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高脂环境下五指山小型猪和西藏小型猪冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达 预览
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作者 郁晨 刘志华 +5 位作者 潘永明 徐孝平 徐剑钦 杨钦钦 蔡兆伟 陈民利 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期1-10,共10页
目的观察在高脂环境下五指山小型猪、西藏小型猪血脂和炎症细胞的变化,分析冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达。方法取雄性五指山小型猪、西藏小型猪各 5 只,高脂饲喂连续 6 个月,每月检测血脂和血常规,并检测饲喂前和饲喂 6 个月时... 目的观察在高脂环境下五指山小型猪、西藏小型猪血脂和炎症细胞的变化,分析冠心病相关血脂和炎症易感基因的表达。方法取雄性五指山小型猪、西藏小型猪各 5 只,高脂饲喂连续 6 个月,每月检测血脂和血常规,并检测饲喂前和饲喂 6 个月时外周白细胞中 LDLR、LPL、PCSK9、ApoAV、5-LO、FLAP、MMP-9、ICAM-1、VCAM-1 基因和蛋白的表达,及血清中 CRP、TNF-α水平;并在饲喂 6 个月时取腹主动脉组织进行 HE 染色病理学检查。结果高脂饲喂后,两种小型猪TC、HDL-C、LDL-C水平均显著升高(P<0.01),西藏小型猪WBC、NEUT%、MONO%和五指山小型猪MONO%亦呈升高趋势(P>0.05);五指山小型猪TC、LDL-C水平高于西藏小型猪,而西藏小型猪的WBC、NEUT%和MONO%显著高于五指山小型猪(P<0.05,P<0.01),且西藏小型猪血清CRP和TNF-α水平显著升高(P<0.05),而五指山小型猪未见显著差异(P>0.05)。高脂饲喂6个月后,两种小型猪均出现明显的AS斑块,五指山小型猪LDLR、ApoAVmRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01),PCSK9、LPLmRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01);西藏小型猪LPLmRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01);五指山小型猪5-LO、FLAP、ICAM-1、VCAM-1mRNA表达和5-LO蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),西藏小型猪FLAP、MMP-9、ICAM-1、VCAM-1mRNA和蛋白表达均显著升高(P<0.05,P<0.01),且西藏小型猪MMP-9、ICAM-1、VCAM-1mRNA和蛋白表达均高于五指山小型猪,而 5-LO mRNA 和蛋白表达则五指山小型猪高于西藏小型猪。结论高脂环境下五指山小型猪、西藏小型猪均出现不同程度的血脂异常和炎症反应,两种小型猪的冠心病相关血脂和炎症易感基因存在明显异质性,其中,高脂诱导下五指山小型猪外周血白细胞对 LDLR、PCSK9、5-LO 表达较敏感,而西藏小型猪外周血白细胞中对 LPL、ICAM-1、VCAM-1 和 MMP-9 表达较敏感。 展开更多
关键词 高脂环境 五指山小型 西藏小型 血脂 炎症 易感基因
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小型猪近交系鉴定研究进展
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作者 冯书堂 牟玉莲 +1 位作者 王太平 庄爱萍 《实验动物科学》 2019年第2期78-82,共5页
本文综述了国内外小型猪近交系鉴定方法的研究进展,包括:异体皮肤移植鉴定、基因组水平鉴定、生理生化标记、同工酶蛋白质鉴定、DNA遗传标记、SNP分析等分子遗传学的方法。综合分析,异体皮肤移植技术是大型哺乳动物近交系最佳鉴定方法... 本文综述了国内外小型猪近交系鉴定方法的研究进展,包括:异体皮肤移植鉴定、基因组水平鉴定、生理生化标记、同工酶蛋白质鉴定、DNA遗传标记、SNP分析等分子遗传学的方法。综合分析,异体皮肤移植技术是大型哺乳动物近交系最佳鉴定方法。该技术将为我国创新资源近交系猪培育和开发利用奠定科学基础,为大型哺乳动物近交系鉴定提供科学的检测技术和方法,并使我国大型哺乳动物近交系研究处于国际领先地位。 展开更多
关键词 五指山小型 近交系 异体皮肤移植 免疫排斥反应
一种新的非Gal异种移植抗原——FAM234A的鉴定 预览
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作者 谢崇伟 戴文杰 +2 位作者 张军方 蔡志明 牟丽莎 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期354-359,共6页
目的 探讨FAM234A是否为一种新的非Gal异种移植抗原。方法 用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪的原代猪主动脉内皮细胞(PAEC)免疫食蟹猴。将免疫的猴血清与PAEC孵育,其中经免疫产生的猴抗猪细胞抗体能够识别并结合PAEC表面的... 目的 探讨FAM234A是否为一种新的非Gal异种移植抗原。方法 用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪的原代猪主动脉内皮细胞(PAEC)免疫食蟹猴。将免疫的猴血清与PAEC孵育,其中经免疫产生的猴抗猪细胞抗体能够识别并结合PAEC表面的未知抗原。采用流式细胞术测定PAEC表面结合的猴抗猪细胞抗体的平均荧光强度(MFI),用以表示PAEC表面抗原的含量。利用慢病毒介导的短发夹核糖核酸(shRNA)敲减PAEC中的FAM234A基因,检测该细胞结合的猴抗猪细胞抗体含量是否减少,以确定该基因是否为潜在的移植抗原。结果 PAEC中的非Gal抗原能够在猴体内引发大量的猴抗猪细胞抗体。在GTKO小型猪的PAEC中用shRNA敲减FAM234A基因后,PAEC结合的猴IgG抗体减少。结论 FAM234A是一种新的非Gal异种移植抗原。 展开更多
关键词 异种移植 非Gal抗原 主动脉内皮细胞(PAEC) FAM234A 食蟹猴 α-1 3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO) 流式细胞术 短发夹核糖核酸(shRNA) 基因敲减 巴马小型 五指山小型 慢病毒
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五指山小型猪近交系异种移植产业化研发进展 预览
4
作者 冯书堂 戴一凡 +1 位作者 章金刚 潘志强 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期469-473,共5页
为了早日实现五指山小型猪(WZSP)近交系异种移植产业化目标,努力推进近交繁育获得近交系,同时开展克服异种移植免疫排斥和猪内源性逆转录病毒(PERV)传染生物安全性两大难题的研发内容。本文从WZSP近交系双基因敲除克隆猪繁育成功、猪-... 为了早日实现五指山小型猪(WZSP)近交系异种移植产业化目标,努力推进近交繁育获得近交系,同时开展克服异种移植免疫排斥和猪内源性逆转录病毒(PERV)传染生物安全性两大难题的研发内容。本文从WZSP近交系双基因敲除克隆猪繁育成功、猪-猴异种角膜内皮移植取得突破性进展、WZSP近交系PERV无传染性群体建立、WZSP近交系是理想的动物模型和异种移植供体等方面,介绍WZSP近交系异种移植产业化的研发进展。 展开更多
关键词 五指山小型 近交系 异种移植 免疫排斥反应 α-1 3-半乳糖基转移酶基因敲除(αGTKO) 内源性逆转录病毒(PERV) 非α-1 3-半乳糖(Gal)抗原 CRISPR/Cas9基因编辑技术
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西藏小型猪和五指山小型猪的生理特点及其动脉粥样硬化的发病特征比较研究 预览 被引量:1
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作者 陈民利 《实验动物与比较医学》 CAS 2018年第5期325-328,共4页
动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是冠心病和脑卒中发生的主要病因。人类AS的发病模式多种多样,在高血脂环境下,有肥胖导致胰岛素抵抗、共同促进AS形成,也有胰岛素抵抗导致高血压、加速AS形成,往往同时存在代谢综合征的一种或多种... 动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是冠心病和脑卒中发生的主要病因。人类AS的发病模式多种多样,在高血脂环境下,有肥胖导致胰岛素抵抗、共同促进AS形成,也有胰岛素抵抗导致高血压、加速AS形成,往往同时存在代谢综合征的一种或多种临床表象,其发生与发展是遗传因素和环境因素共同作用的结果。猪在循环系统、血小板凝聚系统、脂蛋白代谢及消化系统均与人类极为相似,其AS病变与人类AS病变的分布特点相一致,并具有人类成熟斑块的特点,是研究AS的一个重要模式动物。我国小型猪种质资源丰富,不同品种品系的小型猪具有不同种质特性和生物学功能。五指山小型猪、西藏小型猪尤如人类的两个不同类型的AS易感群体。本文就作者研究团队对五指山小型猪、西藏小型猪的AS形成和病症特点方面的研究作一回顾性的总结,为在心血管疾病研究中对小型猪品系的选择和应用提供一些参考。 展开更多
关键词 西藏小型 五指山小型 动脉粥样硬化(AS) 生理特点 发病特征
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五指山小型猪不同器官内猪内源性反转录病毒的存在与表达 预览
6
作者 范瑞 贾俊婷 +4 位作者 钟亚迪 马丽敏 冯书堂 马玉媛 章金刚 《生物技术通讯》 CAS 2018年第1期50-54,共5页
目的 检测五指山小型猪不同器官内猪内源性反转录病毒 (PERV) 的存在与表达情况.方法: 提取心、 肝、脾、 肺、 肾、 胸腺等6种器官基因组DNA与总RNA, 用PCR、 反转录PCR对PERV结构基因gag、 pol、 env进行定性检测,用实时定量反转录... 目的 检测五指山小型猪不同器官内猪内源性反转录病毒 (PERV) 的存在与表达情况.方法: 提取心、 肝、脾、 肺、 肾、 胸腺等6种器官基因组DNA与总RNA, 用PCR、 反转录PCR对PERV结构基因gag、 pol、 env进行定性检测,用实时定量反转录PCR对pol基因进行相对定量检测.结果: 6种器官中均能检测到PERV结构基因gag、 pol、 env的存在与表达; 从mRNA水平上看, 不同器官内pol基因的相对表达量不存在显著性差异.结论: 五指山小型猪不同器官内PERV存在与表达的检测, 对进一步阐明五指山小型猪来源的PERV分子生物学特性及深入评价猪-人异种移植病原安全性具有重要意义. 展开更多
关键词 五指山小型 内源性反转录病毒 异种移植
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封闭群五指山小型猪33个微卫星位点的遗传分析 预览
7
作者 孙瑞萍 魏立民 +6 位作者 晁哲 刘海隆 郑心力 刘圈炜 黄丽丽 邢漫萍 王峰 《江苏农业科学》 2018年第21期164-169,共6页
依据北京市地方标准DB11/T828.3—2011《实验用小型猪第3部分:遗传质量控制》,在DNA水平上对封闭群五指山小型猪进行种群遗传分析。通过利用多重PCR和基因扫描技术对封闭群五指山猪33微卫星位点进行遗传检测,统计各个基因座的杂合度及... 依据北京市地方标准DB11/T828.3—2011《实验用小型猪第3部分:遗传质量控制》,在DNA水平上对封闭群五指山小型猪进行种群遗传分析。通过利用多重PCR和基因扫描技术对封闭群五指山猪33微卫星位点进行遗传检测,统计各个基因座的杂合度及期望杂合度、有效等位基因数、多态信息含量、固定指数和Shannon信息熵。结果表明,33个微卫星位点在WZSP封闭群中平均等位基因数为6.42,平均杂合度为0.66,期望杂合度平均值为0.69。此外,总群体在33个位点多态信息含量的平均值为0.65,平均固定指数为0.05。说明封闭群五指山小型猪群体具有一定的遗传稳定性,符合封闭群动物的遗传结构特征,所选微卫星位点可用于五指山小型猪遗传多样性评估。 展开更多
关键词 微卫星 五指山小型 封闭群 多态性 遗传检测 杂合度
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复合麻醉对五指山小型猪长达8小时实验的麻醉效果观察 预览
8
作者 段天兵 张金霞 +2 位作者 向定成 宋瑞 孔冉冉 《中国比较医学杂志》 北大核心 2018年第1期80-85,95共7页
目的观察氯胺酮、速眠新II和咪达唑仑混合液诱导麻醉,氯胺酮和丙泊酚维持麻醉对实验时间长达8 h的五指山小型猪的全身麻醉效果。方法 18头体重(20.3±1.9)kg的五指山小型猪采用联合氯胺酮、速眠新II和咪达唑仑耳后肌肉注射诱导麻... 目的观察氯胺酮、速眠新II和咪达唑仑混合液诱导麻醉,氯胺酮和丙泊酚维持麻醉对实验时间长达8 h的五指山小型猪的全身麻醉效果。方法 18头体重(20.3±1.9)kg的五指山小型猪采用联合氯胺酮、速眠新II和咪达唑仑耳后肌肉注射诱导麻醉成功后,氯胺酮与丙泊酚混合液静脉持续泵入,观察诱导药物的起效时间和持续时间,以及小型猪进入麻醉状态后0、0.5、1、1.5、2、4、6、8 h的体温、血压、心率和呼吸等生理指标、反射活动和镇痛镇静肌松效果。结果 18头成功麻醉,4头术中死亡,原因分别为低血容量性休克、麻醉意外、左主干血栓和再灌注心律失常。麻醉全程中猪的镇痛、镇静、肌松效果显著,平均显效时间为(4.8±1.2)min,维持时间为(54.1±5.8)min。1~8 h间,小型猪的眼睑反射、角膜反射和肛门反射均迟钝或消失;麻醉全程体温均呈下降趋势,麻醉后1 h体温较0 h差异有显著性(P〈0.05),4 h降至最低点后维持稳定。血压逐步下降,因球囊阻断前降支血流诱发心肌梗死致使血压在2 h降至最低,2 h与0 h相比差异有显著性(P〈0.05)。球囊撤出后,血压和心率回升至相对稳定水平。呼吸虽有波动,但差异无显著性。结论氯胺酮、速眠新Ⅱ和咪达唑仑复合诱导麻醉,氯胺酮和丙泊酚联合维持麻醉方案具有操作简单、起效快,麻醉全程中循环系统和呼吸系统相对稳定,并且镇痛镇静肌松效果良好等优点,适合小型猪的全身麻醉。 展开更多
关键词 五指山小型 复合麻醉 全身麻醉 生理反射 生命体征
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血管内皮特异性表达人血栓调节蛋白转基因猪的研究
9
作者 田兴华 王梦佳 潘登科 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期556-563,共8页
生理条件下,血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)可与凝血酶结合成复合物,该复合物既可通过激活蛋白C达到抗凝和促纤溶作用;又可经内皮细胞胞吞,通过细胞内溶酶体降解、清除体内凝血酶。另外,TM可与凝血因子Xa特异性结合,抑制凝血酶原的... 生理条件下,血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)可与凝血酶结合成复合物,该复合物既可通过激活蛋白C达到抗凝和促纤溶作用;又可经内皮细胞胞吞,通过细胞内溶酶体降解、清除体内凝血酶。另外,TM可与凝血因子Xa特异性结合,抑制凝血酶原的活化,进而使凝血酶的生成速率明显降低。移植后,猪(Sus scrofa)的血管暴露在人(Homo sapiens)血液中,猪TM无法与人的凝血酶发生结合从而使凝血功能紊乱,因此,在猪体内表达人TM是目前解决凝血功能异常的一个新的思路。本研究制备了血管内皮特异性表达人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的转基因克隆猪,研究了hTM在五指山小型猪血管内皮细胞表达情况。利用Red重组系统从细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)上抓捕获得猪的内源TM启动子。PCR扩增获得hTM的c DNA及牛生长素Poly A(b GHp A)序列,依次酶切连入p Blue ScriptⅨSK(-),构建血管内皮特异性表达hTM的载体。获得的载体p BS-hTM-puro经XhoⅨ线性化,电转染五指山小型猪胎儿成纤维细胞,经1.0μg/m L嘌呤霉素筛选10~15 d得到339个转hTM基因的阳性克隆,取两个生长较好的克隆用于核移植,随后获得重构胚972枚。胚胎移植后产仔猪5头;其中4头经基因组DNA、组织RT-PCR检验为阳性,Western blot结果显示hTM为血管内皮细胞特异性表达。成功获得可特异性表达hTM转基因细胞系及转基因克隆猪,为解决异种器官移植后出现的凝血紊乱问题提供了资料基础。 展开更多
关键词 异种移植 血栓调节蛋白 特异性表达 五指山小型
五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植的术前检测 预览
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作者 白鸽 李霄 +3 位作者 张虹 黄敏 陶开山 窦科峰 《实用器官移植电子杂志》 2018年第5期355-358,共4页
目的本研究为了减少五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植手术的超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)和急性排斥反应(acute rejection,AR)发生率,进行全面术前检测。方法分别利用PCR技术和植物凝集素细胞染色对供体GGTAl基因敲... 目的本研究为了减少五指山小型猪-藏酋猴异种肝移植手术的超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)和急性排斥反应(acute rejection,AR)发生率,进行全面术前检测。方法分别利用PCR技术和植物凝集素细胞染色对供体GGTAl基因敲除类型进行鉴定;30只藏酋猴分别与五指山小型猪进行淋巴细胞毒实验;供受体ABO血型鉴定。结果供体为GGTA1基因敲除猪,GTKO猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)植物凝集素细胞染色未检测出荧光,表明GGTA1基因敲除成功,与基因型鉴定结果一致。通过淋巴细胞毒实验选定28#与供体PBMC毒性最小的藏酋猴做为备选受体。血型鉴定显示供受体血型一致。结论通过对GTKO五指山小型猪一藏酋猴异种肝移植的术前检测选定合适的受体,可有效减少异种移植HAR和AR的发生率。 展开更多
关键词 异种肝移植 α-1 3-半乳糖苷转移酶 五指山小型 藏酋猴 淋巴细胞毒实验
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五指山小型猪PPARγ2基因启动子多态性分析 预览 被引量:1
11
作者 潘金春 闵凡贵 王希龙 《中国比较医学杂志》 北大核心 2018年第9期21-26,共6页
目的 对五指山小型猪PPARγ2基因启动子调控区域多态性进行分析。方法 根据猪PPARγ2启动子调控区域2200 bp设计5对引物,对57头封闭群五指山小型猪的多态性进行检测,并用多种生物信息学软件对调控区域的启动子、转录因子结合位点、RNA... 目的 对五指山小型猪PPARγ2基因启动子调控区域多态性进行分析。方法 根据猪PPARγ2启动子调控区域2200 bp设计5对引物,对57头封闭群五指山小型猪的多态性进行检测,并用多种生物信息学软件对调控区域的启动子、转录因子结合位点、RNA二级结构、CpG岛进行预测分析。结果 筛选到9个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点,分别是:-1595T/C、-1534G/A、-1262C/A、-1220C/A、-1017A/G、-963A/G、-955G/A、-866A/G、-333G/A。SNPs都没有处在软件识别的启动子区域中,但-333G/A突变位于核心启动子(-656~-23 bp)区域。突变的SNP位点附近转录因子结合位点会发生改变,突变前后RNA二级结构最小自由能发生变化,其结构也发生显著变化。目标序列未找到CpG岛。结论 筛选到的五指山小型猪PPARγ2启动子调控区域SNPs可能对该基因的表达调控产生影响,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多
关键词 五指山小型 PPARΓ2 启动子 单核苷酸多态性 生物信息学
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人血清中非Gal异种抗体检测方法的探讨 预览 被引量:2
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作者 叶学军 卢希彬 +3 位作者 潘登科 蔡志明 牟丽莎 赵成江 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第2期132-137,共6页
目的 探讨人血清中抗非半乳糖(Gal)异种抗原抗体的最佳检测条件。方法选用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪的外周血单核细胞(PBMC)作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度(4.8%、16.7%、100%)和孵育时间... 目的 探讨人血清中抗非半乳糖(Gal)异种抗原抗体的最佳检测条件。方法选用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪的外周血单核细胞(PBMC)作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度(4.8%、16.7%、100%)和孵育时间(0.5、1.0、2.0、3.0、6.0 h)条件下,利用流式细胞仪检测GTKO猪的PBMC上结合IgM和IgG的水平。结果 在16.7%血清浓度下,孵育时间从0.5 h延长至3.0 h,能显著提高非Gal IgM结合PBMC的水平(P〈0.01),而IgG水平的提高则差异无统计学意义(P〉0.05)。提高血清浓度也可提高非Gal IgM的结合水平,采用100%的血清浓度孵育3 h,IgM结合PBMC水平最高且有统计学意义(P〈0.01)。采用100%的血清孵育6 h,IgG结合水平升高有统计学意义(P〈0.05)。延长孵育时间和提高血清浓度不会影响PBMC的活力。结论检测人血清中抗非Gal异种抗原抗体的最佳条件为每1×105个猪PBMC,采用100%人血清浓度孵育3 h检测IgM水平,或加100%人血清浓度孵育6 h检测IgG水平。这一条件的优化有助于筛选非Gal表达抗原低表达的供体猪。 展开更多
关键词 异种移植 外周血单核细胞 非Gal抗原 流式细胞术 IgM/IgG α-1 3-半乳糖基转移酶 基因敲除 五指山小型
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高脂诱导五指山小型猪动脉粥样硬化模型的建立及Lp-PLA2的表达调控 预览 被引量:3
13
作者 汪晶 潘永明 +4 位作者 徐孝平 蔡月琴 陈方明 蔡兆伟 陈民利 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期194-200,共7页
目的高脂诱导建立五指山小型猪动脉粥样硬化(AS)模型,观察脂蛋白相关磷脂酶A_2(Lp-PLA_2)在AS模型血浆和斑块中的表达变化。方法将10只五指山小型猪随机分为正常对照(Ctr)组4只饲喂普通饲料、AS模型(AS model)组6只饲喂高脂饲料... 目的高脂诱导建立五指山小型猪动脉粥样硬化(AS)模型,观察脂蛋白相关磷脂酶A_2(Lp-PLA_2)在AS模型血浆和斑块中的表达变化。方法将10只五指山小型猪随机分为正常对照(Ctr)组4只饲喂普通饲料、AS模型(AS model)组6只饲喂高脂饲料,连续造模24周。造模24周时,空腹取前腔静脉血测定总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、甘油三酯(TG)、C-反应蛋白(CRP)、Lp-PLA_2活性和成分的变化,并取主动脉进行油红O染色以及取腹主动脉血管行HE染色和IL-6免疫组化染色,观察血管脂质沉积和斑块病理以及IL-6蛋白表达变化。采用RT-PCR和Western Blot法观察腹主动脉组织中Lp-PLA_2mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常对照组比,AS模型组体重、体质量指数(BMI)、TC、LDL-C、HDL-C、CRP、Lp-PLA_2活性和成分均显著升高(P〈0.05,P〈0.01),同时主动脉脂质沉积明显(P〈0.01)和AS斑块形成,腹主动脉组织中Lp-PLA_2mRNA和蛋白表达以及IL-6蛋白表达均显著升高(P〈0.05)。结论长期高脂饮食24周能诱发五指山小型猪AS,且Lp-PLA_2在参与血管炎症和AS斑块形成中发挥了关键作用。 展开更多
关键词 五指山小型 动脉粥样硬化 脂蛋白相关磷脂酶A2 炎症
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SCARB1介导异种肝移植术后受体凝血功能调节障碍的研究 预览
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作者 李霄 纪洪辰 +5 位作者 窦科峰 潘登科 陈辉 周亮 陶开山 刘正才 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第2期115-120,共6页
目的探讨清道夫受体B组1型分子(SCARB1)在异种肝移植手术前、后移植肝组织内的表达变化及其与受体凝血功能调节障碍的关系。方法以α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪为供体,藏酋猴为受体,建立异种异位辅助性肝移植模... 目的探讨清道夫受体B组1型分子(SCARB1)在异种肝移植手术前、后移植肝组织内的表达变化及其与受体凝血功能调节障碍的关系。方法以α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪为供体,藏酋猴为受体,建立异种异位辅助性肝移植模型,并收集移植手术前、后移植肝脏组织标本。以胶原酶消化法提取原代猪肝细胞,免疫磁珠分离人外周血单核细胞,将两者混合培养并加入人血浆,建立异种肝移植术后凝血功能调节障碍的细胞模型。以实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测并对比组织及细胞标本中SCARB1的信使核糖核酸(mR NA)及蛋白质表达情况。最后在细胞水平以慢病毒载体干预SCARB1的表达,并检测凝血时间以验证其对凝血功能的影响。结果与术前组织标本比较,术后移植肝组织内SCARB1的mR NA和蛋白表达均显著下调(均为P〈0.05)。在细胞模型中,与未干预猪肝细胞比较,经人单核细胞共培养后的猪肝细胞内SCARB1的mR NA和蛋白表达也出现显著下调(均为P〈0.05)。与干预组比较,应用慢病毒过表达猪肝细胞内SCARB1的表达后,凝血时间显著延长(均为P〈0.05)。结论移植肝组织内SCARB1的下调是介导受体凝血功能调节障碍的重要原因之一,对其干预有助于纠正异种肝移植术后受体凝血功能调节障碍。 展开更多
关键词 清道夫受体B组1型分子 异种移植 肝移植 凝血功能 五指山小型 藏酋猴
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敲除α-1,3-半乳糖基转移酶基因五指山小型猪的繁育和鉴定 预览 被引量:2
15
作者 龙川 高景波 +5 位作者 唐雨婷 杜敏杰 石宁宁 冯冲 鲁琳 潘登科 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第2期121-126,共6页
目的 总结α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)五指山小型猪的繁育和鉴定。方法统计GTKO五指山小型猪的繁育结果及窝产仔数;采用聚合酶链反应(PCR)技术对GTKO五指山小型猪GGTA1基因敲除类型进行鉴定;采用荧光显微镜和流... 目的 总结α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)五指山小型猪的繁育和鉴定。方法统计GTKO五指山小型猪的繁育结果及窝产仔数;采用聚合酶链反应(PCR)技术对GTKO五指山小型猪GGTA1基因敲除类型进行鉴定;采用荧光显微镜和流式细胞术对人、野生型五指山小型猪、GTKO五指山小型猪外周血单核细胞(PBMC)的α-1,3-半乳糖(αGal)表型进行检测;比较GTKO五指山小型猪与野生型五指山小型猪血常规指标的差异。结果 GGTA1基因型的遗传符合孟德尔定律;GGTA1-/-猪的PBMC流式检测无荧光表达,与基因型鉴定结果一致;GTKO五指山小型猪雌性猪初产窝产仔数为(6.8±1.8)只,经产窝产仔数为(8.3±2.2)只;血常规检测的各项指标与野生型五指山小型猪差异均无统计学意义(均为P〉0.05)。结论 连续2代GTKO五指山小型猪遗传稳定,繁殖力正常。GTKO五指山小型猪可作为异种器官移植研究的可靠供体。 展开更多
关键词 α-1 3-半乳糖基转移酶 基因敲除 五指山小型 繁殖性能 α-1 3-半乳糖表型 外周血单核细胞
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哺乳动物近交系资源创新百年 预览 被引量:4
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作者 冯书堂 高倩 刘岚 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期181-195,共15页
21世纪是生物技术大发展、竞争日益激烈的新时代,而资源更是竞争的核心。驱动资源创新已列为当代世界各国首要实现的任务和目标,而动物资源创新是其主要内容之一。近年来中国政府出巨资开展转基因动物专项研究,将鼠、猪等列入"科技攻... 21世纪是生物技术大发展、竞争日益激烈的新时代,而资源更是竞争的核心。驱动资源创新已列为当代世界各国首要实现的任务和目标,而动物资源创新是其主要内容之一。近年来中国政府出巨资开展转基因动物专项研究,将鼠、猪等列入"科技攻关、基础性研究、863、973"等项目,足以彰显中国对动物资源创新的高度重视并已付诸实施。 展开更多
关键词 近交系 资源创新 五指山小型 动物资源 五指山 实验动物 专项研究 转基因动物 杂合度 纯合度
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五指山小型猪在心血管系统疾病建模中的应用 预览 被引量:9
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作者 田玉龙 钟红珊 《介入放射学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第4期363-366,共4页
五指山小型猪是中国特有的、具有自主知识产权的高度近交猪种,具有遗传性稳定、体型小、体重轻、抗逆性强等特点,因组织器官结构及生理生化指标与人类相似,已越来越广泛地应用于医学研究领域。在我国,五指山小型猪被用来构建高脂血症模... 五指山小型猪是中国特有的、具有自主知识产权的高度近交猪种,具有遗传性稳定、体型小、体重轻、抗逆性强等特点,因组织器官结构及生理生化指标与人类相似,已越来越广泛地应用于医学研究领域。在我国,五指山小型猪被用来构建高脂血症模型、动脉粥样硬化模型、急慢性心肌缺血致急性心肌梗死模型和心力衰竭模型、心脏骤停模型、心肺复苏后心肌代谢评估等心血管疾病模型。五指山小型猪在心血管系统解剖及生物学行为与人高度相似,将会在未来心血管疾病研究中发挥日益重要的作用。 展开更多
关键词 五指山小型 心血管系统疾病 动物模型 医学研究
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GGTA1-/-五指山小型猪SLAI类基因分子特征及与HLA相似性分析 预览
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作者 蒋应弟 曾国敏 +4 位作者 石宁宁 李西睿 纪慧丽 潘登科 滚双宝 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期375-380,共6页
目的明晰α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除(GGTA1-/-)的五指山小型猪SLA经典I类基因分子结构特征及其与人HLA的相似性,对研究异种器官移植细胞性排斥反应具有重要意义。方法采集6头祖代GGTA1-/-五指山小型猪耳组织,利用RT-PCR对SLA I类... 目的明晰α-1,3半乳糖基转移酶基因敲除(GGTA1-/-)的五指山小型猪SLA经典I类基因分子结构特征及其与人HLA的相似性,对研究异种器官移植细胞性排斥反应具有重要意义。方法采集6头祖代GGTA1-/-五指山小型猪耳组织,利用RT-PCR对SLA I类基因(SLA-1、SLA-3、SLA-2)扩增、克隆及测序,对序列进行BLAST分析,并采用生物信息学方法对SLA I类基因分子结构特征及其与人HLA的同源性进行分析。结果测序分析表明,共获得6条等位基因序列,其中4条为已公布的等位基因(SLA-1*0703、SLA-2*1102、SLA-3*0401、SLA-3*0403),另2条为新等位基因(SLA-1*0401wz01、SLA-2*11wz01)。五指山小型猪与人HLA同源性为70.5%~72.1%。SLA-1*0401wz01、SLA-1*0703、SLA-2*11wz01、SLA-2*1102和SLA-3*0401的CD8+分子识别的关键结合域与人HLA氨基酸序列比对,均仅在位点225、228处发生了突变(T→S、T→M),其他位点高度保守。SLA-2*11wz01和SLA-2*1102与人HLA I类基因NK细胞抑制性受体(killer inhibitory receptor,KIR)结合区氨基酸同源性较高,在NKTA-1亚型结合域内仅有1个氨基酸差异,而在NKTA-2和NKTA-3亚型结合域内有2个氨基酸差异。结论从免疫细胞介导的异种排斥反应角度出发,GGTA1-/-五指山小型猪SLA I类基因氨基酸序列与人HLA高度相似,可作为未来猪-人异种器官移植的良好供体之一。 展开更多
关键词 GGTA1-/- 五指山小型 SLA 异种移植 免疫排斥
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猪胰岛素启动子调控EGFP表达载体的优化及体外验证 预览
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作者 于淑珍 冯冲 +2 位作者 石宁宁 宋小凤 潘登科 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第6期34-39,I0005共7页
目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子(PIP,包含5'调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb)构建表达载体,连接PIP和E... 目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子(PIP,包含5'调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb)构建表达载体,连接PIP和EGFP的酶切位点HindⅢ设计在起始密码子前,命名为PIP-Hind IIIEGFP。鉴于酶切位点的插入位置可能会影响外源基因的表达效率,对载体进行了优化:将Hind III酶切位点删除,实现PIP和EGFP无缝连接,载体命名PIP-EGFP;将第一内含子3'端的内含子剪接受体位点(splicing acceptor site,SA)突变为Hind III内切酶识别位点,命名为PIP-SA(M)-EGFP。三种载体分别电转染小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞、猪耳成纤维细胞以及猪肾细胞,48 h后通过荧光强度、流式分析、RT-PCR及Western blot检测,验证载体的表达效率。结果转染细胞后,三种载体都仅在MIN-6胰岛β细胞表达绿色荧光。RT-PCR及其产物测序结果显示三种载体的胰岛素启动子第一内含子的剪切存在差异:载体PIP-Hind III-EGFP和PIP-EGFP的内含子存在剪切和不剪切两种情况,剪切不稳定;载体PIP-SA(M)-EGFP的SA位点突变后内含子不剪切,流式细胞及Western blot检测显示,与另外两种载体相比,该载体目的蛋白的表达量最高。结论通过突变胰岛素启动子第一内含子的3'端的剪接受体位点,成功获得了胰岛β细胞的高效表达载体,可用于制备胰岛特异表达外源基因的转基因猪。 展开更多
关键词 胰岛素启动子PIP 特异性表达 小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞 EGFP 五指山小型
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应用半乳糖表型差异高效筛选α-1,3半乳糖苷转移酶基因缺失的猪成纤维细胞 预览
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作者 岳成鹤 曹随忠 +5 位作者 李西睿 冯冲 龙川 余树民 储明星 潘登科 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2014年第1期1-7,共7页
【目的】筛选α-1,3半乳糖苷转移酶(α1,3galactosyl transferase,GGTA1)基因缺失的猪成纤维细胞。【方法】用同源重组载体pBS-GGTA1-SKO和pBS-GGTA1-DKO电转染GGTA1单等位基因敲除(GGTA1+/-)的五指山小型猪胎儿成纤维细胞,利用磁... 【目的】筛选α-1,3半乳糖苷转移酶(α1,3galactosyl transferase,GGTA1)基因缺失的猪成纤维细胞。【方法】用同源重组载体pBS-GGTA1-SKO和pBS-GGTA1-DKO电转染GGTA1单等位基因敲除(GGTA1+/-)的五指山小型猪胎儿成纤维细胞,利用磁激活细胞分选(MACS)、MACS联合流式细胞术(FACS)、TcdA联合FACS等3种方法进行细胞筛选;对MACS筛选获得的单细胞克隆进行PCR和FACS鉴定,对MACS联合FACS、TcdA联合FACS获得的细胞集落进行PCR鉴定。【结果】经MACS筛选获得了11个细胞克隆,经鉴定2个是GGTA1-/-细胞克隆,阳性率为18.2%;MACS联合FACS筛选获得了3个细胞克隆,经鉴定无GGTA1-/-细胞克隆,阳性率为0;TcdA联合FACS筛选获得了3个细胞克隆,经鉴定均为GGTA1-/-细胞克隆,阳性率为100%。【结论】MACS法筛选和TcdA联合FACS法筛选这2种方法均可以高效筛选出GGTA1双等位基因缺失的猪成纤维细胞,可用于进一步制备供异种器官移植的基因修饰小型猪。 展开更多
关键词 五指山小型 基因缺失 GGTA1基因 成纤维细胞
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