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地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用
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作者 刘志贞 加三三 +5 位作者 张凯丽 孙雨晴 赵虹 郝宇卉 牛勃 李美宁 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期55-58,共4页
目的:制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通... 目的:制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果:成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论:成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。 展开更多
关键词 UCP2 RNA探针 胚胎原位杂交
band3基因在斑马鱼早期胚胎中的表达 预览
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作者 庹媛媛 尚鲁俊 +2 位作者 夏海雄 何志旭 舒莉萍 《贵阳医学院学报》 CAS 2016年第7期760-764,共5页
目的:用band3基因的反义 mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,检测band3基因在野生型Tuebngen斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:Trizol法提取斑马鱼胚胎总RNA并设计特异性引物,采用RT-PCR法扩增band3基因cDNA编码区片段;通过基因... 目的:用band3基因的反义 mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,检测band3基因在野生型Tuebngen斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:Trizol法提取斑马鱼胚胎总RNA并设计特异性引物,采用RT-PCR法扩增band3基因cDNA编码区片段;通过基因重组技术构建PBSK-band3重组质粒,用BamHⅠ酶切得到线性化PBSK-band3;以T7 RNA聚合酶转录合成反义地高辛标记的band3 RNA探针,用全胚胎原位杂交法检测band3基因在斑马鱼胚胎早期的表达情况。结果:成功克隆band3基因片段,构建PBSK-band3重组质粒;经体外转录获得地高辛标记的反义band3 mRNA探针,原位杂交后检测证实band3基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中间细胞群(ICM)和主动脉性腺中肾区(AGM)呈现高表达。结论:地高辛标记的反义band3 mRNA探针可检测到斑马鱼胚胎中band3基因的定位表达。 展开更多
关键词 斑马鱼 胚胎 band3 胚胎原位杂交 探针
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Borealin基因在小鼠中的表达 预览
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作者 张前军 卢光琇 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2012年第6期 7-12,共6页
【目的】研究Borealin在小鼠早期胚胎及睾丸中的表达情况,初步探讨Borealin的生物学功能。【方法】利用体外合成RNA探针,采用全胚胎原位杂交检测Borealin基因在9.5~10.5日龄小鼠胚胎中的表达,免疫组化检测Borealin基因在成年小鼠睾丸... 【目的】研究Borealin在小鼠早期胚胎及睾丸中的表达情况,初步探讨Borealin的生物学功能。【方法】利用体外合成RNA探针,采用全胚胎原位杂交检测Borealin基因在9.5~10.5日龄小鼠胚胎中的表达,免疫组化检测Borealin基因在成年小鼠睾丸中的表达,RT-PCR等方法检测Borealin基因在成年小鼠多组织中的表达。【结果】Borealin在小鼠9.5~10.5日龄胚胎的头部和成年小鼠生精小管基底部细胞的部位有较强的表达,在睾丸、卵巢、肠以及眼睛组织中的表达量较其他组织高。【结论】Borealin在小鼠9.5~10.5日龄胚胎头部及成年小鼠睾丸中均有特异性表达,可能参与了成体干细胞功能的维持。 展开更多
关键词 Borealin 胚胎原位杂交 精原干细胞 纺锤体
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非洲爪蟾β-synuclein基因的克隆、亚细胞定位及原位表达检测
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作者 刘焕义 曹康 +1 位作者 赵新宇 袁铸 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-4,共4页
目的克隆非洲爪蟾β突触核蛋白基因(xenopus-β-synuclein,xSYNB)并研究其亚细胞定位。方法以成年爪蟾脑部的总RNA为模板,RT-PCR扩增获得xSYNB基因,并克隆入pGEM-TEasy载体而获得TA-xSYNB重组质粒,亚克隆到pEGFPN1载体上获得pEGFPN1-x... 目的克隆非洲爪蟾β突触核蛋白基因(xenopus-β-synuclein,xSYNB)并研究其亚细胞定位。方法以成年爪蟾脑部的总RNA为模板,RT-PCR扩增获得xSYNB基因,并克隆入pGEM-TEasy载体而获得TA-xSYNB重组质粒,亚克隆到pEGFPN1载体上获得pEGFPN1-xSYNB真核表达载体。将pEGFPN1-xSYNB重组质粒转染HEK293细胞,用TA-xSYNB重组质粒为模板合成的正义与反义探针对非洲爪蟾胚胎进行原位杂交。结果成功构建了pEGFPN1-xSYNB重组质粒,绿色荧光检测结果发现xSYNB蛋白在细胞浆中表达。原位杂交实验表明xSYNB基因主要表达于胚胎的头部。结论首次鉴定了非洲爪蟾β-synuclein基因的表达,并发现xSYNB基因可能在爪蟾胚胎神经系统发育中起一定作用。 展开更多
关键词 非洲爪蟾 β突触核蛋白 重组质粒 胚胎原位杂交
斑马鱼crip2基因的克隆、亚细胞定位及在胚胎发育早期的表达分析 预览
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作者 解丽芳 刘昌永 +1 位作者 姚少华 杨寒朔 《四川大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期 1515-1519,共5页
为揭示包含具有LIM结构域的crip基因的功能,以斑马鱼为实验对象,克隆了斑马鱼的crip2基因,并用全胚胎原位杂交法检测crip2在斑马鱼胚胎中的表达,周亚细胞定位法检测crip2基因在细胞中的定位.研究发现crip2基因在斑马鱼胚胎早期没... 为揭示包含具有LIM结构域的crip基因的功能,以斑马鱼为实验对象,克隆了斑马鱼的crip2基因,并用全胚胎原位杂交法检测crip2在斑马鱼胚胎中的表达,周亚细胞定位法检测crip2基因在细胞中的定位.研究发现crip2基因在斑马鱼胚胎早期没有表达,五体节开始在脊索特异表达;后期,主要局限于在血管、心脏和体节间肌肉,表明crip2的表达并不局限干内皮系统.左细胞内.crip2基因左细胞枋和胞檠巾均有轰主六. 展开更多
关键词 crip2基因 斑马鱼 胚胎原位杂交 亚细胞定位
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小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究 预览 被引量:3
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作者 李红丽 杨忠 +2 位作者 李泽桂 陈活彝 蔡文琴 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第24期 2223-2226,共4页
目的观察周期素依赖性蛋白激酶5 (CDK5)mRNA在脑发育中的表达与分布.方法采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色.结果①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5 mRNA从胚胎10.5 d(E10.5)开始表达,主要分布于神经上皮的套层细胞... 目的观察周期素依赖性蛋白激酶5 (CDK5)mRNA在脑发育中的表达与分布.方法采用胚胎期至老年期小鼠全胚胎及脑切片的原位杂交染色.结果①全胚胎原位杂交染色发现脑内CDK5 mRNA从胚胎10.5 d(E10.5)开始表达,主要分布于神经上皮的套层细胞内; ②脑切片的原位杂交染色观察到从E14到成年期脑内均见CDK5 mRNA阳性信号,主要定位于神经元的胞浆与核周,于新生期前后表达达高峰;分布于包括大脑皮层、海马、丘脑、下丘脑、小脑及许多神经核团.在老年期上述区域CDK5表达均有减弱,部分区域呈阴性.结论表明脑内CDK5作用贯穿了整个脑的发育阶段,且主要参与了神经系统的早期发育;成年后CDK5可能继续保持对某些区域中神经元的功能调节. 展开更多
关键词 周期素依赖性蛋白激酶5(CDK5)mRNA 脑发育 胚胎原位杂交 小鼠
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Irx5a在野生型斑马鱼早期发育中的表达 预览
7
作者 舒莉萍 何志旭 +1 位作者 许威 丁可军 《贵阳医学院学报》 CAS 2016年第7期755-759,共5页
目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a 基因,将其克隆入pCS^2+质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系... 目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a 基因,将其克隆入pCS^2+质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Irx5a的反义mRNA探针;用该反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了Irx5a-pCS^2+重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测Irx5a基因的表达,发现从3.7 hpf开始有表达,并且在胚胎神经系统和造血系统都有明显表达。结论:Irx5a基因可能参与了Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统和造血系统的发育。 展开更多
关键词 Irx5a pCS^2+质粒 DNA 重组 RNA探针 胚胎原位杂交技术
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低氧诱导因子-1在小鼠胚胎神经胚形成阶段的发育学表达 预览 被引量:2
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作者 丁震宇 李泽桂 +2 位作者 星懿展 纪华 马路 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期 229-232,共4页
为研究低氧诱导因子-1(HIF-1)在小鼠胚胎神经胚形成阶段的时空表达规律,探讨HIF-1在胚胎神经系统发生和发育过程中的作用.本研究以地高辛标记的HIF-1α cRNA为探针,采用全胚胎原位杂交技术,观察HIF-1α在神经胚形成阶段的表达规律.结果... 为研究低氧诱导因子-1(HIF-1)在小鼠胚胎神经胚形成阶段的时空表达规律,探讨HIF-1在胚胎神经系统发生和发育过程中的作用.本研究以地高辛标记的HIF-1α cRNA为探针,采用全胚胎原位杂交技术,观察HIF-1α在神经胚形成阶段的表达规律.结果显示:在髓.5 d,整个鼠胚神经管的头端和尾端均可观察到HIF-1α mRNA的表达,此时表达较弱.在E9.5 d,随着神经管的逐渐关闭,HIF-1α mRNA在前脑泡、第一鳃弓、第二鳃弓、后脑泡处急剧增多,并在发育中的眼部有较强的表达;此外在中脑泡以及心脏原基有较弱的表达.到E10.5 d,阳性信号除在E9.5 d检测到的部位继续富集外,在端脑、间脑、发育中的肢芽以及尾部也出现较强的HIF-1α mRNA的表达,且在心脏原基的表达亦进一步增强.E11.5 d时在连合板、喙区、第一鳃弓、第二鳃弓、后脑、延脑、发育中的肢芽以及尾部末端可检测到HIF-1α mRNA的明显表达.以上结果提示HIF-1可能参与了小鼠神经胚形成的发育过程. 展开更多
关键词 低氧诱导因子-1 小鼠 胚胎 神经胚形成阶段 发育 胚胎原位杂交技术
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