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茂源链霉菌MTG基因pMA5载体的构建及鉴定 预览
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作者 陆姣姣 朱婧 +2 位作者 穆冬冬 姜绍通 郑志 《安徽农业科学》 CAS 2019年第13期92-94,共3页
[目的]提高MTG产量并实现简便有效的纯化过程,以枯草芽孢杆菌为宿主构建pMA5mtg重组质粒。[方法]通过提取茂源链霉菌的基因组DNA,扩增mtg基因片段,再将异源信号肽与mtg基因片段进行融合,融合片段和pMA5质粒双酶切后连接,转化到大肠杆菌... [目的]提高MTG产量并实现简便有效的纯化过程,以枯草芽孢杆菌为宿主构建pMA5mtg重组质粒。[方法]通过提取茂源链霉菌的基因组DNA,扩增mtg基因片段,再将异源信号肽与mtg基因片段进行融合,融合片段和pMA5质粒双酶切后连接,转化到大肠杆菌感受态细胞中,菌落PCR和测序获得阳性单克隆。然后将pMA5mtg重组质粒转入枯草芽孢杆菌感受态中,通过抗性筛选和双酶切鉴定获取重组菌株。[结果]成功扩增出mtg基因片段,构建出重组质粒pMA5mtg。[结论]获得pMA5mtg重组表达菌株,为MTG的纯化及其未来生物工程的改造提供了有效的方法。 展开更多
关键词 MTG 信号肽 载体 枯草芽孢杆菌
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信号肽突变促进透明质酸酶分泌的高通量筛选方法
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作者 张琳培 《轻工科技》 2019年第3期1-3,共3页
为了增强透明质酸酶在微生物胞外的分泌表达,本文采用强组成型启动子P43,在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168基因组中整合表达水蛭来源的透明质酸酶,并利用RECODE突变技术构建信号肽突变库,通过高通量96微孔板初筛,将1000株突变株中... 为了增强透明质酸酶在微生物胞外的分泌表达,本文采用强组成型启动子P43,在枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168基因组中整合表达水蛭来源的透明质酸酶,并利用RECODE突变技术构建信号肽突变库,通过高通量96微孔板初筛,将1000株突变株中胞外酶活提高50%以上的20株突变体进行摇瓶复筛,最终获得了三株胞外酶活显著提升的突变株B. subtilis MspLHyalA-C(比野生型LHyal酶活提高55.50%-66.85%),摇瓶中粗酶活最高达到6.04×104 U/mL,为透明质酸酶的定向进化提供了可行性方案。 展开更多
关键词 透明质酸酶 信号肽 枯草芽孢杆菌 酶活 高通量筛选
鲫鱼肌间刺形成基因SOST的克隆表达研究 预览
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作者 杨敏璇 朱焯安 +6 位作者 陈嘉俊 蔡秀珠 范芷仪 黄楚妮 陈曦 梁日深 林蠡 《仲恺农业工程学院学报》 CAS 2019年第2期58-63,共6页
硬化蛋白(Sclerostin,SOST)是一种由骨细胞特异性分泌用于负调节骨形成的因子,为探究硬化蛋白SOST在鲫鱼肌间刺形成中的调控作用.本研究对鲫鱼SOST基因进行扩增,克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)-SOST,转化感受态细... 硬化蛋白(Sclerostin,SOST)是一种由骨细胞特异性分泌用于负调节骨形成的因子,为探究硬化蛋白SOST在鲫鱼肌间刺形成中的调控作用.本研究对鲫鱼SOST基因进行扩增,克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a(+)-SOST,转化感受态细胞BL21(DE3),利用IPTG诱导蛋白表达,分析诱导时间与诱导浓度对SOST蛋白表达的影响,并比较SOST基因内源信号肽片段切除前后的表达效果.结果显示,鲫鱼SOST基因序列为636bp,蛋白质分子量约为38kDa.随着时间的递增,蛋白表达量逐渐增大,诱导时间为4h左右表达量达到最高;不同IPTG诱导浓度对蛋白的表达效果影响不大,而信号肽的存在会强烈抑制该蛋白的表达.研究结果为进一步分析SOST基因在鲫鱼肌间刺形成过程中的影响提供理论依据. 展开更多
关键词 鲫鱼 骨硬化蛋白SOST 原核表达 信号肽
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三种淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体的建立及功能验证 预览
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作者 张鹏 崔冬冰 +1 位作者 舒莉萍 范安然 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第6期626-631,共6页
目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的... 目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的片段连接于pCMV-APP695载体中得到APP胞外结构域突变体质粒;质粒转染CHO细胞后,添加G418筛选表达APP胞外结构域突变体的单克隆细胞系;通过Western blot方法检测APP胞外结构域突变体的表达及胞外分泌水平,分析信号肽对该突变体分泌的影响。结果:成功获得了APP的E1结构域突变体、E1/信号肽双缺失突变体以及E2结构域突变体细胞株,且APP突变体可以正常表达和分泌,但是信号肽缺失后APP突变体可以表达、而不能分泌。结论:APP的E1和E2结构域对APP蛋白的胞外分泌无影响。 展开更多
关键词 淀粉样前体蛋白 胞外结构域 突变体 信号肽 神经退行性疾病
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通过优化表达元件及培养基组分提高地衣芽胞杆菌中碱性丝氨酸蛋白酶产量
5
作者 饶忆 师璐 +4 位作者 王豪 熊世颉 蔡冬波 陈守文 李顺意 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1327-1335,共9页
【背景】碱性丝氨酸蛋白酶(Subtilisin)是一种具有广泛用途的工业酶制剂。【目的】旨在通过优化启动子、信号肽及培养基组分来提高地衣芽胞杆菌中碱性丝氨酸蛋白酶产量。【方法】以地衣芽胞杆菌BL10为出发菌株,构建了含有4种不同类型启... 【背景】碱性丝氨酸蛋白酶(Subtilisin)是一种具有广泛用途的工业酶制剂。【目的】旨在通过优化启动子、信号肽及培养基组分来提高地衣芽胞杆菌中碱性丝氨酸蛋白酶产量。【方法】以地衣芽胞杆菌BL10为出发菌株,构建了含有4种不同类型启动子(PbacA、P43、PaprE和PsrfA)及4种不同类型信号肽(SPVpr、SPSacB、SPSacC和SPAprE)的碱性丝氨酸蛋白酶表达菌株,并在获得高产菌株的基础上进行培养基优化。【结果】4种启动子的表达水平为PbacA>PaprE>P43>PsrfA,4种信号肽的分泌效率为SPAprE>SPSacC>SPSacB>SPVpr。其中,菌株BL10/pPbacA-aprE产生最高的碱性丝氨酸蛋白酶酶活(275.21 U/mL),相比于出发菌株BL10/pHY-aprE (167.98 U/mL)提高了64%。随后,通过对发酵培养基成分进行优化并结合正交优化,获得了一种高产碱性丝氨酸蛋白酶的培养基(g/L):玉米淀粉40.0,豆粕50.0,(NH4)2SO4 4.0,K2HPO4 3.0,CaCO3 1.0。最后,碱性丝氨酸蛋白酶酶活提高到747.37 U/mL,是初始酶活的4.45倍。【结论】为工业化高产碱性丝氨酸蛋白酶提供了一种有效策略。 展开更多
关键词 地衣芽胞杆菌 碱性丝氨酸蛋白酶 启动子 信号肽 培养基优化
真核表达MERS-CoV刺突蛋白亚单位的信号肽序列优化研究
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作者 宋倩倩 王文玲 +3 位作者 詹瑛 鲁福娜 邓瑶 谭文杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期20-26,共7页
中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的刺突蛋白(Spike,S)亚单位1(S1)是引起宿主免疫反应和产生中和抗体的主要靶抗原,也是疫苗研发和病原检测的重要靶标,选用适宜的真核表达系统高效表达S... 中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的刺突蛋白(Spike,S)亚单位1(S1)是引起宿主免疫反应和产生中和抗体的主要靶抗原,也是疫苗研发和病原检测的重要靶标,选用适宜的真核表达系统高效表达S1蛋白是进行相关研究的基础。为确定MERS-CoV S1在哺乳动物细胞中高效分泌性表达的信号肽序列,构建了含高斯荧光素酶(Gaussia luciferase,GLuc)、人组织纤溶酶原激活剂(Tissue plasminogen activator,tPA)及小鼠免疫球蛋白G的2a亚型(Mouse immunoglobular G subtype 2a,MIgG2a)7个信号肽(原始序列和改造序列)序列的MERS-CoV S1表达质粒,瞬时转染细胞后,通过Western Blot检测并比较细胞培养上清和裂解液中S1的表达水平及分泌表达效率(条带密度灰度扫描比),并对哺乳动物细胞表达的S1蛋白的纯度与抗原特性进行了分析。结果表明7种信号肽在293T、BHK21和ExpiCHO-S^TM三种细胞系统中介导MERS-CoV S1的高效分泌表达的效率各有不同,其中tPA-1信号肽介导S1抗原在ExpiCHO-S^TM中具有较高的分泌表达效率与产量,纯化的S1蛋白保持了较好的抗原性。本研究为进一步研发基于MERS-CoV S1的亚单位疫苗及免疫学检测试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 信号肽 中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV) 刺突蛋白 分泌表达
一株高效降解羽毛废弃物菌株的筛选及表达条件优化 预览
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作者 张钰文 袁航 +3 位作者 于江悦 马晓晓 史超硕 李玉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期93-98,共6页
筛选和构建高效降解羽毛角蛋白的菌株,以提高角蛋白酶分泌表达量。从全国 5 个不同地方的猪、羊圈土壤中取样,在牛奶平板上进行初筛,以羽毛为唯一碳氮源对产角蛋白酶菌株进行复筛。通过形态学观察、16S rDNA 序列分析,对菌株进行分类鉴... 筛选和构建高效降解羽毛角蛋白的菌株,以提高角蛋白酶分泌表达量。从全国 5 个不同地方的猪、羊圈土壤中取样,在牛奶平板上进行初筛,以羽毛为唯一碳氮源对产角蛋白酶菌株进行复筛。通过形态学观察、16S rDNA 序列分析,对菌株进行分类鉴定。为进一步提高菌株的发酵活力,筛选和优化了 5 个不同来源的信号肽序列(KerK、YoaW、DacB、NprE 和 SacB),选用 pWB980 作为表达载体,构建重组质粒并转化到 Bacillus subtilis WB600 进行表达。获得一株高效降解羽毛的菌株 M,经鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.)。37℃发酵培养 48 h 后,菌株 M 角蛋白酶酶活力为 21.98 U/mL。通过筛选和优化信号肽,获得含有信号肽DacB 的重组菌株 R3-DacB,该菌株分泌表达角蛋白酶活力最高,达到了 226.34 U/mL,是初始菌株 M 的 10 倍。获得了一株降解羽毛废弃物效果较好的重组菌株 R3-DacB,对角蛋白酶实现工业化生产具有重要意义。 展开更多
关键词 角蛋白酶 异源表达 信号肽 芽孢杆菌
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大肠杆菌多酚氧化酶结构域及连接区域对其功能的影响 预览
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作者 周波 杨江科 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第18期114-120,126,共8页
以毕赤酵母X-33作为宿主,在摇瓶水平上测定了大肠杆菌多酚氧化酶(CueO)的表达量、最适pH和最适温度,并研究了信号肽、前导肽、第三结构域以及结构域连接区域的“盖子”结构对其功能的影响。结果表明:甲醇诱导72 h后,CueO最高表达量为81... 以毕赤酵母X-33作为宿主,在摇瓶水平上测定了大肠杆菌多酚氧化酶(CueO)的表达量、最适pH和最适温度,并研究了信号肽、前导肽、第三结构域以及结构域连接区域的“盖子”结构对其功能的影响。结果表明:甲醇诱导72 h后,CueO最高表达量为81.26μg/mL,最高酶活为356.67 U/L,最适pH为2.5,最适温度为45℃。去掉CueO自身信号肽,其表达量和酶活分别提高至野生型的3.08倍和3.5倍;前导肽的缺失导致CueO的错误折叠,阻碍CueO的正常分泌;第三结构域的缺失增加了蛋白的表达,但导致CueO完全失活;结构域连接区域“盖子”结构的缺失和替换均会导致CueO丧失活性,这一发现与现有报道完全不同。本研究为实现大肠杆菌多酚氧化酶的工业化应用奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 多酚氧化酶 信号肽 前导 结构域 “盖子”结构
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一种基于压缩感知和动态时间规整的信号肽特征提取新算法 预览
9
作者 张洋俐君 高翠芳 +1 位作者 陈卫 田丰伟 《数据采集与处理》 CSCD 北大核心 2019年第2期303-311,共9页
准确识别出信号肽对蛋白质的研究和定位有着非常重要的意义。压缩感知技术能够在保留生物序列主要信息的同时降低冗余信息,将高维信息投影到低维空间上进行特征提取。因此本文基于压缩感知技术再结合动态时间规整算法提取出新的特征向量... 准确识别出信号肽对蛋白质的研究和定位有着非常重要的意义。压缩感知技术能够在保留生物序列主要信息的同时降低冗余信息,将高维信息投影到低维空间上进行特征提取。因此本文基于压缩感知技术再结合动态时间规整算法提取出新的特征向量,提出一种高鉴别性的信号肽特征提取新方法。该算法所提取的特征不但体现了信号肽中的氨基酸组成、排列顺序、结构等重要信息,还能把信号肽的不同区域在时间维度中非线性地弯曲对整,为机器学习算法提供有效的信号肽特征表达。实验结果显示,新方法提取的特征向量在3个数据集Eukaryotes,Gram+bacteria,Gram-bacteria上的识别率分别达到99.65%,98.05%和98.56%,并且这种方法能简单地运用到其他生物序列的识别过程中。 展开更多
关键词 信号肽 动态时间规整 压缩感知 特征提取 机器学习
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人EBI3及其截短体蛋白在哺乳动物细胞中的分泌 预览
10
作者 刘泽宇 潘林鑫 +3 位作者 李紫阳 冯成 刘晓颖 范礼斌 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第11期1688-1691,1697,共5页
目的:研究人EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白氨基端的缺失是否影响人EBI3蛋白在哺乳动物细胞中的分泌,并探究人EBI3蛋白能否经由外泌体介导的非经典蛋白分泌途径分泌至胞外。方法:将pcDNA3.1-EBI3-FLAG、pcDNA3.1-EBI3(1~135)-FLAG、pcDNA3.1... 目的:研究人EB病毒诱导基因3(EBI3)蛋白氨基端的缺失是否影响人EBI3蛋白在哺乳动物细胞中的分泌,并探究人EBI3蛋白能否经由外泌体介导的非经典蛋白分泌途径分泌至胞外。方法:将pcDNA3.1-EBI3-FLAG、pcDNA3.1-EBI3(1~135)-FLAG、pcDNA3.1-EBI3(125~230)-FLAG真核表达重组质粒分别转染至HEK 293T细胞中,Western blot检测相关蛋白在细胞中及细胞培养液中的表达情况;分别收集转染了上述重组质粒的HEK 293T细胞的培养液,提取外泌体,Western blot检测相关蛋白在外泌体中的表达情况。结果:Western blot结果表明,人野生型EBI3及其截短体重组蛋白在HEK 293T细胞中均能正常表达,细胞培养液中能够检测到EBI3与EBI3(1~135)蛋白的表达,但并不能检测到EBI3(125~230)蛋白的表达。HEK 293T细胞外泌体的Western blot结果表明,外泌体中仅能检测到EBI3蛋白的表达,而无法检测到EBI3(1~135)和EBI3(125~230)蛋白的表达。结论:人EBI3及其截短体真核表达重组质粒均能在HEK 293T细胞中正常表达;人EBI3蛋白氨基端的缺失会抑制EBI3蛋白在哺乳动物细胞中的分泌,人EBI3蛋白能够通过外泌体介导的非经典分泌途径分泌至细胞外,而EBI3氨基端或羧基端的缺失都会导致这一过程受到阻碍。 展开更多
关键词 EBI3 截短体 信号肽 外泌体
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促进米黑根毛霉脂肪酶分泌的毕赤酵母内源信号肽的筛选 预览
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作者 苗杨利 李站胜 韩双艳 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2019年第10期155-163,共9页
米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei Lipase,RML)在造纸、食品、化妆品以及医药等行业应用广泛。本研究通过SignalP 4.1在线预测软件预测出9种具有分泌潜力的毕赤酵母内源信号肽序列:FLO10、CPR5、PRY2、DSE4、NUP145、MSB2、SSP120、F... 米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei Lipase,RML)在造纸、食品、化妆品以及医药等行业应用广泛。本研究通过SignalP 4.1在线预测软件预测出9种具有分泌潜力的毕赤酵母内源信号肽序列:FLO10、CPR5、PRY2、DSE4、NUP145、MSB2、SSP120、FRE2、FLO9。以广泛应用的酿酒酵母α-交配因子(α-mating factor,α-MF)信号肽为对照,考察这九种内源信号肽对增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)和RML在蛋白酶缺陷型PichiaPinkTM表达系统的分泌效果。结果发现FLO10、PRY2、DSE4、MSB2、SSP120、FRE2能有效介导EGFP分泌,且PRY2、DSE4、MSB2、FRE2介导EGFP的分泌水平优于α-MF,分别是α-MF的2.15倍、1.15倍、1.33倍、1.30倍;FLO10、PRY2、DSE4、FRE2能有效介导RML的分泌,且FLO10介导RML的分泌水平最高,是α-MF的1.50倍,说明内源信号肽FLO10更能有效分泌RML。本研究为提高米黑根毛霉脂肪酶在蛋白酶缺陷型毕赤酵母的表达量奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 蛋白酶缺陷型毕赤酵母 信号肽 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 米黑根毛霉脂肪酶(RML)
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水稻种子特异性谷蛋白GluB1启动子在水稻愈伤组织中驱动外源基因表达 预览
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作者 赵艳 唐湧洲 史玉倩 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期28-34,共7页
【目的】水稻谷蛋白启动子GluB1(GluB1 promoter,pGluB1)常用于外源基因在种子中特异性高效表达的研究,也是研究种子储藏蛋白基因表达调控机制的模型。前人研究表明,pGluB1只在水稻胚乳中表达,而在根、茎、叶片、叶鞘、颖壳等组织中均... 【目的】水稻谷蛋白启动子GluB1(GluB1 promoter,pGluB1)常用于外源基因在种子中特异性高效表达的研究,也是研究种子储藏蛋白基因表达调控机制的模型。前人研究表明,pGluB1只在水稻胚乳中表达,而在根、茎、叶片、叶鞘、颖壳等组织中均无表达活性。研究的目的是为了克服种子特异表达启动子筛选周期长的缺点。【方法】将由pGluB1驱动的霍乱毒素B亚单位和重组胰岛素原组成的融合基因(a fusion gene of the cholera toxin B subunit and human proinsulin,CTBIN)表达载体pCAMBIA1302-pGluB1sig-CTBIN-NOS经农杆菌介导法转化水稻成熟胚愈伤组织。通过RT-PCR和蛋白质印迹杂交试验检测融合基因CTBIN在水稻愈伤组织中的转录和翻译表达。【结果】获得的7个转基因愈伤克隆中,有6个克隆的融合基因CTBIN在转录水平上表达。选取其中4个克隆进一步进行蛋白质印迹杂交试验检测证实融合基因CTBIN均在翻译水平上表达,而且从分子量大小推断融合蛋白包含的谷蛋白GluB1的N-端信号肽序列(24个氨基酸残基)在所测的愈伤组织细胞中均被成功切除。【结论】水稻种子特异性启动子pGluB1在愈伤组织中具有驱动外源基因表达活性,种子蛋白体亚细胞定位信号肽序列可在愈伤组织细胞中被切除。这为在愈伤组织细胞中快速检测种子特异表达启动子活性和探索愈伤组织中蛋白质的亚细胞分拣机制奠定了基础。 展开更多
关键词 谷蛋白B1启动子 信号肽 水稻 成熟胚愈伤组织 表达活性
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启动子及信号肽筛选提高普鲁兰酶在地衣芽孢杆菌中的表达
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作者 王倩 初晓宇 +1 位作者 朱宝成 伍宁丰 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期61-69,共9页
普鲁兰酶(pullulanase)是一种淀粉脱支酶,在淀粉糖化加工等工业生产中具有重要的应用价值。选用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) BL10作为表达宿主,为了提高其中的普鲁兰酶产量,对来自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 168和地衣... 普鲁兰酶(pullulanase)是一种淀粉脱支酶,在淀粉糖化加工等工业生产中具有重要的应用价值。选用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) BL10作为表达宿主,为了提高其中的普鲁兰酶产量,对来自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 168和地衣芽孢杆菌BL10中的15种不同信号肽以及4种不同启动子进行筛选,构建了不同的重组工程菌株,最终发现在以P43为启动子、apr为信号肽的条件下,上清液中普鲁兰酶的表达量最高,酶活可达12 U/m L,且测得其最适反应温度为60℃,最适p H为4.5。结果表明通过对启动子及信号肽进行筛选是提高重组工程菌株中目的蛋白表达量的一种有效手段。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 普鲁兰酶 启动子 信号肽
刺齿报春苣苔肌醇半乳糖苷合成酶基因的鉴定及序列分析 预览
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作者 覃信梅 卢永彬 +2 位作者 江祈贵 黄章平 黄夕洋 《江苏农业科学》 2019年第8期56-60,共5页
肌醇半乳糖苷合成酶基因与植物光合产物运输、种子耐脱水性、抵御生物与非生物胁迫和自我保护等生理生化过程密切相关。基于刺齿报春苣苔( Primulina spinulosa )转录组测序数据,获得(鉴定)1个肌醇半乳糖苷合成酶基因。序列分析结果表明... 肌醇半乳糖苷合成酶基因与植物光合产物运输、种子耐脱水性、抵御生物与非生物胁迫和自我保护等生理生化过程密切相关。基于刺齿报春苣苔( Primulina spinulosa )转录组测序数据,获得(鉴定)1个肌醇半乳糖苷合成酶基因。序列分析结果表明,该基因全长1 347 bp(GenBank登录号为MG521418),开放阅读框(ORF)为1 008 bp,共编码335个氨基酸。进一步基于氨基酸序列的分析表明,该基因编码的蛋白质分子量为38.05 ku,理论等电点为5.09,为亲水性蛋白,含有1个与糖基转移酶家族蛋白相同的保守结构域;刺齿报春苣苔的肌醇半乳糖苷合成酶基因与同科的旋蒴苣苔( Boea hygrometrica ,FJ222452)的相似性高达90%,两者在系统进化树上聚为1支。研究结果为进一步研究刺齿报春苣苔的肌醇半乳糖苷合成酶基因的分子结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 刺齿报春苣苔 肌醇半乳糖苷合成酶基因 基因序列分析 信号肽
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细菌脂蛋白功能的研究进展 预览
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作者 秦小彬 伍晨露 彭远义 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期650-654,659共6页
细菌的脂蛋白是一类典型的膜锚定蛋白,其信号肽由18到36个氨基酸组成,分为N区、H区和C区3部分,N区一般由5~7个氨基酸组成,其特征是存在正电荷的精氨酸和赖氨酸;H区由疏水性氨基酸组成;C区具有被称为“脂盒”(Lipobox)的特征性... 细菌的脂蛋白是一类典型的膜锚定蛋白,其信号肽由18到36个氨基酸组成,分为N区、H区和C区3部分,N区一般由5~7个氨基酸组成,其特征是存在正电荷的精氨酸和赖氨酸;H区由疏水性氨基酸组成;C区具有被称为“脂盒”(Lipobox)的特征性保守基序[LVI]-[ASTVI]-[GAS]-C. 展开更多
关键词 脂蛋白 细菌 氨基酸组成 功能 锚定蛋白 特征性 信号肽 赖氨酸
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全基因组预测哈茨木霉T6776的分泌蛋白 预览 被引量:1
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作者 许僖 伍建榕 +1 位作者 韩长志 马焕成 《贵州农业科学》 CAS 2018年第2期5-8,共4页
为探明哈茨木霉T6776的分泌蛋白及其作用于植物病原菌的功能,在前期研究的基础上,采用SignalP、ProtComp和TMHMM等生物在线预测程序,对该菌11 498条蛋白序列进行N-端信号肽、亚细胞定位和跨膜结构等预测。结果表明:哈茨木霉T6776含分... 为探明哈茨木霉T6776的分泌蛋白及其作用于植物病原菌的功能,在前期研究的基础上,采用SignalP、ProtComp和TMHMM等生物在线预测程序,对该菌11 498条蛋白序列进行N-端信号肽、亚细胞定位和跨膜结构等预测。结果表明:哈茨木霉T6776含分泌蛋白503个,分泌蛋白的信号肽长度、氨基酸长度均与植物病原菌不同;哈茨木霉T6776分泌蛋白信号肽切割位点属A-X-A型,为SPI型信号肽识别位点。 展开更多
关键词 哈茨木霉 分泌蛋白 信号肽 氨基酸
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哺乳动物MHCⅠ类分子α链的信号肽预测及保守性分析
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作者 叶红 张爽 +2 位作者 童琳 潘延超 张明霞 《中国热带医学》 CAS 2018年第8期754-756,774共4页
目的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)由一紧密连锁、高度多态的基因座组成,在脊椎动物的移植排斥反应、免疫应答和免疫调控等方面发挥极其重要的作用。MHCⅠ类分子由α链和β微球蛋白以非共价键结合组成... 目的主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)由一紧密连锁、高度多态的基因座组成,在脊椎动物的移植排斥反应、免疫应答和免疫调控等方面发挥极其重要的作用。MHCⅠ类分子由α链和β微球蛋白以非共价键结合组成,其中α链直接参与抗原肽的呈递,显示极为丰富的多态性。本研究旨在分析哺乳动物MHCⅠ类分子α链的信号肽是否呈现出多态性,并明确其分子生物学特征。方法利用NCBI网站收集人等8种哺乳动物编码MHCⅠ类分子α链的mRNA序列,采用信号肽在线预测软件SignalP 4.1和LipoP1.0分析α链信号肽存在的概率、长度及信号肽酶切位点;利用Mega4.1软件进行信号肽氨基酸序列比对,分析其保守性。结果 8种哺乳动物MHCⅠ类分子α链N端的前24个氨基酸均为其信号肽区,信号肽酶切位点全部属于信号肽酶Ⅰ型,且信号肽酶切位点的-3、-1、1、2、3位置上的氨基酸非常保守,是信号肽酶识别的关键位点。氨基酸序列比对分析发现α链信号肽24个氨基酸中有13个位点的氨基酸相同,占信号肽氨基酸总数的54.17%。结论 8种哺乳动物MHCⅠ类分子α链的信号肽具有较强的保守性,这可能与信号肽指导蛋白质分选和蛋白质定位的功能相关。 展开更多
关键词 哺乳动物 MHC 信号肽 保守性
不同信号肽及分子伴侣对中性蛋白酶在枯草芽孢杆菌中分泌表达的影响 预览
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作者 杨何宝 胡美荣 +2 位作者 郑翔 牟庆璇 高沛汝 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2018年第6期134-140,共7页
通过筛选5个不同的信号肽基因(AmyE、AprE、NprE、SacB、YncM)代替对照质粒pHT43-npr上原始的信号肽基因,整合2个不同的分子伴侣(PrsA、DnaK)到pHT43-npr质粒上,构建重组质粒并转化到枯草芽孢杆菌WB800N中进行诱导表达。结果表明,... 通过筛选5个不同的信号肽基因(AmyE、AprE、NprE、SacB、YncM)代替对照质粒pHT43-npr上原始的信号肽基因,整合2个不同的分子伴侣(PrsA、DnaK)到pHT43-npr质粒上,构建重组质粒并转化到枯草芽孢杆菌WB800N中进行诱导表达。结果表明,构建了5株信号肽重组菌株,通过牛奶平板验证无明显水解圈,通过酶活性比较,5株重组菌株中性蛋白酶活性均显著低于对照菌株;成功构建了2株整合分子伴侣的重组菌株,通过牛奶平板验证有水解圈,通过酶活性比较,两株菌株均表达中性蛋白酶,其中重组菌株WB800N/pHT43-npr-PrsA产蛋白酶活性比对照菌株WB800N/pHT43-npr提高了23%,重组菌株WB800N/pHT43-npr-DnaK产蛋白酶活性比对照菌株提高了33%。 展开更多
关键词 中性蛋白酶 信号肽 分子伴侣 枯草芽孢杆菌
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信号肽对亮氨酸脱氢酶在Bacillus subtilis中分泌表达的影响及酶学性质研究 被引量:1
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作者 王男 金吕华 +2 位作者 张玲 林荣 杨海麟 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期46-53,共8页
根据信号肽N端电荷数,选择Sec及Tat两种途径的信号肽构建枯草芽孢杆菌穿梭质粒,首次实现Bacillus cereus源亮氨酸脱氢酶基因在Bacillus subtilis中的分泌表达。Tat途径信号肽Pho D促进蛋白质分泌的效果最好,胞外酶活力达20.25U/ml,为不... 根据信号肽N端电荷数,选择Sec及Tat两种途径的信号肽构建枯草芽孢杆菌穿梭质粒,首次实现Bacillus cereus源亮氨酸脱氢酶基因在Bacillus subtilis中的分泌表达。Tat途径信号肽Pho D促进蛋白质分泌的效果最好,胞外酶活力达20.25U/ml,为不添加信号肽的2.2倍,信号肽N端较多的电荷数,可能有利于多聚体蛋白的分泌。对表达产物进行纯化和酶学性质测定。结果表明,纯酶比酶活为13U/mg;L-Leucine为底物时酶的Km为6.17mmol/L,Vmax为14.49μmol/(L·min);底物特异性研究发现,酶与天然底物L-Leucine的亲和性最好,对一些脂肪族氨基酸也有活性,对芳香族氨基酸L-Phenylalanine无活性;酶的最适pH为10.5~12.0,pH稳定范围为5.0~11.0;最适反应温度为55℃;圆二色谱变温扫描酶二级结构变化,α螺旋含量随温度升高逐渐降低;差示扫描微量热技术(DSC)测定酶的解折叠温度(Tm值)为64.13℃,表明该酶具有较好耐热性。 展开更多
关键词 信号肽 亮氨酸脱氢酶 枯草芽孢杆菌 酶学性质
基于生物信息学的胶孢炭疽菌效应分子的筛选
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作者 赵美 郑文博 +2 位作者 皮磊 周而勋 舒灿伟 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第18期5927-5933,共7页
隶属炭疽菌属的胶孢炭疽菌(C. gloeosporioides)是农业和林业生产上重要的病原真菌,可以引起两百多种植物产生病害,对农林业造成严重的经济损失。效应蛋白在胶孢炭疽菌侵染寄主植物的过程发挥了关键作用。为了能筛选出胶孢炭疽菌(Col... 隶属炭疽菌属的胶孢炭疽菌(C. gloeosporioides)是农业和林业生产上重要的病原真菌,可以引起两百多种植物产生病害,对农林业造成严重的经济损失。效应蛋白在胶孢炭疽菌侵染寄主植物的过程发挥了关键作用。为了能筛选出胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的效应蛋白,以便开展对该菌与寄主的互作研究。本研究利用已经发表的胶孢炭疽菌的基因组序列,根据效应蛋白的主要特征,利用一系列生物信息分析服务器(SignalP, TMHMM, Protcomp, big-PI Predictor, TargetP和Blast),对该菌的效应蛋白进行预测和分析。我们共分析了胶孢炭疽菌的15 381个蛋白质序列,最后获得了443个符合效应蛋白特征的候选效应子,其中有86个具有预测功能。本研究为阐明炭疽病与植物寄主之间的相互作用提供理论依据。 展开更多
关键词 胶孢炭疽菌 效应蛋白 信号肽 致病机理 寄主互作
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