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豆梨中谷胱甘肽还原酶基因的分离、表达特点及酶活性分析 预览
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作者 李慧 阚家亮 +3 位作者 王影 蔺经 杨青松 常有宏 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期11-20,共10页
[目的]测定谷胱甘肽还原酶活性变化,结合其催化产物含量、编码基因表达特点分析,明确该酶是否参与豆梨应对镉胁迫的调控过程。[方法]采用紫外/可见分光光度法检测谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)活性、谷胱甘肽池组成及过氧化... [目的]测定谷胱甘肽还原酶活性变化,结合其催化产物含量、编码基因表达特点分析,明确该酶是否参与豆梨应对镉胁迫的调控过程。[方法]采用紫外/可见分光光度法检测谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)活性、谷胱甘肽池组成及过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)含量,RT-PCR和PCR克隆PcGRchl和PcGRcyt的cDNA和DNA序列,利用生物信息学方法进行序列比较分析,荧光定量PCR检测它们在镉胁迫下转录水平变化。[结果]镉胁迫情况下,豆梨叶片GR活性上升,谷胱甘肽池中总谷胱甘肽(total glutathione,T-GSH)和还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)减少、氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)上升,H2O2积累增加。豆梨叶绿体PcGRchl和胞质PcGRcyt的序列长度、基因结构及所编码蛋白特征各不相同,它们在豆梨叶片中的表达量上调以响应镉胁迫信号,以PcGRchl的转录占主导。外源GSH预处理有助于豆梨预先储存GSH,减缓镉胁迫下H2O2的积累,与Cd(2 mmol·L^-1CdCl2·2.5H2O+Hoagland营养液)组相比较,GC(2 mmol·L^-1,GSH预处理12 h转入2 mmol·L^-1CdCl2·2.5H2O+Hoagland营养液)组PcGRchl和PcGRcyt的表达水平没有太大变化,但GR活性部分受抑制;外源BSO预处理抑制植株叶片GSH合成,镉胁迫下BC(2 mmol·L^-1丁硫氨酸-亚砜亚胺预处理12 h转入2 mmol·L^-1CdCl2·2.5H2O+Hoagland营养液)组H2O2产生加剧,GR活性上升幅度变大,但PcGRchl和PcGRcyt的转录不受影响。上述结果表明,GSH预处理或BSO预处理,可改变豆梨叶片GSH池的组成,从而在蛋白质水平上反馈调节镉胁迫情况下GR活性。[结论]豆梨GR参与应对镉胁迫的调控过程。镉处理后,豆梨叶片中GSH减少,促使GR酶活性上升,以补充植株应对逆境所需GSH,这一过程主要通过叶绿体PcGRchl的转录上调来实现;GSH或BSO预处理,改变植株GSH含量,从而影响GR活性,减缓或加剧镉胁迫下H2O2的产生,这一过程主要是在GR基因翻译后的蛋白水� 展开更多
关键词 豆梨 镉胁迫 谷胱甘肽还原酶 活性调节 表达特点
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家蚕翅原基发育关联基因BmHMGS的鉴定与表达特征分析
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作者 蒋诗梦 钟杨生 +3 位作者 林碧敏 陈芳艳 严会超 林健荣 《蚕业科学》 CSCD 北大核心 2018年第2期242-248,共7页
家蚕幼虫的翅原基最终发育为成虫的翅,翅原基发育与家蚕的变态发育紧密关联。为了研究激素作用下家蚕翅原基发育的分子调控机制,以经过蜕皮激素20E体外诱导培养和未经诱导培养的家蚕5龄幼虫翅原基为材料分别提取总蛋白质,利用Shotgun质... 家蚕幼虫的翅原基最终发育为成虫的翅,翅原基发育与家蚕的变态发育紧密关联。为了研究激素作用下家蚕翅原基发育的分子调控机制,以经过蜕皮激素20E体外诱导培养和未经诱导培养的家蚕5龄幼虫翅原基为材料分别提取总蛋白质,利用Shotgun质谱分析在20E诱导组的翅原基中获得132种差异蛋白,在未经20E诱导组的翅原基中获得76种差异蛋白。进一步通过生物信息学技术及GO分类法在20E诱导组的翅原基的差异蛋白中,筛选到1个具有生物调节作用的酶类蛋白基因Bm HMGS作为翅原基发育相关的候选基因,设计引物并以上蔟1 d的蚕体翅原基总RNA反转录得到的c DNA为模板,克隆了该基因。通过qRT-PCR检测到Bm HMGS基因在幼虫5龄1 d、上蔟3 d、蛹期1 d蚕体内的表达量较高,其中在上蔟3 d的表达量达到峰值。构建重组载体进行Bm HMGS的原核表达并制备抗体后,采用Western blot技术在5龄1~7 d和上蔟1~3 d的蚕体翅原基、脂肪体中及上蔟1~3 d的生殖腺中都可以检测到Bm HMGS的表达,并且在翅原基中的表达没有发育时期特异性。研究结果表明,从20E诱导组的家蚕翅原基中鉴定的Bm HMGS与翅原基发育相关,其表达在5龄至上蔟阶段没有时期和组织的特异性,推测Bm HMGS是一个具有多种生物学功能的基因。 展开更多
关键词 家蚕翅原基 体外培养 蜕皮激素 Shotgun质谱 BmHMGS基因 表达特征
龙眼体胚发生早期miR166初级体的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 张清林 苏立遥 +9 位作者 厉雪 张舒婷 徐小萍 陈晓慧 王培育 李蓉 张梓浩 陈裕坤 赖钟雄 林玉玲 《园艺学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1501-1512,共12页
为了解龙眼miR166初级体基因Pri-miR166 S53结构特点及其前体和成熟体在龙眼体胚发生早期的表达模式,采用SMART~(TM) RACE试剂盒和PCR扩增技术克隆龙眼体胚早期miR166基因的初级体(Pri-miR166 S53),确认其转录起始位点,并预测其含... 为了解龙眼miR166初级体基因Pri-miR166 S53结构特点及其前体和成熟体在龙眼体胚发生早期的表达模式,采用SMART~(TM) RACE试剂盒和PCR扩增技术克隆龙眼体胚早期miR166基因的初级体(Pri-miR166 S53),确认其转录起始位点,并预测其含有的潜在ORF;利用龙眼基因组数据库提取其启动子序列,预测其含有的顺式作用元件;用实时荧光定量PCR对龙眼体胚发生早期及不同激素处理下的胚性愈伤组织中miR166基因的前体(Pre-miR166 S53)和成熟体(miR166a.2)表达模式进行分析。结果表明:获得长317 bp的Pri-miR166 S53基因初级体序列,对其进行翻译,得到一条长13个氨基酸序列的miPEP(MLCFVDALFLIST)。利用生物信息学软件分析Pri-miR166 S53基因的启动子序列发现,除了具有TATA/CAAT-box外,还含有生长素、脱落酸、乙烯、水杨酸、茉莉酸甲酯及spl、HSE等特异作用元件。实时荧光定量PCR分析表明,在2,4-D调控的龙眼体胚发生早期过程中,从胚性松散型愈伤组织发育到球形胚的过程中,Pri-miR166 S53基因的前体pre-miR166 S53和成熟体miR166a.2都表现为下调趋势;而在无2,4-D调控的龙眼体胚发生早期中,pre-miR166 S53和miR166a.2表达模式不同。此外,pre-miR166S53随ABA和乙烯处理浓度升高呈下调表达,而对不同浓度2,4-D处理无应答;miR166a.2随2,4-D、ABA处理浓度升高呈下调表达,而在乙烯处理下呈上调表达。上述研究结果提示miR166前体和成熟体在对外源激素应答的模式上并不呈简单线性相关,可能存在多层次、多方位的调控。 展开更多
关键词 龙眼 miR166初级体 启动子 实时荧光定量PCR 表达特性
中华按蚊细胞色素P450基因表达特征分析
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作者 卫沫 唐建霞 +8 位作者 李菊林 张梅花 陈静 徐岁 曹园园 杨蒙蒙 朱国鼎 周华云 曹俊 《中国血吸虫病防治杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期149-154,共6页
目的探讨6种溴氰菊酯抗性候选细胞色素P450(CYP)基因(CYP6M3、CYP6Y1、CYP6P5、CYP4H14、CYP4G17、CYP12F16)在中华按蚊体内的表达特征。方法收集中华按蚊不同发育时期(卵、幼虫、蛹、雌性成蚊和雄性成蚊)和组织(唾液腺、马氏管... 目的探讨6种溴氰菊酯抗性候选细胞色素P450(CYP)基因(CYP6M3、CYP6Y1、CYP6P5、CYP4H14、CYP4G17、CYP12F16)在中华按蚊体内的表达特征。方法收集中华按蚊不同发育时期(卵、幼虫、蛹、雌性成蚊和雄性成蚊)和组织(唾液腺、马氏管、中肠、卵巢以及脂肪体)样本,以及雌性成蚊在暴露于不同溴氰菊酯剂量(0、1.25、3.75、6.25、12.5μg/瓶)和时间(0,5、15、30、60 min)后的样本.提取总RNA,利用反转录实时定量PCR(q PCR)技术分析CYP6M3、CYP6Y1、CYP6P5、CYP4H14、CYP4G17、CYP12F16基因在中华按蚊不同发育时期、组织以及不同溴氰菊酯接触剂量和时间下的相对表达量。结果 CYP6M3与CYP6Y1基因在雄性中华按蚊成蚊体内的表达量最高,CYP6M3基因在雄性成蚊体内的表达量是雌性成蚊的35.1倍,CYP6Y1基因在雄性成蚊体内的表达量是雌性成蚊的61.4倍;CYP4H14基因在幼虫期表达量最低,且在雌性成蚊体内表达量是四龄幼虫体内表达量的22.5倍。候选CYP基因在中华按蚊不同组织内的表达量差异具有统计学意义,CYP6M3基因在马氏管内的表达量是在卵巢中的38.9倍,CYP6Y1基因在脂肪体内的表达量是在卵巢中的9.1倍,CYP6P5基因在中肠内的表达量是在卵巢中的30.3倍,CYP4G17基因在脂肪体内的表达量是在卵巢中的4.6倍,CYP12F16基因在马氏管内的表达量是在卵巢中的4.4倍。接触不同溴氰菊酯剂量和时间对候选CYP基因的表达水平表现出一定的诱导效应,影响候选CYP基因在中华按蚊体内的表达。结论候选CYP基因在不同发育期中华按蚊体内和不同组织中差异表达,暴露于不同溴氰菊酯剂量和时间影响CYP基因在中华按蚊体内表达。 展开更多
关键词 中华按蚊 溴氰菊酯 细胞色素P450基因 表达特征
陆地棉叶片特异性表达启动子的克隆与表达分析 预览
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作者 司爱君 杨维才 +4 位作者 谢宗铭 田琴 董永梅 李有忠 马盼盼 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期646-652,共7页
【目的】本研究旨在获得叶片特异表达启动子的全长并进行表达分析,为抗逆转基因育种提供重要顺式作用元件。【方法】通过基因芯片及RT-PCR筛选鉴定出1个高活性的棉花叶片特异性表达基因,通过电子克隆及PCR获得了该基因全长,并通过染色... 【目的】本研究旨在获得叶片特异表达启动子的全长并进行表达分析,为抗逆转基因育种提供重要顺式作用元件。【方法】通过基因芯片及RT-PCR筛选鉴定出1个高活性的棉花叶片特异性表达基因,通过电子克隆及PCR获得了该基因全长,并通过染色体步移法(Genome walking)经过3次步移成功获得翻译起始位点上游2kb左右的DNA片段,将其命名为叶片特异性表达启动子LSP(leaf specific promoter)。【结果】生物信息学分析表明,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CAAT-box及多个顺势作用元件。通过构建该启动子驱动GUS的植物表达载体p Ghlsp∷GUS,并经农杆菌花絮侵染法转化拟南芥,对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色观察,结果显示该基因主要在叶片中特异性表达,而根部以及茎部几乎不表达。【结论】LSP是一个全新的叶片特异性表达启动子,为研究外源基因在棉花叶片中的定位表达奠定基础。基因工程中利用此类启动子可以在改良棉花性状的同时减少对棉花生理方面的副作用,在棉花抗逆转基因育种方面有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 棉花 组织特异性 启动子 表达特性
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MYNN基因在猪不同组织及肌肉中的表达规律 预览
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作者 李萌 靳玉舒 +7 位作者 张旗 成志敏 张宁芳 乐宝玉 高鹏飞 曹果清 李步高 郭晓红 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第10期2957-2964,共8页
试验旨在研究myoneurin(MYNN)基因在猪不同组织中的表达特征及其在肌肉(背最长肌、股二头肌和腰大肌)、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的发育性表达规律。采用实时荧光定量PCR技术研究猪MYNN mRNA在90日龄大白猪和... 试验旨在研究myoneurin(MYNN)基因在猪不同组织中的表达特征及其在肌肉(背最长肌、股二头肌和腰大肌)、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的发育性表达规律。采用实时荧光定量PCR技术研究猪MYNN mRNA在90日龄大白猪和马身猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小脑、小肠、胰脏、胃、股二头肌及脂肪共11个组织中的表达谱,以及在大白猪和马身猪1、90、180日龄3个发育阶段的肌肉、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的发育性表达规律。结果表明,MYNN在猪的各种组织中广泛表达,且各组织间表达差异显著或极显著(P〈0.05;P〈0.01);MYNN在大白猪和马身猪的肌肉、小脑、肝脏、胰脏、肾脏、胃、脾脏、肺脏组织中的不同发育阶段表达差异显著或极显著(P〈0.05;P〈0.01),并具有特定规律,由此推测其可能在猪的这几种组织中发挥重要作用。MYNN基因的表达与组织、日龄及品种的遗传背景有关。本试验为研究猪MYNN基因的生物学功能提供了依据,但还需要深入的研究来探索其作用的具体机制,尤其是在骨骼肌发育中的调节机制。 展开更多
关键词 MYNN基因 表达谱 发育性表达
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家蚕Met1基因的表达与组织定位分析
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作者 易文瑾 马琼 +3 位作者 温众杰 刘琳 冯启理 邓惠敏 《蚕业科学》 CSCD 北大核心 2017年第5期757-763,共7页
选择家蚕基因组中与果蝇Dm Met(Methoprene tolerant protein)同源的基因Bm Met1进行研究。预测Dm Met和Bm Met1的结构域均是一个b HLH-PAS(basic helix-loop-helix Per-ARNT-SIM)型转录因子,具有典型的DNA结合结构域。在原核系统... 选择家蚕基因组中与果蝇Dm Met(Methoprene tolerant protein)同源的基因Bm Met1进行研究。预测Dm Met和Bm Met1的结构域均是一个b HLH-PAS(basic helix-loop-helix Per-ARNT-SIM)型转录因子,具有典型的DNA结合结构域。在原核系统表达获得了Bm Met1蛋白并制备了抗体。qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,无论是Bm Met1基因mRNA的转录还是Bm Met1蛋白的表达,在家蚕5龄中后期和吐丝期的翅原基组织中都呈现较高水平,而在蛹期呈现较低的水平。通过免疫组织化学方法分析Bm Met1的组织定位,结果显示该蛋白质在5龄第6天和吐丝期家蚕胸节表皮、脂肪体及翅原基等组织中都有较高水平的表达,在蛹期上述部位和组织的表达水平较低。分别将蜕皮激素(20E)和保幼激素类似物(Methoprene)按照2μg/头的剂量注射到5龄第3天幼虫第2~3胸节间,qRT-PCR检测幼虫翅原基组织中的Bm Met1受到Methoprene的诱导上调表达,且在处理2 h后表达水平最高。上述结果暗示Bm Met1可能参与了保幼激素对家蚕翅原基生长分化的调控。 展开更多
关键词 家蚕 BmMet1基因 表达特征 翅原基 保幼激素类似物
低温胁迫下人参愈伤组织中氧化鲨烯环化酶基因家族的表达特性分析
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作者 刘佳 付爽 +3 位作者 王萌 王景然 全雪丽 吴松权 《北方园艺》 北大核心 2017年第17期164-168,共5页
以培养3周的新鲜人参愈伤组织为试材,分别进行5℃持续低温处理与25℃/5℃培养12h/12h间歇低温处理,取材时间为0、1、2、3、4d,分别设为CK、D1、D2、D3、D4处理,通过实时荧光定量PCR检测5种氧化鲨烯环化酶(OSC)基因在不同处理中的表达... 以培养3周的新鲜人参愈伤组织为试材,分别进行5℃持续低温处理与25℃/5℃培养12h/12h间歇低温处理,取材时间为0、1、2、3、4d,分别设为CK、D1、D2、D3、D4处理,通过实时荧光定量PCR检测5种氧化鲨烯环化酶(OSC)基因在不同处理中的表达。结果表明:PgDAS的表达在持续式低温胁迫D4处理和间歇式低温胁迫D3处理中被显著诱导并达到峰值,分别为对照组的2.15、2.12倍;而Pgβ-AS1与Pgβ-AS2的表达仅在持续式低温胁迫D2处理中被诱导,分别为对照组的1.27、1.71倍;PgCAS与PgLOS的表达在2种低温胁迫中均未被诱导。表明PgDAS可能在响应不同低温胁迫时起到关键作用,而其它氧化鲨烯环化酶基因协同表达。 展开更多
关键词 人参 愈伤组织 低温胁迫 氧化鲨烯环化酶 表达特性
辣椒GRAS家族全基因组鉴定与表达分析
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作者 张焕欣 董春娟 尚庆茂 《园艺学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2305-2317,共13页
基于辣椒全基因组数据信息,利用生物信息学方法对CaGRAS基因家族进行了系统鉴定和进化分析,并通过Real-time PCR方法检测了CaGRAS家族组织表达模式和对PEG6000、盐胁迫的应答。结果表明:在辣椒中存在54个CaGRAS基因,除11号染色体外其... 基于辣椒全基因组数据信息,利用生物信息学方法对CaGRAS基因家族进行了系统鉴定和进化分析,并通过Real-time PCR方法检测了CaGRAS家族组织表达模式和对PEG6000、盐胁迫的应答。结果表明:在辣椒中存在54个CaGRAS基因,除11号染色体外其余染色体均有分布,外显子数1~3,等电点4.97~9.13;系统进化分析显示CaGRAS基因可分为8个进化群;CaGRAS基因具有不同的表达模式,在根、茎、叶片和茎尖中优势表达的基因分别有34、8、3和8个;多数CaGRAS基因能响应PEG6000和盐胁迫,其中CaGRAS11、CaGRAS30、CaGRAS40、CaGRAS44和CaGRAS50受到PEG6000和盐胁迫的强烈诱导。本研究为深入解析CaGRAS家族基因的功能奠定了一定基础。 展开更多
关键词 辣椒 GRAS基因家族 进化分析 表达特性
胡杨F-box基因克隆和功能分析
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作者 任逸秋 贾会霞 +5 位作者 郭英华 徐向东 李建波 卢孟柱 樊军锋 胡建军 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2017年第5期1655-1662,共8页
F-box蛋白在泛素-蛋白酶体途径中能够特异识别底物蛋白,调节多种激素的信号转导途径,并响应多种非生物胁迫,参与植物抗逆途径。胡杨(Populus euphratica)是中国西北沙漠唯一能成林的高大乔木树种,对盐碱、干旱、极端温度等抵抗能力较... F-box蛋白在泛素-蛋白酶体途径中能够特异识别底物蛋白,调节多种激素的信号转导途径,并响应多种非生物胁迫,参与植物抗逆途径。胡杨(Populus euphratica)是中国西北沙漠唯一能成林的高大乔木树种,对盐碱、干旱、极端温度等抵抗能力较强,是研究林木抗逆机理的候选模式树种。本研究对胡杨耐盐性状关联分析获得的F-box基因进行克隆、表达特性分析、亚细胞定位和转化胡杨原生质体的耐盐性测定,旨在研究胡杨F-box基因的功能特性。胡杨F-box基因全长1 086 bp,编码361个氨基酸,含有一个F-box domain和一个F-box associated domain。q RT-PCR表明胡杨F-box基因在各组织中均有表达,无组织特异性,其表达受盐、高温、低温、干旱和ABA胁迫诱导。PEG介导的胡杨原生质体瞬时表达发现F-box蛋白定位于细胞核上,流式细胞术证实过表达F-box基因能够提高胡杨原生质体的耐盐性。研究初步揭示了胡杨F-box基因的表达特性和耐盐性,为进一步解析胡杨F-box基因的功能及胡杨抗逆分子机理提供帮助。 展开更多
关键词 F-BOX 亚细胞定位 表达特性 原生质体转化 耐盐性
BMPMP3、BMPBMP10、BMPBMP15基因在雏鸡和成年鸡主要器官中的表达特性研究 被引量:2
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作者 王赛赛 王亚丽 +7 位作者 沈丹 薛松磊 钱跃 史云强 陈才 钟继汉 刘帅军 高波 《中国家禽》 北大核心 2016年第4期5-9,共5页
骨形态发生蛋白(BMP)是转化生长因子超家族中的重要成员,其信号通路控制着诸如中胚层形成、神经系统分化、牙齿和骨骼发育以及癌症发生等许多重要的生物学过程。研究旨在分析BMP家族中的BMP3、BMP10、BMP15在雏鸡和成年鸡主要器官中... 骨形态发生蛋白(BMP)是转化生长因子超家族中的重要成员,其信号通路控制着诸如中胚层形成、神经系统分化、牙齿和骨骼发育以及癌症发生等许多重要的生物学过程。研究旨在分析BMP家族中的BMP3、BMP10、BMP15在雏鸡和成年鸡主要器官中表达水平。采用RT-PCR方法分析BMP3、BMP10、BMP15在雏鸡、成年鸡主要器官中的表达情况,并分析这3个基因在雏鸡和成年鸡心脏中的表达差异性。结果表明:BMP3、BMP10在雏鸡和成年鸡两阶段主要器官中均可表达,BMP15在成年鸡母鸡各器官均有表达,公鸡仅肝中有表达;BMP3在雏鸡心脏中表达水平显著高于成年鸡(P〈0.05),BMP10表达水平两者差异不显著(P〉0.05),BMP15在成年鸡表达水平显著高于雏鸡(P〈0.05)。研究结果为BMP信号通路研究提供参考。 展开更多
关键词 BMP基因 表达特性
低温胁迫对人参皂苷生物合成途径基因家族表达特性的影响研究 被引量:5
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作者 刘佳 全雪丽 +3 位作者 姜明亮 李翔国 全林虎 吴松权 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1956-1961,共6页
目的 研究低温胁迫对人参皂苷生物合成途径的3个基因家族3-羟基-3-甲基戊二酰Co A还原酶(Pg HMGR)、鲨烯合酶(Pg SS)、鲨烯环氧酶(Pg SE)的影响,探讨各个家族成员响应低温的机制,并推测出响应低温的关键家族基因。方法 将3周大的... 目的 研究低温胁迫对人参皂苷生物合成途径的3个基因家族3-羟基-3-甲基戊二酰Co A还原酶(Pg HMGR)、鲨烯合酶(Pg SS)、鲨烯环氧酶(Pg SE)的影响,探讨各个家族成员响应低温的机制,并推测出响应低温的关键家族基因。方法 将3周大的新鲜人参愈伤组织放置在5℃的冰箱中,分别在0、0.5、1、2、3 d后进行取样,分别记作CK、D1、D2、D3、D4,进行RNA提取和反转录实验,实时荧光定量PCR检测低温胁迫处理下不同基因的表达量。结果 Pg HMGR1的表达量在D3时期达到对照组的1.3倍,Pg HMGR2的表达量在D1时期达到峰值,为对照组的3.8倍;Pg SS1的表达量在D3时期达到对照组的1.7倍;Pg SE1和Pg SE2的表达量均在D1时期分别达到对照组的6.9倍和6倍。其他家族基因(Pg HMGR3、Pg SS2、Pg SE3)的表达量均无显著性变化。结论 人参皂苷生物合成途径各个基因家族积极响应低温胁迫处理,推测Pg HMGR1、Pg HMGR2、Pg SS1、Pg SE1和Pg SE2是人参愈伤组织响应低温胁迫时的关键家族基因。 展开更多
关键词 人参 人参皂苷 低温胁迫 基因家族 表达特性 实时荧光定量PCR
苹果K+转运蛋白基因家族鉴定及表达分析
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作者 杨琳 董玲 +2 位作者 李明军 马锋旺 邹养军 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1021-1032,共12页
利用苹果基因组筛选K+转运蛋白基因,分析其系统发育关系,通过q RT-PCR检测它们在平邑甜茶各器官组织和不同发育阶段果实的表达特征。结果表明,在苹果中存在65个K+转运蛋白基因,包括CHX家族(33个)、HAK家族(24个)、HKT家族(1个)... 利用苹果基因组筛选K+转运蛋白基因,分析其系统发育关系,通过q RT-PCR检测它们在平邑甜茶各器官组织和不同发育阶段果实的表达特征。结果表明,在苹果中存在65个K+转运蛋白基因,包括CHX家族(33个)、HAK家族(24个)、HKT家族(1个)和KEA家族(7个),它们与拟南芥K+转运蛋白基因高度同源,其基因结构相对保守,并且不均匀地分布在13条染色体上。定量表达分析发现,K+转运蛋白基因具有不同的表达模式,其中在根中高度表达的32个,在叶片中高度表达的12个,在茎尖中高度表达的11个,在果实中高度表达的19个。研究结果为揭示苹果K+转运蛋白基因的功能提供了基础资料。 展开更多
关键词 苹果 K+转运蛋白 基因家族 生物信息学 表达特性
表达人CD47基因的巴马小型猪创建及其表达分析 被引量:2
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作者 曾国敏 蒋应弟 +7 位作者 冯冲 石宁宁 龙川 李西睿 魏静 纪慧丽 潘登科 刘霞 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1251-1258,共8页
异种器官移植是解决供体器官短缺的有效途径之一,猪(Sus scrofa)是人类(Homo sapiens)异种器官移植的理想供体。然而,异种移植物进入受体后将被受体巨噬细胞清除,其主要原因是巨噬细胞表面的受体-信号调节蛋白α(singal regulatory... 异种器官移植是解决供体器官短缺的有效途径之一,猪(Sus scrofa)是人类(Homo sapiens)异种器官移植的理想供体。然而,异种移植物进入受体后将被受体巨噬细胞清除,其主要原因是巨噬细胞表面的受体-信号调节蛋白α(singal regulatory proteinα,SIRPα)不能特异地识别异种细胞表面的整合素相关蛋白(integrin associated protein,IAP又称CD47),导致移植物细胞被受体内的巨噬细胞吞噬并清除。本研究在敲除α-1,3-半乳糖基转移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase knockout,GTKO)的巴马小型猪基础上,转入h CD47基因,制备表达h CD47基因的GTKO/h CD47巴马小型猪,可避免超急性排斥反应并减弱受体巨噬细胞对移植物细胞的吞噬。首先构建巨细胞病毒增强子和鸡β肌动蛋白启动子(cytomegalovirus early enhancer/chickenβ-actin promoter,CAG)调控的h CD47基因表达载体p CAGGS-h CD47-Neo,转染GTKO巴马小型猪的耳成纤维细胞,然后通过体细胞克隆技术制备转基因克隆猪。利用PCR对克隆仔猪进行转基因鉴定,通过q RT-PCR、Western blot和免疫组化等方法分析h CD47在转基因猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺等组织的表达。抽取存活仔猪血液进行生理指标检测,监测其健康状况。通过体细胞克隆技术获得了13头转基因克隆猪,PCR鉴定均为h CD47基因阳性猪。q RT-PCR结果显示,h CD47基因在各器官中的表达量由高至低依次为胰腺、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏和心脏。Western blot及免疫组化结果进一步证实h CD47基因在胰腺、肝脏等中均具有较强表达,与q RT-PCR结果一致。血液生理指标显示,存活仔猪健康状况良好。本研究成功制备了表达h CD47基因的GTKO巴马小型猪,确证了h CD47基因在主要器官中的表达特征,将有助于探究h CD47基因在减弱受体巨噬细胞对异种移植各器官的排斥反应。 展开更多
关键词 整合素相关蛋白(CD47) 异种移植 巨噬细胞 表达特征 巴马小型猪
水稻OsWRKY7基因的表达研究 预览 被引量:2
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作者 李茹 周洁 +6 位作者 李冬月 王栩鸣 杨勇 余初浪 程晔 严成其 陈剑平 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期559-570,共12页
WRKY蛋白是植物中一类重要的转录因子,不仅参与植物生长发育的调控,还参与植物对各种生物和非生物胁迫的响应。本研究从水稻日本晴中分离OsWRKY7基因的编码序列(CDS),并克隆其启动子序列进行表达研究。首先通过实时定量PCR的方法检测... WRKY蛋白是植物中一类重要的转录因子,不仅参与植物生长发育的调控,还参与植物对各种生物和非生物胁迫的响应。本研究从水稻日本晴中分离OsWRKY7基因的编码序列(CDS),并克隆其启动子序列进行表达研究。首先通过实时定量PCR的方法检测不同组织中OsWRKY7基因的相对表达量,结果表明,OsWRKY7在叶片中的表达水平较高,且开花期的剑叶中表达量高于7d苗龄的幼叶。进一步将OsWRKY7启动子与GUS报告基因融合,构建了植物表达载体pOsWRKY7-GUS,并将此载体转化日本晴。转基因植株不同组织染色分析结果显示,该启动子在植株的主根尖、叶片、颖壳中有GUS活性,其中叶片上可见全叶范围分布的大量蓝色斑点,这些染色结果与实时定量PCR的结果一致。进一步的接菌和激素处理还显示,OsWRKY7启动子在根和叶中的表达均受水稻白叶枯病菌[Xanthomonas oryzae pv.Oryzae(Xoo)]P10生理小种侵染的诱导,同时还受外源施加的细胞分裂素和生长素诱导,而水杨酸则会抑制其在根和叶中的表达。此外,我们还将OsWRKY7基因的CDS序列分别与绿色荧光蛋白和酵母GAL4的DNA结合域融合,对该基因进行水稻茎原生质体亚细胞定位分析和酵母自激活检验,结果显示该基因定位于细胞核中并具有转录自激活活性。上述结果表明OsWRKY7具有明显的转录激活因子特征,其很可能参与了水稻对白叶枯菌的防御反应以及对多种激素信号的转导过程。 展开更多
关键词 OsWRKY7基因 启动子 表达特性 亚细胞定位 转录活性
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砂梨山梨醇转运蛋白(SOT)基因家族成员表达特性及在果实糖积累中的作用初探 被引量:3
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作者 戴美松 徐飞 +1 位作者 施泽彬 徐昌杰 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1457-1466,共10页
山梨醇转运蛋白(SOT)是植物山梨醇运输的关键载体。参考已公布的白梨基因组数据,应用RNA-seq技术在砂梨果肉中鉴别出22个有表达的山梨醇转运蛋白(SOT)基因家族成员,其中10个高表达成员的表达量之和占总表达量的92%。q RT-PCR分析表... 山梨醇转运蛋白(SOT)是植物山梨醇运输的关键载体。参考已公布的白梨基因组数据,应用RNA-seq技术在砂梨果肉中鉴别出22个有表达的山梨醇转运蛋白(SOT)基因家族成员,其中10个高表达成员的表达量之和占总表达量的92%。q RT-PCR分析表明上述10个成员的表达存在明显的组织特异性,所有成员在种子中的表达丰度最低;Ppy SOT8在所有组织和器官中都有不同程度表达;Ppy SOT26仅在幼叶中有一定表达。在果实发育期间Ppy SOT2、Ppy SOT8、Ppy SOT10/28和Ppy SOT33的相对表达丰度与果实山梨醇积累呈现良好相关性。4℃贮藏期间果实山梨醇含量趋于下降,与Ppy SOT3、Ppy SOT4、Ppy SOT8、Ppy SOT25、Ppy SOT32和Ppy SOT33表达上调相关。 展开更多
关键词 砂梨 山梨醇转运蛋白(SOT) 基因家族 表达特性 果实
家蚕芳基贮藏蛋白新成员BmSP3的基因克隆与表达分析 被引量:1
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作者 李建伟 王阿蓉 +4 位作者 李懿 黎治浪 龚竞 侯勇 夏庆友 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期613-619,共7页
贮藏蛋白在家蚕幼虫5龄盛食期的脂肪体中高量表达,为家蚕变态发育提供重要的营养物质,已报道的家蚕贮藏蛋白成员包括BmSP1和BmSP2,其中BmSP2为富含芳香族氨基酸的芳基贮藏蛋白(arylphorin)。从家蚕5龄幼虫脂肪体中鉴定并克隆了一个新... 贮藏蛋白在家蚕幼虫5龄盛食期的脂肪体中高量表达,为家蚕变态发育提供重要的营养物质,已报道的家蚕贮藏蛋白成员包括BmSP1和BmSP2,其中BmSP2为富含芳香族氨基酸的芳基贮藏蛋白(arylphorin)。从家蚕5龄幼虫脂肪体中鉴定并克隆了一个新的芳基贮藏蛋白基因,命名为BmSP3(GenBank登录号:JQ043182)。该基因ORF全长2 091 bp,编码697个氨基酸,BmSP3与BmSP2具有较高的序列相似性。半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测显示:BmSP3在家蚕5龄第3天幼虫的脂肪体、表皮、生殖腺和头部中均有表达,其中在脂肪体中的表达水平最高,并且同一组织中雌蚕的表达水平明显高于雄蚕;BmSP3在4龄末幼虫的脂肪体中就有表达,5龄中期表达水平开始明显增加,到上蔟前达到最高峰,之后急剧下降。Western blot检测显示:BmSP3在家蚕幼虫阶段主要存在于血淋巴中,化蛹时转运至脂肪体中,在羽化前逐渐被降解。BmSP3基因的转录及蛋白质合成、转运特征与BmSP2极为相似。 展开更多
关键词 家蚕 芳基贮藏蛋白 BmSP3蛋白 基因克隆 表达特征
水稻病程相关基因OsPR1b启动子的表达特性研究 预览
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作者 虞飞博 周洁 +5 位作者 王栩鸣 杨勇 余初浪 程晔 严成其 陈剑平 《生物技术通讯》 CAS 2014年第4期467-473,共7页
目的:分析水稻病程相关基因OsPR1b的表达特性,以进一步了解其表达和调控机制。方法:利用PCR技术从水稻日本晴基因组中扩增OsPR1b基因的启动子片段,命名为OsPR1bp,并构建相应的OsPR1bp:GUS融合表达载体,采用农杆菌介导的转基因技... 目的:分析水稻病程相关基因OsPR1b的表达特性,以进一步了解其表达和调控机制。方法:利用PCR技术从水稻日本晴基因组中扩增OsPR1b基因的启动子片段,命名为OsPR1bp,并构建相应的OsPR1bp:GUS融合表达载体,采用农杆菌介导的转基因技术获得转基因植株,进行GUS组织化学分析;利用Real-time PCR对OsPR1b基因在植物激素、非生物因子和水稻白叶枯菌(Xoo)毒性菌株P10(PXO124)处理下的表达水平进行分析。结果:GUS组织染色结果表明OsPR1b在水稻叶片中的表达量较高,而在茎、根、愈伤和花器中的表达量较低;植物激素水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、激动素(KT)、脱落酸(ABA)及NaCl、PEG均可不同程度地提高OsPR1b在叶片中的表达水平,Me-JA、KT和NaCl的处理能提高其在根部的表达水平,但这些激素在诱导OsPR1b在叶片和根部的表达程度上存在明显差异;单独接种Xoo毒性菌株P1024 h对OsPR1b表达的影响不大,而MeJA与其共同处理后则可显著增强其在叶片中的表达。结论:作为一种防卫基因,OsPR1b在健康植株中的表达水平较低,容易受盐/干旱胁迫及Xoo病原菌的诱导,多种植物激素如JA、KT和ABA很可能作为信号分子参与激活和介导了这种系统性的反应。 展开更多
关键词 OsPR1b基因 启动子 表达特性 水稻
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湖北海棠植物络合素合酶MhPCS基因克隆及表达分析 预览 被引量:3
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作者 姜倩倩 孙晓莉 +2 位作者 曹慧 邹岩梅 束怀瑞 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期341-347,共7页
【目的】为了探明植物络合素酶参与植物解毒重金属的作用,【方法】以湖北海棠(Malus hupehensis)为试材,克隆其植物络合素合酶基因(MhPCS)编码区序列,并研究该基因的表达特点。【结果】结果表明MhPCS基因编码区全长为1 494 bp,编码... 【目的】为了探明植物络合素酶参与植物解毒重金属的作用,【方法】以湖北海棠(Malus hupehensis)为试材,克隆其植物络合素合酶基因(MhPCS)编码区序列,并研究该基因的表达特点。【结果】结果表明MhPCS基因编码区全长为1 494 bp,编码497个氨基酸。序列分析表明,MhPCS编码的氨基酸序列由2个典型的植物络合素合酶亚家族结构域组成,具有3个相邻的Cys-Cys元件(331-332、351-352和369-370位氨基酸)和植物络合素合酶蛋白的特征位点(Cys-56、Cys-90/91和Cys-109)。【结论】湖北海棠MhPCS与杜梨PbPCS蛋白同源性最高(94%),属于系统发生树的同一分支。MhPCS基因为组成型表达,各器官表达水平存在差异,其中根的表达量最高;100μmol.L-1CdSO4处理48 h内,MhPCS基因的表达量迅速上升;不同金属离子对其上调表达的诱导能力为:Cd2+〉Cu2+〉Pb2+。这为揭示重金属胁迫下湖北海棠环境适应的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 湖北海棠 植物络合素合酶基因(MhPCS) 克隆 表达
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翠冠梨PG基因家族两成员的克隆及其表达与货架期果实软化的关系 预览 被引量:2
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作者 李慧 丛郁 +2 位作者 常有宏 蔺经 盛宝龙 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 17-23,共7页
以早熟砂梨翠冠果实为材料,克隆了多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因家族中的两成员功PGj和PpPG2。PpPGI cDNA序列全长1793bp,开放阅读框为287-1666bp,DNA序列长2757bp,包括8个外显子和7个内含子,编码一个含有459个氨基酸残基的蛋白,预... 以早熟砂梨翠冠果实为材料,克隆了多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因家族中的两成员功PGj和PpPG2。PpPGI cDNA序列全长1793bp,开放阅读框为287-1666bp,DNA序列长2757bp,包括8个外显子和7个内含子,编码一个含有459个氨基酸残基的蛋白,预测的等电点(pI)为8.47,估计的相对分子质量为49.45ku。而PpPG2cDNA序列全长1671bp.开放阅读框为120。1316bp,DNA序列长2566bp,包括3个外显子和2个内含子,编码一个含有398个氨基酸残基的蛋白,预测的等电点(pI)为7.34,估计的相对分子质量为41.14ku。PpPG1和PpPG2都含有糖苷水解酶G1yeo_hydro_28亚家族和多聚半乳糖醛酸酶保守域,它们分别位于系统进化树的两个不同发育分枝上。在夏季货架期,吻PG1和印PG2基因的表达丰度先上升,PpPG1在采后16d表达量达到峰值,PpPG2在采后8d达到峰值,然后均下降;施加1-MCP处理后,印PGJ的表达不受影响,采后8d的表达丰度下降,印PG2的表达峰值延后,到采后16d才达到表达高峰。与此同时,果实PG活性上升速度减缓,乙烯释放速率下降,硬度下降速度减缓。上述结果表明,PpPG1与印PG2为多聚半乳糖醛酸酶基因家族的不同成员,它们的表达均受乙烯调控,并且PpPGI和PpPG2都与翠冠梨在货架期的果实软化相关。 展开更多
关键词 砂梨 多聚半乳糖醛酸酶 基因克隆 序列分析 表达特点
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