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天麻种子共生萌发中SCPL基因的克隆与分析
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作者 曾旭 郭顺星 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第13期4211-4218,共8页
天麻种子细小,无胚乳,自然条件下需与内生真菌共生才能萌发。近年来,研究发现丝氨酸羧肽酶(serine carboaypeptidase,SCP)及其类蛋白(serine carboaypeptidase-like proteins,SCPL)可以参与种子萌发中储藏蛋白的水解,以及植物激素... 天麻种子细小,无胚乳,自然条件下需与内生真菌共生才能萌发。近年来,研究发现丝氨酸羧肽酶(serine carboaypeptidase,SCP)及其类蛋白(serine carboaypeptidase-like proteins,SCPL)可以参与种子萌发中储藏蛋白的水解,以及植物激素油菜素内酯和脱落酸的信号传导,在种子萌发的过程中具有重要作用。本研究以共生萌发的天麻(Gastrodia elata Bl.)种子为材料,采用RACE技术获得丝氨酸羧肽酶基因全长cDNA,命名为GeSCPL。该基因全长cDNA为1 665 bp,编码463个氨基酸。亚细胞定位显示该蛋白主要表达于胞外和液泡中,具有S10结构域,属于S10超家族,并存在4种修饰方式,可能属于羧肽酶C,且与其他科属植物的丝氨酸羧肽酶基因相似性较高。qPCR结果表明,在与真菌的共生萌发过程中,天麻原球茎中GeSCPL基因的表达量下降。本研究首次获得了天麻种子GeSCPL全长cDNA序列,为进一步研究天麻种子共生萌发的分子机制提供科学依据。 展开更多
关键词 天麻 丝氨酸羧肽酶 内生真菌 共生萌发
蓖麻RcSCP基因克隆与生物信息学分析 预览 被引量:2
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作者 冯紫洲 刘春梅 +7 位作者 衡宝山 张继星 陈永胜 王云 刘海臣 穆莎茉莉 冀照军 霍红雁 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第12期27-30,共4页
植物的丝氨酸羧肽酶(serine carboxypeptidases,简称SCP)是一类属于邶水解酶家族的蛋白酶,在许多生化途径(包括次生代谢产物的生物合成、催化酰基转移、除草剂共轭、种子萌发相关蛋白质的降解过程)中起着重要作用。丝氨酸羧肽酶... 植物的丝氨酸羧肽酶(serine carboxypeptidases,简称SCP)是一类属于邶水解酶家族的蛋白酶,在许多生化途径(包括次生代谢产物的生物合成、催化酰基转移、除草剂共轭、种子萌发相关蛋白质的降解过程)中起着重要作用。丝氨酸羧肽酶基因是植物的一种抗逆基因,在植物生长发育及抵抗逆境方面发挥着重要作用。蓖麻作为重要的油料作物,用途广泛。本研究利用cDNA末端快速克隆(RACE)方法克隆蓖麻RcSCP基因的3’端、5’端片段,最后设计全长引物获得蓖麻RcSCP全长序列,并对其进行生物信息学分析。结果表明,丝氨酸羧肽酶蛋白基因的eDNA完整开放阅读框序列为1377bp,推测它可编码458个氨基酸;蓖麻RcSCP蛋白含有丝氨酸羧肽酶蛋白家族保守区,预测它定位于细胞质中。 展开更多
关键词 蓖麻 RACE 丝氨酸羧肽酶 克隆
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基于OsGS5的玉米同源基因ZmGS5的克隆 预览
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作者 李彩云 孔曼丽 +4 位作者 孙清鹏 卢敏 王维香 潘金豹 韩俊 《北京农学院学报》 2014年第3期14-17,共4页
高产是玉米育种的重要目标,籽粒大小是决定籽粒产量的重要因子.OsGS5是水稻中已克隆的控制籽粒长度和千粒重的主效基因,编码丝氨酸羧肽酶.本研究利用OsGS5基因编码序列比对玉米同源EST序列,并对EST序列进行拼接,根据拼接后的EST序列设计... 高产是玉米育种的重要目标,籽粒大小是决定籽粒产量的重要因子.OsGS5是水稻中已克隆的控制籽粒长度和千粒重的主效基因,编码丝氨酸羧肽酶.本研究利用OsGS5基因编码序列比对玉米同源EST序列,并对EST序列进行拼接,根据拼接后的EST序列设计3&#39;-RACE基因特异引物,利用同源克隆的方法克隆出玉米同源基因的3&#39;端基因片段,经测序发现该基因片段长度为981 bp,功能注释后发现该基因编码丝氨酸羧肽酶,与水稻OsGS5基因编码蛋白具有高度同源性,将该基因暂时命名为ZmGS5. 展开更多
关键词 玉米 ZmGS5 OsGS5 丝氨酸羧肽酶 克隆
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茶树丝氨酸羧肽酶基因的克隆及表达分析 预览 被引量:1
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作者 仇传慧 李伟伟 +5 位作者 王云生 李明卓 骆洋 刘亚军 高丽萍 夏涛 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期202-211,共10页
近年来,人们发现丝氨酸羧肽酶类蛋白(SCPL)参与植物次生代谢产物的酰基转移过程,即具有转酰基功能。本研究采用RT-PCR技术,获得了3个茶树丝氨酸羧肽酶基因的全长序列;生物信息学分析表明,3个CsSCPL蛋白均包含了1个底物结合位点、3个... 近年来,人们发现丝氨酸羧肽酶类蛋白(SCPL)参与植物次生代谢产物的酰基转移过程,即具有转酰基功能。本研究采用RT-PCR技术,获得了3个茶树丝氨酸羧肽酶基因的全长序列;生物信息学分析表明,3个CsSCPL蛋白均包含了1个底物结合位点、3个催化作用保守区和多个N-糖基化位点,及其Ser-Asp-His三联体催化中心等SCPL家族的典型特征;进化树分析表明,3个CsSCPL可能具有酰基转移酶的功能。实时荧光定量PCR结果表明3个基因在芽叶茎根中都有表达,其中,CsSCPL1和CsSCPL3在叶中的相对表达量明显高于茎和根,而CsSCPL2则在根中高表达。本研究成功地将CsSCPL重组到表达载体pET32a(+)上进行原核表达,并对诱导时间及诱导温度进行了优化;经IPTG诱导、SDS-PAGE检测,目标蛋白条带分子量为70 kD,与预测大小相符。 展开更多
关键词 茶树 丝氨酸羧肽酶 生物信息学分析 原核表达
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丝氨酸羧肽酶及其类蛋白的研究进展 被引量:2
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作者 叶玲飞 罗光宇 +2 位作者 向建华 刘爱玲 陈信波 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期122-126,共5页
丝氨酸羧肽酶(SCP)是一个庞大的蛋白酶家族,普遍存在于动物、植物和真菌中。本文简要介绍了SCP及丝氨酸羧肽酶类蛋白(SCPLs)的结构特点和分类,综述了它们的亚细胞定位、基因表达水平、提高植物耐逆性、调控植物生长发育和影响次... 丝氨酸羧肽酶(SCP)是一个庞大的蛋白酶家族,普遍存在于动物、植物和真菌中。本文简要介绍了SCP及丝氨酸羧肽酶类蛋白(SCPLs)的结构特点和分类,综述了它们的亚细胞定位、基因表达水平、提高植物耐逆性、调控植物生长发育和影响次生代谢产物合成等方面的最新研究进展。 展开更多
关键词 丝氨酸羧肽酶 基因表达调控 次生代谢产物 耐逆性
玉米丝氨酸羧肽酶基因(ZmSCP)的克隆及表达分析 预览 被引量:3
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作者 刘丽 王静 +2 位作者 张志明 赵茂俊 潘光堂 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期164-171,共8页
丝氨酸羧肽酶(serinecarboxypeptidases,scp)基因在植物生长发育及抗病性方面起着重要作用。本研究在立枯丝核菌胁迫24h后,以RT-PCR技术和RACE技术克隆玉米丝氨酸羧肽酶基冈全长cDNA序列,命名为ZmSCP。结果显示,该基囚全长为1874b... 丝氨酸羧肽酶(serinecarboxypeptidases,scp)基因在植物生长发育及抗病性方面起着重要作用。本研究在立枯丝核菌胁迫24h后,以RT-PCR技术和RACE技术克隆玉米丝氨酸羧肽酶基冈全长cDNA序列,命名为ZmSCP。结果显示,该基囚全长为1874bp(GenBank登录号为JF682634),开放阅读框为999bp,编码332个氨基酸,相对分子量为36.505kD,等电点为4.75。ZmSCP基因编码蛋白与其他高等植物中该蛋白具有一定的同源性,同源性比例范围为42%~81%。进化树分析表明ZmSCP基因与水稻、高粱亲缘关系较近,属于同一进化分支。ZmSCP基冈编码蛋白序列保守结构域分析显示该基因编码产物具有S10结构域,属于s10超家族。半定量RT—PCR与实时荧光定量PCR结果表明,ZmSCP基因在立枯丝核菌、ABA、JA、低温、高盐胁迫条件下,总体均呈诱导表达的趋势。其中,在立精丝核菌AG1-IA诱导下,ZmSCP基冈表达呈两步诱导趋势,第1次诱导出现在接菌后24h,然后下降,第2次诱导出现在接菌后60h。在ABA、JA、低温和盐胁迫下,ZmSCP基因表达均呈现上调趋势,表达高峰均出现在胁迫后48h。 展开更多
关键词 丝氨酸羧肽酶 基因克隆 表达模式
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华北大黑鳃金龟丝氨酸羧肽酶在不同体系中的表达 预览 被引量:1
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作者 张雅昆 赵丹 +3 位作者 郭巍 刘小民 徐大庆 孙伟明 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期44-47,共4页
丝氨酸羧肽酶(Serine carboxypeptidases,SCPs)是一类在酸性pH环境下参与多肽和蛋白质的加工、修饰与降解等多个重要环节的真核生物蛋白水解酶。根据华北大黑鳃金龟丝氨酸羧肽酶( HoSCP)全长基因序列设计引物,利用PCR方法克隆hosc... 丝氨酸羧肽酶(Serine carboxypeptidases,SCPs)是一类在酸性pH环境下参与多肽和蛋白质的加工、修饰与降解等多个重要环节的真核生物蛋白水解酶。根据华北大黑鳃金龟丝氨酸羧肽酶( HoSCP)全长基因序列设计引物,利用PCR方法克隆hoscp基因并分别连接到表达载体pET28b和pPIC9K上,转化大肠杆菌BL21和毕赤酵母GS115,实现了其在原核以及真核体系中的表达。结果显示,HoSCP在原核细胞及酵母细胞中均能稳定表达50 kDa的特异蛋白。 HoSCP的成功表达为其在华北大黑鳃金龟体内的活性和生物学功能研究提供了可能。 展开更多
关键词 华北大黑鳃金龟 丝氨酸羧肽酶 HoSCP 原核表达系统 毕赤酵母表达系统
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植物丝氨酸羧肽酶及其类蛋白的研究进展 预览 被引量:8
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作者 王育华 邹杰 陈信波 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期 72-75,102,共5页
丝氨酸羧肽酶(serine carboxypeptidases,SCP)是一类属于α/β水解酶家族的蛋白酶,在植物生长发育过程中参与多肽和蛋白质的加工、修饰与降解等多个重要环节,并且在许多生化途径包括次生代谢产物的生物合成、催化酰基转移、除草剂共... 丝氨酸羧肽酶(serine carboxypeptidases,SCP)是一类属于α/β水解酶家族的蛋白酶,在植物生长发育过程中参与多肽和蛋白质的加工、修饰与降解等多个重要环节,并且在许多生化途径包括次生代谢产物的生物合成、催化酰基转移、除草剂共轭和种子萌发相关蛋白质降解中起重要作用。介绍和评述了植物丝氨酸羧肽酶及其类蛋白的种类、特点、功能及其基因的表达调控,并对植物丝氨酸羧肽酶及其类蛋白的研究方向和应用提出了展望。 展开更多
关键词 丝氨酸羧肽酶 功能 基因表达
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水稻与拟南芥全基因组丝氨酸羧肽酶类蛋白家族比较分析 预览 被引量:3
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作者 冯英 俞朝 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期 1-15,共15页
基于水稻与拟南芥全基因组序列,在基因组与蛋白质组水平上对这2种模式植物的丝氨酸羧肽酶(SCPs)基因家族进行比较分析.利用隐马可夫模型(hidden Markov models,HMM),发现水稻与拟南芥中分别存在71个与54个丝氨酸羧肽酶类(serin... 基于水稻与拟南芥全基因组序列,在基因组与蛋白质组水平上对这2种模式植物的丝氨酸羧肽酶(SCPs)基因家族进行比较分析.利用隐马可夫模型(hidden Markov models,HMM),发现水稻与拟南芥中分别存在71个与54个丝氨酸羧肽酶类(serine carboxypeptidases like,SCPL)蛋白编码基因,它们广泛分布于基因组中各条染色体上,并且存在多个基因簇聚区.基因结构分析显示,拟南芥的SCPL基因存在广泛的交替剪接方式,而这种现象在水稻SCPL基因中却不常见.蛋白结构分析表明,所有SCPL家族成员均具有α/β水解酶折叠亚族与S10家族典型的保守结构域与二级结构特征.系统进化分析表明,这125个SCPL蛋白可以分成3大类,与水稻不同,大多数拟南芥SCPL(88.9%)可归属于双链羧肽酶Ⅰ或Ⅱ. 展开更多
关键词 丝氨酸羧肽酶 基因家族 水稻 拟南芥 进化
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拟南芥丝氨酸羧肽酶类蛋白家族的基因组学分析 预览 被引量:7
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作者 冯英 刘庆坡 +1 位作者 贾佳 薛庆中 《遗传学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期 864-873,共10页
基于隐马可夫模型,利用已知丝氨酸羧肽酶(Serine Carboxypeptidases,SCP)氨基酸序列作为训练集,搜索拟南芥全蛋白质组数据库,鉴定了54个推定的SCPL(丝氨酸羧肽酶类,Serine Carboxypeptidase-Like)基因,详细分析了各基因的结构特征、染... 基于隐马可夫模型,利用已知丝氨酸羧肽酶(Serine Carboxypeptidases,SCP)氨基酸序列作为训练集,搜索拟南芥全蛋白质组数据库,鉴定了54个推定的SCPL(丝氨酸羧肽酶类,Serine Carboxypeptidase-Like)基因,详细分析了各基因的结构特征、染色体定位与编码的蛋白质序列,发现7个可能最近发生复制事件的基因簇聚区,并且其SCPL基因广泛存在交替剪接方式.系统进化分析表明,88.9%基因编码的蛋白质属于双链羧肽酶l或Ⅱ亚族,仅11.1%蛋白质属于单链羧肽酶Ⅲ亚族,暗示SCP蛋白不仅具有独特拓扑结构的催化中心与高度保守的"α/β水解酶折叠"三级结构,其DNA或蛋白质序列特征也可以作为系统进化研究依据. 展开更多
关键词 丝氨酸羧肽酶 基因家族 拟南芥 系统发生 进化
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利用CODEHOP设计简并引物克隆红色红曲霉丝氨酸羧肽酶基因片段和序列分析 预览 被引量:1
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作者 齐育平 周月婷 +2 位作者 马泽萍 陈丹凤 蒋冬花 《浙江师范大学学报:自然科学版》 CAS 2014年第1期93-98,共6页
利用CODEHOP(Consensus-Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primers)软件设计了红色红曲霉丝氨酸羧肽酶基因片段的简并引物,选取1对简并引物进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),得到348 bp的聚合酶链式反应产物,经pMD18-T载体克隆... 利用CODEHOP(Consensus-Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primers)软件设计了红色红曲霉丝氨酸羧肽酶基因片段的简并引物,选取1对简并引物进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),得到348 bp的聚合酶链式反应产物,经pMD18-T载体克隆转化至大肠杆菌DH5α中,测序后进行BLASTX比对,发现此DNA产物与其他丝氨酸羧肽酶基因序列有相似性,推断所克隆的产物即为红色红曲霉的丝氨酸羧肽酶基因片段. 展开更多
关键词 CODEHOP软件 丝氨酸羧肽酶基因 简并引物 红曲菌
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