剂、还原剂的耐受性较强。底物特异性分析表明,该酶胶原活性较低。AprG对羊皮和兔皮作用显著,且降解羽毛效果明显。【结论】蛋白酶AprG在制革行业中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 芽孢杆菌N1 克隆 酶学表征 低胶原活性 脱毛作用
肺炎克雷伯菌榆中分离株 OmpK17基因的克隆、生物信息学分析及免疫原性研究 预览
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作者 程家海 殷娟斌 +3 位作者 白珊泽 田泽暘 庞红红 包世俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1456-1465,共10页
试验旨在研究肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)外膜蛋白OmpK17基因序列特征及其免疫原性。参照GenBank中肺炎克雷伯菌外膜蛋白OmpK17基因序列(登录号:U52843.1)设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增获得了肺炎克雷伯菌榆中分离株(YZ株)... 试验旨在研究肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)外膜蛋白OmpK17基因序列特征及其免疫原性。参照GenBank中肺炎克雷伯菌外膜蛋白OmpK17基因序列(登录号:U52843.1)设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增获得了肺炎克雷伯菌榆中分离株(YZ株)OmpK17基因CDS序列,应用相关软件及程序对OmpK17基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,构建其原核表达载体pET-OmpK17,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达。表达产物纯化后免疫新西兰兔制备多抗血清,应用ELISA和Westernblotting分析了重组蛋白的免疫原性。结果显示,肺炎克雷伯菌YZ株外膜蛋白OmpK17基因高度保守,其CDS序列全长513bp,编码170个氨基酸,与GenBank中其他肺炎克雷伯菌OmpK17基因序列同源性均高于99.6%;OmpK17蛋白分子质量约为18.5ku,具有较强的亲水性,含有1个信号肽、1个跨膜区和6个抗原决定簇区域,是一种具有桶状三维结构的跨膜蛋白。SDS-PAGE结果显示,OmpK17基因在大肠杆菌中获得表达且表达产物主要以包涵体形式存在。ELISA及Westernblotting结果表明,肺炎克雷伯菌OmpK17蛋白具有良好的免疫原性。本研究克隆和表达了肺炎克雷伯菌OmpK17基因及其编码蛋白,并证实该蛋白具有良好的免疫原性,为OmpK17基因的生物学特性研究和肺炎克雷伯菌检测方法的建立奠定了基础,为肺炎克雷伯菌基因工程疫苗的研发提供了理论依据。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 OmpK17基因 克隆 生物信息学 原核表达 免疫原性
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牛HSL基因的克隆和生物信息学分析 预览
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作者 刘燕 李赞 田万年 《畜牧与饲料科学》 2019年第6期9-12,共4页
旨在克隆牛HSL基因的CDS序列,并对该基因进行生物信息学、组织表达谱分析。根据GenBank登录的牛HSL基因序列(NM_001080220)设计1对引物,对牛组织样品中的HSL基因CDS序列进行RT-PCR扩增及序列测定;利用半定量RT-PCR方法检测HSL基因在牛... 旨在克隆牛HSL基因的CDS序列,并对该基因进行生物信息学、组织表达谱分析。根据GenBank登录的牛HSL基因序列(NM_001080220)设计1对引物,对牛组织样品中的HSL基因CDS序列进行RT-PCR扩增及序列测定;利用半定量RT-PCR方法检测HSL基因在牛各组织中的表达情况;利用生物信息学软件对其所编码的牛HSL蛋白进行分析。结果显示,获得的牛HSL基因CDS全长为2271bp,编码756个氨基酸,与GenBank登录的牛HSL基因同源性最高,为99.9%。HSL蛋白含有一个HSL-Nsuperfamily保守结构域,无信号肽结构,具有疏水性。半定量RT-PCR显示,HSL基因在检测的心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肝脏、大网膜、皮下脂肪、肌肉8种组织中均有表达,其中在大网膜和皮下脂肪中表达量较高,在肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、肌肉和心脏中度表达。该试验可为研究牛HSL蛋白的结构和功能提供参考。 展开更多
关键词 克隆 分析 HSL基因 生物信息学 表达谱
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杂交鹅掌楸LhARF2基因启动子的克隆及瞬时表达分析 预览
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作者 刘立盘 钟永达 +2 位作者 杨爱红 李彦强 余发新 《江西科学》 2019年第4期513-518,共6页
生长素响应因子(Auxin response factor,ARF)参与调控植物生长发育的多个途径。本研究利用Tail-PCR技术从杂交鹅掌楸中克隆LhARF2基因5'端上游2637bp序列,即pLhARF2启动子,并利用生物信息学软件PlantCARE分析其包含的调控元件,发现... 生长素响应因子(Auxin response factor,ARF)参与调控植物生长发育的多个途径。本研究利用Tail-PCR技术从杂交鹅掌楸中克隆LhARF2基因5'端上游2637bp序列,即pLhARF2启动子,并利用生物信息学软件PlantCARE分析其包含的调控元件,发现其含有启动子必需元件TATA-box和CAAT-box,以及压力响应、激素响应、光信号转导和代谢循环过程元件。构建pLhARF2-pCAMBIA1300:GUS植物表达载体并瞬时浸染本氏烟草叶片,利用GUS组织化学染色法鉴定烟草叶片中瞬时表达活性,发现在烟草叶片中有蓝色斑块,但颜色较浅。实验结果推测杂交鹅掌楸pLhARF2启动子可以调控GUS基因活性,为下一步研究启动子遗传转化的组织表达活性奠定了基础。 展开更多
关键词 杂交鹅掌楸 pLhARF2启动子 克隆 瞬时表达
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An Analysis of the Alienation in Brave New World 预览
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作者 张月红 《校园英语》 2019年第27期249-250,共2页
Based on the alienation phenomenon described in Brave New World,like the embryonic cloning technology,we can see a fictitious society under totalitarianism and the rudiment of a world b ased on mechanism from the pers... Based on the alienation phenomenon described in Brave New World,like the embryonic cloning technology,we can see a fictitious society under totalitarianism and the rudiment of a world b ased on mechanism from the perspective of Marx’s alienation theory.To analyze the social alienation phenomenon in Brave New World can help us understand the importance of the balance between the productive force of science and technology and humanity,of the fact that scientific and technological progress are likely to lead to dehumanization. 展开更多
关键词 ALIENATION EMBRYONIC CLONING DEHUMANIZATION MECHANISM
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桂花β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆与序列分析 预览
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作者 程楠 项黛徽 +2 位作者 沈雅园 付建新 张超 《河南农业科学》 北大核心 2019年第1期99-104,共6页
为揭示桂花不同品种β-胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase,HYB)基因的序列差异,利用已构建的桂花花瓣转录组数据库中Unigene序列信息,结合RT-PCR技术对桂花品种玉玲珑、金球桂、堰虹桂和日香桂中2个β-胡萝卜素羟化酶基因(HYB1和H... 为揭示桂花不同品种β-胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase,HYB)基因的序列差异,利用已构建的桂花花瓣转录组数据库中Unigene序列信息,结合RT-PCR技术对桂花品种玉玲珑、金球桂、堰虹桂和日香桂中2个β-胡萝卜素羟化酶基因(HYB1和HYB2)的最大阅读框进行扩增,并测序验证。生物信息学分析结果表明,4个桂花品种HYB 1基因均含有长为909bp的开放阅读框,编码302个氨基酸残基;HYB 2基因均含有长为915bp的开放阅读框,编码304个氨基酸残基。4个桂花品种HYB1和HYB2推导的氨基酸序列均具备保守的组氨酸结构域。HYB1基因核苷酸序列存在27个变异位点,其氨基酸序列存在8个变异位点;HYB2基因核苷酸序列存在12个变异位点,其氨基酸序列存在3个变异位点。进化树分析结果发现,4个桂花品种的HYB1和HYB2蛋白与茄科植物番茄和辣椒HYB蛋白亲缘性最高。 展开更多
关键词 桂花 花色 Β-胡萝卜素羟化酶 克隆 序列分析
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小尾寒羊ACAA 1基因CDS克隆及组织表达谱分析 预览
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作者 王延莉 梁祎凡 +3 位作者 肖成 金花子 曹阳 金海国 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期2823-2833,共11页
为探索乙酰辅酶A酰基转移酶1(acetyl-coenzyme A acyltransferase 1,ACAA1)基因的生物学功能,明确该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异,试验采集小尾寒羊心脏、肝脏、胃、十二指肠、小肠、背最长肌、皮下脂肪组织,提取总RNA,根据GenB... 为探索乙酰辅酶A酰基转移酶1(acetyl-coenzyme A acyltransferase 1,ACAA1)基因的生物学功能,明确该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异,试验采集小尾寒羊心脏、肝脏、胃、十二指肠、小肠、背最长肌、皮下脂肪组织,提取总RNA,根据GenBank中公布的绵羊ACAA 1基因序列(登录号:XM_004018227.3)设计引物,利用RT-PCR和分子克隆技术获得小尾寒羊ACAA 1基因完整CDS,并对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测该基因在小尾寒羊不同组织中的表达差异。结果显示,小尾寒羊ACAA 1基因CDS长为1 071 bp,编码356个氨基酸;小尾寒羊ACAA 1基因氨基酸序列与绵羊、山羊同源性最高,约为100%,与食蟹猴、狒狒和野猪的同源性均为93.0%;系统进化树结果显示,小尾寒羊与绵羊、山羊位于同一分支,亲缘关系较近,与穿山甲、狒狒的亲缘关系较远;各物种间同源性较高,保守性较强。ACAA1蛋白分子质量约为36.92 ku,分子式为C 1603 H 2638 N 458 O 501 S 18,理论等电点为7.48,半衰期为30 h,消光系数为9 440,稳定系数为40.88,脂溶系数为92.67,亲水性氨基酸残基约占58%,为不稳定的碱性脂溶性亲水蛋白;不存在跨膜结构与信号肽,不是分泌蛋白;主要分布在过氧化物酶体,存在25个磷酸化位点、3个潜在的N-糖基化位点和4个O-糖基化位点。ACAA1蛋白二级结构含有α-螺旋(37.92%)、β-折叠(12.64%)和无规则卷曲(49.44%),三级结构预测结果与其一致。实时荧光定量PCR结果显示,ACAA 1基因在小尾寒羊不同组织中均有表达,其中在肝脏、皮下脂肪、小肠中表达量相对较高。本试验结果为进一步探索小尾寒羊ACAA 1基因生物学功能及筛选与肉质性状相关的候选基因提供依据。 展开更多
关键词 小尾寒羊 ACAA 1基因 克隆 生物信息学分析 组织表达
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一种三角帆蚌肌浆网Ca^2+-ATP酶基因cDNA的全长克隆与表达分析 预览
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作者 张爱菊 刘士力 +2 位作者 刘金殿 张根芳 周志明 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期545-555,共11页
采用RACE技术,从三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)鳃组织中成功克隆得到一种肌浆网Ca^2+-ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA)基因的全长cDNA序列,共3326bp,包含201-bp5’-UTR区域、3060-bp编码框(ORF)和65-bp3’-UTR... 采用RACE技术,从三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)鳃组织中成功克隆得到一种肌浆网Ca^2+-ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA)基因的全长cDNA序列,共3326bp,包含201-bp5’-UTR区域、3060-bp编码框(ORF)和65-bp3’-UTR。ORF共编码1019个氨基酸,预测无信号肽。该基因氨基酸序列呈现出典型的Ca^2+-ATP酶特征,由Cation_ATPase_N、E1-E2ATPase、Hydrolase、Cation_ATPase_C四种类型结构域组成,其内含SERCAs的常见结构组成包括磷酸化区域、异硫氰酸荧光素位点、FSBA结合位点、受磷蛋白结合区以及毒胡萝卜素位点。分析显示,该基因序列高度保守且与海洋软体动物具有最高同源性。荧光定量PCR检测,该基因在三角帆蚌外套膜、斧足、鳃、肝胰腺、性腺等5个组织中均有表达,且在鳃、外套膜、肝胰腺组织中表达较高。不同Ca^2+浓度处理试验的结果表明,随水体中Ca^2+浓度逐渐升高,该基因在外套膜中的表达水平呈先下降后上升趋势,并在Ca^2+浓度为60mg·L^-1时达到最低值,80mg·L^-1时达到最高值。同时在60mg·L^-1Ca^2+浓度条件下,外套膜中SERCA基因的表达量随时间推移先上升,并于48h时达到最高,而后逐渐下降。上述结果为进一步深入研究SERCA基因的功能及其调控机理奠定了基础。 展开更多
关键词 三角帆蚌 SERCA 克隆 基因表达 钙刺激
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重组牛LAP-CATHL2融合抗菌肽的克隆及原核表达 预览
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作者 王静 高利 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第4期40-49,共10页
从牛舌鳞状上皮细胞和股骨骨髓细胞中分别克隆出牛β-防御素LAP和牛CATHL2抗菌肽,然后利用重叠延伸PCR克隆得到重组牛LAP-CATHL2抗菌肽,将其克隆进pGEX-4T-1载体,构建了重组牛LAP-CATHL2抗菌肽的原核表达载体,并转进感受态大肠杆菌BL21... 从牛舌鳞状上皮细胞和股骨骨髓细胞中分别克隆出牛β-防御素LAP和牛CATHL2抗菌肽,然后利用重叠延伸PCR克隆得到重组牛LAP-CATHL2抗菌肽,将其克隆进pGEX-4T-1载体,构建了重组牛LAP-CATHL2抗菌肽的原核表达载体,并转进感受态大肠杆菌BL21进行诱导表达,并加以纯化,得到了重组牛LAP-CATHL2抗菌肽产量是2.83 mg·mL-1培养液。 展开更多
关键词 重组牛LAP-CATHL2融合抗菌肽 克隆 原核表达
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犬弓首蛔虫enol-1基因的克隆及序列分析
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作者 卜卜才加 张念章 +2 位作者 张芙恺 朱兴全 赵权 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期97-101,共5页
对犬弓首蛔虫烯醇化酶(enolase)基因(enol-1)进行克隆及序列分析,预测其作为抗犬弓首蛔虫疫苗候选抗原的潜力。从犬弓首蛔虫的cDNA中扩增出enol-1基因,连接至pMD18-T载体,并筛选阳性克隆后,测序鉴定。将测序结果正确的核苷酸序列翻译成... 对犬弓首蛔虫烯醇化酶(enolase)基因(enol-1)进行克隆及序列分析,预测其作为抗犬弓首蛔虫疫苗候选抗原的潜力。从犬弓首蛔虫的cDNA中扩增出enol-1基因,连接至pMD18-T载体,并筛选阳性克隆后,测序鉴定。将测序结果正确的核苷酸序列翻译成氨基酸序列,运用生物信息学软件分析enol-1蛋白的结构,预测抗原表位及功能位点,并运用Maximum likelihood(ML)法构建了系统发育树。结果表明:enol-1基因长1 311 bp,可编码437个氨基酸。Enol-1蛋白中包含18个α-螺旋区,7个β-折叠区,10个亲水区域和16个柔性区域,并预测含有9个线性B细胞抗原表位,enol-1蛋白可能具有潜在的免疫原性。并对犬弓首蛔虫enol-1基因进行了克隆及序列分析,为评价enol-1蛋白作为犬弓首蛔虫亚单位疫苗及表位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 犬弓首蛔虫 enol-1基因 克隆 生物信息学分析
8个茶树WRKY转录因子基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 王鹏杰 陈笛 +5 位作者 林浥 郑知临 郑玉成 杨江帆 岳川 叶乃兴 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期685-693,共9页
目的克隆茶树WRKY转录因子(Cs WRKYs)家族中的8个成员,并对其进行生物信息学和非生物胁迫下的表达分析。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术从'铁观音'茶树品种中克隆8个WRKY基因,运用生物信息学的方法对8个WRKY基因编码的... 目的克隆茶树WRKY转录因子(Cs WRKYs)家族中的8个成员,并对其进行生物信息学和非生物胁迫下的表达分析。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术从'铁观音'茶树品种中克隆8个WRKY基因,运用生物信息学的方法对8个WRKY基因编码的蛋白进行理化性质分析,同时通过与拟南芥同源基因的比较进行进化树的构建、多序列比对及保守基序分析。采用qRT-PCR方法检测8个WRKY基因在低温、干旱和脱落酸(abscisicacid,ABA)胁迫处理下的表达量。结果 8个WRKY转录因子基因开放阅读框(ORF)长度分别为1 407、2 208、1 302、849、978、879、1 443和810 bp,分别编码468、735、433、282、325、292、480和269个氨基酸,GenBank登录号分别为MG298951、MG298952、MG298955、MG298956、MG298957、MG298959、MG298960和MG298963。系统进化树及序列比对分析显示,8个CsWRKYs可以分成了2个大组;除CsWRKY39缺少锌指结构外,其他CsWRKYs均含有WRKYGQK保守七肽结构域及锌指结构组成的WRKY结构域。非生物胁迫下的表达模式显示,CsWRKYs基因在低温、干旱和ABA胁迫处理下均有表达且表达受到不同程度的诱导;CsWRKY2、CsWRKY21、CsWRKY23、CsWRKY44和CsWRKY65基因在低温处理后表达量上调超过2,显著响应低温胁迫;CsWRKY21、CsWRKY23、CsWRKY39和CsWRKY65在干旱胁迫处理12 h及ABA处理6 h时均上调表达。结论克隆获得来自不同组的8个茶树WRKY基因,推测与茶树抗逆密切相关。 展开更多
关键词 茶树 WRKY转录因子 克隆 生物信息学 非生物胁迫
福建黄兔Nramp1基因的克隆及序列分析
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作者 陈冬金 桑雷 +3 位作者 孙世坤 陈岩锋 王锦祥 谢喜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第10期49-53,共5页
为掌握福建黄兔自然巨噬细胞抗性相关蛋白1(natural macro-phage resistant association protein one,Nramp1)基因的分子基础,应用RT-PCR和RACE技术从脾脏组织总RNA中克隆出福建黄兔Nramp1基因的cDNA序列并进行序列分析。结果显示:福建... 为掌握福建黄兔自然巨噬细胞抗性相关蛋白1(natural macro-phage resistant association protein one,Nramp1)基因的分子基础,应用RT-PCR和RACE技术从脾脏组织总RNA中克隆出福建黄兔Nramp1基因的cDNA序列并进行序列分析。结果显示:福建黄兔Nramp1克隆序列全长为2 180 bp(GenBank登录号KT943979),其中5′非翻译区103 bp,3′非翻译区443 bp,1 635 bp的开放阅渎框编码544个氨基酸;福建黄兔与人、猪、马、黄牛、水牛、绵羊、鹿和犬的核苷酸序列同源性分别为86.0%、84.7%、86.2%、84.9%、85.0%、85.4%、85.2%和85.9%。研究结果为进一步研究福建黄兔Nramp1基因的结构、表达及抗病育种等提供基础数据。 展开更多
关键词 福建黄兔 Nramp1 克隆 序列分析
Cloning of Gene of Carrot Antifreeze Protein and Its Transformation to Sugar Beet
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作者 崔杰 李俊良 +3 位作者 王琮玉 代翠红 刘俊利 刘天娇 《中国甜菜糖业》 2019年第3期1-4,18共5页
Sugar beet in our country and the world at one of the main sugar crops, in North China, Northeast China, Northwest China large -scale cultivation. Compared with the cold-sensitive plants is a relatively cold - resista... Sugar beet in our country and the world at one of the main sugar crops, in North China, Northeast China, Northwest China large -scale cultivation. Compared with the cold-sensitive plants is a relatively cold - resistant sugar beet crops, but sugar beet is more sensitive to low temperature below zero. Frostbite of late frost in early spring and early frost in autumn seriously affects the growth of sugar beet at seedling stage and sugar accu? mulation stage. Therefore, it is very beneficial for the production of northern sugar beet to cultivate the variety of cold and cold beet. In this study, the method of PCR cloning using a new antifreeze protein found in carrots (afp) gene, chloroplast expression vector construction of sugar beet, sugar beet transformed using particle bom? bardment, with the initial antifreeze protein gene in transgenic plant regeneration. Induction of differentiation, ac? cess to a number of resistant buds, many times after subculture, eventually three resistant plants. Some of them resistant plants for PCR testing, results show that: there is an integration of the chloroplast genome have afp gene. For the rapid cultivation of cold 一 resistant frozen beet varieties lay the foundation. 展开更多
关键词 afp gene CLONING SUGAR BEET CHLOROPLAST TRANSFORMATION TRANSGENIC plant regeneration
羚牛苦味受体3(Tas2R3)基因的克隆及生物信息学分析
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作者 周明 余姣姣 +2 位作者 李彪 欧阳菠 杨建东 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1957-1968,共12页
Tas2R3是苦味受体基因家族中一个重要的成员,为了进一步了解和研究羚牛(Budorcas taxicolor)苦味受体基因的结构和功能,本研究对羚牛苦味受体3 (Tas2R3)基因进行了克隆和生物信息学分析(GenBank登录号:MG650195)。结果显示,羚牛Tas2R3... Tas2R3是苦味受体基因家族中一个重要的成员,为了进一步了解和研究羚牛(Budorcas taxicolor)苦味受体基因的结构和功能,本研究对羚牛苦味受体3 (Tas2R3)基因进行了克隆和生物信息学分析(GenBank登录号:MG650195)。结果显示,羚牛Tas2R3基因编码区(coding sequence, CDS)序列全长951 bp,共编码316个氨基酸,以亮氨酸含量最高,谷氨酰胺含量最低。其蛋白质等电点为9.68,分子量为51.96 kD。高级结构功能预测显示,二级结构以α-螺旋为主,蛋白质为碱性、稳定的亲水性蛋白,由4个胞外区、7个跨膜区和4个胞内区组成。预测到2种类型共8个糖基化功能位点和4种类型共15个磷酸化功能位点。通过比较Tas2R3基因种间相似性发现,在偶蹄目中具有很高的同源性,羚牛与绵羊(Ovis aries)的相似性最高(0.98),与褐家鼠(Rattus norvegicus)最低(0.52)。用羚牛、绵羊等12个物种的Tas2R3基因CDS序列构建的NJ树与ME树结构一致,表明Tas2R3基因适合用于构建不同物种间的系统进化树。 展开更多
关键词 羚牛 苦味受体 Tas2R3基因 克隆 生物信息学分析
鸡传染性法氏囊病病毒DK株VP2基因序列分析及其对SPF雏鸡的致病力 预览
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作者 雷赟赟 林绍青 +5 位作者 刘秉珲 于高博 武琦 周五朵 黄宝钦 吴异健 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期414-417,共4页
为探究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)DK分离株的致病性和遗传变异情况,本研究测定了该分离株的鸡胚半数致死量(ELD50)、对SFP雏鸡的致病力以及扩增病毒的VP2基因并分析其序列。结果显示,DK分离株对鸡胚的ELD50为104.5/0.2mL,以2×10^3... 为探究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)DK分离株的致病性和遗传变异情况,本研究测定了该分离株的鸡胚半数致死量(ELD50)、对SFP雏鸡的致病力以及扩增病毒的VP2基因并分析其序列。结果显示,DK分离株对鸡胚的ELD50为104.5/0.2mL,以2×10^3ELD50剂量感染SFP雏鸡出现典型IBD的临床症状、剖检和组织学病变;实验鸡发病率为100%,致死率为44.4%;DK株VP2基因序列与参考株的同源性为93.1%~97.0%、氨基酸序列同源性为93.6%~97.5%,其基因序列和氨基酸序列均与Cu-1wt参考株(经典株)同源性最高;DK株VP2氨基酸序列的七肽区SASWSGS及249Q、253Q、279D、284A、290M、313V、330S氨基酸位点均与强毒株的氨基酸位点一致;但其222P、256V、299N3个氨基酸不符合IBDV超强毒株的特征;而其第222、249位氨基酸为P和Q,与抗原变异株(vIBDV)的T和K也不相同。结果表明:IBDVDK株为中等偏强毒力病毒。本研究为IBD的防控提供参考依据。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 VP2基因 克隆 序列分析
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26个桑树品种的ITS序列位点的克隆与分析 预览
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作者 王晖 高妍夏 +4 位作者 高玉军 李娜 谢岩 张东豪 杨帆 《北方蚕业》 2019年第2期1-4,共4页
选择26个代表性的桑树品种,提取DNA作为模板,进行PCR反应,以已经公布的ITS引物作为本研究的扩增引物,同时从NCBI中搜索所有关于桑树的ITS扩增序列,下载与本研究的扩增序列进行比对。结果表明:26个代表性桑树品种中,只有毛桑出现了两个... 选择26个代表性的桑树品种,提取DNA作为模板,进行PCR反应,以已经公布的ITS引物作为本研究的扩增引物,同时从NCBI中搜索所有关于桑树的ITS扩增序列,下载与本研究的扩增序列进行比对。结果表明:26个代表性桑树品种中,只有毛桑出现了两个个变异位点,其它25个品种或种质序列完全一致,从Genbank中共下载到15条桑树的ITS序列,其中有3条序列含有3个变异位点。本研究证明,单独的ITS只能进行少数几个桑树品种的鉴别,不能完全准确地进行桑树品种分类。 展开更多
关键词 桑树 基因间隔序列 克隆
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辣椒CaWRKY8基因克隆及胁迫下的表达分析 预览
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作者 刁玄章 王述彬 +3 位作者 刁卫平 潘宝贵 戈伟 高青海 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期210-217,共8页
为了揭示辣椒WRKY基因功能,以辣椒PI201234为实验材料,克隆得到WRKY基因全长1 647bp的cDNA序列,命名为CaWRKY8。生物信息学分析表明,该基因含有一个1 647bp完整开放阅读框(ORF),编码548个氨基酸残基。氨基酸序列分析显示,CaWRKY8编码的... 为了揭示辣椒WRKY基因功能,以辣椒PI201234为实验材料,克隆得到WRKY基因全长1 647bp的cDNA序列,命名为CaWRKY8。生物信息学分析表明,该基因含有一个1 647bp完整开放阅读框(ORF),编码548个氨基酸残基。氨基酸序列分析显示,CaWRKY8编码的蛋白含有2个WRKY结构域,属于Group I。氨基酸序列比对结果表明,CaWRKY8与辣椒WRKY25、马铃薯WRKY、番茄基因组中预测的WRKY26、烟草基因组中预测的WRKY33和猕猴桃WRKY的氨基酸序列之间均具有高度的保守性。实时荧光定量分析表明,CaWRKY8受盐、高温、干旱和辣椒疫霉菌诱导表达;其中CaWRKY8的表达量在盐和干旱处理下3h达到峰值,分别是对照的2.38倍和121.10倍,在高温和疫霉菌处理下12h达到峰值,分别是对照的6.12和6.81倍。以上研究结果表明,CaWRKY8基因在辣椒响应胁迫进程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 辣椒 CaWRKY8 克隆 胁迫 生物信息学
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核桃FLOWERING LOCUS T(JrFT)基因的克隆及表达分析 预览
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作者 王企 陈利娜 +4 位作者 夏小丛 敬丹 李好先 骆翔 曹尚银 《江西农业学报》 CAS 2019年第4期13-20,共8页
为了了解核桃FLOWERING LOCUS T(JrFT)基因在核桃雌雄异熟开花机制中的作用,以核桃雌先型品种‘极早丰’与雄先型品种‘新早丰’在3个时期(2月6日、3月21日及4月7日)的雌、雄花芽为试验材料,结合荧光定量PCR(qRT-PCR)、RT-PCR扩增、生... 为了了解核桃FLOWERING LOCUS T(JrFT)基因在核桃雌雄异熟开花机制中的作用,以核桃雌先型品种‘极早丰’与雄先型品种‘新早丰’在3个时期(2月6日、3月21日及4月7日)的雌、雄花芽为试验材料,结合荧光定量PCR(qRT-PCR)、RT-PCR扩增、生物信息技术,分析了核桃JrFT基因的结构与表达,预测了JrFT基因的功能。结果表明:核桃JrFT基因在‘极早丰’与‘新早丰’3个时期的雌、雄花芽中均有表达;在不同时期同一花芽JrFT基因的表达量有所差异;在同一时期,JrFT基因在雌花中的表达量明显高于雄花,在‘新早丰’雄花中的表达量高于在‘极早丰’雄花中的表达量。克隆获得了JrFT基因的CDS序列,其长度为525 bp,编码174个氨基酸,含有高度保守的PEBP蛋白结构域。在NCBI数据库进行Blast比对显示:核桃JrFT基因与其他木本植物FT同源基因的相似性较高,可达到80%以上;JrFT蛋白与其他植物FT蛋白的相似性也很高。系统进化分析也同样说明JrFT基因属于PEBP家族基因。因此推测JrFT基因可能在核桃开花进程中具有一定的促进作用。 展开更多
关键词 核桃 FLOWERING LOCUS T(FT)基因 克隆 功能分析 表达载体构建
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