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基于单克隆抗体捕获的猪血清和乳汁中PEDVIgA抗体间接ELISA方法的建立和评估 认领
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作者 王治平 张云静 +4 位作者 孙玉洁 徐鑫 汪志艳 黄柏成 田克恭 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第7期2248-2255,共8页
为快速准确地评价猪血清和乳汁中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体水平,本研究从4株PEDV单克隆抗体中筛选得到1株可高效捕获PEDV全病毒粒子(灭活的病毒细胞培养原液)的特异性IgG单克隆抗体8A3,将其用作... 为快速准确地评价猪血清和乳汁中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体水平,本研究从4株PEDV单克隆抗体中筛选得到1株可高效捕获PEDV全病毒粒子(灭活的病毒细胞培养原液)的特异性IgG单克隆抗体8A3,将其用作检测孔内的包被抗体以捕获病毒粒子制备抗原板,从而建立了用于检测母猪血清和乳汁中PEDV特异性IgA抗体的间接ELISA方法。该方法中,单克隆抗体8A3的最适包被浓度为6.0μg/mL,阴性判定临界值(D450 nm)为0.34,且在检测中不与常见的猪病毒阳性血清反应。与传统的免疫过氧化物酶单层检测(immuno-peroxidase monolayer assay,IPMA)相比,所建立的ELISA方法检测阳性和阴性血清的符合率分别为98.7%(152/154)和98.0%(145/148);检测初乳和乳汁样品的阳性和阴性符合率分别为100%(60/60)和95.8%(23/24);检测初乳和泌乳期样品中的IgA水平与中和效价的趋势高度相关(kappa=0.835)。本研究建立的检测PEDV IgA的间接ELISA方法灵敏度、敏感性和特异性与传统方法高度一致,可简化检测步骤,适用于大规模评价临床样本乳汁和血清中PEDV IgA抗体的快速检测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 单克隆抗体(MAb) IGA抗体 间接ELISA
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巴泰病毒单克隆抗体的制备及鉴定 认领
2
作者 朱翔宇 史宁 +2 位作者 李丽霞 蔡熙姮 刘昊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期55-62,共8页
巴泰病毒(Batai virus,BATV)是一种人兽共患病毒,近年在全球广泛流行。我国也有人和动物感染的相关报道,而目前对BATV的研究仅局限于分子检测和全基因测序,还没有关于BATV单克隆抗体的相关研究,但制备特异性强、活性好的单克隆抗体也是... 巴泰病毒(Batai virus,BATV)是一种人兽共患病毒,近年在全球广泛流行。我国也有人和动物感染的相关报道,而目前对BATV的研究仅局限于分子检测和全基因测序,还没有关于BATV单克隆抗体的相关研究,但制备特异性强、活性好的单克隆抗体也是防控BATV的关键。为了制备BATV单克隆抗体,本研究利用纯化的BATV作为抗原免疫雌性BALB/c小鼠,制备鼠源单克隆抗体。通过免疫小鼠后断尾取血,间接ELISA测其血清效价后,将SP2/0细胞与小鼠的脾细胞融合。ELISA方法筛选阳性细胞株,并进行亚克隆后制备单抗腹水,并利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水。结果获得7株单克隆抗体,包括5株IgG型和2株IgM型。其中制备的3E2单克隆抗体效价最高为1∶32 000。经间接ELISA、间接免疫荧光和Western Blot检测表明,制备的3E2单抗具有较好的纯度、活性和特异性,为BATV快速检测方法的建立及致病机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 巴泰病毒(BATV) 单克隆抗体(mAb) 杂交瘤细胞(Hybridoma cell)
猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用 认领
3
作者 王宁 谨瑾 +4 位作者 刘璐 刘欢欢 姜立波 辛九庆 刘恒贵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1110-1118,共9页
为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段(P97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂... 为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段(P97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂交瘤细胞株A3。鉴定结果显示,A3 MAb是IgG1亚类,轻链为κ链。Western blot结果显示A3 MAb能够和原核表达纯化的P97CR1蛋白特异性反应,并且在流式细胞仪分析中能够识别天然的Mhp。通过逐渐截短表达分析该MAb识别的表位序列为LDDNLQ,该抗原表位在Mhp菌株中高度保守。阻断ELISA初步试验结果显示,A3 MAb与蛋白抗原的结合能够被Mhp高免阳性血清阻断。该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的Mhp阻断ELISA检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 单克隆抗体 P97蛋白 表位鉴定
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单克隆抗体糖基化修饰的研究现状及进展 认领
4
作者 刘晓宇(综述) 常军亮 刘玉林(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第2期216-221,共6页
糖基化是经酶定向控制下,在蛋白质或脂质特定位点附加寡糖链的共翻译和翻译后重要的修饰过程,发生于高尔基体和内质网。糖基化修饰是单克隆抗体药物结构形成、功能发挥及药代动力学等生物学特性的重要影响因素。糖型通过影响单克隆抗体... 糖基化是经酶定向控制下,在蛋白质或脂质特定位点附加寡糖链的共翻译和翻译后重要的修饰过程,发生于高尔基体和内质网。糖基化修饰是单克隆抗体药物结构形成、功能发挥及药代动力学等生物学特性的重要影响因素。糖型通过影响单克隆抗体的结构而对药物的半衰期、效应功能等产生影响。在特定的细胞表达系统中,不同的细胞培养工艺参数对糖基化异质性产生影响。本文就糖型结构异质性对抗体效应功能的影响、细胞培养条件对抗体糖基化的作用以及糖基化研究技术的现状作一综述。 展开更多
关键词 单克隆抗体 糖基化 结构异质性 效应功能 细胞培养条件
嵌合抗原受体T细胞在治疗难治/复发多发性骨髓瘤中的新进展 认领
5
作者 He HUANG Heng-wei WU Yong-xian HU 《浙江大学学报:B卷英文版》 SCIE CAS CSCD 2020年第1期29-41,共13页
多发性骨髓瘤被认为是一种无法治愈的血液系统恶性疾病,其特征为恶性浆细胞的克隆性增殖。尽管在过去的几十年中,自体干细胞移植(ASCT)的应用及新型药物(蛋白酶体抑制剂和免疫调节药)的问世,将患者的中位生存时间由原来的4年提高到了8年... 多发性骨髓瘤被认为是一种无法治愈的血液系统恶性疾病,其特征为恶性浆细胞的克隆性增殖。尽管在过去的几十年中,自体干细胞移植(ASCT)的应用及新型药物(蛋白酶体抑制剂和免疫调节药)的问世,将患者的中位生存时间由原来的4年提高到了8年,但复发与难治仍然是多发性骨髓瘤疾病进程中难以逾越的鸿沟。为了获得长期持续的缓解,免疫治疗开始在多发性骨髓瘤中崭露头角,其中嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗就是最有潜力的一颗新星。通过在基因层面改造患者自己的T细胞,使T细胞表达一种特定的受体(人造的融合蛋白),该受体可以识别并结合肿瘤相关抗原,并活化T细胞启动后续的杀伤过程。Tisagenlecleucel和Axicabtagene是两个针对CD19抗原的CAR T产品,用于治疗B细胞来源的急性淋巴细胞白血病(B-ALL)和弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL),并于2017年被美国食品药品监督管理局(FDA)批准。这两个产品的发展极大推动了B细胞来源的恶性血液系统疾病的治疗,并刷新了对于传统治疗的认知。基于之前CAR T治疗的成功经验,寻找如CD19一样的特定靶点能为CAR T治疗多发性骨髓瘤打下基础。本综述介绍了数个在骨髓瘤细胞上的肿瘤靶抗原,如B细胞成熟抗原(BCMA)和CD38。这些针对抗原的CAR T治疗有些还在实验室阶段,而有些已经进入了3期的临床试验,很有可能成为下一个被批准的CAR T产品。另外,本综述也介绍了在CAR T治疗中出现的毒副反应以及相应的管理和处理方法。 展开更多
关键词 嵌合抗原受体(CAR)T细胞 免疫治疗 单克隆抗体 靶抗原 多发性骨髓瘤
牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及其应用 认领
6
作者 赵洪哲 范峻豪 +3 位作者 李新培 王昊 关平原 温永俊 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期287-293,共7页
为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间... 为制备牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)单克隆抗体(MAb)及其直接荧光标记抗体,本试验用纯化的牛病毒性腹泻病毒Ht01株免疫雌性BALB/c小鼠。间接ELISA测其血清效价,取抗体效价达标小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合。用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行2次亚克隆后注射入小鼠腹腔制备单抗腹水。利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水,用间接免疫荧光试验测定其活性,用SDS-PAGE试验测定其纯度。经活性、纯度检测合格后,采用搅拌法与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联;用葡聚糖G-25 Medium介质进行分离纯化。结果,本研究共获得2株能够稳定分泌IgG1类型的阳性杂交瘤细胞株和一种直接荧光抗体,分别被命名为BMAb11、BMAb20、DB11。稳定性试验表明,杂交瘤细胞分泌的抗体稳定性好。ELISA、间接免疫荧光试验和直接免疫荧光试验表明,单克隆抗体和直标荧光抗体均与BVDV发生特异性反应,说明它们的特异性较好。经ELISA鉴定,腹水抗体效价达到1∶12 800。直接荧光抗体荧光素与蛋白的摩尔比(F/P)为3.34,标准值在2.0~4.0之间,符合标准。上述研究结果表明,本研究制备的单克隆抗体和直标荧光抗体可用于BVDV的检测,为BVDV的临床诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 杂交瘤细胞 单克隆抗体(MAb) 直标荧光抗体
柯萨奇病毒A组16型抗原表位预测 认领
7
作者 白晗 马淑花 +2 位作者 郭会杰 刘少华 李秀玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第10期1064-1069,共6页
目的应用模拟表位策略研究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)抗原表位。方法分别以具有中和活性的抗CA16单克隆抗体2C6、4F9、1D8为靶分子,在噬菌体12肽库中淘选可与之特异性结合的阳性克隆,对淘选得到的阳性克隆进行序列测... 目的应用模拟表位策略研究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)抗原表位。方法分别以具有中和活性的抗CA16单克隆抗体2C6、4F9、1D8为靶分子,在噬菌体12肽库中淘选可与之特异性结合的阳性克隆,对淘选得到的阳性克隆进行序列测定和比对,并采用Phage ELISA法进行特异性鉴定。同时利用生物信息学方法对CA16衣壳蛋白理化性质进行分析,并与阳性噬菌体多肽序列和结构进行比对,预测CA16中和抗原表位。结果经噬菌体12肽库筛选,单克隆抗体2C6、4F9、1D8淘选阳性噬菌体富集率分别为2.39×103、1.32×104和3.762×10,获得可与单克隆抗体2C6、4F9、1D8结合的阳性克隆分别为10、11、6种,其中各组共有基序分别为K+X+WW和N/Q+S/T+Y/F/W、K+X+WW+D/E、T+X+P+W。Phage ELISA特异性鉴定阳性克隆肽CA1和CB1、FB3和FC3、DA1和DA2、DA5分别强特异性结合单克隆抗体2C6、4F9、1D8。经计算机预测分析,确定了主要位于CA16 VP1800-810区域,并涉及VP4、VP3上的多个中和表位区域。结论应用模拟表位策略成功筛选出了CA16中和抗原表位,为CA16蛋白抗原结构、新型表位疫苗及诊断试剂的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组16型 模拟表位 单克隆抗体 噬菌体展示 生物淘选
抗人t-PSA单克隆抗体的制备及化学发光检测方法的建立 认领
8
作者 曹领改 张兰兰 魏德强(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期1599-1603,共5页
目的:制备抗人前列腺癌特异性抗原(t-PSA)单克隆抗体,建立t-PSA的化学发光CLIA检测方法。方法: t-PSA抗原免疫小鼠后,通过细胞融合、HTS筛选、扩大培养及亲和纯化后得到t-PSA单克隆抗体(mAb),测定抗体亲和力、特异性及表位,最后选择抗... 目的:制备抗人前列腺癌特异性抗原(t-PSA)单克隆抗体,建立t-PSA的化学发光CLIA检测方法。方法: t-PSA抗原免疫小鼠后,通过细胞融合、HTS筛选、扩大培养及亲和纯化后得到t-PSA单克隆抗体(mAb),测定抗体亲和力、特异性及表位,最后选择抗不同表位的单克隆抗体建立双抗体夹心 CLIA检测方法。结果:获得4株阳性信号较强的抗人t-PSA的mAb(3-21-1、3-26-1、3-40-1、3-41-1)。用3-21-1 mAb-HRP和3-26-1 mAb-HRP建立的CLIA体系检测范围为0.1~100 ng/ml,最低检测限为 0.09 ng/ml,相对偏差均在±5%之内,与肿瘤标志物CEA、AFP、Myo无交叉反应。与罗氏试剂检测t-PSA结果对比,一致性检验KAPPA系数为0.933,相关系数为0.936,两组数据具有较好的一致性和相关性。结论:本研究成功制备了抗人t-PSA mAb,建立了定量检测t-PSA的双抗体夹心CLIA 方法。 展开更多
关键词 人前列腺癌特异性抗原 单克隆抗体 肿瘤标志物 化学发光免疫分析
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重组单克隆抗体药物的工程细胞培养工艺研究 认领
9
作者 汪艳艳(综述) 毛晓燕(审校) 《微生物学免疫学进展》 2019年第5期79-85,共7页
单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)是一类重要的基因工程生物技术衍生药物,其药物适应证包括自身免疫性疾病、移植后并发症、心血管疾病、感染性疾病和各种类型的癌症。此类适应证药物通常使用时间长、使用剂量大,因此需具备大批量... 单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)是一类重要的基因工程生物技术衍生药物,其药物适应证包括自身免疫性疾病、移植后并发症、心血管疾病、感染性疾病和各种类型的癌症。此类适应证药物通常使用时间长、使用剂量大,因此需具备大批量生产的能力。由于mAb药物的生产成本以及产品质量控制的复杂性,要求有效且经济地提供批间一致性较好的高质量药物。中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞是生物技术产业中用于生产治疗性糖蛋白最常用的真核表达宿主,也是生产治疗性抗体药物最常使用的细胞。在细胞培养过程中,工程细胞株、培养基和工艺条件是mAb药物生产中影响其质量的三个重要因素。现分别从培养基、培养参数和培养模式等对生产mAb药物的细胞培养技术作一概述。 展开更多
关键词 中国仓鼠卵巢细胞 单克隆抗体 工艺 培养基 参数
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MiniSOG蛋白的单克隆抗体制备及初步研究 认领
10
作者 高利萍 武月章 +4 位作者 杨雪花 陈冬冬 肖康 董小平 石琦 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期880-887,共8页
单线态氧产生者(mini singlet oxygen generator,miniSOG)是改造于拟南芥向光素2蛋白而获得的小分子荧光黄素蛋白,由106个氨基酸残基组成。miniSOG被广泛用于电镜及荧光显微镜,并被广泛用于发色团辅助的光灭活(Chromophore-assisted lig... 单线态氧产生者(mini singlet oxygen generator,miniSOG)是改造于拟南芥向光素2蛋白而获得的小分子荧光黄素蛋白,由106个氨基酸残基组成。miniSOG被广泛用于电镜及荧光显微镜,并被广泛用于发色团辅助的光灭活(Chromophore-assisted light inactivation,CALI)蛋白、DNA或RNA,并结合免疫光敏用于癌症的治疗,以及结合细胞消融用于神经科学、免疫生物学等。但是目前国内并无商品化的miniSOG抗体,为了辅助课题研究,制备抗miniSOG蛋白的单克隆抗体,本研究根据miniSOG基因的ORF区序列构建miniSOG-GST重组蛋白的原核表达载体PGEX-4T-1-miniSOG,然后将该重组质粒转化于BL21感受态大肠杆菌中,异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-DThiogalactoside,IPTG)诱导融合蛋白的表达,并经亲和层析方法进行纯化。将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。筛选获得稳定分泌抗miniSOG的单克隆抗体细胞株,最终选取性能最优的4F9细胞株进行小鼠腹水制备并纯化。单抗4F9亚型为IgG1/Kappa,腹水滴度达到1∶200 000,纯化抗体灵敏度达到5 ng/mL。并通过Western Blot、免疫荧光及免疫组化方法进行特异性鉴定,该单克隆抗体能特异性识别转染细胞和转基因小鼠脑组织中的miniSOG蛋白。本研究在国内首次制备了miniSOG单克隆抗体,将丰富其在其它方面的应用。 展开更多
关键词 单线态氧产生者(miniSOG) 光电镜关联(CLEM) 单克隆抗体
前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体生物学活性荧光染料标记法的建立、优化及验证 认领
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作者 韩月然 陈妍 +3 位作者 杜向瑞 吕品 刘博 李剑 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第11期1281-1286,共6页
目的建立并优化前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体生物学活性的荧光染料标记检测法,并进行验证。方法对建立的荧光染料标记法的细胞铺板密度(1×10^5、5×10^5和1×... 目的建立并优化前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体生物学活性的荧光染料标记检测法,并进行验证。方法对建立的荧光染料标记法的细胞铺板密度(1×10^5、5×10^5和1×10^6个/mL)、PCSK9蛋白浓度(5、20、40、80μg/mL)、荧光标记的低密度脂蛋白(low density lipoprotein labeled with 1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate,Dil-LDL)浓度(10、16、20μg/mL)、单克隆抗体的浓度梯度(200、52、20、12、8、4、0.8μg/mL,200、30、10、6、4、1、0.2μg/mL,200、28、9、6、4、2、0.2μg/mL)进行优化,并对优化方法的专属性、准确度、精密度、线性范围、耐用性进行验证。结果最适方法检测条件:铺板密度为5×105个/mL,PCSK9蛋白和Dil-LDL浓度分别为20和16μg/mL,单克隆抗体的浓度梯度为200、52、20、12、8、4、0.8μg/mL。该方法可特异性检测PCSK9单克隆抗体;供试品检测回收率在70%~130%之间;供试品检测结果的相对标准偏差(RSD)均<10%;供试品效价在50%~150%之间时,检测值与理论值呈良好的线性关系,线性拟合方程为y=1.002 x-0.0067,R2=0.9978;耐用性检测活性均在70%~140%范围内。结论本实验建立的方法具有良好的专属性、准确度和精密度,可用于PCSK9单克隆抗体的生物学活性测定。 展开更多
关键词 前蛋白转化酶枯草溶菌素9 单克隆抗体 HepG2细胞 生物学活性
单克隆抗体消光系数测定方法的建立 认领
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作者 孙开青 李文华 +3 位作者 周冬梅 徐军 孙文正 杨彬 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期633-637,共5页
目的建立单克隆抗体药物消光系数测定方法,用于单克隆抗体药物的鉴别和紫外分光光度法的定量分析,并对其进行初步评价。方法使用6 mol/L盐酸胍对抗体进行变性处理,打开抗体折叠的高级结构,将其当作是色氨酸、酪氨酸和"S-S"键的三元体... 目的建立单克隆抗体药物消光系数测定方法,用于单克隆抗体药物的鉴别和紫外分光光度法的定量分析,并对其进行初步评价。方法使用6 mol/L盐酸胍对抗体进行变性处理,打开抗体折叠的高级结构,将其当作是色氨酸、酪氨酸和"S-S"键的三元体系,通过检测相同浓度下折叠和非折叠抗体在紫外280 nm波长处的吸光值,计算抗体的消光系数,并进行方法的精密度验证。结果两种单克隆抗体m Ab1和m Ab2在280 nm波长处的消光系数平均值分别为1.702和1.387 m L/(mg·cm);两位实验员检测的消光系数各自相对标准偏差分别为0.48%和0.87%,总相对标准偏差为0.69%,均小于1%,表明方法精密度良好。结论建立的方法操作简单,不依赖于抗体浓度,不破坏其二硫键结构,结果准确,可用于单克隆抗体药物消光系数的测定。 展开更多
关键词 单克隆抗体 消光系数 变性 朗伯比尔定律
Pharmacokinetics of monoclonal antibodies ]nd Fc-fusion proteins 认领
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作者 Liming Liu 《蛋白质与细胞:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第1期15-32,共18页
关键词 蛋白质 FC 抗体 熔化 MABS ND 相互作用能 再循环
阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体的电荷异质性 认领
14
作者 秦海艳 安晨 +6 位作者 宋兰兰 陈继军 黄峥 乔玉玲 南建军 庄超 毛晓燕 《微生物学免疫学进展》 2018年第4期19-25,共7页
目的建立阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)电荷异质性的方法,并对其进行验证。方法基于m Ab等电点呈弱碱性,且因为抗体所带电荷的不同导致其与色谱柱结合力的不同,采用"PropacTMWCX... 目的建立阳离子交换高效液相色谱检测重组人源化抗CD52单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)电荷异质性的方法,并对其进行验证。方法基于m Ab等电点呈弱碱性,且因为抗体所带电荷的不同导致其与色谱柱结合力的不同,采用"PropacTMWCX-10"弱阳离子交换柱,利用盐梯度洗脱的方法依次洗脱出m Ab的酸性电荷变异体、中性电荷变异体及碱性电荷变异体;对方法的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性进行验证。结果阳离子交换高效液相色谱分析重组人源化抗CD52 m Ab各电荷变异体的保留时间在14~21 min之间,其中酸性电荷变异体的保留时间在14~17 min,中性电荷变异体的保留时间在17~18 min,碱性电荷变异体的保留时间在18~21 min之间。专属性验证显示空白辅料对照色谱图在样品出峰位置无干扰。线性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体相关系数R2均〉0.99。准确性验证显示酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体回收率分别为99.3%~99.9%、99.8%~100.4%和99.3%~99.7%。仪器重复性、样品重复性和中间精密度验证中,各电荷变异体的RSD均〈5%。耐用性验证中,流动相p H在8.0±0.1、流动相中盐浓度为100 mmol/L±5 mmol/L、柱温在(30±2)℃变化时各电荷变异体的RSD均〈5%。结论阳离子交换高效液相色谱可以有效分离重组人源化抗CD52 m Ab的酸性电荷变异体、中性电荷变异体和碱性电荷变异体,且该方法具有良好的专属性、线性、准确性、精密度和耐用性。 展开更多
关键词 阳离子交换高效液相色谱 CD52 单克隆抗体 电荷异质性
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细胞角蛋白19片段抗原21-1含量化学发光微粒子定量免疫检测方法的建立 认领 被引量:1
15
作者 王英雪 郭小怡 +3 位作者 刘江武 翁祖星 葛胜祥 陈毅歆 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期523-527,共5页
目的建立细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokeratin 19 fragment 21-1,CYFRA21-1,简称CY21-1)含量的化学发光微粒子免疫检测方法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA)。方法原核表达制备重组CY21-1(r CY21-1),用其免疫... 目的建立细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokeratin 19 fragment 21-1,CYFRA21-1,简称CY21-1)含量的化学发光微粒子免疫检测方法(chemiluminescent microparticle immunoassay,CMIA)。方法原核表达制备重组CY21-1(r CY21-1),用其免疫BALB/c小鼠后,收集小鼠脾脏细胞,常规杂交瘤技术与Sp2/0进行融合,制备CY21-1单抗。间接ELISA法筛选可稳定分泌CY21-1抗体的杂交瘤细胞,分别标记微性磁珠(magnetic beads,MB)和吖啶酯(acridinium ester,AE),筛选可特异检测CY21-1的单抗配对,建立CY21-1 CMIA,同时验证方法的线性及灵敏度,并与同类试剂盒进行比较。结果经筛选获得了一组能特异检测CY21-1的单抗配对MB*26B5-3E4*AE,建立的CY21-1 CMIA对检测CY21-1校准品的线性范围为0.1-1 000 ng/m L,R-2=0.992 3,检测灵敏度为0.076 ng/m L。该方法与美国雅培公司生产的Abbott CY21-1 CMIA诊断试剂盒平行检测250份临床血清标本的结果具有良好的相关性(R-2=0.961 6)。结论成功建立了CY21-1 CMIA,且具有良好的线性及灵敏度,为我国肺癌的临床筛查和早期诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 细胞角蛋白19片段抗原21-1 单克隆抗体 化学发光微粒子免疫检测方法 非小细胞肺癌
抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体对小鼠的被动免疫保护作用 认领
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作者 吴智远 焦磊 +6 位作者 徐兵 辛有全 常娅莉 张青雯 祁芝珍 卜培英 王秉翔 《微生物学免疫学进展》 2018年第1期7-13,共7页
目的研究抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体(单抗)被动免疫BALB/c小鼠后的抗鼠疫保护效果,确认鼠疫抗体治疗依据,探索鼠疫免疫学治疗的评价手段。方法将BALB/c小鼠随机分组,用不同剂量的抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单抗4C6和2D2分别进行免疫,... 目的研究抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体(单抗)被动免疫BALB/c小鼠后的抗鼠疫保护效果,确认鼠疫抗体治疗依据,探索鼠疫免疫学治疗的评价手段。方法将BALB/c小鼠随机分组,用不同剂量的抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单抗4C6和2D2分别进行免疫,再分别用不同剂量的鼠疫强毒菌攻击,通过小鼠的存活率和存活时间,判定F1单抗免疫小鼠被动保护其抵抗鼠疫强毒菌攻击的有效性和剂量相关性。结果在14 d的观察期内,在100.0 MLD鼠疫强毒菌攻击下,4C6单抗400.0μg组、200.0μg组、100.0μg组、50.0μg组和25.0μg组小鼠的存活率分别为100%、83%、50%、50%和0%,平均存活时间分别为15.00 d、14.67 d、13.00 d、13.50 d和9.67 d;2D2单抗400.0μg组、200.0μg组、100.0μg组、50.0μg组、25.0μg组小鼠的存活率分别为83%、50%、50%、33%和0%,平均存活时间分别为14.83 d、13.33 d、12.67 d、12.33 d和8.00 d。在10.0 MLD鼠疫强毒菌攻击下,4C6单抗50.0μg组、25.0μg组和12.5μg组小鼠的存活率分别为83%、83%和17%,平均存活时间分别为14.17 d、14.50 d、9.83 d;2D2单抗50.0μg组、25.0μg组、12.5μg组小鼠的存活率分别为100%、33%和33%,平均存活时间分别为15.00 d、12.33d和11.67 d。2.0 MLD和1.0 MLD攻击的未免疫对照组小鼠全部死亡,平均存活时间分别为6.1 d和6.7 d。F1抗原单抗的免疫剂量与小鼠的平均存活时间和存活率有比较明显的相关性(P〈0.05)。结论用抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单抗被动免疫小鼠,在受到鼠疫强毒菌攻击时,对小鼠具有免疫保护作用。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 鼠疫耶尔森菌F1抗原 单克隆抗体 被动免疫保护
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氯霉素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立 认领 被引量:2
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作者 范素菊 杨兴东 高润 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第9期2566-2574,共9页
本研究旨在建立检测动物源性食品中氯霉素(CAP)残留的间接竞争ELISA(ci-ELISA)方法。在CAP羟基(-OH)位点上引入活性基团羧基(-COOH)得到氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS);采用混合酸酐法将CAP-HS分别与BSA和OVA偶联合成人工免疫原CAP-HS-BSA和... 本研究旨在建立检测动物源性食品中氯霉素(CAP)残留的间接竞争ELISA(ci-ELISA)方法。在CAP羟基(-OH)位点上引入活性基团羧基(-COOH)得到氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS);采用混合酸酐法将CAP-HS分别与BSA和OVA偶联合成人工免疫原CAP-HS-BSA和包被抗原CAP-HS-OVA,用CAP-HS-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和ci-ELISA筛选细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术制备抗CAP单克隆抗体;以CAP单克隆抗体为基础、CAP-HS-OVA为检测原建立ci-ELISA方法。结果显示,试验成功筛选获得一株稳定分泌抗CAP抗体的杂交瘤细胞株(2C4),抗体效价为4.8×10^-5,利用2C4腹水优化得到ci-ELISA最佳试验条件:0.4μg/mL CAP-HS-OVA 37℃包被2 h;5%猪血清37℃封闭1 h;1∶6.4×10 4 CAP单克隆抗体37℃孵育15 min;1∶1 000羊抗鼠酶标二抗(GaMIgG-HRP)37℃孵育30 min;室温显色9 min。绘制的CAP残留ci-ELISA标准曲线为典型的S型,与4参数logit拟合曲线相吻合,半数抑制浓度(IC 50)为0.53 ng/mL。添加回收试验结果显示,阴性鱼肉、牛奶的回收率分别为93.3%~96.6%和93.7%~96.8%,批内变异系数分别为2.3%~5.0%和2.2%~4.6%,批间变异系数分别为2.7%~4.1%和2.3%~3.6%。HPLC对比试验结果显示,ci-ELISA与HPLC的测定结果无显著差异。本试验成功建立了CAP的ELISA残留检测方法,该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度,可满足动物源性食品中CAP残留检测要求。 展开更多
关键词 氯霉素 残留检测 单克隆抗体 ci-ELISA
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H1N1流感病毒HA蛋白抗原表位预测方法研究 认领
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作者 郭春艳 刘杨 +7 位作者 封青 梁导艳 孙晶莹 李慧瑾 赵向绒 李研 赵彭花 胡军 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期93-97,共5页
目的对H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白抗原表位预测方法进行研究。方法用H1N1流感病毒裂解疫苗常规法免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/O)融合、克隆化筛选,获得特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,mA... 目的对H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白抗原表位预测方法进行研究。方法用H1N1流感病毒裂解疫苗常规法免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/O)融合、克隆化筛选,获得特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记各株mAb,ELISA阻断试验检测各mAb相互阻断结果;克隆各mAb的轻链和重链可变区基因,并用计算机模拟预测各mAb结合HA抗原表位的氨基酸位点。结果获得稳定分泌抗H1N1流感病毒HA蛋白的杂交瘤细胞3株;ELISA阻断试验将3株mAbs分为2类;计算机模拟预测将3株mAbs也分为2类。结论ELISA阻断试验和计算机模拟预测在解析H1N1流感病毒HA蛋白抗原表位时可以相互佐证。 展开更多
关键词 H1 N1流感病毒 血凝素 单克隆抗体 抗原表位
汞离子胶体金免疫层析试纸条的研制 认领
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作者 王玉珍 温雅琼 +2 位作者 陈泽忠 冯锋 邓安平 《西南大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2017年第11期107-112,共6页
基于特异性识别汞离子的单克隆抗体,以胶体金标记抗体作为检测探针,样品中的汞离子和检测线上的包被抗原竞争与免疫探针结合,建立了一种快速测定水样中汞离子的胶体金免疫层析试纸条方法.在最优实验条件下,试纸条对汞离子的检出限为100... 基于特异性识别汞离子的单克隆抗体,以胶体金标记抗体作为检测探针,样品中的汞离子和检测线上的包被抗原竞争与免疫探针结合,建立了一种快速测定水样中汞离子的胶体金免疫层析试纸条方法.在最优实验条件下,试纸条对汞离子的检出限为100μg/L,与其他金属离子没有交叉反应,样品的加标回收实验结果与酶联免疫吸附分析方法(ELISA)有很好的相关性.整个分析过程在10min内可以完成,表明该方法可以快速直接检测汞离子,不需要复杂的样品预处理过程. 展开更多
关键词 汞离子 胶体金 免疫层析 试纸条 单克隆抗体
人巨细胞病毒包膜糖蛋白B主要中和表位单克隆抗体的制备 认领 被引量:1
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作者 何赛 廖旻晶 +8 位作者 靳晓瑞 邱义兰 李晓丹 郑姣 唐娜 罗焕 梁湘辉 郭向荣 刘如石 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第1期16-22,共7页
人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分布广泛,能够引发多种疾病,人群感染率极高,严重威胁到人类健康。现根据标准毒AD169基因序列,人工合成包膜糖蛋白B(glycoprotein B,g B)AD13区段的主要中和抗原表位AD-1、AD-2、AD-3,并... 人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分布广泛,能够引发多种疾病,人群感染率极高,严重威胁到人类健康。现根据标准毒AD169基因序列,人工合成包膜糖蛋白B(glycoprotein B,g B)AD13区段的主要中和抗原表位AD-1、AD-2、AD-3,并将其与表达载体p ET-32a连接,构建重组表达质粒;用IPTG诱导表达重组蛋白,采用Western-blot进行特异性鉴定;将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,然后筛选制备AD13单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)。12%SDS-PAGE电泳鉴定表明重组蛋白表达成功,其相对分子质量约为35 k D;Western-blot和间接ELISA结果说明,重组AD13蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性;克隆化后筛选到5个AD13单克隆抗体细胞株,经间接ELISA鉴定,与AD13抗原有良好的特异性反应。上述研究为研发HCMV快速诊断试剂盒提供了原料,也为研究HCMV亚单位疫苗提供了相关的基础。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒(HCMV) 包膜糖蛋白B(g B) 中和表位 单克隆抗体(m Ab) 酶联免疫吸附反应(ELISA) 免疫反应性
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