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正选择基因无启动子的供体质粒pN(CDS)(N2)-R的构建及应用
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作者 王英泽 曹晴晴 +4 位作者 马文惠 王凤利 薛巍 王晨晨 杜朝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期465-472,共8页
为提高对发生基因编辑细胞的筛选效率,本研究构建了具备正负筛选功能的供体质粒pN(CDS)(N2)-R,其正选择基因是无启动子NeoR,负选择基因是能自主表达的RED。利用该质粒和CRISPR-Cas9系统对小鼠B16细胞FasL进行编辑。G418筛选2周,获得混... 为提高对发生基因编辑细胞的筛选效率,本研究构建了具备正负筛选功能的供体质粒pN(CDS)(N2)-R,其正选择基因是无启动子NeoR,负选择基因是能自主表达的RED。利用该质粒和CRISPR-Cas9系统对小鼠B16细胞FasL进行编辑。G418筛选2周,获得混合克隆。镜下观察显示,混合克隆质量较高。junction PCR结果表明,有基因编辑发生。DNA测序结果表明,NeoR准确插入靶位点。细胞杀伤实验表明,FasL功能被有效敲除。该供体质粒的多克隆位点,充分利用同尾酶酶切位点,因而具有广泛的适用性。综上所述,在对各种位点进行编辑时,使用该供体质粒有助于混和克隆的筛选。 展开更多
关键词 供体质粒 基因编辑 同源重组 FASL
家蚕转基因技术中若干因素对转基因效率的影响 被引量:13
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作者 马三垣 徐汉福 +3 位作者 段建平 赵爱春 张美蓉 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期595-603,共9页
建立高效、稳定的家蚕Bombyx mori转基因技术对于推进家蚕功能基因组研究,解决蚕丝产业重大问题以及向非绢丝产业拓展等具有重要意义。本文在已建立的基于piggyBac的家蚕转基因技术基础上,探索了多个影响转基因效率的因素。结果显示:... 建立高效、稳定的家蚕Bombyx mori转基因技术对于推进家蚕功能基因组研究,解决蚕丝产业重大问题以及向非绢丝产业拓展等具有重要意义。本文在已建立的基于piggyBac的家蚕转基因技术基础上,探索了多个影响转基因效率的因素。结果显示:以家蚕品种大造(P50)为供试材料、pBac[GOI]为供体质粒、pHA4PIG为辅助质粒,以眼睛和神经组织特异启动子3×p3启动的红色荧光蛋白基因DsRed为报告基因,在蚕卵产下后2~3h进行注射,综合效果最佳,孵化率和转化率分别达到62.7%和34.8%;荧光筛选的最佳时期在胚胎发育第5到第8天;在2000~8000bp之间时,外源片段的长度对转化率并无太大影响。本研究建立的技术体系,有望为家蚕功能基因研究、品种分子改良和家蚕生物反应器的开发奠定基础,并为其他鳞翅目昆虫转基因技术的建立提供参考。 展开更多
关键词 家蚕 PIGGYBAC 转基因技术 孵化率 转化率 蚕品种 供体质粒 辅助质粒 显微注射 荧光筛选 荧光标记
水稻基因整合平台系统供体质粒pURKMT的构建 预览
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作者 徐虹 章军 《厦门大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期 157-160,共4页
提高水稻产量,改良稻米品质是育种学家广泛研究的课题.随着现代生物技术的发展,水稻已成为植物基因工程的重要研究对象.许多实验室已成功地建立了一系列供外源基因转化水稻的系统.但是这些转化系统主要应用Ti质粒衍生的载体,通... 提高水稻产量,改良稻米品质是育种学家广泛研究的课题.随着现代生物技术的发展,水稻已成为植物基因工程的重要研究对象.许多实验室已成功地建立了一系列供外源基因转化水稻的系统.但是这些转化系统主要应用Ti质粒衍生的载体,通过T-DNA左右两端的序列将目的基... 展开更多
关键词 水稻 基因整合平台 供体质粒 pURKMT 育种
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