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家畜防御素体内组织表达及体外表达研究进展 预览
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作者 魏薇 李海军 +2 位作者 王鑫 张齐政 曹贵方 《畜牧与饲料科学》 2019年第4期52-57,共6页
防御素是广泛分布于动物、植物、昆虫体内的一类富含半胱氨酸的阳离子内源性抗菌肽,在动物免疫调节及植物自身防御方面扮演着重要的角色。对防御素的概念、类型、结构特征、作用机理进行了综述,总结了防御素在牛、马、羊、猪、鹿、骆驼... 防御素是广泛分布于动物、植物、昆虫体内的一类富含半胱氨酸的阳离子内源性抗菌肽,在动物免疫调节及植物自身防御方面扮演着重要的角色。对防御素的概念、类型、结构特征、作用机理进行了综述,总结了防御素在牛、马、羊、猪、鹿、骆驼等家畜体内组织表达及体外表达研究进展,并对防御素在未来生物制药和畜牧饲料生产方面的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 家畜 防御素 组织表达分布 体外表达
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Methylocorus sp.MP 688菌株glyA基因体外表达及功能研究 预览
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作者 孙宇桐 邹琪琪 +4 位作者 孙菊鲜 孙晓宇 齐姗姗 辛琪 葛欣 《浙江农业科学》 2018年第6期1010-1014,共5页
Methylocorus sp.MP 688菌株具有高产吡咯喹啉醌的特性而应用于工业生产当中。分析其全基因组及代谢通路,发现在C1固定中丝氨酸循环起到重要的生理作用。为了研究丝氨酸循环中glyA基因是否具有表达丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxyme... Methylocorus sp.MP 688菌株具有高产吡咯喹啉醌的特性而应用于工业生产当中。分析其全基因组及代谢通路,发现在C1固定中丝氨酸循环起到重要的生理作用。为了研究丝氨酸循环中glyA基因是否具有表达丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxymethyltransferase,SHMT)活性及基因缺失是否会对菌株生命活动产生影响。采用体外表达方式,纯化并检测gly A基因产物SHMT酶是否具有催化活性。通过双交换实验进行glyA基因敲除,探究glyA基因缺失是否会对菌株产生影响。结果表明,glyA基因成功在体外表达,双交换敲除实验证明glyA基因作为关键基因存在,其缺失或可致死。此外,SHMT酶在35℃,pH值7.5缓冲体系中酶促效率最高,还原剂β-巯基乙醇对SHMT酶催化活性具有促进作用。 展开更多
关键词 glyA基因 丝氨酸羟甲基转移酶 体外表达 双交换敲除
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用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统的建立
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作者 温机智 魏玲 +4 位作者 王贞 贾双双 付涌水 罗广平 姬艳丽 《中国输血杂志》 2018年第11期1240-1242,共3页
目的建立用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统。方法从Rh阴性献血者的外周血中分离单个核细胞,并从中进一步分离、培养有核红细胞,同时使用含有野生型RHD等位基因和绿色荧光蛋白的慢病毒表达质粒和包装质粒共转染HEK 293细胞... 目的建立用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统。方法从Rh阴性献血者的外周血中分离单个核细胞,并从中进一步分离、培养有核红细胞,同时使用含有野生型RHD等位基因和绿色荧光蛋白的慢病毒表达质粒和包装质粒共转染HEK 293细胞包装慢病毒,收获包装病毒颗粒后感染体外培养的Rh D阴性有核红细胞,诱导有核红细胞分化,最后使用针对9种不同D抗原表位的15种单克隆抗体对红细胞Rh D抗原表位进行流式分析。结果用携带野生型RHD基因的慢病毒感染体外培养的Rh D阴性有核红细胞,成功表达了抗原表位完整的D抗原,Rh D阴性有核红细胞的感染效率为51. 7%。结论成功建立了用于研究RHD等位基因的有核红细胞体外表达系统,可进一步应用于弱D、部分D和D放散型相关的RHD突变型等位基因的体外表达研究。 展开更多
关键词 RHD等位基因 有核红细胞 慢病毒感染 体外表达 D抗原表位
重组SIRPα1的体外表达及其在红细胞CD47-SIRPα信号通路研究中的应用
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作者 叶璐夷 杨启修 +7 位作者 夏荣伟 荀春志 赵俸涌 张嘉敏 李勤 王晨 向东 朱自严 《中国输血杂志》 2018年第9期934-937,共4页
目的获得野生型信号调节蛋白α1(SIRPα1)功能结构域重组蛋白,以用于研究正常或异常红细胞的吞噬和清除中CD47-SIRPα信号通路的作用。方法全基因合成人源野生型SIRPα1 IgV结构域编码区;将合成片段构建入携带组氨酸(His)标签的pET-... 目的获得野生型信号调节蛋白α1(SIRPα1)功能结构域重组蛋白,以用于研究正常或异常红细胞的吞噬和清除中CD47-SIRPα信号通路的作用。方法全基因合成人源野生型SIRPα1 IgV结构域编码区;将合成片段构建入携带组氨酸(His)标签的pET-21a大肠杆菌载体,获得重组表达载体。使用大肠杆菌BL21 (DE3)细胞体外表达重组SIRPα1,并通过亲和层析法纯化;利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组SIRPα1;采用基于ELISA的红细胞结合试验评估2名Rh缺失表型献血者与正常Rh表型个体对照在红细胞结合水平的差异;流式细胞术检测红细胞CD47表达;采用单因素方差分析对数据做统计分析。结果成功构建重组表达载体,纯化获得野生型重组SIRPα1。成功建立了基于ELISA的红细胞结合试验方法并应用于评估重组SIRPα1与红细胞的结合。伴随CD47表达量的明显降低,Rh缺失表型个体的红细胞和正常个体相比,其与重组SIRPα1的结合能力下降。结论 CD47-SIRPα信号通路可能在Rh缺失表型红细胞的清除中发挥了作用。 展开更多
关键词 信号调节蛋白α1(SIRPα1) 重组蛋白 CD47-SIRPα信号通路 体外表达 红细胞结合试验
眼镜蛇神经毒素研究进展 预览 被引量:3
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作者 蒋世强 潘能庆 +5 位作者 鄢航 贾银海 苏惠梅 刘伟 蒋和生 杨秀荣 《现代农业科技》 2017年第4期255-256,共2页
眼镜蛇毒神经毒素(Cobrotoxin,CT)是一种短链神经毒素,最早是从台湾眼镜蛇蛇毒中分离得到的。因其在镇痛和抗癌方面有着显著的效果而成为研究的热点,本文通过对近年来CT的结构、药理作用、镇痛、抗癌研究进展进行综述,旨在为各位研究... 眼镜蛇毒神经毒素(Cobrotoxin,CT)是一种短链神经毒素,最早是从台湾眼镜蛇蛇毒中分离得到的。因其在镇痛和抗癌方面有着显著的效果而成为研究的热点,本文通过对近年来CT的结构、药理作用、镇痛、抗癌研究进展进行综述,旨在为各位研究者提供基础参考资料。 展开更多
关键词 眼镜蛇 神经毒素 药理作用 体外表达
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灰飞虱水通道蛋白基因克隆及其与杀虫剂代谢的关系 预览
6
作者 周晨 韩召军 《南京农业大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1014-1022,共9页
[目的]水通道蛋白是细胞膜内嵌蛋白超家族的主要成员,具有传输水分子以及小分子化合物进出细胞膜的功能,本研究目的是分析重要农业害虫灰飞虱体内水通道蛋白功能及其与杀虫剂代谢之间的关系。[方法]根据转录组数据,采用PCR和RACE技... [目的]水通道蛋白是细胞膜内嵌蛋白超家族的主要成员,具有传输水分子以及小分子化合物进出细胞膜的功能,本研究目的是分析重要农业害虫灰飞虱体内水通道蛋白功能及其与杀虫剂代谢之间的关系。[方法]根据转录组数据,采用PCR和RACE技术对灰飞虱体内的水通道蛋白基因进行了克隆,并利用进化树对获得的基因进行亲缘关系的分析验证,利用实时荧光定量PCR技术分析这些基因在灰飞虱抗、感品系间的表达量差异,利用体外表达技术分析其转运活性。[结果]从灰飞虱体内克隆获得了6个灰飞虱水通道蛋白基因全长序列,分别命名为LsAQPl、LsAQP2、LsAQP3、LsAQP4、LsAQP5和LsAQP6,其中LsAQP6在灰飞虱的不同抗性品系里均高表达。体外功能表达试验显示:LsAQP6对水具有很强的转运能力,对灭多威也具有显著的转运能力,但对甘油和杀虫双的转运能力不显著。[结论]EsAQP6在灰飞虱体内对水和某些小分子农药具有转运作用。 展开更多
关键词 灰飞虱 水通道蛋白 基因克隆 体外表达 杀虫剂转运
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木薯干旱胁迫响应CC类谷氧还蛋白基因的筛选与体外表达分析 被引量:1
7
作者 王雪 阮孟斌 +3 位作者 王斌 郭鑫 于晓玲 彭明 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2017年第4期1204-1211,共8页
CC类谷氧还蛋白(CC-type glutaredoxins)是高等植物中所特有的一类谷氧还蛋白,模式植物中的研究表明,CC类GRX可以与TGA转录因子互作,在植物器官发育及响应环境胁迫过程中起重要的调控作用。基因差异表达分析结果表明,木薯中有多个CC类... CC类谷氧还蛋白(CC-type glutaredoxins)是高等植物中所特有的一类谷氧还蛋白,模式植物中的研究表明,CC类GRX可以与TGA转录因子互作,在植物器官发育及响应环境胁迫过程中起重要的调控作用。基因差异表达分析结果表明,木薯中有多个CC类GRX基因在叶片中的表达受干旱胁迫的诱导。为了进一步研究木薯中CC类GRX蛋白与TGA的互作,本研究选择了其中的Me GRX058和Me GRX785这两个基因作进一步体外蛋白表达分析。理化性质及二级结构预测分析表明Me GRX058和Me GRX785蛋白分子量均在11 k D左右,具有谷氧还蛋白以及CC类谷氧还蛋白典型的结构域。通过构建酵母表达载体及植物表达载体,利用HA-Tag和GFP分别对Me GRX058和Me GRX785蛋白进行标记,在酵母和转基因木薯中进行表达,随后对融合蛋白的表达进行了Western blot检测。结果表明Me GRX058和Me GRX785成功在酵母和转基因木薯中表达,为进一步筛选它们的互作蛋白、研究其结构与功能做铺垫。 展开更多
关键词 木薯 干旱胁迫响应 CC类GRX基因 体外表达 WESTERN BLOT
In vitro expression and analysis of the 826 human G protein-coupled receptors
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作者 Xuechen Lv Junlin Liu +14 位作者 Qiaoyun Shi Qiwen Tan Dong Wu John J. Skinner Angela L. Walker Lixia Zhao Xiangxiang Gu Na Chen Lu Xue Pei Si Lu Zhang Zeshi Wang Vsevolod Katritch Zhijie Liu Raymond C. Stevens 《蛋白质与细胞:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第5期325-337,共13页
G 联合蛋白质的受体(GPCR ) 涉及他们为 transducing 负责的所有人的生理的系统细胞外的信号进房间。GPCR 包括光,荷尔蒙,和类脂化合物响应刺激的一个多样的数组发信号,在这些信号影响下游的串联影响健康和疾病状态的地方。然而,尽... G 联合蛋白质的受体(GPCR ) 涉及他们为 transducing 负责的所有人的生理的系统细胞外的信号进房间。GPCR 包括光,荷尔蒙,和类脂化合物响应刺激的一个多样的数组发信号,在这些信号影响下游的串联影响健康和疾病状态的地方。然而,尽管有他们是的重要性治疗学的目标,仅仅 30 GPCR 的详细分子的结构迄今为止被决定了。对他们的结构决心的关键挑战是足够的蛋白质表示。这里,我们用二不同熔化构造为所有 826 人的 GPCR 在一个昆虫房间表达式系统报导蛋白质表示的 quantification。表示特征在总数并且在每五个不同亚科之中被分析。这些数据能被用来识别与在不同熔化构造之间并且在不同 GPCR 家庭之间的 GPCR 表示有关的趋势,并且为未来结构决心可行性优先考虑铅候选人。 展开更多
关键词 G蛋白偶联受体 体外表达 分子结构 信号转导 昆虫细胞表达 蛋白质表达 融合蛋白 受体表达
口服疫苗背后的真相——黏膜免疫系统的组成及疫苗应用 预览
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作者 柏丽华 许宝华 《今日养猪业》 2016年第2期26-28,共3页
最近有公司推出"含疫苗的教槽料"新产品,实现"不打针也可免疫"的功能,使得教槽料具有营养、免疫、保健功能,我们追踪该公司,被告知是使用乳酸菌作为抗原递送载体,在三种乳酸菌质粒中分别插入传染性胃肠炎、流行性腹泻和圆环病毒的抗... 最近有公司推出"含疫苗的教槽料"新产品,实现"不打针也可免疫"的功能,使得教槽料具有营养、免疫、保健功能,我们追踪该公司,被告知是使用乳酸菌作为抗原递送载体,在三种乳酸菌质粒中分别插入传染性胃肠炎、流行性腹泻和圆环病毒的抗原,并在体外表达产物后,与一些酶和肽制剂添加入教槽料中,原理就是口服了含乳酸菌、 展开更多
关键词 教槽料 口服疫苗 传染性胃肠炎 流行性腹泻 圆环病毒 体外表达 重组疫苗 蓝耳病 表达产物 养猪人
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慢病毒介导EGFP在小鼠胚胎的体外表达 预览
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作者 许诺 贾俊龙 +4 位作者 王维 朱玉博 王雪晗 白文林 罗光彬 《沈阳农业大学学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期559-566,共8页
为探讨3种感染方法对不同发育阶段胚胎中EGFP基因表达影响,利用透明带下注射法、胞质内注射法及透明带切口与慢病毒共培养法感染1-细胞期小鼠胚胎,分别提取以上3种方法感染慢病毒的不同发育阶段胚胎的EGPF基因,并以其为模板,扩增出630bp... 为探讨3种感染方法对不同发育阶段胚胎中EGFP基因表达影响,利用透明带下注射法、胞质内注射法及透明带切口与慢病毒共培养法感染1-细胞期小鼠胚胎,分别提取以上3种方法感染慢病毒的不同发育阶段胚胎的EGPF基因,并以其为模板,扩增出630bp的EGPF基因片段。结果表明:慢病毒转染后在不同发育阶段的胚胎中,均扩增出EGFP目的片段(630bp)。当透明带下注射病毒时,90p L注射组(C组)和60p L注射组(B组)的EGFP基因阳性率显著优于30p L注射组(A组)(p〈0.05)。当胞质注射病毒时,C组显著优于其他组(p〈0.05),但胚胎发育的后期A组和B组差异不显著(p〉0.05)。透明带做切口的胚胎与含不同浓度慢病毒共培养时,从1-细胞期到4-细胞期胚胎为止组间差异不显著(p〉0.05),而胚胎发育的后期2×10^3cfu·μL-1组和3×10^3cfu·μL-1组均极显著优于1×10^3cfu·μL-1组(p〈0.01),但2×10^3cfu·μL-1组和3×10^3cfu·μL-1组间差异不显著(p〉0.05)。透明带下注射慢病毒与胞质内注射慢病毒时,注射90p L(病毒滴度3×10^3cfu·μL-1)组的EGFP基因体外表达效果最好;透明带做切口的胚胎与含不同浓度慢病毒共培养时,在3×10^3cfu·μL-1滴度培养液中培养的EGFP基因体外表达效果最好。 展开更多
关键词 慢病毒 胚胎 EGFP 体外表达
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非洲猪瘟病毒p54蛋白的表达及单抗制备 预览 被引量:1
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作者 冯春燕 宋晓晖 +6 位作者 仇松寅 王淑娟 王彩霞 张永宁 邓俊花 吴绍强 林祥梅 《中国动物检疫》 CAS 2016年第5期80-84,共5页
为制备非洲猪瘟病毒p54蛋白的单克隆抗体,本研究扩增p54蛋白的胞外区编码基因,分别克隆到p ET30a和p GEX-6p-1中,构建了p54-p ET30a和p54-p GEX-6p-1重组质粒;将质粒分别转化到大肠杆菌BL21中,表达C末端带6个His、N端带有GST的p54重组蛋... 为制备非洲猪瘟病毒p54蛋白的单克隆抗体,本研究扩增p54蛋白的胞外区编码基因,分别克隆到p ET30a和p GEX-6p-1中,构建了p54-p ET30a和p54-p GEX-6p-1重组质粒;将质粒分别转化到大肠杆菌BL21中,表达C末端带6个His、N端带有GST的p54重组蛋白;利用亲和层析的方法,富集和纯化带His标签的p54蛋白;以带His标签的p54蛋白为抗原,免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体;以带有GST标签的p54蛋白为抗原,对制备的单抗进行特异性验证。结果显示:大肠杆菌能高效表达带His标签和GST标签的非洲猪瘟p54蛋白;His标签的p54蛋白免疫BALB/C小鼠后,得到了3株单克隆抗体;Western blot结果表明,3株单克隆抗体能与带有GST标签的p54蛋白相互反应。本研究成功制备了p54的单克隆抗体,为进一步开展非洲猪瘟ELISA、Western blot和细胞免疫荧光检测技术的开发研究奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p54蛋白 体外表达 单克隆抗体
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人血小板膜糖蛋白ITGB3基因终止突变C.1476G〉A的体外表达研究
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作者 刘瑛 许先国 +5 位作者 陈舒 洪小珍 陶苏丹 何吉 朱发明 吕杭军 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期17-21,共5页
目的对ITGB3基因新的终止突变c.1476G〉A进行体外表达研究,以阐明其功能。方法应用体外定点诱变技术构建突变型ITGB3e.1476G〉AcDNA的真核表达载体,转化感受态细胞,提取质粒后测序验证。采用非脂质体介导重组质粒转染中国仓鼠卵巢... 目的对ITGB3基因新的终止突变c.1476G〉A进行体外表达研究,以阐明其功能。方法应用体外定点诱变技术构建突变型ITGB3e.1476G〉AcDNA的真核表达载体,转化感受态细胞,提取质粒后测序验证。采用非脂质体介导重组质粒转染中国仓鼠卵巢癌细胞株(Chinesehamsterovariancancer,CHO)细胞,经G418筛选获取稳定表达细胞株。采用实时荧光定量PCR、Western印迹和流式细胞术分别检测CHO稳定表达株ITGB3基因的mRNA表达和血小板膜糖蛋白llIa(glycoproteinIIIa,GPⅢa)糖蛋白水平。结果成功构建野生型和突变型ITGB3cDNA的真核表达载体,转染筛选后分别获得了稳定表达的CHO细胞株。突变型细胞株中CD61抗原表达量仅为野生型的37%,而ITGB3mRNA转录水平为野生型的6%。Western印迹结果显示,野生型细胞株稳定表达完整的GPⅢa蛋白,而突变型CHO细胞株无完整的GPⅢa蛋白表达。结论ITGB3c.1476G〉A终止突变可导致ITGB3基因的转录水平降低,影响GPⅢa蛋白合成及CD61抗原的表达水平。 展开更多
关键词 ITGB3基因 血小板膜糖蛋白HIa 终止突变 体外表达
Extract from Phyllanthus urinaria L. Inhibits Hepatitis B Virus Replication and Expression in Hepatitis B Virus Transfection Model in Vitro
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作者 吴莹 碌颖 +3 位作者 李姝玉 宋月晗 郝钰 王谦 《中国结合医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2015年第12期938-943,共6页
目的将从 Phyllanthus urinaria L 探索摘录的效果。在肝炎 B 上,在 HBV 短暂 transfection 的病毒(HBV ) 复制和表示在 vitro 当模特儿。真核细胞的表示 plasmid pHBV1.1,包含 HBV 的第 1.1-fold-overleng 染色体,是进人的 hepatoma... 目的将从 Phyllanthus urinaria L 探索摘录的效果。在肝炎 B 上,在 HBV 短暂 transfection 的病毒(HBV ) 复制和表示在 vitro 当模特儿。真核细胞的表示 plasmid pHBV1.1,包含 HBV 的第 1.1-fold-overleng 染色体,是进人的 hepatoma 房间的 transfected 的方法排队, HepG2,建立并且估计 HBV 短暂 transfection 模型。从 Phyllanthus urinaria L 的摘录。在不同集中被准备,甲基 thiazolyl tetrazolium 被用来检测这药的最大的无毒的集中。从 Phyllanthus urinaria L 的摘录。分别地被增加进 transfected 房间,在 0.8, 0.2 和 0.05 g/L 的集中。在药申请以后的四天,连接酶的免疫吸着剂试金被用来在上层清液检测 HBsAg 的集中,南部的污点被使用分析 HBV DNA 水平,和西方的污点被用来在房间检测 HBcAg 的表达式。在进 HepG2 房间的 plasmid pHBV1.1 的 transfection 以后的结果,在上层清液的 HBsAg 的集中作为与正常房间的相比显然被增加( P < 0.05 ),并且所有期望的 HBV replicative 中介被南部的污点分析证实,它保证了 HBV 短暂 transfection 模型的成功的建立。在在 0.8 和 0.2 g/L 的集中的药的申请以后, HBsAg 的水平显然在上层清液被减少,作为与病毒组的相比(P < 0.05 ) ;南部的污点证明 HBV rc DNA 的水平, ds DNA, ss DNA 显然与病毒组的相比被减少(P < 0.01 ) ;西方的污点表明在药组的 HBcAg 的表示显然被禁止,作为与病毒组的相比(P < 0.01 ) 。结论从 Phyllanthus urinaria L 的摘录。在 HBV transfected 房间的 HBV 的显然禁止的复制和表示在 vitro 排队,因此施加特殊 anti-HBV 效果。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 瞬时转染 体外表达 叶下珠 提取物 模型 SOUTHERN杂交 BLOT分析
KISS-1基因对结肠癌细胞株HT29体外表达的影响
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作者 刘虹 孔刚 +3 位作者 龚志军 卿笃桔 李恩就 黎飞 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2708-2711,共4页
目的 观察KISS-1基因对结肠癌细胞株HT29体外表达的作用和对其生物学功能的影响.方法 通过基因转染法使KISS-1在结肠癌细胞株HT29中稳定表达,应用噻唑蓝(MTT)法和Transwell侵袭实验检测KISS-1表达对结肠癌细胞株HT29的增殖和侵袭能力... 目的 观察KISS-1基因对结肠癌细胞株HT29体外表达的作用和对其生物学功能的影响.方法 通过基因转染法使KISS-1在结肠癌细胞株HT29中稳定表达,应用噻唑蓝(MTT)法和Transwell侵袭实验检测KISS-1表达对结肠癌细胞株HT29的增殖和侵袭能力的作用和影响;通过免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测KISS-1基因mRNA在体外结肠癌细胞株HT29中的表达水平,并用Real-time PCR测定转染后结肠癌细胞株HT29中c-fos、c-jun mRNA水平表达变化,并通过显微镜、透射电镜等观察凋亡细胞的形态学改变.结果 (1)Real-time PCR和免疫细胞组织化学证实转染后结肠癌细胞中有KISS-1稳定表达.(2)MTt法表明:培养0、24 h时各组HT29细胞数差异无统计学意义(P>0.05),48 h后,随着培养时间延长,转染组HT29细胞数明显低于空白对照组与阴性对照组(P<0.05),而空白对照组与阴性对照组HT29细胞数差异无统计学意义(P>0.05).(3) Transwell侵袭实验结果:转染KISS-1基因的结肠癌细胞HT29穿透Matrigel基底膜的细胞数显著低于空质粒转染组及空白对照组细胞(P<0.01),侵袭指数显著降低(P<0.01),侵袭力抑制率达到56.5%,显著低于空质粒转染组及空白对照组细胞(P<0.01).空质粒转染组及空白对照组细胞比较,侵袭穿膜细胞数差异无统计学意义(P>0.05).(4)KISS-1作用于结肠癌细胞株HT29 24 h后,形态学观察结肠癌细胞株HT29发生凋亡或坏死.(5)Real-time PCR:转染组c-jun和c-fos吸光度值为0.87 ±0.16和0.44±0.12,阴性对照组吸光度值为1.82±0.39和1.76±0.34,空白对照组吸光度值为1.65±0.36和1.58±0.31.与对照组比较,转染组c-jun和c-fos扩增产物条带吸光度值均显著降低(P<0.01).结论 KISS-1基因对体外结肠癌细胞株HT29具有抑制增殖和促进凋亡作用,其可能是通过负性调控信号通路降低结肠癌细胞中 展开更多
关键词 结肠癌细胞 KISS-1基因 体外表达
C-reactive protein stimulates RAGS: expression in human coronary artery endothelial cells in vitro via ROS generation and ERK/NF-κB activation
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作者 Yun ZHONG Chuan-fang CHENG +6 位作者 Yi-zhi LUO Chao-wei TIAN Hui YANG Ben-rong LIU Min-sheng CHEN Yan-fang CHEN Shi-ming LIU 《中国药理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2015年第4期440-447,共8页
关键词 血管内皮细胞 C-反应蛋白 体外表达 冠状动脉 ROS ERK 激活 RAGE
朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶真核表达载体构建及在293T细胞中表达条件 预览 被引量:1
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作者 韩晶玉 楼怡宁 +3 位作者 师光禄 陈青 彭博 卜春亚 《北京农学院学报》 2015年第4期24-28,共5页
乙酰胆碱酯酶(AChE;EC 3.1.1.7)是神经传导中调节神经递质乙酰胆碱水平的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标。目前关于朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的真核表达还未见报道。本研究拟构建朱砂叶螨AChE的真核表达载体,进行在2... 乙酰胆碱酯酶(AChE;EC 3.1.1.7)是神经传导中调节神经递质乙酰胆碱水平的一种关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的主要作用靶标。目前关于朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的真核表达还未见报道。本研究拟构建朱砂叶螨AChE的真核表达载体,进行在293T细胞中表达条件摸索。将朱砂叶螨野生型ace完整读框和去掉3’疏水区的ace基因分别插入到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中,经PCR和双酶切鉴定及测序验证后,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1/ace。采用GFP报告基因确定在293T细胞中表达条件摸索,结果表明293T细胞的最适转染时间为48h和LipofectamineTM2000转染试剂的最适加样量为20μL。本试验成功构建了朱砂叶螨AChE的真核表达载体,确定了在293T细胞中的表达条件,为后续筛选新型选择性AChE抑制剂奠定了基础。 展开更多
关键词 乙酰胆碱酯酶 朱砂叶螨 293T细胞 转染 体外表达
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分光光度计法分析检测家蚕酪氨酸羟化酶的活性 预览
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作者 张振旺 李梦茜 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第6期281-283,共3页
家蚕酪氨酸羟化酶(Bm TH)是一种以酪氨酸为底物、铁离子和四氢生物喋呤为辅因子,可催化氧化酪氨酸形成多巴的芳香族氨基酸羟化酶,目前检测分析酪氨酸羟化酶活性的方法耗时、繁琐且工作量大。建立了分光光度计检测法快速测定家蚕酪氨... 家蚕酪氨酸羟化酶(Bm TH)是一种以酪氨酸为底物、铁离子和四氢生物喋呤为辅因子,可催化氧化酪氨酸形成多巴的芳香族氨基酸羟化酶,目前检测分析酪氨酸羟化酶活性的方法耗时、繁琐且工作量大。建立了分光光度计检测法快速测定家蚕酪氨酸羟化酶活性的新方法,采用高碘酸钠氧化反应产物L-多巴生成多巴色素发色团,其在475 nm处有最高吸收峰。该方法快速准确,可用于酪氨酸羟化酶活性的测定。 展开更多
关键词 酪氨酸羟化酶 分光光度计 体外表达 L-酪氨酸 L-多巴 活性测定
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流产布鲁氏菌的Cu/Zn超氧化物歧化酶的表达及其特性分析 预览
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作者 Shustov A V Manat Y +2 位作者 Unyshiva G B Sarina N I Eskendirova S Z 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第2期46-51,共6页
本研究体外表达了流产布鲁氏菌的Cu/Zn超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)并对表达产物进行了免疫原性分析。扩增编码Cu/Zn-SOD的基因,并将其克隆连接到pET-22b(+)载体中。SDS-PAGE结果显示诱导细菌的裂解物有重组Cu/Zn-SOD表达,分子量为20.8 kD... 本研究体外表达了流产布鲁氏菌的Cu/Zn超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)并对表达产物进行了免疫原性分析。扩增编码Cu/Zn-SOD的基因,并将其克隆连接到pET-22b(+)载体中。SDS-PAGE结果显示诱导细菌的裂解物有重组Cu/Zn-SOD表达,分子量为20.8 kDa。Western blot结果显示重组Cu/Zn-SOD均与鼠、牛的阳性血清反应。由此,说明体外表达的重组Cu/ZnSOD具有很好的抗原性,为今后疫苗开发及诊断试剂的开发奠定了物质基础。 展开更多
关键词 流产布鲁氏菌 CU/ZN BRUCELLA 特性分析 抗原性 血清反应 体外表达 免疫原性分析 裂解
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紫云英非特异性转脂蛋白AsIB259的体外酶活性及在共生固氮中的功能 预览 被引量:3
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作者 李一星 王建云 +2 位作者 石晓峰 陈大松 李友国 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期19-25,共7页
将紫云英AsIB259基因编码的一个预测的非特异性转脂蛋白AsIB259(nsLTP,non-specific lipid transfer protein)在大肠杆菌表达菌株Rosetta 2(DE3)中进行了诱导表达,体外测定AsIB259蛋白的脂质结合动力学特征,检测它对不同碳链长度脂... 将紫云英AsIB259基因编码的一个预测的非特异性转脂蛋白AsIB259(nsLTP,non-specific lipid transfer protein)在大肠杆菌表达菌株Rosetta 2(DE3)中进行了诱导表达,体外测定AsIB259蛋白的脂质结合动力学特征,检测它对不同碳链长度脂肪酸及其衍生物的结合能力,进一步考查AsIB259超表达对紫云英毛根结瘤情况的影响。结果表明:AsIB259具有转脂蛋白的典型特征,与16~22碳链长度脂肪酸的结合活性较强,对茉莉酸也表现出一定的结合活性;AsIB259超表达导致根瘤数量增加1.5倍且固氮酶活性降低,说明该基因在根瘤形成和固氮过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 非特异性转脂蛋白 AsIB259 体外表达 脂质结合活性 共生固氮
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大肠杆菌细胞抽提物制备方案的简化与优化 被引量:2
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作者 郭新娟 权春善 +2 位作者 赵朋超 王丽娜 范圣第 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期532-535,共4页
无细胞蛋白表达系统是一种将目的蛋白在体外进行表达的新技术和新方法,已广泛应用到蛋白质组学、蛋白质结构和功能等领域的研究中。在无细胞蛋白表达系统中,细胞抽提物的制备是关键因素之一。通过对大肠杆菌细胞抽提物制备过程中离心... 无细胞蛋白表达系统是一种将目的蛋白在体外进行表达的新技术和新方法,已广泛应用到蛋白质组学、蛋白质结构和功能等领域的研究中。在无细胞蛋白表达系统中,细胞抽提物的制备是关键因素之一。通过对大肠杆菌细胞抽提物制备过程中离心速度、预孵化和透析等参数的考察,利用绿色荧光蛋白作为报告蛋白,可以得到一个细胞抽提物制备的简化方案。采用相对低的转速(12000×g,10min),简易空孵化即可制备出活性高的细胞抽提物,用于无细胞体系蛋白表达,其表达的绿色荧光蛋白产量为209μg/mL。与传统的大肠杆菌细胞抽提物S30相比较,新方案将使时间与成本节省62%,产量是传统方法的2.6倍,使无细胞蛋白表达技术的操作快速、高通量的优势更加明显。 展开更多
关键词 蛋白质表达 无细胞表达系统 细胞抽提物 大肠杆菌 体外表达
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