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多金属氧酸盐的酶学研究进展
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作者 迟国祥 王力 《食品工业》 CAS 北大核心 2019年第1期277-282,共6页
多金属氧酸盐(POMs)具有独特的结构和功能特性。在酶学领域,因有望成为一种潜在有效的酶抑制剂而备受关注。通过对国内外研究成果进行综述,并结合实验室多年的研究成果,论述了其在酶动力学和PAGE电泳分析方面的应用,以期为进一步探索多... 多金属氧酸盐(POMs)具有独特的结构和功能特性。在酶学领域,因有望成为一种潜在有效的酶抑制剂而备受关注。通过对国内外研究成果进行综述,并结合实验室多年的研究成果,论述了其在酶动力学和PAGE电泳分析方面的应用,以期为进一步探索多金属氧酸盐在酶学领域的研究提供理论依据。 展开更多
关键词 多金属氧酸盐(POMs) 酶动力学 PAGE电泳
毒死蜱和重金属对近海沉积物碱性磷酸酶和过氧化氢酶活性的影响
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作者 李宏观 李玉 +2 位作者 樊杨 柏晓云 吉春慧 《海洋湖沼通报》 CSCD 北大核心 2019年第2期107-115,共9页
选择连云港近海临洪河口河心浅滩沉积物,采用不同浓度毒死蜱和重金属于室内培养,研究了毒死蜱和重金属对沉积物碱性磷酸酶和过氧化氢酶酶活性及其动力学特征的影响。研究结果表明:1)碱性磷酸酶活性受毒死蜱影响显著,峰值出现在10-200mg... 选择连云港近海临洪河口河心浅滩沉积物,采用不同浓度毒死蜱和重金属于室内培养,研究了毒死蜱和重金属对沉积物碱性磷酸酶和过氧化氢酶酶活性及其动力学特征的影响。研究结果表明:1)碱性磷酸酶活性受毒死蜱影响显著,峰值出现在10-200mg/kg浓度区间,培养第三周时Vmax显著下降,酶活性抑制作用最显著。2)毒死蜱对过氧化氢酶激活作用的峰值出现在50mg/kg处。培养三周,过氧化氢酶活性逐渐回归正常值。3)Cd处理对沉积物碱性过氧化氢酶和过氧化氢酶抑制作用显著,明显强于Pb处理以及Cd、Pb复合处理,而Pb在相当程度上缓解了Cd对两种酶的抑制作用。4)酶活性可以用来指示沉积物的早期污染状况。 展开更多
关键词 毒死蜱 重金属 动力学特征
人红细胞内核苷二磷酸激酶的酶学特性及动力学研究
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作者 杨春晓 师少军 +4 位作者 沈如飞 周嘉黎 罗小梅 张玉 刘亚妮 《药物分析杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期385-392,共8页
目的:探讨人红细胞(RBC)内核苷二磷酸激酶(NDPK)的酶学动力学特性。方法:利用NDPK催化反应底物二磷酸脱氧腺苷、三磷酸脱氧鸟苷生成三磷酸脱氧腺苷及二磷酸脱氧鸟苷(dADP+dGTP←→dATP+dGDP)的酶促反应,通过改变反应温度、热... 目的:探讨人红细胞(RBC)内核苷二磷酸激酶(NDPK)的酶学动力学特性。方法:利用NDPK催化反应底物二磷酸脱氧腺苷、三磷酸脱氧鸟苷生成三磷酸脱氧腺苷及二磷酸脱氧鸟苷(dADP+dGTP←→dATP+dGDP)的酶促反应,通过改变反应温度、热处理温度、pH条件、底物浓度及抑制剂浓度进行NDPK酶学动力学研究。结果:底物动力学研究中,Linewever-Burk双倒数图为两组平行直线。产物抑制动力学研究中,固定反应底物dGTP浓度并改变dADP浓度时,dATP表现为非竞争性抑制作用,固定反应底物dADP浓度并改变dGTP浓度时,dATP表现为竞争性抑制作用。反应遵循乒乓机制。文中实验条件下,NDPK酶促反应最大速度V_(max)约为110μmol·min~(-1)·g~(-1),K_m~(dADP)=1.26 mmol·L~(-1),K_m~(dGTP)=1.94 mmol·L~(-1)。dATP抑制常数K_i约为0.34~0.67 mmol·L~(-1)。结论:NDPK为酶促反应dADP+dGT dAPT+dGDP的一种高亲和性催化酶。 展开更多
关键词 嘌呤类药物 人红细胞 核苷二磷酸激酶 酶学动力学 药物不良反应
冷/热榨紫苏子油对黄嘌呤氧化酶的抑制作用
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作者 肖小年 桂静芬 +3 位作者 刘唤 孟培 侯海涛 易醒 《中国食品学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期207-211,共5页
考察冷榨法和热榨法制备的紫苏子油对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及抑制动力学。分别制备1,2,3,4,5,6 mg/m L的冷/热榨紫苏子油醇溶液,采用紫外分光光度法测定紫苏子油对黄嘌呤氧化酶的抑制活性。试验结果表明冷/热榨紫苏子油均对黄嘌呤氧... 考察冷榨法和热榨法制备的紫苏子油对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及抑制动力学。分别制备1,2,3,4,5,6 mg/m L的冷/热榨紫苏子油醇溶液,采用紫外分光光度法测定紫苏子油对黄嘌呤氧化酶的抑制活性。试验结果表明冷/热榨紫苏子油均对黄嘌呤氧化酶有一定的抑制活性,随着紫苏子油浓度的增加抑制活性增大,且冷榨紫苏子油的抑制效果好。动力学分析可知:冷/热榨紫苏子油对黄嘌呤氧化酶的作用均属于竞争性抑制。冷/热榨紫苏子油的IC50分别为7.07,10.56 mg/m L,抑制常数Ki分别为2.86,4.23 mg/m L。 展开更多
关键词 紫苏子油 黄嘌呤氧化酶 尿酸 酶动力学
人类线粒体肌酸激酶uMtCK的底物结合位点分析
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作者 孟浩毅 李丹阳 +3 位作者 孙正阳 杨兆勇 张志斐 袁丽杰 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期24-32,共9页
研究人类线粒体肌酸激酶uMtCK的结合位点,将其与底物肌酸和ATP结合有关的关键氨基酸进行突变,并对突变体进行酶动力学和圆二色谱数据分析,探讨这些关键氨基酸在底物识别和催化过程中的作用。结果显示,与野生酶相比,突变体Q313A和R336A的... 研究人类线粒体肌酸激酶uMtCK的结合位点,将其与底物肌酸和ATP结合有关的关键氨基酸进行突变,并对突变体进行酶动力学和圆二色谱数据分析,探讨这些关键氨基酸在底物识别和催化过程中的作用。结果显示,与野生酶相比,突变体Q313A和R336A的KmCr分别提高了2.6和2.9倍,kcat下降了19%和55%;同样地,与ATP结合相关的突变体R125A和R287A分别使得KmATP升高了3.2和4.2,kcat下降了72%和38%。以上结果表明突变体R125A、R287A、Q313A和R336A影响对底物的结合,同时也降低了酶促反应的速度。利用圆二色谱比较野生酶与不同突变体的二级结构并无明显变化,但进一步的结构模拟表明底物结合位点氨基酸在与底物之间的氢键对底物的识别和酶催化过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 肌酸激酶 定点突变 酶动力学 结构模拟
马钱子碱和士的宁在人肝微粒体和UGT1A4重组酶中的体外酶动力学研究 预览
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作者 李阿荣 李丽明 +4 位作者 邓志军 刘若轩 郭洁文 袁牧 徐峰 《广东药科大学学报》 CAS 2018年第5期541-546,共6页
目的 考察士的宁和马钱子碱在体外人肝微粒体(HLMs)和UDP-葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)1A4中的代谢动力学,及UGT1A4抑制剂对士的宁和马钱子碱在HLMs中葡糖醛酸化反应的抑制作用。 方法 采 用HPLC-MS/MS测定士的宁和马钱子碱在体外孵育... 目的 考察士的宁和马钱子碱在体外人肝微粒体(HLMs)和UDP-葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)1A4中的代谢动力学,及UGT1A4抑制剂对士的宁和马钱子碱在HLMs中葡糖醛酸化反应的抑制作用。 方法 采 用HPLC-MS/MS测定士的宁和马钱子碱在体外孵育体系中代谢产物含量,GraphPad Prism软件计算酶促反应最大反应速率( V max )、 米氏常数( K m)等酶动力学参数;通过抑制试验观察UGT1A4特异性抑制剂海柯皂苷元对士的宁和马钱子碱在HLMs中Ⅱ相代谢影响。 结果 在HLMs和UGT1A4孵育体系中,马钱子碱和士的宁均生成1个单葡萄糖醛酸代谢产物,二者在HLMs中的代谢产物酶促反应参数 K m分别为(76.23±7.77)、(66.55±11.46) μmol/L, V max 分别为(4.21±0.24)、(6.60±0.59) nmol/(min ·mg); 在人重组UGT1A4孵育体系中 K m分别为(56.52±11.63)、(63.33±13.32)μmol/L, V max 分别为(8.30±0.83)、(2.53±0.27) nmol/(min ·mg)。HLMs孵育体系中加入UGT1A4特异性抑制剂海柯皂苷元后,马钱子碱和士的宁代谢产物含量均显著降低。 结论 UGT1A4是马钱子碱和士的宁Ⅱ相代谢葡糖醛酸化主要亚酶,临床可能存在二者基于UGT1A4酶的药物相互作用。 展开更多
关键词 士的宁 马钱子碱 人肝微粒体 UGT1A4 酶动力学
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黄芩素在正常及早期肝纤维化模型小鼠体外肝、肠微粒体中Ⅱ相代谢差异
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作者 李雪 李力 +1 位作者 黎赛 刘湘 《中南药学》 CAS 2018年第1期49-54,共6页
目的考察肝纤维化模型小鼠肝、肠微粒体对黄芩素体外葡萄糖醛酸化代谢影响和酶促反应动力学研究。方法小鼠每周3次灌胃20%CCl4油溶液,持续6周,检测血清肝功能指标ALT和AST,ELISA试剂盒检测血清中HA,天狼猩红染色和免疫组化染色α-SMA评... 目的考察肝纤维化模型小鼠肝、肠微粒体对黄芩素体外葡萄糖醛酸化代谢影响和酶促反应动力学研究。方法小鼠每周3次灌胃20%CCl4油溶液,持续6周,检测血清肝功能指标ALT和AST,ELISA试剂盒检测血清中HA,天狼猩红染色和免疫组化染色α-SMA评估肝纤维化模型。检测正常和肝纤维小鼠肠道内容物β-葡萄糖醛酸苷酶活性,同时建立小鼠肝、肠微粒体孵育体系对黄芩素葡萄糖醛酸化反应的酶促反应动力学进行研究,评估其代谢动力学类型,并对比在正常和肝纤维化模型中最大反应速率(Vmax)和米氏常数(Km)。结果经过6周CCl4诱导后,模型组的血清、病理和免疫组化检测结果显示肝纤维化模型复制成功。体外实验结果显示,黄芩素在小鼠肝微粒体中的代谢方式符合米氏方程,而在肠微粒体中属于底物抑制型。与正常组相比,黄芩素在肝纤维化后的肝微粒体中的代谢速率要显著提高(P〈0.01),而在肠微粒体中则相反,但差异无统计学意义,同时发现肝纤维化后肠道菌群中的β-葡萄糖醛酸苷酶活性要显著高于正常组(P〈0.01)。结论肝纤维化状态对葡萄糖醛酸苷转移酶等Ⅱ相代谢酶的活性带来显著的改变,这值得我们关注肝纤维化疾病状态下药物的代谢特征和临床疗效,促进安全合理用药。 展开更多
关键词 肝纤维化 黄芩素 葡萄糖醛酸苷转移酶 酶促反应动力学 Β-葡萄糖醛酸苷酶
氧化白藜芦醇对酪氨酸酶的抑制作用 被引量:1
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作者 王昊 郝谜谜 +4 位作者 刘园园 庄朋伟 李红艳 王艳 张艳军 《现代药物与临床》 CAS 2018年第4期717-722,共6页
目的研究氧化白藜芦醇对酪氨酸酶抑制的作用机制。方法将N-乙酰-L-酪氨酸代替酪氨酸作为底物,HPLC动态监测氧化白藜芦醇对酶催化生成多巴醌的影响;将对苯醌代替多巴醌,HPLC动态监测其对非酶催化生成多巴色素的影响;分别以左旋酪氨酸和... 目的研究氧化白藜芦醇对酪氨酸酶抑制的作用机制。方法将N-乙酰-L-酪氨酸代替酪氨酸作为底物,HPLC动态监测氧化白藜芦醇对酶催化生成多巴醌的影响;将对苯醌代替多巴醌,HPLC动态监测其对非酶催化生成多巴色素的影响;分别以左旋酪氨酸和左旋多巴为底物,在pH 6.8的磷酸盐缓冲体系反应后测定475 nm吸光度值,研究氧化白藜芦醇对酪氨酸酶催化反应进程和酶活性抑制的影响,计算酶的抑制动力学参数。结果氧化白藜芦醇对酪氨酸酶催化过程有抑制作用,对非酶催化过程有促进作用。对酪氨酸酶单酚酶、二酚酶均有抑制作用,半抑制浓度(IC50)分别为2.48μmol/L、0.020 mmol/L。结论氧化白藜芦醇对酪氨酸酶的抑制类型为可逆抑制中的非竞争性抑制。 展开更多
关键词 氧化白藜芦醇 酪氨酸酶 酶动力学 抑制作用
氮磷添加对杉木林土壤碳氮矿化速率及酶动力学特征的影响 预览 被引量:2
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作者 聂二旗 张心昱 +4 位作者 郑国砥 杨洋 王辉民 陈伏生 孙晓敏 《生态学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期615-623,共9页
以江西杉木林红壤为研究对象,开展野外长期氮(N)、磷(P)添加控制试验,设置对照(CK)、N(50kg N hm^-2a^-1)、P(50kg P hm^-2a^-1)、NP(50kg N hm^-2a^-1+50kg P hm^-2a^-1)处理,分析N、P添加对土壤碳矿化速率(Cmin)、氮... 以江西杉木林红壤为研究对象,开展野外长期氮(N)、磷(P)添加控制试验,设置对照(CK)、N(50kg N hm^-2a^-1)、P(50kg P hm^-2a^-1)、NP(50kg N hm^-2a^-1+50kg P hm^-2a^-1)处理,分析N、P添加对土壤碳矿化速率(Cmin)、氮矿化速率(Nmin)和相关的β-1,4-葡萄糖苷酶(βG)和β-1,4-N-乙酰葡糖氨糖苷酶(NAG)动力学参数的影响。结果表明:(1)N添加明显降低了Cmin和Nmin,比CK分别减少了25%和18%;N添加减小了NAG的潜在最大酶活性(Vmax)、半饱和常数(Km)、催化效率(Vmax/Km),但差异不显著(P〉0.05);N添加显著增加了βG的Vmax、Km,但对Vmax/Km有抑制作用。(2)P输入(P、NP)较CK使NAG的Vmax、Km减小26%—60%;NP同时添加明显提高βG和NAG的Vmax/Km(P〈0.05),但P输入(P、NP)对Cmin和Nmin影响不显著(P〉0.05)。(3)Cmin与土壤溶解性有机碳正相关,Nmin与pH显著正相关,与土壤NH4^+-N、NO3^--N显著负相关;βG和NAG的Vmax/Km均与NH4^+-N、NO3^--N负相关(P〈0.05),Km均与NH4^+-N、NO3^--N正相关(P〈0.05)。βG的Vmax与NH4^+-N、NO3^--N正相关(P〈0.05),NAG的Vmax与有机碳、全氮、全磷、有效磷负相关(P〈0.05)。研究结果表明,在亚热带杉木人工林中,N添加降低土壤pH,增加土壤有效氮含量,抑制βG和NAG的Vmax/Km,对土壤Cmin和Nmin产生抑制作用;而NP添加增加土壤有效磷含量,增加土壤βG和NAG的Vmax/Km。 展开更多
关键词 氮磷添加 碳氮矿化 酶动力学 水解酶 亚热带红壤
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低频超声对丰水梨多酚氧化酶酶活的影响研究
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作者 程谦伟 孟陆丽 +2 位作者 孙庭广 刘文娟 黄翠霞 《食品工业》 北大核心 2018年第8期151-153,共3页
研究低频超声对丰水梨多酚氧化酶(PPO)的影响,探讨超声功率、超声时间、超声温度、pH等因素对其酶活的影响,同时对多酚氧化酶的酶反应动力学进行研究。研究表明,多酚氧化酶经超声波处理后,酶活性均比未经超声波处理的酶活力有所下降,... 研究低频超声对丰水梨多酚氧化酶(PPO)的影响,探讨超声功率、超声时间、超声温度、pH等因素对其酶活的影响,同时对多酚氧化酶的酶反应动力学进行研究。研究表明,多酚氧化酶经超声波处理后,酶活性均比未经超声波处理的酶活力有所下降,而超声对过氧化物酶酶活的最适温度和最适pH影响不大。经过超声处理后PPO的K_m值变大,可见超声处理使PPO和底物的亲和力有所降低。 展开更多
关键词 超声波 多酚氧化酶 酶活 动力学
A novel manganese(Ⅲ)-peroxo complex bearing a proline-derived pentadentate aminobenzimidazole ligand
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作者 Junyi Du Chengxia Miao +1 位作者 Chungu Xia Wei Sun 《中国化学快报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第12期1869-1871,共3页
Manganese(Ⅲ)-peroxo complexes are invoked as key intermediates in the enzymatic cycles of Mncontaining enzymes, and the synthesis of reactive manganese(Ⅲ)-peroxo complexes with rationally designed ligand has been of... Manganese(Ⅲ)-peroxo complexes are invoked as key intermediates in the enzymatic cycles of Mncontaining enzymes, and the synthesis of reactive manganese(Ⅲ)-peroxo complexes with rationally designed ligand has been of great interest in the communities of bioinorganic and biomimetic chemistry.Herein, we designed a novel pentadentate aminobenzimidazole ligand and obtained its manganese(Ⅱ)complex, which was successfully applied in the synthesis of a reactive manganese(Ⅲ)-peroxo complex by treatment with hydrogen peroxide in the presence of triethylamine. The manganese(Ⅲ)-peroxo complex was well characterized with various spectroscopic techniques, including ultraviolet-visible(UV-vis)spectrophotometry, coldspray ionization time-of-flight mass spectrometry(CSI-TOF MS), and continuous wave electron paramagnetic resonance(CW-EPR) spectroscopy. Besides, its reactivity in aldehyde deformylation was investigated, demonstrating second-order kinetics in the reaction with 2-phenylpropionaldehyde and affording acetophenone as the sole product. 展开更多
关键词 ENZYME models MANGANESE Manganese(Ⅲ)-peroxo complex ALDEHYDE deformylation KINETICS
超高压体系下皱褶假丝酵母脂肪酶的水解特性 预览
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作者 杜焕梅 缪铭 +2 位作者 冯骉 江波 张涛 《食品与生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期256-261,共6页
研究了压力、温度、pH、保压时间对脂肪酶活性的影响,并分析了酶的复原性,测定了不同温度和压力处理脂肪酶的动力学参数。结果表明,200MPa时脂肪酶酶活最高,是常压的1.76倍。200MPa时脂肪酶最适温度为40℃,最适pH值7.5,最佳保... 研究了压力、温度、pH、保压时间对脂肪酶活性的影响,并分析了酶的复原性,测定了不同温度和压力处理脂肪酶的动力学参数。结果表明,200MPa时脂肪酶酶活最高,是常压的1.76倍。200MPa时脂肪酶最适温度为40℃,最适pH值7.5,最佳保压时间为10min。与常压相比,200MPa时,40℃时Km值变化不大,50℃时Km值有所增加,而Vmax、Kcat、Kcat/Km值随压力的升高而增大。 展开更多
关键词 超高压 脂肪酶 酶活 催化 动力学
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瑞香素在大鼠肝S9中体外代谢研究
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作者 梁思成 葛广波 +4 位作者 夏杨柳 齐晓怡 王傲雪 涂彩霞 杨凌 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期291-295,共5页
瑞香素给药后在大鼠体内快速代谢消除,但机制仍不清楚。本研究开展瑞香素体外代谢特征分析,鉴定了瑞香素在大鼠肝S9(RLS9)中的代谢产物结构,测定了不同代谢路径的动力学参数。HPLC-DAD-MS检测发现,瑞香素在RLS9中转化为6个代谢产物,包... 瑞香素给药后在大鼠体内快速代谢消除,但机制仍不清楚。本研究开展瑞香素体外代谢特征分析,鉴定了瑞香素在大鼠肝S9(RLS9)中的代谢产物结构,测定了不同代谢路径的动力学参数。HPLC-DAD-MS检测发现,瑞香素在RLS9中转化为6个代谢产物,包括7-或8-葡糖醛酸和硫酸酯代谢物、8-甲基代谢物及7-硫酸酯-8-甲基代谢物。动力学分析表明,瑞香素在RLS9的葡糖醛酸化和甲基化反应符合米氏动力学,7-O-磺酸化反应和8-O-磺酸化反应分别符合双位点和底物抑制动力学。3条代谢路径中,清除率最大的为磺酸化反应,其次为甲基化和葡糖醛酸化反应。借助体外代谢动力学数据和体外-体内关联方法,预测获得的瑞香素在大鼠体内肝清除率(54.9 m L·min^-1·kg^-1)与文献报道的大鼠体内总清除率(58.5 m L·min^-1·kg^-1)接近。结果表明,肝脏是瑞香素在大鼠体内主要代谢位点。磺酸化、甲基化和葡糖醛酸化反应是瑞香素在大鼠肝脏中主要清除路径。 展开更多
关键词 瑞香素 II相代谢酶 酶动力学 肝清除率
The regioselective glucuronidation of morphine by dimerized human UGT2B7, 1A1, 1A9 and their allelic variants
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作者 Zi-zhao YANG Li LI +6 位作者 Lu WANG Ling-min YUAN Ming-cheng XU Jing-kai GU Hui-di JIANG Lu-shan YU Su ZENG 《中国药理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第8期1184-1194,共11页
Uridine diphosphate-glucuronosyltransferase (UGT ) 2B7 主要在人的肝,肺和肾被表示并且能把内长的 glucuronide 组变成它的底层并且影响象雌素三醇, AZT 和吗啡那样的几药的药理学效果。UGT2B7 和它的突变而产生之遗传的变体能与... Uridine diphosphate-glucuronosyltransferase (UGT ) 2B7 主要在人的肝,肺和肾被表示并且能把内长的 glucuronide 组变成它的底层并且影响象雌素三醇, AZT 和吗啡那样的几药的药理学效果。UGT2B7 和它的突变而产生之遗传的变体能与相应的酶使聚合成二聚物 UGT1A1 和 UGT1A9,以及他们的突变而产生之遗传的变体,然后变化他们在底层催化作用的进程的酶的活动。当前的学习被设计作为 UGT2B7 的底层用吗啡识别这机制。 Single-recombinant allozymes 包括 UGT2B7 <sup>*</sup>1 (野类型), UGT2B7 <sup>*</sup>71S ( A71S , 211G > T ), UGT2B7 <sup>*</sup>2 ( H268Y , 802C > T ), UGT2B7 <sup>*</sup>5 ( D398N , 1192G >一),并且 double-recombinant allozymes 由 UGT1A9 <sup>*</sup>1 (野类型)的 dimerization 形成了, UGT1A9 <sup>*</sup>2 ( C3Y , 8G >一), UGT1A9 <sup>*</sup>3 ( M33T , 98T > C ), UGT1A9 <sup>*</sup>5 ( D256N , 766G >一),有它的splice 变体 UGT1A1b 的 UGT1A1 (野类型)在 vitro 与吗啡被建立并且孵化。每件样品与 HPLC-MS/MS 被分析。运动参数当时是的所有酶测量了并且分析。从结果,它的异常新陈代谢的生产比率和随后的代谢物, morphine-3-glucuronide (M3G ) 和 morphine-6-glucuronide (M6G ) , regioselectively 变化。Double-recombinant allozymes 展览比 single-recombinant alloyzymes 催化吗啡的更强壮的酶的活动。把 UGT2B7 <sup>*</sup>2 挑选或加倍的 <sup>*</sup>1, 比作 UGT2B7 有更低的 K <sub > 为 M3G 和 M6G 的 m </sub> 价值,而 UGT2B7 <sup>*</sup>5 allozymes 表现在效果对面。有 UGT2B7 的 UGT1A9 <sup>*</sup>2 或 UGT1A9 <sup>*</sup>5 的双 allozymes 趋于生产 M6G。有趣地,单个或双的 allozymes 的多数显著地把 M3G 的比率归结为 M6G。UGT1A9 <sup>*</sup>2-UGT2B7<sup>*</sup>1 两倍酶有最低 M3G : M6G 比率,反映那更多的 M6G 将在吗啡形成 glucuronide 新陈代谢。这研究证明有 UGT1A1 和 UGT1A9 和他们的突变而� 展开更多
关键词 等位基因变异 葡萄糖醛酸 吗啡 酶催化 动力学参数 重组酶 野生型 药理作用
联苯利用节杆菌YC-RL1中2,3-二羟基联苯-1,2-双加氧酶BphC功能验证
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作者 乔铖 任磊 +3 位作者 樊双虎 贾阳 赵百锁 闫艳春 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1639-1648,共10页
【目的】通过节杆菌(Arthrobacter sp.)YC-RL1对多氯联苯降解过程中关键基因bphC的克隆与原核表达,鉴定其编码的2,3-二羟基联苯-1,2-双加氧酶BphC的酶活特性与功能。【方法】以菌株YC-RL1全基因组为模板进行PCR扩增获得bphC基因... 【目的】通过节杆菌(Arthrobacter sp.)YC-RL1对多氯联苯降解过程中关键基因bphC的克隆与原核表达,鉴定其编码的2,3-二羟基联苯-1,2-双加氧酶BphC的酶活特性与功能。【方法】以菌株YC-RL1全基因组为模板进行PCR扩增获得bphC基因,将该基因转入Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞后进行原核表达;利用镍柱亲和层析法对BphC酶进行纯化并分别测定该酶在不同条件下对底物2,3-DHBP的催化特性,确定其最适反应pH、温度及不同金属离子对酶活特性的影响;进一步根据米氏方程对该酶的动力学参数进行测定与分析。【结果】通过PCR扩增获得了bphC基因,其大小为930bp;对该基因进行原核表达,所得重组蛋白BphC携带有6个组氨酸标签,经纯化后体外仍具有活性,该酶作用于2,3-DHBP时的最适pH与温度分别为pH7.4和30℃,且在最适条件下,Fe^2+、Cu^2+及Cd^2+等金属离子可明显促进其酶活作用,但多数金属离子对该酶有不同程度的抑制作用;该酶在与底物2,3-DHBP作用过程中,酶促动力学常数分别为Km:8.67mmol/L,%。:27.32μmol/s,kcat:15.55s^-1,Kcat/Km:1.79L/(mmol·s),其催化效率同有关报道中同类酶的动力学特性比较均有所提高。【结论】菌株YC—RL中的bphC基因对于多氯联苯的生物降解具有至关重要的作用,其编码的BphC是重要的芳香环裂解酶,该酶对其底物具有较高的亲和性,可在体外环境中发挥高效的酶促作用,具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 多氯联苯 生物降解 2 3-二羟基联苯-1 2-双加氧酶 酶促动力学
川西高寒土壤酶的动力学及热力学特征研究
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作者 沈丹杰 陈玥希 +1 位作者 孙辉 姚建 《土壤》 CSCD 北大核心 2017年第6期1146-1152,共7页
土壤酶动力学与热力学特征对于揭示土壤生物化学过程及其对环境变化的响应具有重要意义。本文采用微孔板荧光法,分析了川西高寒森林土壤中磷酸单酯酶(PME)、β-葡萄糖苷酶(BG)、β-N-乙酰氨基葡萄糖酶(NAG)、纤维二糖水解酶(CBH... 土壤酶动力学与热力学特征对于揭示土壤生物化学过程及其对环境变化的响应具有重要意义。本文采用微孔板荧光法,分析了川西高寒森林土壤中磷酸单酯酶(PME)、β-葡萄糖苷酶(BG)、β-N-乙酰氨基葡萄糖酶(NAG)、纤维二糖水解酶(CBH)的动力学及热力学特征。结果表明,在酶动力学方面,这4种酶活性均随底物浓度(0~0.28 mmol/L)的增加而升高,当底物浓度为0.28 mmol/L时,PME、BG、CBH和NAG活性分别达到109.01、52.53、6.51和6.63μmol/(g·h);土壤酶热力学方面,这4种土壤酶活性随着温度升高呈现出两种变化趋势,即持续增长型(NAG)和先升高后稳定型(PME、BG、CBH);4种酶的温度敏感性(Q10值)随着温度升高而降低,在10~20℃时Q10最高,PME、BG、CBH、NAG的最大Q10值分别为3.25、3.80、10.22和6.31。高寒土壤这4种酶在低温区间(0~20℃)具有较高的温度敏感性,土壤升温将导致酶活性显著升高,因此全球变暖导致的高寒土壤升温,将对这些酶参与的相关土壤生态与生化过程产生重要影响。 展开更多
关键词 高寒土壤 土壤酶活性 酶动力学 酶热力学 温度敏感性
TEM-1型β内酰胺酶的原核表达纯化及活性验证 预览
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作者 李静 徐建余 +5 位作者 宁年智 刘传杰 黄洁 刘雪超 李涛 王慧 《生物技术通讯》 CAS 2017年第3期319-323,共5页
目的:产β-内酰胺酶是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一,该酶能水解青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类等多种抗生素,其中TEM型是发现最早且种类最多的β内酰胺酶。探讨TEM-1型β内酰胺酶原核表达载体的构... 目的:产β-内酰胺酶是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一,该酶能水解青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类等多种抗生素,其中TEM型是发现最早且种类最多的β内酰胺酶。探讨TEM-1型β内酰胺酶原核表达载体的构建、酶的纯化及活性验证。方法:利用PCR技术,以大肠杆菌全基因组为模板钓取TEM-1基因,构建pET22b(+)-TEM-1表达质粒,经测序鉴定后,转入大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达、亲和纯化,并通过抗生素水解实验验证其酶活性。结论:构建了可溶性表达TEM-1的工程菌,通过亲和纯化最终获得纯度达90%以上的TEM-1型β内酰胺酶,该酶可水解氨苄西林。结论:获得了对氨苄西林具有水解活性的TEM-1型β内酰胺酶,并对其进行了酶动力学参数检测,验证其抗生素水解特性,有利于对临床抗生素的合理应用做出指导。 展开更多
关键词 TEM-1 Β内酰胺酶 表达 纯化 酶动力学
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Effects of ausforming strain on bainite transformation in nanostructured bainite steel 预览
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作者 Hong-liang Fan Ai-min Zhao +2 位作者 Qing-chun Li Hui Guo Jian-guo He 《矿物冶金与材料学报:英文版》 SCIE EI CAS CSCD 2017年第3期264-270,共7页
The effects of ausforming strain on bainite transformation in high-carbon low-alloy nanobainite steel were investigated using a Gleeble 3500 thermomechanical simulator machine. The bainite transformation speed at 300&... The effects of ausforming strain on bainite transformation in high-carbon low-alloy nanobainite steel were investigated using a Gleeble 3500 thermomechanical simulator machine. The bainite transformation speed at 300°C was found to be accelerated by ausforming at 300, 600, and 700°C under applied strains ranging from 10% to 50% followed by isothermal transformation at 300°C. The ausformed bainite volume fraction varied with the ausforming strain because of the mechanical stabilization of the deformed austenite. Ausforming at low temperatures not only enhanced the bainite ferrite volume fraction but also refined the microstructure substantially. Although the amount of bainite ferrite might have been reduced with increasing strain, the microstructures were refined by ausforming. 展开更多
关键词 phase TRANSFORMATIONS KINETICS BAINITE steels NANOSTRUCTURED materials AUSFORMING
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大学生物化学课程“酶动力学”教学之我见 预览
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作者 朱亮亮 李从虎 +1 位作者 李文娟 吴彦 《安庆师范大学学报:自然科学版》 2017年第3期112-115,共4页
酶动力学是大学生化课程教学的重要内容,旨在培养学生分析酶和配体相互作用的基本能力。随着生物医学体外研究技术的兴起,分析酶-配体相互作用将会成为研究者必备的基本技能,但是当前酶动力学的教学内容并不能达到这一目标。本文从科学... 酶动力学是大学生化课程教学的重要内容,旨在培养学生分析酶和配体相互作用的基本能力。随着生物医学体外研究技术的兴起,分析酶-配体相互作用将会成为研究者必备的基本技能,但是当前酶动力学的教学内容并不能达到这一目标。本文从科学研究实际出发,重点讨论现行酶动力学教学的不足,认为在该部分的教学中应加入动力学模型构建和非米氏动力学的内容。 展开更多
关键词 酶动力学 动力学模型构建 非米氏动力学
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理性设计提高乙醇脱氢酶LbADH的催化活性
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作者 王加丽 杨怡 瞿旭东 《武汉大学学报:理学版》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期45-50,共6页
来源于革兰氏阳性短乳杆菌Lactobacillus brevis ATCC 367的乙醇脱氢酶LbADH是催化手性醇的模式酶,以四聚体的形式发挥催化活性.本研究通过计算机分子模拟进行理性设计,确定并设计LbADH中与单体间疏水相互作用及盐桥键形成相关的关键位... 来源于革兰氏阳性短乳杆菌Lactobacillus brevis ATCC 367的乙醇脱氢酶LbADH是催化手性醇的模式酶,以四聚体的形式发挥催化活性.本研究通过计算机分子模拟进行理性设计,确定并设计LbADH中与单体间疏水相互作用及盐桥键形成相关的关键位点,通过定点突变在原始序列中引入相应的氨基酸,以改变单体间的结合能力,定向调节其催化活性和热稳定性.研究获得一个疏水突变体LbADH F146L,其在37℃下的酶活力为野生酶的8.5倍,在50℃下的酶活力为野生酶的5.6倍;其动力学参数Kcat/Km(1.99×106 L·mol-1·s-1)为野生酶(1.40×104 L·mol-1·s-1)的142倍,表明其催化效率明显提高.该研究结果表明,通过将LbADH中146位的苯丙氨酸(F146)突变为亮氨酸(L)增大疏水作用可以提高其催化活性. 展开更多
关键词 乙醇脱氢酶 分子模拟 酶活力 动力学 疏水作用 理性设计
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