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建立雌酮硫酸钠胶体金免疫层析快速限量检测方法
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作者 巩月红 段新宇 +4 位作者 王建华 赵军 罗俊 温浩 高晓黎 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期352-360,共9页
目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫... 目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫描鉴定并计算偶联率。ESS-17-肟-BSA免疫BALB/C小鼠,取血清高滴度小鼠脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用ELISA法进行阳性筛选。获得阳性克隆细胞株后于BALB/C小鼠体内诱生腹水制备单克隆抗体,抗体纯化后用胶体金标记,通过正交设计确定最佳实验参数,研制出雌酮硫酸钠胶体金免疫层析试纸条。结果:获得经化学结构修饰后的目标抗原ESS-17-肟-BSA,融合克隆后得到4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2D1、7G4、5F3、2A7,其中2D1抗体纯化后特异强,效价达1.0×106。该抗体制备的胶体金层析试纸条的检测限为1μg·L-1,与结构类似物均无交叉反应,此法检测样品结果与高效液相色谱法测定结果比对阳性符合率为85.45%(45/52),阴性符合率为89.58%(43/48),总符合率为88.00%(88/100),结果一致性较好。结论:本研究制备了雌酮硫酸钠免疫原,融合制得抗雌酮硫酸钠特异性单克隆抗体,并研制出以雌酮硫酸钠单克隆抗体为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够快速、灵敏地检测孕马尿中的雌酮硫酸钠。 展开更多
关键词 雌酮硫酸钠 半抗原 免疫原 偶联率 细胞融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体 胶体金免疫层析法
苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立 预览
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作者 项自来 王玲 +6 位作者 夏苏干 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期849-857,共9页
为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利... 为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5~1000ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845(R^2=0.990),其IC50为58.88ng/mL,LOD为3.83ng/mL,回收率在85.96%~104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。 展开更多
关键词 苯乙醇胺A(PA) 杂交瘤 单克隆抗体 间接竞争ELISA 回收试验
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抗牛免疫球蛋白G单克隆抗体的制备及鉴定 预览
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作者 王丽威 刘金 +2 位作者 武俊瑞 乌日娜 岳喜庆 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第2期110-116,共7页
采用杂交瘤技术从90株融合株中筛选得到分泌抗牛免疫球蛋白G(immunoglobulinG,IgG)单克隆抗体的2F6、5E3、9C6、9H8四个细胞株。其抗体亚型均为IgG1型,腹水单克隆抗体的效价可达5.12×10^6;5E3、9H8识别牛IgG重链Fc片段,2F6识别牛Ig... 采用杂交瘤技术从90株融合株中筛选得到分泌抗牛免疫球蛋白G(immunoglobulinG,IgG)单克隆抗体的2F6、5E3、9C6、9H8四个细胞株。其抗体亚型均为IgG1型,腹水单克隆抗体的效价可达5.12×10^6;5E3、9H8识别牛IgG重链Fc片段,2F6识别牛IgG轻链Fab片段,9C6识别牛IgG重链Fab片段;9C6与牛IgG1和牛IgG2反应,与山羊IgG、绵羊IgG、兔IgG、牛IgM、牛乳酪蛋白、牛乳β-乳球蛋白、牛乳铁蛋白、牛血清白蛋白、鸡卵清白蛋白、鱼明胶的交叉反应率均小于1%;9C6亲合力常数达牛乳8.92×10^8L/mol。 展开更多
关键词 牛免疫球蛋白G(IgG) 单克隆抗体 杂交瘤 交叉反应 亲合力
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栀子苷单克隆抗体的制备与鉴定 预览
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作者 张海霞 尹湘君 +5 位作者 刘姝伶 程发峰 王庆国 于才 魏玮 王雪茜 《中医药信息》 2019年第1期1-4,共4页
目的:制备特异性的栀子苷(Geniposide,GEN)单克隆抗体。方法:采用高碘酸钠氧化法合成栀子苷免疫抗原,通过对BALB/c小鼠进行免疫;对血清进行检测阳性后,取上述免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14按10∶1的比例融合;用间接竞争EL... 目的:制备特异性的栀子苷(Geniposide,GEN)单克隆抗体。方法:采用高碘酸钠氧化法合成栀子苷免疫抗原,通过对BALB/c小鼠进行免疫;对血清进行检测阳性后,取上述免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测。选择血清效价高且敏感性好的小鼠,采用杂交瘤细胞技术进行细胞融合,筛选分泌栀子苷单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备栀子苷单克隆抗体,并通过正辛酸纯化的方法纯化腹水中抗体蛋白,采用SDS-PAGE法对抗体蛋白的纯化纯度进行检测。结果:获得了能分泌抗栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株。SDS-PAGE结果说明经过纯化腹水中大量的杂蛋白能够被除去,获得的栀子单克隆抗体纯度较高,纯化后腹水中抗体效价与纯化前比均为60000∶1左右。结论:成功获得了能分泌栀子苷单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞株,特异性、灵敏度都比较高,为样品中的栀子苷快速微量检测及免疫亲和色谱柱的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 栀子苷 单克隆抗体 制备 鉴定 杂交瘤细胞 酶联免疫吸附法
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杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展 被引量:1
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作者 孙静静 周伟伟 +2 位作者 周雷鸣 赵巧辉 李桂林 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期82-89,共8页
单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势,如特异性好,灵敏度高,更便于质量控制,利于标准化和规范化。传统的方法是利... 单克隆抗体在生物学和医学研究领域中显示了极大的应用价值,是免疫检验中的新型试剂,是生物治疗的导向武器。作为医学检验试剂,单克隆抗体可以充分发挥其优势,如特异性好,灵敏度高,更便于质量控制,利于标准化和规范化。传统的方法是利用小鼠腹水制备单克隆抗体,但是近几十年杂交瘤细胞体外大规模培养制备单克隆抗体技术也在不断发展。特别是单克隆抗体在疾病诊断和治疗方面的需求,更进一步促进了杂交瘤细胞体外培养生产技术的发展,体外培养杂交瘤细胞生产的单克隆抗体已应用到许多方面。由于杂交瘤细胞的半贴壁性质,无论是悬浮培养还是贴壁培养,均可进行杂交瘤细胞的体外大规模培养。针对应用于体外诊断试剂的杂交瘤细胞体外培养制备单克隆抗体进行综述,主要包括中空纤维细胞培养和生物反应器细胞培养方法,以及不同培养方法优化的进展。 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 单克隆抗体 生物反应器 中空纤维
一种新型β_1肾上腺素受体单克隆抗体的制备及其临床应用 预览 被引量:2
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作者 杜芸辉 李笑 +2 位作者 于海存 张诗晗 刘慧荣 《心肺血管病杂志》 2017年第8期696-700,共5页
目的:采用杂交瘤细胞融合技术构建特异性针对β_1肾上腺素受体(β_1-AR)细胞外第二环的单克隆抗体(β_1-AAmAb)。方法:设计合成两条肽段,偶联后作为免疫原混合免疫小鼠,挑选免疫反应强的小鼠进行细胞融合。筛选杂交瘤细胞、扩大培... 目的:采用杂交瘤细胞融合技术构建特异性针对β_1肾上腺素受体(β_1-AR)细胞外第二环的单克隆抗体(β_1-AAmAb)。方法:设计合成两条肽段,偶联后作为免疫原混合免疫小鼠,挑选免疫反应强的小鼠进行细胞融合。筛选杂交瘤细胞、扩大培养,并于接种小鼠,14d后收集腹水,用Protein G对腹水进行纯化以获得单克隆抗体。结果:ELISA结果显示,杂交瘤细胞上清液中β_1-AA的滴度明显高于对照组(2.9896±0.1873)vs.(0.0635±0.0386),差异有统计学意义(P〈0.001)。Western bolt分析发现,β_1-AAmAb与商业化抗β_1-AR多克隆抗体阳性对照具有相同分子量的条带。激光共聚焦结果表明,β_1-AAmAb可与天然存在的β_1-AR相结合。Annexin V/PI流式分析发现,β_1-AAmAb可以诱导心肌细胞发生早期凋亡。乳鼠心肌细胞跳动频率实验证实,β_1-AAmAb与心力衰竭患者血清中的β_1-AA均可增加乳鼠心肌细胞跳动频率。结论:本研究成功构建了与心力衰竭患者血清中存在的β_1-AA具有相同生物学效应的单克隆抗体,使用该单克隆抗体进行后续的研究可以使我们对β_1-AA的致病机制有更好的认识。 展开更多
关键词 β_1肾上腺素受体 单克隆抗体 杂交瘤细胞融合 凋亡
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淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒GP2单克隆抗体的制备和鉴定 被引量:1
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作者 周渝阳 李秉首 +3 位作者 李芝蓉 何艳艳 沈桂林 叶丽林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期343-348,共6页
目的制备淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)单克隆抗体(m Ab)。方法采用杂交技术获得并筛选出杂交瘤细胞,收集含单克隆抗体的培养上清行免疫荧光(IFA)、dot-blot、ELISA法鉴定抗体重链类型和测定单克隆抗体的免疫效价。用蛋白G Seph... 目的制备淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)单克隆抗体(m Ab)。方法采用杂交技术获得并筛选出杂交瘤细胞,收集含单克隆抗体的培养上清行免疫荧光(IFA)、dot-blot、ELISA法鉴定抗体重链类型和测定单克隆抗体的免疫效价。用蛋白G Sepharose亲和层析填料纯化抗体,纯化后的抗体采用SDS-PAGE检测纯化效果,并进一步用Western blot检查抗体对LCMV的作用部位。结果成功获得能稳定分泌抗LCMV的特异性杂交瘤细胞株,顺利获得纯化的单克隆抗体,命名为anti-GP2。免疫荧光、ELISA结果均证实获得的单克隆抗体能识别LCMV抗原。用ELISA法鉴定出该单克隆抗体重链类型为Ig G2b,培养液免疫效价大约为1.35×10-3。蛋白G Sepharose亲和层析填料纯化抗体后经SDS-PAGE检测证实纯化抗体成功。Western blot提示该单克隆抗体对LCMV的作用部位为病毒颗粒表面糖蛋白抗原GP2。结论成功制备出了针对LCMV病毒颗粒表面糖蛋白抗原GP2的单克隆抗体(anti-GP2 m Ab)。 展开更多
关键词 LCMV 杂交瘤 单克隆抗体 GP2
福氏志贺氏菌2a单克隆抗体的制备及ELISA方法的建立 预览 被引量:1
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作者 王怡雯 齐颖颖 +3 位作者 张红星 张帅 谢远红 刘慧 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期共6页
为制备特异性和灵敏度较高的抗福氏志贺氏菌2a单克隆抗体,并建立双抗夹心酶联免疫吸附检测法,用于检测生鲜食品中的福氏志贺氏菌2a.本研究利用自制的福氏志贺氏菌2a抗原免疫BALB/c小鼠,并用杂交瘤技术进行细胞融合,经筛选克隆后,获得3... 为制备特异性和灵敏度较高的抗福氏志贺氏菌2a单克隆抗体,并建立双抗夹心酶联免疫吸附检测法,用于检测生鲜食品中的福氏志贺氏菌2a.本研究利用自制的福氏志贺氏菌2a抗原免疫BALB/c小鼠,并用杂交瘤技术进行细胞融合,经筛选克隆后,获得3株分泌抗福氏志贺氏菌2a单克隆抗体稳定的杂交瘤细胞,分别命名为5C12、1B5和6A11.3株杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后,诱导产生的腹水中抗体的效价为 1∶2.048×105~1∶1.024×105,免疫球蛋白亚型均为IgG.3株抗体识别抗原表位的最佳配对为5C12和6A11,由此建立双抗夹心ELISA体系,测得其灵敏度为1 000 CFU/g,且具有良好的特异性. 展开更多
关键词 福氏志贺氏菌2a 单克隆抗体 杂交瘤 双抗夹心ELISA
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抗ADAMTS13单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 预览
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作者 凌婧 马珍妮 +4 位作者 殷杰 沈飞 谢丽倩 赵云霄 阮长耿 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第4期1123-1129,共7页
目的:建立分泌抗ADAMTS13单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备针对ADAMTS13不同结构域的单克隆抗体。方法:利用真核表达的重组血浆金属蛋白酶ADAMTS13截短型蛋白(ADAMTS13-T7)纯品免疫BALB/c小鼠。用ELISA方法测定免疫小鼠与ADAMTS13-T7... 目的:建立分泌抗ADAMTS13单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备针对ADAMTS13不同结构域的单克隆抗体。方法:利用真核表达的重组血浆金属蛋白酶ADAMTS13截短型蛋白(ADAMTS13-T7)纯品免疫BALB/c小鼠。用ELISA方法测定免疫小鼠与ADAMTS13-T7蛋白的抗血清效价。取小鼠脾脏,制成单细胞悬液与SP2/0骨髓瘤细胞以10∶1的比例混合,进行细胞的融合,并将杂交瘤细胞稀释培养。2周后选生长良好的克隆孔检测,阳性克隆孔扩大培养并再次检测。结果:获得真核表达截短型血管性血友病因子裂解蛋白酶ADAMTS13-T7蛋白纯品。利用真核表达的截短型ADAMTS13-T7蛋白免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA检测免疫后抗血清效价约为1∶20 000。利用杂交瘤技术通过融合,获得多株分泌抗重组ADAM TS13抗体的杂交瘤单克隆细胞株。将其中的30株转入液氮中冻存,以备进一步分选及功能研究。结论:融合获得多株分泌抗重组ADAMTS13抗体的杂交瘤单克隆细胞株,为进一步筛选出具有一定功能活性的单克隆抗体及研究ADAMTS13结构和功能提供更多的有力工具。 展开更多
关键词 ADAMTS13 真核表达 杂交瘤 单克隆抗体
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鼠抗人PCNA Mab-人IgG交联物的制备及应用
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作者 张远利 王红勋 +3 位作者 李春梅 张玥 兰燕宇 孙祥明 《生物技术》 北大核心 2017年第4期378-382,共5页
[目的]制备鼠抗人PCNA Mab与人IgG的交联物作为临床分析阳性参考品。[方法]利用杂交瘤技术制备鼠抗人PCNA Mab,在SPDP的作用下与人IgG交联,建立ELISA方法评估其作为参考品的可行性。[结果]获得2株鼠抗人PCNA杂交瘤细胞;免疫印迹表明鼠抗... [目的]制备鼠抗人PCNA Mab与人IgG的交联物作为临床分析阳性参考品。[方法]利用杂交瘤技术制备鼠抗人PCNA Mab,在SPDP的作用下与人IgG交联,建立ELISA方法评估其作为参考品的可行性。[结果]获得2株鼠抗人PCNA杂交瘤细胞;免疫印迹表明鼠抗人PCNA Mab与人IgG交联后对人PCNA和抗人IgG抗体均具有反应性;以该交联物作为参考品建立的ELISA中,300μg/L~4.69μg/L范围内,R2达0.994、准确度为88.26%~99.66%、相对标准偏差4.66%~17.95%;稀释400倍后,血清基质对检测结果没有明显干扰;SLE病人样本(n=41)的ELISA均值和高值均大于健康人(n=22);临床免疫膜条确认的阴阳性样本的ELISA结果分别16.44±1.30μg/m L和6.05±0.50μg/m L,与判别结果相关。[结论]鼠抗人PCNA Mab-人IgG交联物可作为阳性参考品应用于PCNA自抗体的免疫分析。 展开更多
关键词 单克隆抗体 免疫分析 杂交瘤 自身免疫 增殖细胞核抗原
牛支原体脂蛋白P48单克隆抗体的制备及鉴定
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作者 包世俊 胡国明 +6 位作者 邢小勇 郝宝成 薛惠文 伏小平 温峰琴 胡永浩 项海涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1418-1423,共6页
为制备牛支原体表面脂蛋白P48的单克隆抗体,应用纯化的牛支原体武威株脂蛋白P48基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠,继而取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经克隆和筛选,获得2株能分泌抗牛支原体脂蛋白P48抗体的杂交瘤细胞... 为制备牛支原体表面脂蛋白P48的单克隆抗体,应用纯化的牛支原体武威株脂蛋白P48基因的原核表达产物免疫BALB/c小鼠,继而取免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经克隆和筛选,获得2株能分泌抗牛支原体脂蛋白P48抗体的杂交瘤细胞融合株,并分别命名为C7及E5。ELISA和W estern-blot检测结果表明,2株单克隆抗体均可与牛支原体特异性地结合,而与牛的其他常见病原菌无任何反应。亚类鉴定结果表明,2株单克隆抗体重链均为Ig G 1,轻链均为λ型。稳定性试验结果表明,2株杂交瘤细胞均可稳定分泌单克隆抗体。本研究结果为建立牛支原体有效的检测方法和深入研究脂蛋白P48的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 牛支原体 单克隆抗体 杂交瘤 鉴定
猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定 预览 被引量:2
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作者 赵孟孟 张二芹 +5 位作者 冯松林 郭依嘉 阮海宇 王文佳 邢星 张桂红 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期63-69,共7页
根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA... 根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应。在PRRSV感染的Marc-145细胞中,NSP9蛋白表达水平接毒后不断升高,48 h达最高,为深入研究NSP9功能奠定基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9 单克隆抗体 杂交瘤
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伏马毒素B1单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 范文桐 项自来 +9 位作者 徐辉 王光光 王冰洁 蔡国栋 王凤丽 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第7期5-8,12共5页
为了制备伏马毒素B1(FB1)单克隆抗体,建立针对FB1快速、简便、灵敏的检测方法,试验用戊二醛一步法分别偶联FB1与BSA和OVA作为免疫原和检测原,5次免疫后取脾细胞与SP2/0融合。结果表明:共筛选出2株能稳定分泌抗FB1单克隆抗体杂交瘤细... 为了制备伏马毒素B1(FB1)单克隆抗体,建立针对FB1快速、简便、灵敏的检测方法,试验用戊二醛一步法分别偶联FB1与BSA和OVA作为免疫原和检测原,5次免疫后取脾细胞与SP2/0融合。结果表明:共筛选出2株能稳定分泌抗FB1单克隆抗体杂交瘤细胞,选取其中1株5F5杂交瘤细胞制备小鼠腹水,所制腹水效价达到1∶256000,其半数抑制浓度(IC50)为6.1ng/mL,检测下限(LOD)低于0.05ng/mL。回收率在84.20%-102.60%之间,变异系数为2.48%-8.79%。制备的单克隆抗体对FB1抑制率为100%,与呕吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、黄曲霉毒素B1(AFB1)、α-玉米赤霉烯醇(α-ZOL)等基本无交叉反应。 展开更多
关键词 伏马毒素B1 单克隆抗体 杂交瘤 完全抗原 间接竞争ELISA
利用改良电融合法制备杂交瘤细胞的试验探索 预览
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作者 吴梦 刘作华 +2 位作者 罗林 丁玉春 葛良鹏 《四川畜牧兽医》 2016年第7期26-28,共3页
目的:运用改良电融合法提高杂交瘤的融合效率,以获得更多的杂交瘤克隆。方法:将SP2/0细胞和脾细胞分别用NHS-d-PEG24-biotin孵育30 min,再将脾细胞用avidin孵育30 min,然后将SP2/0细胞和脾细胞按1∶5混合孵育15 min后进行电融合,融合... 目的:运用改良电融合法提高杂交瘤的融合效率,以获得更多的杂交瘤克隆。方法:将SP2/0细胞和脾细胞分别用NHS-d-PEG24-biotin孵育30 min,再将脾细胞用avidin孵育30 min,然后将SP2/0细胞和脾细胞按1∶5混合孵育15 min后进行电融合,融合后的细胞用半固体培养基筛选单克隆。结果显示:用2×105个SP2/0细胞和1×106个脾细胞进行正常电融合,经半固体培养基筛选共获得6个单克隆,而用改良电融合法获得了20个单克隆。结论:利用改良电融合法能够增加异种细胞相互配对的几率,从而提高杂交瘤的融合效率,最终获得更多的杂交瘤细胞。 展开更多
关键词 电融合 半固体培养基 杂交瘤
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Monoclonal neutralizing antibodies against EV71 screened from mice immunized with yeast-produced virus-like particles
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作者 Tao Lin Lingzhi Xianyu Songya Lyu 《中国病毒学:英文版》 CAS CSCD 2015年第3期208-213,共6页
Periodic outbreaks of hand, foot and mouth disease(HFMD) occur in children under 5 years old, and can cause death in some cases. The C4 strain of enterovirus 71(EV71) is the main pathogen that causes HFMD in China. Al... Periodic outbreaks of hand, foot and mouth disease(HFMD) occur in children under 5 years old, and can cause death in some cases. The C4 strain of enterovirus 71(EV71) is the main pathogen that causes HFMD in China. Although no drugs against EV71 are available, some studies have shown that candidate vaccines or viral capsid proteins can produce anti-EV71 immunity. In this study, female BABL/c mice(6–8 weeks old) were immunized with virus-like particles(VLPs) of EV71 produced in yeast to screen for anti-EV71 antibodies. Two hybridomas that could produce neutralizing antibodies against EV71 were obtained. Both neutralizing m Abs(D4 and G12) were confirmed to bind the VP1 capsid protein of EV71, and could protect > 95% cells from 100 TCID50 EV71 infection at 25 μg/m L solution(lowest concentration). Those two neutralizing m Abs identified in the study may be promising candidates in development for m Abs to treat EV71 infection, and utilized as suitable reagents for use in diagnostic tests and biological studies. 展开更多
关键词 hand foot and MOUTH disease ENTEROVIRUS 71(EV71) virus-like particles(VLPs) HYBRIDOMA NEUTRALIZING antibodies
滑液支原体二氢硫辛酰胺乙酰转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
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作者 郭小琴 包世俊 +5 位作者 邢小勇 胡国明 薛慧文 温峰琴 胡永浩 项海涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期802-806,共5页
为制备滑液支原体(MS)的单克隆抗体,将滑液支原体WVU 1853株全菌免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,在间接ELISA检测的基础上经有限稀释法克隆化,成功筛选出3株分泌抗MS WVU 1853株单克隆抗体的杂交瘤细胞融合株1B3、... 为制备滑液支原体(MS)的单克隆抗体,将滑液支原体WVU 1853株全菌免疫的BALB/c小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,在间接ELISA检测的基础上经有限稀释法克隆化,成功筛选出3株分泌抗MS WVU 1853株单克隆抗体的杂交瘤细胞融合株1B3、1E7及4E8。ELISA和Western-blot试验表明,这3株单克隆抗体可特异性地与滑液支原体WVU 1853株的32ku蛋白质结合,而与禽的其他几种常见病原微生物无任何反应。亚类鉴定结果表明,这3株单克隆抗体重链均为IgG1,轻链均为λ型。质谱分析结果表明,所获得的3株单克隆抗体均为抗滑液支原体二氢硫辛酰胺乙酰转移酶单克隆抗体。 展开更多
关键词 滑液支原体 单克隆抗体 杂交瘤 鉴定
鼠抗人B7-H4单克隆抗体的制备及功能研究
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作者 张标 房鹏 +1 位作者 张宁 顾宗江 《中国血液流变学杂志》 CAS 2015年第1期18-21,共4页
目的:制备鼠抗人B7-H4单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步研究。方法以表达B7-H4分子的转基因细胞L929/B7-H4为免疫原,免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术,融合小鼠骨髓瘤细胞与脾脏细胞,用流式细胞术筛选阳性克隆,获得稳... 目的:制备鼠抗人B7-H4单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步研究。方法以表达B7-H4分子的转基因细胞L929/B7-H4为免疫原,免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术,融合小鼠骨髓瘤细胞与脾脏细胞,用流式细胞术筛选阳性克隆,获得稳定分泌抗B7-H4 mAb的杂交瘤细胞株,并对mAb的生物学功能进行初步研究。结果成功获得1株稳定分泌抗人B7-H4 mAb的杂交瘤细胞株,命名为8F10。Western blot结果显示:8F10特异性识别B7-H4蛋白;T细胞增殖抑制阻断实验显示8F10可以阻断B7-H4对T细胞增殖的抑制作用。结论成功获得鼠抗人B7-H4 mAb,为进一步研究B7-H4分子的生物学功能提供了有效的工具。 展开更多
关键词 B7-H4 单克隆抗体 杂交瘤 B7-H4
牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶单克隆抗体的制备
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作者 盛美蕾 张晓 +3 位作者 张纬 张燕飞 王盈 戴一凡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期829-832,837共5页
目的制备牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行初步鉴定。方法构建含PEPCK基因的重组质粒,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达,对表达产物PEPCK重组蛋白进行纯化,以PEPCK重组蛋白为抗原,免疫BALB/... 目的制备牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行初步鉴定。方法构建含PEPCK基因的重组质粒,将其转化大肠杆菌,并进行诱导表达,对表达产物PEPCK重组蛋白进行纯化,以PEPCK重组蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞,用间接ELISA筛选阳性克隆,获得稳定分泌抗牛PEPCKmAb的细胞株,并用Westernblot法,免疫组织化学染色和免疫沉淀鉴定其特异性。结果成功获得稳定分泌抗牛PEPCKmAb的杂交瘤细胞株。Westernbbt法、免疫组织化学和免疫沉淀结果表明,该抗体能与牛PEPCK蛋白特异性结合。结论成功获得抗牛PEPCKmAb。 展开更多
关键词 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 单克隆抗体 杂交瘤
人生长分化因子15单克隆抗体制备、鉴定及药用价值初探 被引量:1
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作者 郑蕾 冯英明 +3 位作者 宋扬 李红 聂娜 苏海川 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第24期4601-4604,共4页
目的:制备稳定分泌抗人生长分化因子15(GDF15)单克隆抗体(m Ab)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的m Ab进行鉴定。方法:根据人GDF15氨基酸序列特征,设计合成了8条能够免疫产生GDF15特异性抗体的抗原多肽,与VLP载体偶联后,免疫雌性BALB/... 目的:制备稳定分泌抗人生长分化因子15(GDF15)单克隆抗体(m Ab)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的m Ab进行鉴定。方法:根据人GDF15氨基酸序列特征,设计合成了8条能够免疫产生GDF15特异性抗体的抗原多肽,与VLP载体偶联后,免疫雌性BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备鼠源抗人GDF15的m Ab,用间接ELISA检测m Ab腹水效价。结果:获得针对7个抗原多肽的12株稳定分泌抗人GDF15的杂交瘤细胞系,腹水m Ab效价可达1×104~1×109。结论:获得了针对不同抗原多肽的抗人GDF15的特异性m Ab,为进一步研发以GDF15为靶点的单克隆抗体抗肿瘤药物奠定了基础。 展开更多
关键词 人GDF15 杂交瘤 单克隆抗体
人颗粒蛋白前体F片段结构域单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 李彦青 任东妮 夏海滨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期540-543,552共5页
目的制备抗人颗粒蛋白前体F片段(GrnF)的单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其生物学特性。方法通过分子生物学技术构建含人GrnF编码序列的酵母表达载体,表达并纯化酵母来源的融合人血清白蛋白(HSA)的GrnF片段HSA-GrnF。用纯化的HSA-Grn... 目的制备抗人颗粒蛋白前体F片段(GrnF)的单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其生物学特性。方法通过分子生物学技术构建含人GrnF编码序列的酵母表达载体,表达并纯化酵母来源的融合人血清白蛋白(HSA)的GrnF片段HSA-GrnF。用纯化的HSA-GrnF免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,用ELISA筛选阳性克隆,并采用有限稀释法进行亚克隆;采用免疫荧光染色及Westernblot法对所获得的mAb的特异性进行鉴定,并用抗体亚类测定试剂盒检测所获得单克隆抗体亚类。结果成功获得2株可分泌特异性抗GrnF的杂交瘤细胞株(1G6及4E8),经鉴定这2株抗体重链亚类均为IgG1亚类。结论成功制备了抗人GrnF片段结构域的单克隆抗体。 展开更多
关键词 颗粒前体蛋白 Grn F 酵母表达载体 杂交瘤 单克隆抗体
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