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姜黄素通过Wnt信号通路调节人牙髓干细胞的成牙本质分化 预览
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作者 陈冬梅 徐丽丽 周建伟 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期4018-4024,共7页
背景:研究证实,姜黄素不仅可促进成体干细胞成骨分化还可通过激活Wnt信号通路促进神经干细胞的增殖与分化。但姜黄素能否通过激活Wnt信号通路促进人牙髓干细胞成牙本质分化尚未见报道。目的:探讨姜黄素对人牙髓干细胞增殖和成牙本质分... 背景:研究证实,姜黄素不仅可促进成体干细胞成骨分化还可通过激活Wnt信号通路促进神经干细胞的增殖与分化。但姜黄素能否通过激活Wnt信号通路促进人牙髓干细胞成牙本质分化尚未见报道。目的:探讨姜黄素对人牙髓干细胞增殖和成牙本质分化的影响及其可能机制。方法:将人牙髓干细胞(购于上海妍生实业有限公司)分为6组:正常对照组不进行干预,低、中、高浓度姜黄素组用50,250,500 nmol/L姜黄素干预,IWR-1组用1μmol/L Wnt信号通路抑制剂IWR-1干预,IWR-1+姜黄素组用1μmol/L IWR-1和500 nmol/L姜黄素干预。各组进行矿化诱导7 d和14 d后,实时定量PCR检测Wnt5a、碱性磷酸酶、牙本质涎磷蛋白的m RNA表达;Western blot检测Wnt5a、β-catenin、骨唾液酸蛋白、牙本质涎磷蛋白、骨钙蛋白、牙本质基质蛋白1水平;比色法检测细胞碱性磷酸酶活性;CCK-8法检测细胞增殖活性。结果与结论:①姜黄素能够提高牙髓干细胞增殖活性和碱性磷酸酶活性,且呈时间和剂量依赖性;②姜黄素能够提高牙髓干细胞中牙本质涎磷蛋白、碱性磷酸酶的m RNA表达以及牙本质涎磷蛋白、牙本质基质蛋白1、骨唾液酸蛋白和骨钙蛋白水平,且呈时间和剂量依赖性;③姜黄素能够提高牙髓干细胞中Wnt5a和β-catenin蛋白的表达,且呈时间和剂量依赖性;④IWR-1+姜黄素组人牙髓干细胞中Wnt5a m RNA表达以及Wnt5a、牙本质涎磷蛋白、牙本质基质蛋白1、骨唾液酸蛋白及骨钙蛋白水平和增殖活性高于正常对照组和IWR-1组(P <0.05);⑤以上结果表明,姜黄素通过激活Wnt信号通路促进人牙髓干细胞的增殖和成牙本质分化。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 姜黄素 WNT信号通路 成牙本质分化 成骨分化 牙齿再生 细胞增殖
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瘦素对人根尖乳头干细胞成骨/成牙本质相关基因表达的影响 预览
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作者 尹小萍 熊华翠 +2 位作者 陈柯 黄颖 徐帅妹 《口腔疾病防治》 2019年第1期23-29,共7页
目的探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础。方法采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免... 目的探讨瘦素(leptin)对人根尖乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)增殖及成骨/成牙本质相关基因表达的影响,为临床年轻恒牙根尖持续发育的研究提供实验基础。方法采用人根尖乳头组织块培养法获得hSCAPs,以免疫荧光染色法、Western blot和qRT-PCR分别检测hSCAPs中leptin及其受体OBRb蛋白及基因的表达。实验组用质量分数为0.1μg/mL的leptin(0.1μg/mL组)和1.5μg/mL的leptin(1.5μg/mL组)分别刺激hSCAPs,对照组仅加入α-MEM培养基,CCK-8、流式细胞仪法、qRT-PCR分别检测各组hSCAPs增殖情况及成骨/成牙本质相关基因:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质基质蛋白-1(dentin matrix protein-1,DMP-1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达。结果hSCAPs表达leptin及其受体OBRb的蛋白及基因。与对照组相比,实验组细胞增殖能力及S期细胞比例均高于对照组(P<0.05),且其中1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组(P<0.05)。3 d和7 d时,0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量高于对照组,且1.5μg/mL组高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),14 d时0.1μg/mL组、1.5μg/mL组hSCAPs的ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达量明显低于对照组(P<0.05);0.1μg/mL组、1.5μg/mL组OCN mRNA的表达量于7 d、14 d时高于对照组,且1.5μg/mL组均高于0.1μg/mL组,差异有统计学意义(P<0.05),于14 d达到峰值。结论Leptin可促进hSCAPs增殖,并上调hSCAPs成骨/成牙本质相关基因的表达。 展开更多
关键词 牙源性 根尖乳头干细胞 瘦素 成骨/成牙本质相关基因 分化 牙本质基质蛋白.1 牙本质涎磷蛋白 骨钙素
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miR-210促进大鼠牙髓干细胞的增殖和牙源性分化 预览
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作者 王艳玲 左春然 +3 位作者 王静 杨琨 王守儒 张小平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期4004-4010,共7页
背景:miR NA表达谱预测miR-210可能在牙髓干细胞向牙本质和成骨方向分化中发挥作用,但具体作用尚不明确。目的:探讨miR-210在大鼠牙髓干细胞增殖和牙源性分化中的作用。方法:经河南中医药大学第二附属医院伦理委员会批准,收集5只SD大鼠... 背景:miR NA表达谱预测miR-210可能在牙髓干细胞向牙本质和成骨方向分化中发挥作用,但具体作用尚不明确。目的:探讨miR-210在大鼠牙髓干细胞增殖和牙源性分化中的作用。方法:经河南中医药大学第二附属医院伦理委员会批准,收集5只SD大鼠牙髓组织,分离获得牙髓干细胞并分为5组:正常对照组、miR-210模拟物阴性对照组、miR-210模拟物组、miR-210抑制物阴性对照组和miR-210抑制物组。实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞中miR-210、ALP、DSPP、DMP-1、GIT2、OPNmR NA的表达和DSPP、DMP-1、OPN和OCN蛋白的表达,CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测细胞的增殖能力,比色法检测细胞碱性磷酸酶活性,茜素红染色检测矿物质合成能力。结果与结论:(1)miR-210模拟物组细胞的增殖活力高于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);miR-210抑制物组细胞的增殖活力低于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);(2)miR-210模拟物组细胞的碱性磷酸酶活性高于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);miR-210抑制物组细胞的碱性磷酸酶活性低于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);(3)茜素红染色结果显示,miR-210模拟物组细胞表面布满钙盐沉积形成的大小不等的暗红色结节,数量多于其他4组,miR-210抑制物组细胞表面的暗红色钙结节散在分布,数量少于其他4组;(4)miR-210模拟物组细胞中miR-210、ALP、DSPP、DMP1、GIT2、OPN mRNA和DSPP、DMP1、OPN、OCN蛋白的表达高于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);miR-210抑制物组细胞中miR-210、ALP、DSPP、DMP1、GIT2、OPN mRNA和DSPP、DMP1、OPN、OCN蛋白的表达低于其他4组,差异有显著性意义(P <0.01);(5)结果提示,miR-210能够促进大鼠牙髓干细胞增殖与牙源性分化。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 MIRNA MIR-210 牙源性分化 细胞增殖 碱性磷酸酶活性 矿物质合成能力
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血小板浓缩生长因子对人牙髓细胞存活及其增殖分化的影响
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作者 严崎方 窦磊 +1 位作者 宦俊 杨德琴 《四川大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第5期716-719,共4页
目的 探讨血小板浓缩生长因子(Concentrate Growth factors,CGF)对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)增殖分化的影响,为其今后在牙髓及根尖周疾病治疗应用进行前期研究。方法 从因正畸治疗拔除的健康恒牙分离培养出人牙髓... 目的 探讨血小板浓缩生长因子(Concentrate Growth factors,CGF)对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)增殖分化的影响,为其今后在牙髓及根尖周疾病治疗应用进行前期研究。方法 从因正畸治疗拔除的健康恒牙分离培养出人牙髓细胞,在体外采用CGF或矿物三氧化物聚合体(mineral trioxide aggregate,MTA)处理人牙髓细胞,分别在第1、3、7天,CCK-8法测定各组细胞增殖水平、碱性磷酸酶活性、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果 与MTA组相比,CGF组的细胞增殖能力增强,S期细胞的比例增加,且第3、7天ALP活性增高(P〈0.05),而第1、7天牙髓细胞凋亡率降低。结论 CGF在体外具有良好的促进牙髓细胞增殖,抗凋亡以及诱导成骨/成牙分化的能力。 展开更多
关键词 血小板浓缩生长因子 矿化三氧化物聚合物 牙髓细胞 CCK8增殖 成牙分化
过表达骨形态发生蛋白-4对小鼠诱导性多能干细胞生物学活性的影响 预览
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作者 裘今 张慧宇 +1 位作者 刘丽 谭颖徽 《华西口腔医学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期190-193,共4页
目的 构建过表达骨形态发生蛋白-4(BMP4)基因的慢病毒载体,探讨其过表达后对小鼠诱导性多能干细胞(i PS)生物学活性的影响。方法 采用慢病毒转染建立稳定过表达BMP4的i PS细胞株(BMP4过表达组),未作任何转染的细胞为空白组,转染... 目的 构建过表达骨形态发生蛋白-4(BMP4)基因的慢病毒载体,探讨其过表达后对小鼠诱导性多能干细胞(i PS)生物学活性的影响。方法 采用慢病毒转染建立稳定过表达BMP4的i PS细胞株(BMP4过表达组),未作任何转染的细胞为空白组,转染慢病毒阴性对照组的细胞为空载体组。CCK8检测各组细胞增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性检测细胞分化程度,荧光定量聚合酶链反应检测BMP4、成釉细胞蛋白(AMBN)、细胞角蛋白(CK)14、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨唾液酸蛋白(BSP)及骨细胞特异转录因子Runx2的mRNA表达。结果 与空白组及空载体组相比,BMP4过表达组的细胞增殖活性及ALP活性升高(P〈0.05),Runx2、AMBN、CK14、DSPP、BSPmRNA的表达增加(P〈0.05)。结论 BMP4基因能够促进i PS的牙向分化。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白-4 诱导性多能干细胞 牙向分化 增殖
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控制间充质干细胞牙向分化功能是促进牙齿组织再生的关键 预览
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作者 范志朋 《口腔医学》 CAS 2017年第2期97-101,共5页
牙齿组织缺损、缺失是人类的常见病、多发病,严重影响患者的咀嚼、言语、消化等口颌功能和身心健康。现有的牙齿组织缺失修复方法属于非生物性的修复,难以完全恢复天然牙的结构与功能。随着生物技术的发展,利用间充质干细胞结合组织工... 牙齿组织缺损、缺失是人类的常见病、多发病,严重影响患者的咀嚼、言语、消化等口颌功能和身心健康。现有的牙齿组织缺失修复方法属于非生物性的修复,难以完全恢复天然牙的结构与功能。随着生物技术的发展,利用间充质干细胞结合组织工程技术再生牙齿组织是牙齿组织生物性再生修复研究的前沿及关键课题。但目前在牙齿组织再生过程中,间充质干细胞如何进行牙向分化,其功能、调控作用与机制仍未完全明确,限制了其研究及临床转化应用。因此,阐明间充质干细胞牙向分化功能及调控是促进间充质干细胞介导的牙齿组织再生的关键,具有重要的科学意义及临床应用价值。 展开更多
关键词 间充质干细胞 牙向分化 调控 牙齿组织再生
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生物活性玻璃和牙本质浸提蛋白对人牙髓细胞的作用 预览
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作者 信义 王赛楠 +1 位作者 崔彩云 董艳梅 《北京大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2017年第2期331-336,共6页
目的:明确生物活性玻璃(bioactive glass,BG)和牙本质浸提蛋白(extracted dentin proteins,EDP)对人牙髓细胞增殖、成牙本质向分化、矿化的作用。方法:采用酶消化法培养牙髓细胞,传代至第4代用于实验。分别用含BG-EDP浸提液、BG... 目的:明确生物活性玻璃(bioactive glass,BG)和牙本质浸提蛋白(extracted dentin proteins,EDP)对人牙髓细胞增殖、成牙本质向分化、矿化的作用。方法:采用酶消化法培养牙髓细胞,传代至第4代用于实验。分别用含BG-EDP浸提液、BG浸提液、EDP浸提液的达尔伯克必需基本培养基(Dulbecco’s minimum essential medium,DMEM)培养牙髓细胞,对照组为DMEM培养组;通过细胞活性噻唑蓝比色法检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测及real-time PCR检测细胞成牙本质向分化能力,茜素红钙化结节染色及氯化十六烷基吡啶半定量分析检测细胞矿化能力。结果:BG-EDP组3、7、9 d时(光密度值1.36±0.06、2.52±0.20、2.72±0.29)能够增强人牙髓细胞增殖活性,同BG组(光密度值1.20±0.26、2.33±0.26、2.50±0.30)、EDP组(光密度值1.13±0.15、2.10±0.13、2.38±0.22)和对照组(光密度值0.84±0.17、1.84±0.18、1.95±0.19)比较差异具有统计学意义(P〈0.05)。7 d时,BG-EDP组ALP活性与EDP组、对照组差异无统计学意义,分化相关基因(DSPP、DMP-1)表达无明显升高。14 d时,BG-EDP组ALP活性升高(56.67±1.83),显著高于EDP组(41.98±9.71)及对照组(30.82±6.70),P〈0.05,但同BG组(56.29±6.20)相比差异无统计学意义(P〉0.05);BG-EDP组DSPP表达量明显升高(5.79±1.94),显著高于BG组(2.62±0.46)、EDP组(2.66±1.06)及对照组(1.84±0.76),P〈0.05;BG-EDP组DMP-1表达升高(3.87±1.87),略高于BG组(1.89±0.90)、EDP组(2.38±1.04)和对照组(2.25±0.93),但差异无统计学意义(P〉0.05)。诱导2周后,BG-EDP组形成较多矿化结节,氯化十六烷基吡啶半定量分析显示BG-EDP组钙化量最高(0.27±0.01)。结论:同单纯的BG及EDP相比,BG-EDP复合后具有更强的促进人牙髓细胞的增殖、成牙本质向分化、矿化作用。 展开更多
关键词 生物活性玻璃 牙本质浸提蛋白 成牙本质向分化 牙再矿化
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TET1 knockdown inhibits the odontogenic differentiation potential of human dental pulp cells
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作者 Li-lia Rao Bai-Cheng Yi +1 位作者 Qi-Meng Li Qiong Xu 《国际口腔科学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期110-116,共7页
Human dental pulp cells(h DPCs) possess the capacity to differentiate into odontoblast-like cells and generate reparative dentin in response to exogenous stimuli or injury. Ten–eleven translocation 1(TET1) is a novel... Human dental pulp cells(h DPCs) possess the capacity to differentiate into odontoblast-like cells and generate reparative dentin in response to exogenous stimuli or injury. Ten–eleven translocation 1(TET1) is a novel DNA methyldioxygenase that plays an important role in the promotion of DNA demethylation and transcriptional regulation in several cell lines. However, the role of TET1 in the biological functions of h DPCs is unknown. To investigate the effect of TET1 on the proliferation and odontogenic differentiation potential of h DPCs, a recombinant sh RNA lentiviral vector was used to knock down TET1 expression in h DPCs.Following TET1 knockdown, TET1 was significantly downregulated at both the m RNA and protein levels. Proliferation of the h DPCs was suppressed in the TET1 knockdown groups. Alkaline phosphatase activity, the formation of mineralized nodules,and the expression levels of DSPP and DMP1 were all reduced in the TET1-knockdown h DPCs undergoing odontogenic differentiation. Based on these results, we concluded that TET1 knockdown can prevent the proliferation and odontogenic differentiation of h DPCs, which suggests that TET1 may play an important role in dental pulp repair and regeneration. 展开更多
关键词 牙髓细胞 分化潜能 成牙本质细胞 碱性磷酸酶活性 增殖分化 蛋白水平 生物学功能 慢病毒载体
FAM20C在体外培养人牙髓细胞中的表达及成牙本质向分化诱导对其表达的影响 预览 被引量:1
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作者 易柏成 莫泽欢 徐琼 《中华口腔医学研究杂志(电子版)》 CAS 2016年第5期315-321,共7页
目的:研究人牙髓细胞(hDPC)体外培养传代过程中FAM20C的表达模式,及对hDPC成牙本质向分化诱导后FAM20C的表达变化。方法蛋白免疫印迹法(Western blot)检测第1代至第7代(P1~P7)hDPC中FAM20C蛋白的表达量;结果采用独立样本t检验... 目的:研究人牙髓细胞(hDPC)体外培养传代过程中FAM20C的表达模式,及对hDPC成牙本质向分化诱导后FAM20C的表达变化。方法蛋白免疫印迹法(Western blot)检测第1代至第7代(P1~P7)hDPC中FAM20C蛋白的表达量;结果采用独立样本t检验;对P3代hDPC进行成牙本质分化诱导7和14 d后,反转录聚合酶链反应与Western blot检测FAM20C的mRNA和蛋白水平变化。牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP1)表达变化,FAM20C的mRNA以及蛋白表达变化采用单因素方差分析。免疫荧光法检测FAM20C在hDPC中的分布。结果体外培养的hDPC中可检测到FAM20C表达,表达量随细胞传代先增加后减少(tP2=-10.177,PP2=0.001;tP3=-18.242,PP3<0.001;tP4=-19.143,PP4<0.001;tP5=-7.452,PP5=0.002;tP6=1.357,PP6=0.246;tP7=1.099,PP7=0.334);成牙本质向分化诱导7和14 d后,FAM20C的mRNA和蛋白表达量高于未诱导组细胞(FFAM20C mRNA=86.252, PFAM20C mRNA,7 d<0.001,PFAM20C mRNA,14 d<0.001;FFAM20C蛋白=85.569,PFAM20C蛋白,7 d=0.002,PFAM20C蛋白,14 d<0.001)。免疫荧光结果显示,成牙本质诱导前FAM20C蛋白表达于细胞核,诱导后主要表达于细胞质,诱导14 d FAM20C在细胞质中表达量高于诱导7 d。结论 hDPC中表达FAM20C,成牙本质向分化诱导上调其表达水平,诱导后在细胞质中表达较高,提示FAM20C与hDPC的成牙本质分化相关。 展开更多
关键词 牙髓 细胞培养 体外 FAM20C 成牙本质向分化
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Single CD271 marker isolates mesenchymal stem cells From human dental pulp
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作者 Ruth Alvarez Hye-Lim Lee +1 位作者 Christine Hong Cun-Yu Wang 《国际口腔科学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2015年第4期205-212,共8页
Mesenchymal stem cells(MSCs) are a promising tool in regenerative medicine due to their capacity to differentiate into multiple lineages. In addition to MSCs isolated from bone marrow(BMSCs), adult MSCs are isolated f... Mesenchymal stem cells(MSCs) are a promising tool in regenerative medicine due to their capacity to differentiate into multiple lineages. In addition to MSCs isolated from bone marrow(BMSCs), adult MSCs are isolated from craniofacial tissues including dental pulp tissues(DPs) using various stem cell surface markers. However, there has been a lack of consensus on a set of surface makers that are reproducibly effective at isolating putative multipotent dental mesenchymal stem cells(DMSCs). In this study, we used different combinations of surface markers(CD51/CD140 a, CD271, and STRO-1/CD146) to isolate homogeneous populations of DMSCs from heterogeneous dental pulp cells(DPCs) obtained from DP and compared their capacity to undergo multilineage differentiation.Fluorescence-activated cell sorting revealed that 27.3% of DPCs were CD51~+/CD140a~+, 10.6% were CD271~+, and 0.3% were STRO-1~+/CD146~+. Under odontogenic conditions, all three subsets of isolated DMSCs exhibited differentiation capacity into odontogenic lineages. Among these isolated subsets of DMSCs, CD271~+ DMSCs demonstrated the greatest odontogenic potential.While all three combinations of surface markers in this study successfully isolated DMSCs from DPCs, the single CD271 marker presents the most effective stem cell surface marker for identification of DMSCs with high odontogenic potential. Isolated CD271~+ DMSCs could potentially be utilized for future clinical applications in dentistry and regenerative medicine. 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 标记物 分离 牙髓 酶联免疫吸附 细胞表面 人类 多向分化
组蛋白去甲基化酶KDM5A在人牙髓细胞及成牙本质细胞分化中的表达 预览 被引量:1
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作者 李金铃 廖章松 +1 位作者 饶利佳 徐琼 《中华口腔医学研究杂志(电子版)》 CAS 2014年第6期18-22,共5页
目的探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶KDM5A在人牙髓细胞(hDPC)中的表达模式及成牙本质分化诱导对其表达量的影响。方法体外培养hDPC,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测第1代至第8代(P1-P8代)hDPC中KDM5A mRNA和蛋白的表达量;... 目的探讨组蛋白赖氨酸去甲基化酶KDM5A在人牙髓细胞(hDPC)中的表达模式及成牙本质分化诱导对其表达量的影响。方法体外培养hDPC,实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测第1代至第8代(P1-P8代)hDPC中KDM5A mRNA和蛋白的表达量;免疫荧光检测KDM5A在hDPC中的分布;对P3代细胞进行成牙本质分化诱导,于第7天和第14天分别检测KDM5A mRNA和蛋白的表达水平。结果体外传代培养hDPC中可检测到KDM5A的表达,KDM5A mRNA和蛋白量均呈先增加后减少的趋势;hDPC细胞质及细胞核中均表达KDM5A;成牙本质向分化诱导7和14 d,KDM5A mRNA和蛋白量高于未诱导组细胞,诱导14 d表达量高于诱导7 d(P〈0.05)。结论 hDPC表达KDM5A,矿化诱导可提高KDM5A的表达。 展开更多
关键词 组蛋白去甲基化酶 KDM5A 牙髓细胞 成牙本质分化
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富血小板血浆对人牙髓干细胞/内皮细胞共培养体外成牙本质分化的影响 预览 被引量:4
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作者 李心竹 吴补领 +3 位作者 侯晋 吴靖漪 陈婷 罗傲翔 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2014年第6期317-322,共6页
目的:探讨人牙髓干细胞(hDPSCs)与内皮祖细胞(EPCs)在体外成牙本质分化中的相互作用以及富血小板血浆(PRP)对其增殖和矿化的影响。方法:体外分离培养hDPSCs和EPCs,并将两者单独或共同接种于含PRP或FBS的DMEM中进行培养,分别于培... 目的:探讨人牙髓干细胞(hDPSCs)与内皮祖细胞(EPCs)在体外成牙本质分化中的相互作用以及富血小板血浆(PRP)对其增殖和矿化的影响。方法:体外分离培养hDPSCs和EPCs,并将两者单独或共同接种于含PRP或FBS的DMEM中进行培养,分别于培养1、3、5、7、9 d,MTT法检测各组细胞的增殖活性;然后再按上述相同方法接种细胞并进行矿化诱导,分别于诱导后7 d和14 d,qRT-PCR检测各组细胞的碱性磷酸酶(ALP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)及牙本质涎磷蛋白(DSPP)mRNA的表达水平。结果:无论是单种细胞培养还是两种细胞共同培养,含PRP各组细胞的增殖活性均明显高于含FBS各组(P〈0.05);ALP、DMP-1、DSPP mRNA的表达水平也均为含PRP组明显高于含FBS组(P〈0.05);而且在相同培养条件下,两种细胞共同培养组的各基因表达水平均明显高于各细胞单独培养组(P〈0.05)。结论:PRP有维持和促进hDPSCs、EPCs增殖的能力;并可促进hDPSCs向成牙本质分化,两细胞共同培养时其促进作用更明显。 展开更多
关键词 富血小板血浆 牙髓干细胞 内皮祖细胞 共培养 成牙本质分化
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尼莫地平对大鼠牙髓干细胞分化后DMP-1表达的影响 预览
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作者 琚燕琴 葛剑平 +3 位作者 黄晓峰 许多 蒋承智 赵守亮 《北京口腔医学》 CAS 2014年第2期75-78,共4页
目的 观察尼莫地平对牙本质基质蛋白-1在大鼠牙髓干细胞分化前后基因表达的影响.方法 通过特殊培养液诱导大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化,实验组分为正常诱导组和加入尼莫地平干扰组,在诱导后的不同时间点,1、3、5、7、10和14天... 目的 观察尼莫地平对牙本质基质蛋白-1在大鼠牙髓干细胞分化前后基因表达的影响.方法 通过特殊培养液诱导大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化,实验组分为正常诱导组和加入尼莫地平干扰组,在诱导后的不同时间点,1、3、5、7、10和14天,分别提取细胞的总RNA,通过Real-time PCR观察大鼠牙髓干细胞分化前后牙本质基质蛋白-1基因表达的变化,数据采用独立样本t检验.结果 大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化后,1、3天的牙本质基质蛋白-1表达没有明显变化(P>0.05);5天变化较明显,差异有统计学意义(P<0.05);5、7、10和14天随着时间增加牙本质基质蛋白-1基因表达明显增高.加入尼莫地平干扰的诱导分化组和正常诱导组比较,同一时间点,牙本质基质蛋白-1的表达量减少(P<0.05).结论 尼莫地平可减少牙本质基质蛋白-1在大鼠牙髓干细胞向成牙本质细胞方向分化后的表达,推测L型钙离子通道可能在牙髓干细胞的分化中起重要的作用. 展开更多
关键词 牙髓干细胞 L型钙离子通道 成牙本质细胞方向分化 牙本质基质蛋白-1
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改良酶消化法分离培养人乳牙牙髓干细胞 预览 被引量:6
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作者 别利克孜·卡德尔 刘奕杉 +4 位作者 王璇 李伯琦 马艳 毕晓娟 努斯来提·哈里克 《中国组织工程研究》 CSCD 2013年第10期1793-1800,共8页
背景:乳牙牙髓干细胞具有极强的增殖活力,可以在短期内获得组织工程需要的细胞量。目的:比较传统酶消化法和改良酶消化法获取人乳牙牙髓干细胞的成功率及生物学特性。方法:取无龋滞留乳切牙12颗,随机数字表法均分为两组,分别应用传... 背景:乳牙牙髓干细胞具有极强的增殖活力,可以在短期内获得组织工程需要的细胞量。目的:比较传统酶消化法和改良酶消化法获取人乳牙牙髓干细胞的成功率及生物学特性。方法:取无龋滞留乳切牙12颗,随机数字表法均分为两组,分别应用传统酶消化法和改良酶消化法分离获取乳牙牙髓细胞,在不同代次细胞中检测细胞扩增天数、收获量、生长曲线、倍增时间、克隆形成率、细胞表面特异标记物STRO-1、CD146、CD34和CD45的表达。细胞成骨、成脂诱导分化能力及通过检测碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白表达水平,判定细胞牙向分化潜能。结果与结论:两组细胞生长曲线,扩增天数、细胞收获量及细胞倍增时间相比,差异有显著性意义(P〈0.05);牙向分化实验结果显示,改良酶消化法碱性磷酸酶和牙本质涎蛋白较传统酶消化法和对照组而言呈强阳性表达。然而,两组在克隆形成率、细胞表面特异标记物及多项诱导分化等方面差异无显著性意义(P〉0.05)。说明改良酶消化法与传统酶消法相比,可在较短时间内完成同源乳牙牙髓干细胞体外扩增培养,可为牙齿再生治疗提供高质量种子细胞,是乳牙牙髓干细胞体外培养的可靠方法。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞培养与分化 乳牙牙髓细胞 改良酶消化法 牙本质涎蛋白 体外培养 细胞鉴定 牙向分化 省级基金 干细胞图片文章
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硅化胶原对人牙髓干细胞成牙本质分化的影响 预览 被引量:2
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作者 孙佳琦 牛丽娜 +2 位作者 沈丽娟 吴丹 陈吉华 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2013年第11期700-704,共5页
目的:通过观察硅化胶原支架材料对人牙髓干细胞牙本质再生相关基因表达的影响,探讨其对成牙本质细胞分化和牙本质再生的促进作用。方法:体外培养人牙髓干细胞,分别与硅化胶原、胶原材料复合,构建细胞一支架复合体后,置于矿化诱导... 目的:通过观察硅化胶原支架材料对人牙髓干细胞牙本质再生相关基因表达的影响,探讨其对成牙本质细胞分化和牙本质再生的促进作用。方法:体外培养人牙髓干细胞,分别与硅化胶原、胶原材料复合,构建细胞一支架复合体后,置于矿化诱导液和常规培养液中培养。分别于培养48h和2周、3周时,扫描电镜和HE染色观察不同培养条件下牙髓干细胞在两种胶原支架材料上的生长情况;半定量PCR、实时定量PCR法比较各组DSPP、DMP-1、OCNmRNA表达水平的差异。结果:人牙髓干细胞在硅化胶原支架材料上生长情况与胶原材料组相比无明显差异;胶原支架材料经硅化处理后能明显促进DSPP、DMP-1、OCN等牙本质再生相关基因的表达。结论:胶原支架材料经硅化处理后能促进人牙髓干细胞向成牙本质细朐分化。 展开更多
关键词 硅化胶原 支架 牙髓干细胞 成牙本质分化
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KDM6B epigenetically regulates odontogenic differentiation of dental mesenchymal stem cells 预览
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作者 Xu, Juan Yu, Bo +1 位作者 Hong, Christine Wang, Cun-Yu 《国际口腔科学杂志:英文版》 SCIE CSCD 2013年第4期200-205,共6页
Mesenchymal stem cells(MSCs) have been identified and isolated from dental tissues, including stem cells from apical papilla, which demonstrated the ability to differentiate into dentin-forming odontoblasts. The histo... Mesenchymal stem cells(MSCs) have been identified and isolated from dental tissues, including stem cells from apical papilla, which demonstrated the ability to differentiate into dentin-forming odontoblasts. The histone demethylase KDM6B(also known as JMJD3) was shown to play a key role in promoting osteogenic commitment by removing epigenetic marks H3K27me3 from the promoters of osteogenic genes. Whether KDM6B is involved in odontogenic differentiation of dental MSCs, however, is not known. Here, we explored the role of KDM6B in dental MSC fate determination into the odontogenic lineage. Using shRNA-expressing lentivirus, we performed KDM6B knockdown in dental MSCs and observed that KDM6B depletion leads to a significant reduction in alkaline phosphate(ALP) activity and in formation of mineralized nodules assessed by Alizarin Red staining. Additionally, mRNA expression of odontogenic marker gene SP7(osterix, OSX), as well as extracellular matrix genes BGLAP(osteoclacin, OCN) and SPP1(osteopontin, OPN), was suppressed by KDM6B depletion. When KDM6B was overexpressed in KDM6B-knockdown MSCs, odontogenic differentiation was restored, further confirming the facilitating role of KDM6B in odontogenic commitment. Mechanistically, KDM6B was recruited to bone morphogenic protein 2(BMP2) promoters and the subsequent removal of silencing H3K27me3 marks led to the activation of this odontogenic master transcription gene. Taken together, our results demonstrated the critical role of a histone demethylase in the epigenetic regulation of odontogenic differentiation of dental MSCs. KDM6B may present as a potential therapeutic target in the regeneration of tooth structures and the repair of craniofacial defects. 展开更多
关键词 间充质干细胞 表观遗传学 遗传调控 性分化 成牙本质细胞 骨形态发生蛋白 基因表达 MSCS
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转录共激活子p300在人牙髓细胞中的表达及成牙本质向分化对其表达的影响 预览
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作者 王彤宁 艳洋 +1 位作者 张德茜 徐琼 《中华口腔医学研究杂志(电子版)》 CAS 2013年第3期14-17,共4页
目的探讨体外培养人牙髓细胞中转录共激活子p300的表达模式,及成牙本质向分化诱导是否影响牙髓细胞中p300的表达水平。方法体外培养人牙髓细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测P0到P7代细胞中p300mRNA和蛋白的表达情... 目的探讨体外培养人牙髓细胞中转录共激活子p300的表达模式,及成牙本质向分化诱导是否影响牙髓细胞中p300的表达水平。方法体外培养人牙髓细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot检测P0到P7代细胞中p300mRNA和蛋白的表达情况;取P3代细胞进行成牙本质向分化诱导,于第7天和第14天分别检测p300mRNA和蛋白的表达量。结果体外培养人牙髓细胞中可检测到p300表达,表达量随细胞传代逐渐减少(P〈0.05);成牙本质向分化诱导7天和14天,p300表达量低于未诱导组细胞(P〈0.05),诱导14天表达量低于诱导7天(P〈0.05)。结论人牙髓细胞中表达p300,表达量随体外培养传代逐渐减少;成牙本质向分化诱导下调p300表达水平。 展开更多
关键词 转录共激活子p300 牙髓细胞 成牙本质向分化
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过表达Msx1、Pax9和Bmp4对牙髓干细胞牙向分化的影响
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作者 黄义德 王放放 胡雪峰 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2011年第9期969-975,共7页
在组织工程研究领域中,利用干细胞进行牙齿再生是一种途径。目前,研究认为牙齿的发育过程是上皮与间充质相互诱导的结果,利用干细胞进行再生牙齿时也需要有上皮源性和间充质源性干细胞的参与。牙髓干细胞是牙齿自体的干细胞,具有多... 在组织工程研究领域中,利用干细胞进行牙齿再生是一种途径。目前,研究认为牙齿的发育过程是上皮与间充质相互诱导的结果,利用干细胞进行再生牙齿时也需要有上皮源性和间充质源性干细胞的参与。牙髓干细胞是牙齿自体的干细胞,具有多向分化潜能,在牙齿再生中是一种理想的间充质源性干细胞。该研究通过慢病毒介导在牙髓干细胞中分别过表达人Msxl、Pax9和Bmp4基因,研究其对牙向分化的诱导潜能。过表达这三个基因均能显著提高牙髓干细胞碱性磷酸酶的水平,并且促使牙髓干细胞表达成牙本质细胞标志蛋白——牙本质涎磷蛋白、骨钙素、骨桥素和形成钙化组织。但在诱导牙向分化的能力上,三个基因有一定的区别。过表达Msx1基因对牙髓干细胞体外诱导牙向分化能力最为明显,其次是曰mp4基因,过表达Pax9在促进牙髓干细胞表达骨桥素和钙质形成上不是很显著。 展开更多
关键词 牙髓干细胞:Msx1 Pax9 BMP4 牙向分化
脐带间充质干细胞牙向分化的可行性研究
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作者 陈林 刘磊 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第23期 4580-4582,共3页
再生医学近年来受到越来越多的重视。它开启了治疗由于老化,损伤及一些先天性缺陷所造成的缺损畸形的新途径。其临床应用已涉及到各种组织的修复,包括血液,皮肤,角膜,软骨和骨等。在口腔领域,目前治疗牙缺失主要依靠修复体,种植... 再生医学近年来受到越来越多的重视。它开启了治疗由于老化,损伤及一些先天性缺陷所造成的缺损畸形的新途径。其临床应用已涉及到各种组织的修复,包括血液,皮肤,角膜,软骨和骨等。在口腔领域,目前治疗牙缺失主要依靠修复体,种植体和牙移植。然而这些方法都存在一定的缺陷。而通过再生医学的原理和方法实现牙再生治疗可以为机体提供有生命的,有功能的,相容性好的组织结构。种子细胞是牙再生的基础与关键。在牙再生研究中,牙髓间充质干细胞,牙乳头细胞,牙周膜间充质细胞,牙囊细胞及牙源性上皮细胞等牙源性干细胞常通过诱导分化为成釉细胞或成牙本质细胞来作为种子细胞应用,在临床上却难以获取,近来研究也有用骨髓间充质干细胞或脂肪间充质干细胞细胞等非牙源性干细胞者,但其牙向分化能力及分化调控机制还不明确。跻带间充质干细胞在新近的研究中较其它非牙源性干细胞表现出更大的优势,脐带间充质干细胞更原始、具有更高可塑性、更大扩增分化潜能。在此,本文就脐带间充质干细胞向牙细胞系分化的可能性做一论述,并对其可能实现的牙向分化给出可能的方法和策略,为牙再生种子细胞的选取提供新的思路。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 牙向分化 牙再生 种子细胞 再生医学
骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的体外实验研究 预览 被引量:6
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作者 董金山 段晴月 +3 位作者 文军 金超威 郝靖惠 陆群 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2010年第4期192-195,共4页
目的:观察骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的能力。方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞、胎鼠牙胚细胞,制备牙胚细胞条件培养液;用牙胚细胞条件培养液诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞7d,通过免疫荧光染色和RT-PCR方法,观测其表达... 目的:观察骨髓间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的能力。方法:分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞、胎鼠牙胚细胞,制备牙胚细胞条件培养液;用牙胚细胞条件培养液诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞7d,通过免疫荧光染色和RT-PCR方法,观测其表达成牙本质细胞特异性标志物—牙本质涎蛋白(DSP)、牙本质基质蛋白1(DMP-1)的情况,明确骨髓间充质干细胞能否向成牙本质样细胞分化。结果:大鼠骨髓间充质干细胞在诱导体系中生长状态良好。培养7d后,部分细胞抗牙本质涎蛋白(DSP)、抗牙本质基质蛋白1(DMP-1)免疫荧光染色呈阳性;RT-PCR显示mRNA水平表达牙本质涎磷蛋白(DSPP)和牙本质基质蛋白(DMP-1)。结论:大鼠骨髓间充质干细胞在牙胚细胞条件培养液的诱导下可以分化为成牙本质样细胞。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 牙胚细胞条件培养液 成牙本质样细胞
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