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Allo-HSCT患者血浆IL-17和IL-23与aGVHD相关性分析
1
作者 马军 刘希民 周芳 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2013年第23期1821-1824,共4页
目的:异基因造血干细胞移植(Allo—HscT)患者移植前后血浆中IL-17、IL-23浓度与急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)相关性分析。方法:采用双夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清中IL-17和IL-23浓... 目的:异基因造血干细胞移植(Allo—HscT)患者移植前后血浆中IL-17、IL-23浓度与急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)相关性分析。方法:采用双夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清中IL-17和IL-23浓度,采用逆转录聚合酶链反应法(ReahimePCR)检测IL-17mRNA和IL-2mRNA相对表达量。结果:1)移植后aGVHD阴性组和aGVHD阳性组患者在性别、年龄、疾病类型、组织类型和预处理方案差异均无统计学意义,P〉0.05。2)各组血浆中IL-17与IL-23浓度检测结果,aGVHD阳性组IL-17的浓度为(330.0±11.5)ρg/mL,显著高于对照组的(109.6±7.6)ρg/mL和aGVHD阴性组的(243.1±16.4)ρg/mL,P值均〈0.00l;aGVHD阳性组IL-23的浓度为(250.6±14.3)ρg/mL,显著高于对照组的(101.5±9.6)ρg/mL和aGVHD阴性组的(111.0±16.3)ρg/mL,P值均〈0.001。3)aGVHD阳性组血浆中IL-17与IL23浓度检测结果,aGVHD发生当天血浆中IL-17的浓度为(330.0±11.5)Dg/mL,IL-23的浓度为(250.6±14.3)9g/mL,显著高于aGVHD发生前2周和aGVHD发生后1、2和3周IL-17和IL-23的浓度,P值均〈0.05。IL-17、IL-23的浓度在aGVHD发生当天达到高峰,随着症状的控制,逐渐下降。4)aGVHD阳性患者IL-17mRNA的相对表达量为,3.232±1.137,显著高于对照组的1.432±0.954和aGVHD阴性组的1.672±0.896,P值均〈0.001;aGVHD阳性患者IL-23mRNA的相对表达量为2.142±1.194,显著高于对照组的1.242±0.752和aGVHD阴性组的1.496±0.653,P值均〈0.001。结论:A110HSCT后血浆中IL-17、IL-23与aGVHD的发生呈正相关,动态检测allo—HSCT后IL—17和IL-23浓度的变化,可能为临床上预测或诊断aGVHD的发生提供预警或依据。 展开更多
关键词 移植物抗宿主病 造血干细胞移植 IL-17 IL-23 聚合酶链反应 方法
血清曲霉菌游离DNA定量PCR检测方法的建立及应用初探
2
作者 姚贝 张捷 《中国误诊学杂志》 CAS 2012年第14期 3437-3440,共4页
目的建立并评价从血清中检测曲霉游离DNA的定量PCR方法。方法合成曲霉28srDNA基因特异广谱引物和Taqman探针,建立定量PCR检测方法,并进行方法学评价。用建立的方法检测33例患者的GM阳性血清标本。结果定量PCR方法灵敏度为2拷贝/反应... 目的建立并评价从血清中检测曲霉游离DNA的定量PCR方法。方法合成曲霉28srDNA基因特异广谱引物和Taqman探针,建立定量PCR检测方法,并进行方法学评价。用建立的方法检测33例患者的GM阳性血清标本。结果定量PCR方法灵敏度为2拷贝/反应,标准曲线Y=-3.629X+40.187,相关系数R。为0.9976。定量PCR方法检测33例患者的首次GM阳性血清标本,对诊断侵袭性曲霉感染的敏感性84%(21/25)、特异性87.5%(7/8)、阳性预测值95.5%(21/22)、阴性预测值63.6%(7/11)。PCR阳性与PCR阴性病例组间侵袭性曲霉感染诊断率有统计学差异(95.5%VS36.4%),PCR阳性与侵袭性曲霉感染诊断有相关性(RR=2.625)。结论血清曲霉游离DNA定量PCR检测有助于侵袭性曲霉感染的早期诊断。 展开更多
关键词 曲霉菌属/遗传学 聚合酶链反应/方法 曲霉菌病/诊断
荧光定量PCR检测儿童非典型EB病毒感染的临床评价
3
作者 孙弋阳 谷庆节 《中国误诊学杂志》 CAS 2011年第14期3296-3298,共3页
目的探讨荧光定量PCR检测对诊断和治疗非典型EB病毒(EBV)感染的临床意义。方法对2007-04-2009-10诊断为非典型EBV感染90例患儿,抽静脉血2 ml,注入枸橼酸钠抗凝剂与静脉血充分混匀,用核酸扩增荧光PCR法测定基因拷贝数,同时进行常规外... 目的探讨荧光定量PCR检测对诊断和治疗非典型EB病毒(EBV)感染的临床意义。方法对2007-04-2009-10诊断为非典型EBV感染90例患儿,抽静脉血2 ml,注入枸橼酸钠抗凝剂与静脉血充分混匀,用核酸扩增荧光PCR法测定基因拷贝数,同时进行常规外周血及异型淋巴细胞检查,对照病因和首发临床表现,分析儿童感染非典型EBV时荧光定量PCR检测的基因拷贝数变化。结果 EBV-DNA拷贝数能早期反映出非典型EBV感染,拷贝数越高,出现多器官损害概率越高。结论荧光定量PCR检测EBV-DNA拷贝数有助于早期诊断非典型EBV感染,能减少诊疗的盲目性,对临床有一定指导意义。 展开更多
关键词 聚合酶链反应/方法 疱疹病毒科感染
嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的建立 预览 被引量:6
4
作者 吕沁风 郑伟 +3 位作者 罗鹏 吴忠华 李禾 沈建根 《浙江大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期 305-310,共6页
目的:建立一种快速简便的嗜肺军团菌分子检测方法。方法:运用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),设计一套引物特异性识别嗜肺军团菌毒力基因——mip基因的6个特殊区域,在恒温条件下,对8株嗜肺军团菌... 目的:建立一种快速简便的嗜肺军团菌分子检测方法。方法:运用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),设计一套引物特异性识别嗜肺军团菌毒力基因——mip基因的6个特殊区域,在恒温条件下,对8株嗜肺军团菌和5株其它细菌进行检测,并与普通PCR方法进行比对,验证该方法的特异性和灵敏度。结果:所有嗜肺军团菌扩增产物均产生肉眼可见的白色沉淀,而其它不同菌株均不产生沉淀;加入荧光染料smart green后,嗜肺军团菌扩增产物均产生强绿色荧光,其它菌株呈弱荧光。与普通PCR(检出限约为57.6 pg,)比,LAMP扩增反应的灵敏度大100倍左右,基因组DNA检出限为576 fg,阳性水样检出限为8 cfu/ml。结论:LAMP技术可在简易的实验环境中快速、特异、灵敏地检测嗜肺军团菌。 展开更多
关键词 军团病杆菌 嗜肺 军团杆菌病/诊断 基因扩增 聚合酶链反应/方法 增强子元件(遗传学)
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Real-time PCR技术结合浓缩涂片染色法用于结核病快速诊断的研究 被引量:1
5
作者 彭东东 林健雄 +2 位作者 纪丽微 王冬敏 郑惠聪 《中国误诊学杂志》 CAS 2010年第1期7-9,共3页
目的:评价Real-time PCR技术结合浓缩涂片染色法对结核病快速诊断的应用价值。方法:应用Real-timePCR技术结合浓缩涂片染色法组合测定1 052份临床标本,并与直接涂片法、BACTEC MGIT-960快速培养法结果进行比较。结果:Real-time PCR... 目的:评价Real-time PCR技术结合浓缩涂片染色法对结核病快速诊断的应用价值。方法:应用Real-timePCR技术结合浓缩涂片染色法组合测定1 052份临床标本,并与直接涂片法、BACTEC MGIT-960快速培养法结果进行比较。结果:Real-time PCR技术结合浓缩涂片染色法的阳性检出率30.6%,显著高于直接涂片法的19.2%(χ2=36.6,P〈0.01),而接近于BACTEC-960培养法的34.9%(χ2=2.5,P〉0.05),而且检测时间明显缩短为4 h;以BACTECMGIT-960培养鉴定结果为标准评价,Real-time PCR技术结合浓缩涂片染色法的敏感性为89.7%(280/312),特异性为94.3%(698/740),符合率为93.0%(978/1 052)。结论:Real-time PCR技术结合浓缩涂片染色法用于结核分枝杆菌检测快速简便,具有很高的敏感性和特异性,在结核病早期诊断中有重要的临床价值。 展开更多
关键词 聚合酶链反应/方法 结核/诊断 染色与标记
急性视网膜坏死综合征的临床分析 被引量:6
6
作者 周旻 高巧云 +1 位作者 徐格致 王文吉 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期454-457,共4页
目的 观察急性视网膜坏死综合征(ARN) 的临床特征。方法 回顾性分析84 例98只眼ARN患者的临床资料。患者进行了最佳矫正视力、眼压、B型超声检查、裂隙灯生物显微镜、前置镜、直接和(或)间接检眼镜结合三面镜检查,屈光间质清楚者... 目的 观察急性视网膜坏死综合征(ARN) 的临床特征。方法 回顾性分析84 例98只眼ARN患者的临床资料。患者进行了最佳矫正视力、眼压、B型超声检查、裂隙灯生物显微镜、前置镜、直接和(或)间接检眼镜结合三面镜检查,屈光间质清楚者行荧光素眼底血管造影。部分患者行聚合酶链反应(PCR)检查鉴定致病病毒种类,明确诊断ARN后抗病毒、选择性激光和玻璃体手术治疗。并对视力和眼底情况进行随访,平均随访时间24.1个月。结果 ANR患者平均发病年龄42.8岁,双眼发病率16.6%,视网膜脱离发生率57.1%。治疗后6个月和12个月以上视力高于0.02者分别为53.5%和35.5%。确诊时间在14 d内的ARN患眼以及双眼发病的继发眼预后较好。水痘带状疱疹病毒是本组ARN的主要致病病毒,占62.5%;单纯疱疹病毒1型ARN 与脑炎等中枢神经系统疾病密切相关。结论 ARN急性起病,视网膜脱离发生率高,后期易出现严重视网膜血管病变,预后差。发病早期临床误诊多见,必要时可做PCR 检查帮助明确诊断。 展开更多
关键词 视网膜坏死综合征 急性/诊断 视网膜坏死综合征 急性/外科学 聚合酶链反应/方法
结肠癌患者实时荧光定量RT—PCR检测门静脉血CK19 mRNA水平及其临床意义 预览 被引量:1
7
作者 高阳 庄竟 +1 位作者 刘永刚 张勇超 《中国误诊学杂志》 CAS 2008年第32期 7815-7817,共3页
目的:探讨细胞角蛋白19(Cytokeratin19,CK19)mRNA在结肠癌术中患者门脉血中的表达及临床意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)半定量检测CK19 mRNA在结肠癌手术中患者门脉血中的表达,随访并记录术后24个月时患者的生存... 目的:探讨细胞角蛋白19(Cytokeratin19,CK19)mRNA在结肠癌术中患者门脉血中的表达及临床意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)半定量检测CK19 mRNA在结肠癌手术中患者门脉血中的表达,随访并记录术后24个月时患者的生存情况。结果:90例结肠癌患者门脉血CK19 mRNA阳性者62例,阳性率为66.7%;结肠癌组织CK19 mRNA的表达与分化程度、Dukes分期有相关性(分别rs=0.280,P=0.008;rs=0.367,P〈0.001),且两者之间分别存在线性趋势(精确概率法分别P=0.011;P〈0.001);CK19 mRNA在肝转移患者中的表达水平明显高于无肝转移组(P=0.049),并且门脉血CK19 mRNA与肝转移间具有一定相关性(rs=0.208,P=0.049)。术中发现肝转移且门脉血CK19 mRNA阳性表达的患者3例,而术中无肝转移但门脉血CK19 mRNA阳性表达的患者59例,其中9例在随访期间出现肝转移,其阳性率分别为4.8%(3/62)和15.3%(9/59)。结论:门脉血CK19 mRNA的表达与结肠癌的分期及分化程度有关,对判断肝脏微转移提供一定的帮助。 展开更多
关键词 结肠肿瘤/病理学/血液 聚合酶链反应/3法 角蛋白/血液/遗传学 RNA 信使 门静脉 人类
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双黄连治疗人巨细胞病毒小鼠肺炎的实验研究 预览 被引量:6
8
作者 侯舒 许晓燕 王亚亭 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第1期 62-65,共4页
目的研究双黄连粉针剂对人巨细胞病毒(HCMV)感染的小鼠肺组织病理改变和病毒DNA载量的影响。方法取4周龄SPF级Balb/c小鼠60只随机分成6组,建立HCMV小鼠肺炎模型。然后分别进行双黄连及更昔洛韦腹腔注射治疗。用药10d后,处死小鼠,... 目的研究双黄连粉针剂对人巨细胞病毒(HCMV)感染的小鼠肺组织病理改变和病毒DNA载量的影响。方法取4周龄SPF级Balb/c小鼠60只随机分成6组,建立HCMV小鼠肺炎模型。然后分别进行双黄连及更昔洛韦腹腔注射治疗。用药10d后,处死小鼠,对小鼠肺组织进行电镜和光镜病理检查,同时用荧光定量PCR方法检测小鼠肺组织HCMV DNA载量。结果双黄连大、中剂量治疗组小鼠肺组织病理损害较感染模型组明显减轻,HCMV DNA载量分别为1628.80copies/100mg和1869.37copies/100mg,较感染模型组(468527.40copies/100mg)有显著性降低(P〈0.001),与更昔洛韦治疗组(1521.61copies/100mg)相比差异无显著性(P〉0.05),双黄连小剂量组小鼠肺组织病理损伤及DNA载量(462547.90copies/100mg)与感染模型组相比差异无显著性(P〉0.05);正常对照组肺脏未见异常改变。结论双黄连能明显减轻HCMV急性原发小鼠肺部炎症损害并降低HCMV感染小鼠肺组织中病毒DNA载量。 展开更多
关键词 双黄连注射剂/药理学 聚合酶链反应/方法
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梯度PCR在基因扩增研究中的应用 预览 被引量:3
9
作者 王德文 王铁兵 +1 位作者 陈海霞 王晓春 《中国误诊学杂志》 CAS 2008年第11期 2527-2529,共3页
探讨和尝试一种较为迅速确定最佳退火温度的方法来扩增目的基因。方法:采用梯度PCR对醛固酮合酶基因(CYP11B2)进行扩增,通过凝胶呈像技术判断CYP11B2基因最佳退火温度。结果:与普通PCR相比,梯度PCR能够迅速地确定CYP11B2基因的最佳... 探讨和尝试一种较为迅速确定最佳退火温度的方法来扩增目的基因。方法:采用梯度PCR对醛固酮合酶基因(CYP11B2)进行扩增,通过凝胶呈像技术判断CYP11B2基因最佳退火温度。结果:与普通PCR相比,梯度PCR能够迅速地确定CYP11B2基因的最佳退火温度。结论:梯度PCR简单、直观、快速,适用于各种核酸分子的扩增,具有高效率、高通量的优点,有着广阔的应用前景。 展开更多
关键词 聚合酶链反应/方法 基因扩增
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问号钩端螺旋体lipL32/1-zipL21-OmpL1/2融合基因原核表达及其产物免疫原性分析 预览 被引量:4
10
作者 罗冬娇 邱晓枫 +4 位作者 王江 严谨 王海斌 周金成 严杰 《浙江大学学报:医学版》 CAS CSCD 2008年第6期 599-604,共6页
目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,优化目的产物表达条件并对表达产物免疫原性进行鉴定。方法:采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL21-OmpLl/2融合基因,并用常规基因工程方... 目的:构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,优化目的产物表达条件并对表达产物免疫原性进行鉴定。方法:采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL21-OmpLl/2融合基因,并用常规基因工程方法建立其原核表达系统。采用SDS—PAGE及Bio—Rad凝胶图象分析系统,检测目的重组蛋白rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2表达量。采用免疫双扩散试验及WesternBlot,鉴定rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2的免疫原性。结果:获得了序列正确的lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统E.coli BL21DE3^pET42a-lipL32/1-lipL21-ompL1/2。表达条件优化后的rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2产量为37.78mg/L,是优化前的3.7倍。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2兔抗血清免疫双扩效价为1:4。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2抗血清能识别rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2以及rLipL32/1、rLipL21、rOmpL1/2。rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2能与问号钩体56601株全菌兔抗血清以及黄疸出血群、流感伤寒群、波摩那群、秋季群问号钩体感染患者血清出现阳性杂交信号。结论:成功地构建了lipL32/1-lipL21-OmpL1/2融合基因及其原核表达系统,表达产物具有良好的抗原性和交叉免疫反应性,可作为研制通用型问号钩体基因工程疫苗及通用型钩体病血清学检测的抗原。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 问号 抗原 细菌/分析 聚合酶链反应/方法 属特异性抗原 lipL32基 因/lipL21基因/OmpL1/2 融合基因/构建 原核表达 免疫原性/鉴定
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人核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及鉴定 预览 被引量:2
11
作者 操海萍 舒振波 张桂珍 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期 590-592,共3页
目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,为进一步研究其生物学活性奠定基础。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,PCR产物及真核表达载体peDNA3分别双酶切后进行连接,并转化入大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体。结... 目的:构建人核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,为进一步研究其生物学活性奠定基础。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增目的片段,PCR产物及真核表达载体peDNA3分别双酶切后进行连接,并转化入大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体。结果:PCR获得与预期大小一致的、约1000bp的特异性DNA片段,PCR产物与表达载体经双酶切后连接,构建重组载体peDNA-dec,经双酶切鉴定及测序证实,人DCN基因cDNA片段正确插入真核表达载体中。结论:成功构建人DCN真核表达载体pcDNA-dec。 展开更多
关键词 核心蛋白聚糖 基因表达 聚合酶链反应/方法
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网状分枝扩增技术快速检测大肠埃希菌O157:H7及其他产志贺样毒素大肠埃希菌 预览 被引量:8
12
作者 赵春燕 易世红 李凡 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 18-22,共5页
目的:建立一种简便、快速、灵敏和特异的检测食品和临床标本中大肠埃希菌O157:H7及其他产志贺样毒大肠埃希菌(STEC)的方法。方法:设计并合成了检测志贺毒素2(stx2)基因特异的环形探针和捕获探针,确定网状分枝扩增方法(RAM)的... 目的:建立一种简便、快速、灵敏和特异的检测食品和临床标本中大肠埃希菌O157:H7及其他产志贺样毒大肠埃希菌(STEC)的方法。方法:设计并合成了检测志贺毒素2(stx2)基因特异的环形探针和捕获探针,确定网状分枝扩增方法(RAM)的灵敏度;含有stx2基因的不同血清型的菌株包括O46:H38、O22:H8、O111:NM,用于RAM特异度的测定。用RAM检测所有分离的菌株,并进一步对瞬时RAM进行研究。结果:RAM最低能检测10个拷贝的stx2合成靶基因和临床分离的菌株,表明RAM与PCR具有一样的灵敏度。特异度的测定结果表明不同血清型的大肠埃希菌均为stx2阳性,而非致病性大肠埃希菌ATCC23716则为阴性。在32株菌株中,28株细菌含有stx2基因,其余则为阴性,与PCR检测结果100%一致。瞬时RAM结果也表明最低能检测10个细菌,检测信号的出现依赖于样品的浓度。结论:RAM的简便和等温扩增特点可替代PCR检测各种标本中大肠埃希菌O157:H7和STEC。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157 网状分枝扩增方法 环形探针 聚合酶链反应/方法
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荧光实时定量PCR检测铜绿假单胞菌方法建立及价值 预览 被引量:4
13
作者 徐璇 钟礼立 +4 位作者 张兵 蔡瑞云 段贞 林小娟 张爱民 《中国医师杂志》 CAS 2006年第12期 1614-1617,共4页
目的建立荧光实时定量PCR(FQ-PCR)定量测定铜绿假单胞菌的方法,检测该方法的灵敏度并与传统细菌培养比较其特异性吻合率。方法选择铜绿假单胞菌的oprI基因为目的基因设计探针引物,建立Taqman探针FQ-PCR体系定量检测5种标准菌株、3... 目的建立荧光实时定量PCR(FQ-PCR)定量测定铜绿假单胞菌的方法,检测该方法的灵敏度并与传统细菌培养比较其特异性吻合率。方法选择铜绿假单胞菌的oprI基因为目的基因设计探针引物,建立Taqman探针FQ-PCR体系定量检测5种标准菌株、3种病毒株、白色念珠菌、肺炎支原体、人基因组DNA及临床培养96株菌株。结果31株铜绿假单胞菌、铜绿假单胞菌与其它菌种或人全血的混合液均产生特异扩增信号,标准曲线的相关系数为0.997;其他菌种(76株)无扩增;乙肝病毒、巨细胞病毒及肺炎支原体及健康人全血均无扩增,与传统培养相比特异性吻合率达100%,铜绿假单胞菌标准株按等级浓度稀释后其拷贝数也呈等级梯度递减,实际可检测到的最小菌落数为100个/ml,全程检测〈4h。结论荧光实时定量法检测oprI基因可以运用于铜绿假单胞菌的快速检测。 展开更多
关键词 聚合酶链反应/方法 假单胞菌 铜绿/分离和提纯
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PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌 预览 被引量:5
14
作者 李波 乔凤 +4 位作者 方丽 刘桂华 王韶 刘键 刘娅 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 154-156,共3页
目的:建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法:采用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增单核细胞增生李斯特氏菌溶血索基因(hlyA),用PCR方法检测80份长春地区的食品样品。结果:在706bp处出现hlyA基因的目的片... 目的:建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法:采用聚合酶链反应(PCR)特异性扩增单核细胞增生李斯特氏菌溶血索基因(hlyA),用PCR方法检测80份长春地区的食品样品。结果:在706bp处出现hlyA基因的目的片段,食品样品中单核细胞增生李斯特氏菌阳性检出12份,阳性率为15%,与吉林省疾病预防控制中心同步进行的国标法检测结果一致。二者符合率100%。结论:PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌更简便、快速、敏感、特异性高;适用于基层单位开展食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染的调查及监测。 展开更多
关键词 食品 利斯特菌 单核细胞增生 聚合酶链反应/方法
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p53基因突变子175H、248W和273H的定点突变及表达载体的构建 预览 被引量:1
15
作者 刘扬 赵银龙 +3 位作者 刘晓冬 马淑梅 龚守良 刘树铮 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期 543-546,共4页
目的:定点诱变合成p53基因突变子进而构建表达载体。方法:以野生型p53基因为模板,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物,将突变位点设计在引物上,通过重叠延伸法2次PCR扩增,扩增片段上含有所需要的突变位点,最后将扩增片段克隆... 目的:定点诱变合成p53基因突变子进而构建表达载体。方法:以野生型p53基因为模板,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物,将突变位点设计在引物上,通过重叠延伸法2次PCR扩增,扩增片段上含有所需要的突变位点,最后将扩增片段克隆入pcDNA3.1载体中。结果:在预期位点已经发生突变,p53基因第175位密码子由精氨酸(cgc)突变为组氨酸(cac),第248位密码子由精氨酸(cgg)突变为色氨酸(tgg),第273位密码子由精氨酸(cgt)突变为组氨酸(cat)。p53基因突变子表达载体成功构建。结论:PCR技术诱导定点突变准确、高效。基因突变体的成功构建,为进一步研究该突变位点奠定了基础。 展开更多
关键词 基因 p53 突变子 定点突变 遗传载体 聚合酶链反应/方法
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MT1X基因多态性与2型糖尿病的关系 预览 被引量:1
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作者 乔会珍 于雅琴 +3 位作者 史杰萍 刘雅文 刘青 刘娅 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 97-99,共3页
目的:探讨金属硫蛋白(MT)1X基因多态性与中国汉族人群中2型糖尿病(T2DM)发病的关系。方法:采用PCR技术和限制性片段长度多态性(RFLP)的方法检测132例糖尿病患者和137名正常对照者的MT基因家族中的MT1X基因(rs4531729)501T→C... 目的:探讨金属硫蛋白(MT)1X基因多态性与中国汉族人群中2型糖尿病(T2DM)发病的关系。方法:采用PCR技术和限制性片段长度多态性(RFLP)的方法检测132例糖尿病患者和137名正常对照者的MT基因家族中的MT1X基因(rs4531729)501T→C突变,统计各组对象的突变频率。结果:糖尿病组和正常对照组MT1X基因(rs4531729)501C→T突变型等位基因(c)频率差异无显著性(X^2=1.508,P〉0.05);两组间的CC、CT和TT3种基因型频率分布差异无显著性(X^2=1.581,P〉0.05)。结论:MT1X(rs4531729位点)突变型等位基因与T2DM的发生无关联性。 展开更多
关键词 尿病 非胰岛素依赖型 金属硫蛋白 多态现象(遗传学) 疾病遗传易感性 聚合酶链反应/方法
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KCNJ10基因多态性与精神分裂症的关系 预览
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作者 郭伟 陶然 +2 位作者 寇长贵 史杰萍 于雅琴 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 100-102,共3页
目的:探讨KCNJ10基因多态性与精神分裂症的关系。方法:应用PCR-RFLP方法在90个中国北方汉族精神分裂症患者及其健康父母双亲组成的核心家系中检测单核苷酸多态性(SNP)rs1186679位点的基因型。结果:rs1186679基因型频率的分布符合Ha... 目的:探讨KCNJ10基因多态性与精神分裂症的关系。方法:应用PCR-RFLP方法在90个中国北方汉族精神分裂症患者及其健康父母双亲组成的核心家系中检测单核苷酸多态性(SNP)rs1186679位点的基因型。结果:rs1186679基因型频率的分布符合Hardy-Weinberg平衡定律;单倍型相对风险分析(HRR)结果显示rs1186679位点与精神分裂症无关联(X^=0.775,P〉0.05);传递不平衡检验(TDT)结果表明,杂合父母传递给受累子女与非传递等位基因频率分布差异无显著性(X^2=1.025,P〉0.05)。结论:在中国北方汉族人群中KCNJ10基因位点上的rs1186679与精神分裂症可能无关联。 展开更多
关键词 精神分裂症/遗传学 多态性 单核苷酸 聚合酶链反应/方法 多态性 限制性片段长度 染色体 1对1 KCNJ10基因
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HSP-沙眼衣原体MOMPT细胞表位基因的重组、原核表达和蛋白质纯化 预览 被引量:2
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作者 杨思睿 卫红飞 +5 位作者 孙景辉 杨煜 王燕媚 鲁继荣 于永利 王丽颖 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 11-14,共4页
目的:构建热休克蛋白65(HSP65)与沙眼衣原体(c.trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP)T细胞表位(简称ctml)融合蛋白(简称H-ctml)的原核表达载体,并将其表达及纯化。方法:用PCR技术获得HSP65基因和ctml基因,并分别将其克隆... 目的:构建热休克蛋白65(HSP65)与沙眼衣原体(c.trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP)T细胞表位(简称ctml)融合蛋白(简称H-ctml)的原核表达载体,并将其表达及纯化。方法:用PCR技术获得HSP65基因和ctml基因,并分别将其克隆入pMD18-T载体,采用酶切与连接的方法从pMD18-T载体上获得HSP65基因片段,并将其克隆入pET28a表达质粒,再用相同的方法将ctml基因连接于HSP65基因片段的下游,从而完成H—ctml的基因重组。用IPTG诱导转化H—ctml表达载体的大肠杆菌,以镍金属螯合亲和层析法纯化融合蛋白质。结果:构建了HSP65与ctml的表达载体pET28a-H-ctml,DNA序列测定结果表明构建正确。以镍金属螯合亲和层析获得纯度为98%的融合蛋白质。结论:用分子克隆技术正确构建HSP65与Ct MOMPT细胞表位融合蛋白的表达载体,并成功表达与纯化出具有生物活性的融合蛋白。 展开更多
关键词 热休克蛋白65 衣原体 沙眼 表位 T淋巴细胞 聚合酶链反应/方法 重组融合蛋白质类
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8R-MUC1核心肽融合蛋白的原核表达及纯化 预览 被引量:3
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作者 唐艳 李慧 +6 位作者 张培因 李大鹏 王燕媚 卫红飞 王爱丽 于永利 王丽颖 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期 21-24,共4页
目的:构建蛋白质转导结构域8个精氨酸聚合体(8R)与MUC1核心肽融合蛋白的原核表达载体,并表达、纯化出具有生物学活性的8R-MUC1核心肽融合蛋白.方法:以PCR法从HSP65-MUC1-pET28a质粒中钓取MUC1核心肽2个重复序列片段,连入pMD18-T载体,然... 目的:构建蛋白质转导结构域8个精氨酸聚合体(8R)与MUC1核心肽融合蛋白的原核表达载体,并表达、纯化出具有生物学活性的8R-MUC1核心肽融合蛋白.方法:以PCR法从HSP65-MUC1-pET28a质粒中钓取MUC1核心肽2个重复序列片段,连入pMD18-T载体,然后用酶切、连接的方法从T载体上获得MUC1核心肽6重复序列片段(MUCPT),将其克隆入含8R的pET26b+原核表达载体中构建8R与MUCPT融合蛋白(8R-MUCPT)表达载体.用IPTG诱导转化8R-MUCPT表达载体的大肠杆菌BL21(DE3),并以镍螯合层析法纯化8R-MUCPT融合蛋白.结果:构建了8R与MUC1核心肽6个重复序列片段的融合蛋白原核表达载体8R-MUCPT-pET26b+,并在BL21(DE3)中表达了8R-MUCPT融合蛋白,经镍螯合层析获得纯度为95.5%的8R-MUC1核心肽融合蛋白.结论:构建了8R-MUC1核心肽融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化出具有生物学活性的融合蛋白. 展开更多
关键词 MUC1 核心肽 精氨酸聚合体 重组融合蛋白质类 载体蛋白类 聚合酶链反应/方法
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细菌—酵母穿梭表达质粒pGBKT7—LMP1的构建与鉴定 预览 被引量:2
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作者 刘鹏 张清秀 +2 位作者 朱振宇 庾蕾 马涧泉 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第5期 348-351,共4页
[目的]构建能在酵母中表达EBV潜伏膜蛋白1(LMPl)的穿梭表达质粒pGBKT7-LMP1.[方法]RT-PCR方法扩增EB病毒LMP1全外显子片段,利用DNA重组技术将其定向插人细菌-酵母穿梭质粒pGBKT7的T7启动子下游.[结果]限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实... [目的]构建能在酵母中表达EBV潜伏膜蛋白1(LMPl)的穿梭表达质粒pGBKT7-LMP1.[方法]RT-PCR方法扩增EB病毒LMP1全外显子片段,利用DNA重组技术将其定向插人细菌-酵母穿梭质粒pGBKT7的T7启动子下游.[结果]限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的LMP1 cDNA片段与GenBank中的数据完全吻合;LMP1准确克隆人pGBKT7的多克隆位点,未改变读码框架.[结论]成功构建了穿梭质粒pGBKT7-LMP1. 展开更多
关键词 疱疹病毒4型 潜伏膜蛋白1 聚合酶链反应 质粒pGBKT7
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