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RNA病毒翻译调控元件——内部核糖体进入位点(IRES) 预览 被引量:12
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作者 卢杰 张珈敏 +2 位作者 林美娟 曹旭 胡远扬 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期 513-518,共6页
真核生物大多数蛋白质合成采用了依赖帽子结构的翻译起始方式.但一组缺乏帽子结构的RNA病毒的蛋白质合成起始是依赖其5'端非翻译区(untranslated region,UTR)翻译调控的顺式作用元件——内部核糖体进入位点(internal ribosome entry... 真核生物大多数蛋白质合成采用了依赖帽子结构的翻译起始方式.但一组缺乏帽子结构的RNA病毒的蛋白质合成起始是依赖其5'端非翻译区(untranslated region,UTR)翻译调控的顺式作用元件——内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES).它们能够在一些反式作用因子的辅助下,招募核糖体小亚基到病毒mRNA的翻译起始位点.目前,依赖IRES元件翻译起始的RNA病毒在哺乳动物,无脊椎动物及植物中均有发现.因此,对RNA病毒IRES元件的深入研究,不仅有助于阐明相关疾病的发生机理,而且为工业应用和疾病治疗提供借鉴意义.本文对RNA病毒IRES元件发现、分类、结构与功能等作了综述. 展开更多
关键词 RNA病毒 内部核糖体进入位点(ires) 翻译起始
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口蹄疫病毒基因组内部核糖体进入位点一级和二级结构分析 预览 被引量:3
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作者 张显升 赵启祖 +6 位作者 刘在新 江鹏斐 常惠芸 陈应理 李冬 魏怀录 谢庆阁 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期 142-148,共7页
以口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)强毒China/99株牛舌水泡皮为材料,用RT-PCR法提取RNA及扩增目的cDNA,然后与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株,再经重组质粒电泳、PCR和EcoRI酶切鉴定.用DNAstar软件比较了内部核糖... 以口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)强毒China/99株牛舌水泡皮为材料,用RT-PCR法提取RNA及扩增目的cDNA,然后与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株,再经重组质粒电泳、PCR和EcoRI酶切鉴定.用DNAstar软件比较了内部核糖体进入位点(IRES)的序列差异,并用RNAdraw软件绘制和分析了该区段的二级结构.8株FMDV IRES核苷酸序列比较表明该区段较为保守,并对非保守区域进行了分析.二级结构分析表明,FMDV IRES至少有3种二级结构图形:第一型有5个结构域,与Pilipenko等报道的一致;第二和三型分别有6和11个结构域,与Pilipenko等报道的结果不同.无论FMDV IRES二级结构如何不同,但单链区大部分核苷酸序列或基序相同,如AACUCC、GAAA、CUUU、AGG、AACC、GUAA等.茎环柄部核苷酸对维持二级结构的空间构像具有十分重要的作用,环中或单链区序列(基序)在维持其功能方面具有很重要的作用,如GAAA和CUUU基序分别是三级结构的组件和嘧啶区结合蛋白的结合位点. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 基因组 内部核糖体进入位点 二级结构 一级结构
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IRES连接双基因在溶瘤腺病毒中的抗肝癌作用 预览 被引量:3
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作者 刘金 刘必胜 刘新垣 《浙江理工大学学报》 2007年第4期 466-470,493,共6页
单基因治疗癌症可能杀伤力还嫌不够,故使用两个基因在癌症治疗中具有重要价值。利用IRES将双基因连接起来在溶瘤腺病毒中表达,构成ZD55-IL-24-IRES-TRAIL。研究发现,该病毒在多种肝癌细胞中能有效地介导外源双基因表达,并在很大程... 单基因治疗癌症可能杀伤力还嫌不够,故使用两个基因在癌症治疗中具有重要价值。利用IRES将双基因连接起来在溶瘤腺病毒中表达,构成ZD55-IL-24-IRES-TRAIL。研究发现,该病毒在多种肝癌细胞中能有效地介导外源双基因表达,并在很大程度上杀死肿瘤细胞,而对正常细胞WI38无明显杀伤力。并且,该病毒可以有效地抑制体内肿瘤生长,有的肿瘤甚至完全消失。 展开更多
关键词 双顺反子溶瘤腺病毒 内部核糖体进入住点(ires) 基因治疗
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雌激素受体2(ESR2) mRNA 5'非翻译区内部核糖体进入位点活性的鉴定与分析
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作者 孙柳柳 黄方婷 +2 位作者 张旭燕 朱瑞宇 金坚 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期622-631,共10页
真核生物除了传统的帽依赖型翻译机制外,还存在内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)介导的翻译机制。雌激素受体2(estrogen receptor 2,ESR2)是雌激素受体家族成员之一,其编码的蛋白质在许多肿瘤中发挥重要的作... 真核生物除了传统的帽依赖型翻译机制外,还存在内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)介导的翻译机制。雌激素受体2(estrogen receptor 2,ESR2)是雌激素受体家族成员之一,其编码的蛋白质在许多肿瘤中发挥重要的作用。ESR2蛋白的异常表达会导致众多肿瘤的发生,但其蛋白质翻译水平的调控机制至今仍不清楚。研究发现,在药物刺激的条件下,乳腺癌细胞MCF7/WT中ESR2蛋白的表达提高,但是其转录水平基本未见发生改变。猜测ESR2 mRNA5'非翻译区(5'untranslated region,5'UTR)具有IRES活性。为了验证ESR2 mRNA 5'UTR是否具有IRES元件,将ESR2 mRNA 5'UTR插入到双顺反子报告基因载体(pRF)中,构建pRL-ESR2-FL重组质粒载体,将其瞬时转染到HEK293细胞。结果发现,ESR2 mRNA 5'UTR有假定的IRES活性。并且通过3个排除实验验证了ESR2 IRES活性与其5'UTR中的内部潜在启动子(P〈0.0001)、内部剪切位点以及核糖体通读无关。进一步对其序列进行截短研究发现,ESR2 IRES活性发挥的关键区域是3'端的439~468 nt,且ESR2 IRES最大活性的发挥依赖于5'UTR序列的完整性。并且发现,ESR2 IRES活性的发挥不但需要特定的一级核酸序列,还要有稳定的二级茎环结构。此研究有望为ESR2蛋白调控的相关疾病提供新的药物治疗靶点。 展开更多
关键词 雌激素受体2 5'非翻译区 内部核糖体进入位点
丙型肝炎病毒5’端非编码区的5’端序列对其翻译启动活性的影响 被引量:2
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作者 刘水平 赵俊琴 +2 位作者 谭德明 朱海鹏 余俊龙 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2005年第4期 355-358,共4页
目的分析丙型肝炎病毒(HCV)5'端非编码区(5'NCR)的5'端序列对其翻译启动活性的影响.方法用PCR技术扩增获得全长和5'端17个碱基缺失的HCV 5'NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,分别构建成全长... 目的分析丙型肝炎病毒(HCV)5'端非编码区(5'NCR)的5'端序列对其翻译启动活性的影响.方法用PCR技术扩增获得全长和5'端17个碱基缺失的HCV 5'NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,分别构建成全长和5'端截短的HCV 5'NCR调控SEAP表达的重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP.用脂质体方法将重组质粒转染至肝细胞株QSG7701,并用化学发光法检测SEAP的表达.结果酶切和测序结果表明,重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP构建成功.表达的发光强度分别为390482±42856和635265±52285RLU,二者有差异显著性(P<0.01).结论 HCV 5'NCR的5'端碱基缺失提高了它对SEAP基因的翻译启动活性,为进一步分析HCV IRES的结构提供了实验基础. 展开更多
关键词 肝炎病毒 丙型 5’端非编码区 内部核糖体进入位点 翻译启动活性
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转录激活因子1(ATF1)内部核糖体进入位点的鉴定及活性分析 被引量:2
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作者 李琪 高文青 +1 位作者 朱瑞宇 金坚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期937-943,共7页
蛋白质翻译起始通常有两种机制,一是依赖帽结构的翻译,另一种是依赖5'非翻译区的内部核糖体进入位点(IRES).在后一种方式中,在某些IRES反式作用因子,如La蛋白、多聚嘧啶串结合蛋白1等的参与下,直接招募核糖体小亚基到mRNA的翻译起始... 蛋白质翻译起始通常有两种机制,一是依赖帽结构的翻译,另一种是依赖5'非翻译区的内部核糖体进入位点(IRES).在后一种方式中,在某些IRES反式作用因子,如La蛋白、多聚嘧啶串结合蛋白1等的参与下,直接招募核糖体小亚基到mRNA的翻译起始位点,启始翻译.研究发现,参与细胞生长、分化、细胞周期进程、凋亡和压力调控的相关蛋白中通常含有IRES元件.基于功能,我们提出假说:转录激活因子1(ATF1)的5'-UTR可能具有IRES活性.为验证假说,首先构建了含全长ATF1 5'-UTR的双荧光素酶报告质粒;质粒转染结合报告酶活性分析显示,ATF1 5'-UTR在Bel7402、HCT-8和HEK293细胞中表现出不同的IRES活性;而此IRES活性与5'-UTR中的隐藏启动子无关.同时还发现,ATF1 5'-UTR在NIH3T3细胞中却没有IRES活性.与此结果相一致,Western印迹检测ATF1在这几种细胞系中的表达.结果显示,Bel7402、HCT-8和HEK293中ATF1蛋白质表达水平较高,而在NIH3T3中却极低.ATF1 5'-UTR的系列5'-删除突变及报告酶分析证明,ATF1 5'-UTR的完整性对其IRES活性大小发挥重要作用;其中5'端的204 bp序列对其IRES活性贡献较大.RNA-蛋白免疫共沉淀实验揭示,ATF1 5'-UTR可与La和PTBP1蛋白结合;抑制La和PTBP1蛋白质的表达,并可减低HEK293细胞中ATF1蛋白质表达水平.这些结果提示,La和PTBP1蛋白(两种ITAFs)为ATF1 5'-UTR发挥IRES活性所必需.总之,上述结果证明,ATF1 5'-UTR具有IRES活性,其活性发挥依赖与La和PTBP1蛋白的结合.上述发现为进一步研究La和PTBP1表达及亚细胞定位对ATF1 IRES调控机制的影响奠定了基础. 展开更多
关键词 转录激活因子1(ATF1) 5'-非编码区(5'-UTR) 内部核糖体进入位点(ires) ires反式作用因子(ITAFs)
CTLA4Ig和OX40Ig的表达及其生物学活性研究 预览 被引量:3
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作者 王光明 杨阳 +3 位作者 李爱玲 郝洁 高翔 谢蜀生 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期 383-387,共5页
目的构建p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig真核表达载体,共同表达CTLA4Ig和OX40Ig,通过体外实验初步研究其生物学特性. 方法通过特异引物扩增OX40胞外区的cDNA,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig,并使之在体外... 目的构建p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig真核表达载体,共同表达CTLA4Ig和OX40Ig,通过体外实验初步研究其生物学特性. 方法通过特异引物扩增OX40胞外区的cDNA,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig,并使之在体外进行表达,用RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot鉴定目的基因的表达,ELISA法测定目的基因的表达水平和混合淋巴细胞反应研究其抑制免疫应答的效应. 结果测序证实所扩增的PCR产物是OX40胞外区的cDNA,其序列与GenBank中的相一致;成功构建了p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig真核表达载体;RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot结果显示,表达的蛋白为CTLA4Ig和OX40Ig,ELISA结果提示,该两种蛋白均得到了高效表达,混合淋巴细胞反应结果证实转染了p3.1/CTLA4Ig-IRES-OX40Ig的CHO细胞培养上清可以有效地抑制异基因淋巴细胞的刺激作用,其抑制效果强于转染p3.1/CTLA4Ig和p3.1/OX40Ig的CHO细胞培养上清. 结论成功构建了含CTLA4Ig和OX40Ig的真核表达载体,并在体外能够同时得到表达;体外实验证实该两种分子协同作用可以有效抑制免疫应答,并且优于该两种分子单独作用时的抑制效果. 展开更多
关键词 CTLA4IG OX40Ig 表达 生物学活性 ELISA法 T细胞 器官移植排斥
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内部核糖体结合位点介导的三顺反子抗人肿瘤坏死因子-α单克隆抗体表达质粒的构建及在CHO细胞中的表达 被引量:1
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作者 李计来 崔文禹 +3 位作者 王欣怡 刘敬 郝少杰 徐静 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第12期1252-1257,共6页
目的构建内部核糖体结合位点(internal ribosome entry site,IRES)介导的三顺反子抗人肿瘤坏死因子-α(human tumor necrosis factor-α,hTNF-α)单克隆抗体的表达质粒,并在CHO细胞中进行表达。方法采用重叠延伸PCR(gene splicing ... 目的构建内部核糖体结合位点(internal ribosome entry site,IRES)介导的三顺反子抗人肿瘤坏死因子-α(human tumor necrosis factor-α,hTNF-α)单克隆抗体的表达质粒,并在CHO细胞中进行表达。方法采用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)技术扩增hTNF-α抗体的轻、重链基因,并与IRES基因连接,将连接产物LC-IRES-HC基因克隆至pOptiVEC~(TM)-TOPO~?TA载体,构建单表达载体pOptiVEC-LIH。将单表达载体pOptiVEC-LIH及共转染载体pOptiVEC-HC和pcDNA3.3-LC分别电转至CHODG44细胞,经氨甲喋呤(methotrexate,MTX)加压筛选稳定转染细胞,有限稀释法筛选高表达单克隆细胞株,并采用3 L反应罐对高表达株进行补料批次发酵培养。结果经测序鉴定,单表达载体pOptiVEC-LIH构建正确。瞬时转染后,单表达载体pOptiVEC-LIH转染组的抗体表达量明显高于共转染载体p Opti VEC-HC和pcDNA3.3-LC(P〈0.05);经稳定转染有限稀释筛选后,共获得132个克隆,其中A值〉2.0的克隆有18株,应用3 L反应器补料批次发酵培养,其表达量可达250 mg/L。结论成功构建了三顺反子抗hTNF-α单克隆抗体的表达质粒,并在CHO细胞中进行了表达。 展开更多
关键词 内部核糖体结合位点 人肿瘤坏死因子-Α 单克隆抗体 CHO细胞
Construction and Co-expression of Bicistronic Plasmid Encoding Human WEE1 and Stem Cell Factor
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作者 PingLEI Wen-HanLI Wen-JunLIAO BingYU Hui-FenZHU Jing-FangSHAO Guan-XinSHEN 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 107-112,共6页
To protect the hematopoietic stem cells (HSCs) from apoptosis induced by chemotherapy and promote HSC proliferation, bi-functional gene delivery systems are increasingly investigated in gene therapy.In the present stu... To protect the hematopoietic stem cells (HSCs) from apoptosis induced by chemotherapy and promote HSC proliferation, bi-functional gene delivery systems are increasingly investigated in gene therapy.In the present study, we constructed a bicistronic vector, pWISG, expressing the anti-apoptotic protein human WEE1 (WEE1Hu) and the fusion protein of the proliferation-stimulating stem cell factor (SCF) and enhanced green fluorescent protein (EGFP) separately with internal ribosome entry site (IRES). We first examined the expression and location of WEE1Hu in Chinese hamster ovary (CHO) cells and showed that WEE1Hu was located in the nucleus, which was confirmed by immunohistochemistry and Western blot. Wedetermined the expression and receptor-binding ability of the SCF-EGFP fusion protein on CD34^+ cells,which were proved by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and flow cytometry,respectively. Furthermore, inhibition of cisplatin-induced apoptosis was observed in CD34^+ cells transfected with pWISG, which implies that protection for CD34^+ cells was achieved via WEE1Hu and SCF-EGFP. Our study suggests that the introduction of two functional genes via bicistronic vector is more powerful and efficient than single gene therapy. 展开更多
关键词 造血干细胞 人WEE1蛋白质 固有核糖体进入位置 质粒 基因治疗 细胞凋亡 RT-PCR
人TNF—α双顺反子逆转录病毒载体的构建及其在 … 预览 被引量:1
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作者 赖冠华 唐展云 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第3期 274-279,共6页
利用脑炎心肌炎病毒的内核糖体进入位点连接人TNF-α cDNA和选择基因NeoR基因,使TNF-α及NeoR基因均受控于病毒LTR启动子,将两基因同时转录至一mRNA,而构建成人TNF-α双顺反子逆转录病毒载体pGC... 利用脑炎心肌炎病毒的内核糖体进入位点连接人TNF-α cDNA和选择基因NeoR基因,使TNF-α及NeoR基因均受控于病毒LTR启动子,将两基因同时转录至一mRNA,而构建成人TNF-α双顺反子逆转录病毒载体pGCEN/TNF-α。在LipofectAMINE介导下将其导入包装细胞PA317,G418筛选到单克隆,病毒滴度为10^6CFU/ml重组病毒分泌的细胞朱。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 逆转录病毒 载体 成纤维细胞
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脑心肌炎病毒IRES置换不影响口蹄疫病毒的复制和毒力 预览 被引量:1
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作者 高荣远 杨德成 +3 位作者 孙超 周国辉 王海伟 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期834-837,共4页
内部核糖体进入位点(IREs)是微RNA病毒起始蛋白合成的关键元件。为研究IRES元件在病毒致病过程中的作用,本研究以口蹄疫病毒(FMDV)为模型,在已建立的0型FMDVcDNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法以脑心肌炎病毒(EMCV)的I... 内部核糖体进入位点(IREs)是微RNA病毒起始蛋白合成的关键元件。为研究IRES元件在病毒致病过程中的作用,本研究以口蹄疫病毒(FMDV)为模型,在已建立的0型FMDVcDNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法以脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES替换FMDV的IRES,构建并拯救出含有EMCVIRES的嵌合病毒(rFMDV-E IRES)。一步生长曲线结果显示rFMDV—E IRES无论是在鼠源BHK-21细胞还是在猪源IBRS-2细胞中的复制能力均与亲本病毒相近。另外,rFMDV-E IRES对乳鼠的致病力与亲本病毒也相同。以上研究结果表明,虽然EMCVIRES与FMDVIRES一级序列存在显著差异,但二者的置换并不影响FMDV的复制和毒力,该结果有助于加深IRES在微RNA病毒复制和致病性功能的认识。 展开更多
关键词 内部核糖体进入位点 蛋白翻译起始 口蹄疫病毒 ires嵌合 病毒拯救
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核糖体内部进入位点介导的翻译起始机制研究进展
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作者 白艳丽 薛慧文 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2017年第11期67-72,共6页
真核生物mRNA翻译起始是依赖于帽状结构的。但是一些病毒的自身蛋白合成的起始依赖非帽状结构,这一特点有利于病毒摆脱宿主细胞翻译起始机制对其在细胞内复制的限制。它们利用一种末端为核糖体内部进入位点(IRES)的结构RNA来招募40S... 真核生物mRNA翻译起始是依赖于帽状结构的。但是一些病毒的自身蛋白合成的起始依赖非帽状结构,这一特点有利于病毒摆脱宿主细胞翻译起始机制对其在细胞内复制的限制。它们利用一种末端为核糖体内部进入位点(IRES)的结构RNA来招募40S和60S核糖亚基组装成不同于帽状结构介导的成熟的核糖体来进行相关病毒蛋白的翻译。IRES元件由一些可以招募翻译因子并作用于mRNA末端的顺式作用元件构成。IRES早在20年前已被发现,但是仅在近几年研究者利用Ⅲ型和Ⅳ型IRES的模型对其进行了相关研究,使人们了解了RNA的二级结构如何控制并操纵核糖体对翻译的起始。 展开更多
关键词 翻译起始 病毒 核糖体内部进入位点(ires) RNA 元件
HCV IRES调控外分泌性碱性磷酸酶基因在肝细胞中的表达 预览 被引量:1
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作者 刘水平 谭德明 +2 位作者 侯周华 刘双虎 文质 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第4期 335-337,共3页
目的:构建HCV IRES调控外分泌性碱性磷酸酶(SEAP)基因表达的细胞模型.方法:用PCR技术扩增HCV 5′NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,构建HCV 5′NCR调控SEAP表达的重组质粒pdNCRSEAP.用脂质体基因转染技术,将pdNC... 目的:构建HCV IRES调控外分泌性碱性磷酸酶(SEAP)基因表达的细胞模型.方法:用PCR技术扩增HCV 5′NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,构建HCV 5′NCR调控SEAP表达的重组质粒pdNCRSEAP.用脂质体基因转染技术,将pdNCRSEAP转染至肝细胞株QSG7701.用化学发光法检测SEAP的表达,并观察不同浓度反义寡聚核苷酸(ASODN)对SEAP表达的影响.结果:重组质粒pdNCRSEAP表达的发光强度为pSEAP2-Control的76%,5 μmol和10 μmol ASODN对pdNCRSEAP发光强度的抑制率分别为29.2%和44.6%, 而对pSEAP2-Control的SEAP表达无显著抑制作用(P>0.05) 结论:重组质粒pdNCRSEAP 的SEAP表达受HCV 5′NCR调控,为以HCV 5′NCR为靶位点的药物评价建立了检测方便的细胞模型. 展开更多
关键词 HCV ires 调控 外分泌性碱性磷酸酶基因 肝细胞 表达
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内部核糖体进入位点(IRES)调控多种癌细胞系中尾型同源盒转录因子2的翻译
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作者 高文青 李琪 +2 位作者 陈蕴 朱瑞宇 金坚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期260-268,共9页
尾型同源盒转录因子2(caudal type homeobox transcription factor 2,CDX2)促进肠癌细胞增殖,并具有致瘤的潜能。然而,对于CDX2翻译水平的调控机制研究甚少。本研究基于转染及报告酶活性分析结果,首次证明CDX2 5'非翻译区(5'untran... 尾型同源盒转录因子2(caudal type homeobox transcription factor 2,CDX2)促进肠癌细胞增殖,并具有致瘤的潜能。然而,对于CDX2翻译水平的调控机制研究甚少。本研究基于转染及报告酶活性分析结果,首次证明CDX2 5'非翻译区(5'untranslated region,5'-UTR)存在内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES),并通过IRES在HEK293细胞以及肝癌、肠癌和卵巢癌等肿瘤细胞株中介导翻译起始。IRES介导的翻译机制与经典的帽依赖翻译途径(cap-dependent translation)不同,在一些IRES反式作用因子(IRES trans-acting factors,ITAFs)的作用下,不需要帽状结构,IRES可以直接招募核糖体小亚基,起始翻译。同时,肿瘤细胞内IRES介导的翻译方式可能是引起蛋白质异常表达的原因之一。通过Western印迹检测CDX2在4种肿瘤细胞系中的表达,发现CDX2的IRES活性与其在肿瘤细胞中蛋白质表达量正相关,其活性在耐药型卵巢肿瘤细胞株中最高。此外,CDX2 IRES元件的5'端截短及报告酶活性分析证明,CDX2 5'-UTR的活性中心位于68-147碱基之间,而位于5'末端的67个碱基形成一个远端茎环,抑制全长IRES的活性。定点突变68-147活性区域的实验结果揭示,3个茎环结构域(68GCCGGC73,88GCCAG92和114CUCUG118)是IRES元件中不可或缺的部分。上述结果证明,CDX2 5'-UTR具有IRES活性,其活性依赖于二级茎环结构。因此,可以针对特殊的茎环结构域进行研究,使之成为肿瘤药物作用靶点。 展开更多
关键词 尾型同源盒转录因子2 5'非编码区 内部核糖体进入位点
结核分枝杆菌rv3802c基因双顺反子真核表达质粒的构建及鉴定
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作者 张娈娈 陈利苹 +3 位作者 曹俊 崔保亮 李华芳 刘思国 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第10期1-5,共5页
为了构建结核分枝杆菌rv3802c基因双顺反子真核表达质粒,本研究利用重叠延伸PCR技术扩增出rv3802c-HisFlag基因片段,将其克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)上,测序验证后,将基因合成的内部核糖体进入位点和增强型红色荧光蛋白基因片段(... 为了构建结核分枝杆菌rv3802c基因双顺反子真核表达质粒,本研究利用重叠延伸PCR技术扩增出rv3802c-HisFlag基因片段,将其克隆到真核表达载体pCDNA3.1(+)上,测序验证后,将基因合成的内部核糖体进入位点和增强型红色荧光蛋白基因片段(IRES-DsRed2)定向插入到这个重组质粒上,经酶切鉴定获得双顺反子表达质粒pC3.1-3LHF-Red.将质粒pC3.1-3LHF-Red转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,通过荧光显微镜观察到增强型红色荧光蛋白成功表达;经Western blot分析表明Rv3802c-HisFlag融合蛋白在CHO细胞中获得了表达.结果表明,本研究成功构建了共表达增强型红色荧光蛋白和Rv3802c-HisFlag融合蛋白的双顺反子表达质粒pC3.1-3LHF-Red,为进一步研究结核分枝杆菌Rv3802c蛋白在分枝杆菌感染细胞过程中的作用奠定基础. 展开更多
关键词 Rv3802c蛋白 pC3.1-3LHF-Red重组质粒 内部核糖体进入位点(ires) CHO细胞
猪瘟病毒N^pro蛋白及细胞内环境改变对其IRES活性的影响 预览
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作者 罗庆华 贾俊杰 +5 位作者 张必凯 米士江 张莉 谢金鑫 刘艳 涂长春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期844-848,共5页
位于猪瘟病毒(CSFV)基因组5’端非翻译区(UTR)的内部核糖体进入位点(IRES)在调控CSFV基因组的翻译中发挥重要的作用,为探索CSFV自身蛋白以及细胞内环境改变对IRES活性的影响,本研究构建了包含CSFVIRES在内的荧光素酶报告基因质... 位于猪瘟病毒(CSFV)基因组5’端非翻译区(UTR)的内部核糖体进入位点(IRES)在调控CSFV基因组的翻译中发挥重要的作用,为探索CSFV自身蛋白以及细胞内环境改变对IRES活性的影响,本研究构建了包含CSFVIRES在内的荧光素酶报告基因质粒,采用编码CSFV非结构蛋白N印和NS5A蛋白表达重组质粒转染细胞,或通过葡萄糖剥夺、氨基酸剥夺、氧化应激、血清饥饿等条件分别处理细胞,结果显示N舯蛋白比之前报道的NS5A蛋白具有更显著的IRES抑制效果,并且抑制程度呈浓度依赖性;氨基酸剁夺、氧化应激及血清饥饿时可以显著降低CSFVIRES的活性,而葡萄糖剥夺对其活性无显著影响。本研究明确了CSFV非结构蛋白N舯以及细胞内环境的改变可以调控IRES的活性,为进一步阐明CSFV复制增殖的分子机制提供新的实验依据。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 ires 双荧光素酶报告基因 N^pro蛋白 细胞内环境
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小RNA病毒对宿主细胞蛋白翻译的影响
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作者 李公启 张晓杰 韩俊 《疾病预防控制通报》 2013年第4期84-87,90共5页
目的探究小RNA病毒入侵宿主细胞后,对细胞蛋白质翻译的影响。方法通过归纳整理相关的研究进展,总结出小RNA病毒入侵真核细胞后抑制宿主蛋白合成的几种机制。结果小RNA病毒可以通过裂解真核细胞翻译起始因子,对翻译起始因子或其结合... 目的探究小RNA病毒入侵宿主细胞后,对细胞蛋白质翻译的影响。方法通过归纳整理相关的研究进展,总结出小RNA病毒入侵真核细胞后抑制宿主蛋白合成的几种机制。结果小RNA病毒可以通过裂解真核细胞翻译起始因子,对翻译起始因子或其结合蛋白的去磷酸化,以及阻止翻译起始复合物的形成等途径,抑制了宿主细胞的蛋白产生,同时依靠内部核糖体进入位点(IRES),进行病毒自身的蛋白合成。结论小RNA病毒通过其非结构蛋白的作用,迅速有效地抑制了宿主细胞的蛋白合成。 展开更多
关键词 小RNA病毒 宿主细胞 翻译 内部核糖体进入位点
Immune Responses to a Dicistronic Plasmid Expressing HBsAg of Hepatitis B Virus and Interferon-γ 预览
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作者 WANG Chun-yi QI Feng-chun +3 位作者 WU Xiao-juan ZHAO Da-peng LENG Mei SHENG Jun 《高等学校化学研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2007年第4期 437-443,共7页
DNA vaccines encoding a viral protein have been shown to induce antiviral immune responses and provide protection against subsequent viral challenge.The present article deals with the efficacy of a DNA vaccine greatly... DNA vaccines encoding a viral protein have been shown to induce antiviral immune responses and provide protection against subsequent viral challenge.The present article deals with the efficacy of a DNA vaccine greatly improved by the simultaneous expression of HBsAg and interferon-γ gene.We constructed a dual expression vector pHIN encoding the HBsAg of Hepatitis B virus and murine IFN-γ which are connected with Internal Ribosome Entry Site(IRES).Mice immunized with this dual expression DNA vaccine exhibited the enhancement of cellular immune response and increased the production of anti-HBV surface antibody,compared with the mice of single gene expression control.Taken together,these results demonstrate that the application of a cytokine gene in a DNA vaccine formulation as an adjuvant can improve its immunigenicity. 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 DNA疫苗 表达载体 免疫原性 免疫响应 干扰素-Γ
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含1—Aα和β链cDNA的三顺反子逆转录病毒载体构建及真核
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作者 李煜 钱书兵 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2001年第3期 144-147,153,共5页
为了协同表达MHCⅡ类分子的两个链α和β,利用脑心肌炎病毒和脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点,构建了含MHCⅡ类分子α和β链及选择标记新霉素磷酸转移酶基因的三顺反子逆转录病毒载体。经包装细胞包装成重组逆转录病毒后,感染NIH3T... 为了协同表达MHCⅡ类分子的两个链α和β,利用脑心肌炎病毒和脊髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点,构建了含MHCⅡ类分子α和β链及选择标记新霉素磷酸转移酶基因的三顺反子逆转录病毒载体。经包装细胞包装成重组逆转录病毒后,感染NIH3T3、MM45T,Li、COS7细胞,经PCR、RT-PCR,Southern印迹、Northern印迹及流式细胞术在多水平上证实了链和β链的基因表达和MHCⅡ类分子的正确组装。 展开更多
关键词 MHC Ⅱ类分子 三顺反子逆转录病毒载体 内核糖体进入位点 基因治疗 肿瘤
锌指蛋白转录抑制因子145′非翻译区内部核糖体进入位点的活性
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作者 丁鹏鹏 马文囡 +2 位作者 朱瑞宇 陈蕴 金坚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期23-27,30共6页
目的 检测锌指蛋白转录抑制因子14(positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM14)5忆非翻译区(5忆untranslated region,5忆UTR)内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的活性。方法 PCR扩增PRDM14 ... 目的 检测锌指蛋白转录抑制因子14(positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM14)5忆非翻译区(5忆untranslated region,5忆UTR)内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的活性。方法 PCR扩增PRDM14 5忆UTR各截短序列的基因及全长基因,分别插入至双荧光素酶和红绿荧光报告基因中,构建重组质粒p RL-PRDM14 S1-FL、p RL-PRDM14 S2-FL、p RL-PRDM14 S3-FL及p G-PRDM 14-R。将各重组质粒分别转染HEK293细胞,检测PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性、内部剪切位点和自身启动子的活性及影响IRES活性的序列。将重组质粒p RL-FL/5忆UTR分别转染HCT-8/WT、Hep-2、Bel7402/WT和NIH3T3细胞,检测各细胞中PRDM14 5忆UTR IRES元件的活性。结果 PRDM14 5忆UTR具有内部核糖体进入位点元件活性;不具有内部剪切位点和自身启动子活性;PRDM14 5忆UTR的活性激活中心位于25~60 nt,活性抑制中心位于60~95 nt;除NIH3T3细胞外,其他细胞均具有IRES活性。结论 PRDM14 5忆UTR具有典型的IRES活性,为今后深入研究PRDM14表达的调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 锌指蛋白转录抑制因子14 内部核糖体进入位点 萤火虫荧光素酶 海肾荧光素酶
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