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SDF1/CXCR4轴通过PI3K/AKT通路对退变椎间盘血管长入发挥作用
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作者 张晗祥 何斌 +4 位作者 吴永铁 李代君 范华华 蔡小军 胡侦明 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期633-640,共8页
[目的]观察SDF1/CXCR4对髓核细胞(NPCs)诱导血管内皮细胞(VECs)成血管能力的影响。[方法]通过病毒转染上调原代髓核细胞中基质细胞衍生因子1(SDF1)表达,并根据表达量分为D组和UP组,将不同分组的髓核细胞(或条件培养基)与血管内皮细胞进... [目的]观察SDF1/CXCR4对髓核细胞(NPCs)诱导血管内皮细胞(VECs)成血管能力的影响。[方法]通过病毒转染上调原代髓核细胞中基质细胞衍生因子1(SDF1)表达,并根据表达量分为D组和UP组,将不同分组的髓核细胞(或条件培养基)与血管内皮细胞进行共培养,分别进行细胞计数试剂盒8(CCK8)、细胞迁移实验、管腔形成实验,以观察髓核细胞对于血管内皮细胞成血管能力的影响。[结果]在mRNA和蛋白水平检验证实SDF1表达在UP组上调成功。NPCs和VECs共培养后,UP组VECs中pAKT水平较D组显著升高,PTEN水平较D组下降,差异均具有统计学意义。后续的共培养体系中,UP组的VECs在细胞活力、迁移能力、形成管腔样结构能力上较D组均显著增强,差异具有统计学意义。加入MK-2206后,UP+MK-2206组在细胞活力、迁移能力、管腔样结构形成能力上较UP组均显著下降,差异具有统计学意义。加入SF1670后,UP+SF1670组的细胞活力、迁移能力、管腔样结构形成能力均较UP组进一步增强,差异具有统计学意义。[结论]本实验通过体外培养证明退变髓核细胞可通过SDF1/CXCR4信号轴来诱导血管内皮细胞成血管活动,并且这一活动在内皮细胞内通过PI3K/AKT通路调控。 展开更多
关键词 基质细胞衍生因子1 髓核细胞 血管内皮细胞 共培养 血管新生 PI3K/AKT
应用液相芯片技术观察脐带间充质干细胞对T细胞分泌的改变
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作者 牛文惠 李成龙 +3 位作者 刘辉 石文霞 张金卷 朱争艳 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期556-558,共3页
实验分为三组,即脐带间充质干细胞(UC-MSCs)组、脐血T细胞组和UC-MSCs与脐血T细胞的共培养组。采用液相芯片技术检测三组细胞培养上清液中细胞因子的分泌量。检测P1~P8代UC-MSCs14种细胞因子的分泌量,实验得知P6代UC-MSCs细胞因子分泌... 实验分为三组,即脐带间充质干细胞(UC-MSCs)组、脐血T细胞组和UC-MSCs与脐血T细胞的共培养组。采用液相芯片技术检测三组细胞培养上清液中细胞因子的分泌量。检测P1~P8代UC-MSCs14种细胞因子的分泌量,实验得知P6代UC-MSCs细胞因子分泌量较高。利用P6代细胞建立不同比例的共培养体系,检测与抗炎和促炎相关的五种细胞因子表达量。共培养组与对照组相比抗炎细胞因子白细胞介素-4和白细胞介素-10的分泌量显著增加(P<0.05),促炎细胞因子肿瘤坏死因子-α和干扰素γ的分泌量显著减少(P<0.05),且脐血T细胞与UC-MSCs比值为10∶1以上比例时分泌量变化更显著(P<0.05)。共培养组中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子分泌量不受UC-MSCs存在的影响。 展开更多
关键词 间充质干细胞 脐带 T淋巴细胞 液相芯片 细胞因子 共培养 免疫调节 肝病
共培养大型海藻对蒙古裸腹溞培养体系的生态效应
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作者 谢玺 魏杰 +1 位作者 张志鹏 赵文 《生态学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1817-1823,共7页
为了解大型海藻与盐水枝角类共培养的生态作用,通过大型海藻与蒙古裸腹溞共培养的方法,研究了孔石莼和肠浒苔对共培养水体水质的静态净化效果以及对该溞生殖与种群增长的影响。结果表明:孔石莼和肠浒苔对共培养水体氨氮(NH3-N)、pH和溶... 为了解大型海藻与盐水枝角类共培养的生态作用,通过大型海藻与蒙古裸腹溞共培养的方法,研究了孔石莼和肠浒苔对共培养水体水质的静态净化效果以及对该溞生殖与种群增长的影响。结果表明:孔石莼和肠浒苔对共培养水体氨氮(NH3-N)、pH和溶解氧(DO)的影响显著(P<0.05)且变化规律基本一致,其中NH3-N在第12 d降到最低(0.016mg·L-1),随后维持在相对稳定范围内;pH和DO随孔石莼和肠浒苔生物量的增加而升高,pH变化范围8.2~9.0,DO变化范围4.2~6.4 mg·L-1;共培养条件下两种大型海藻对蒙古裸腹溞生殖和种群增长的影响表现出明显差异,在孔石莼共培养体系中,蒙古裸腹溞的平均生殖量、内禀增长率rm、周限增长率λ和世代周期T随孔石莼生物量的增加呈波动升高,当生物量为2.5 g·L-1时均达峰值,之后逐渐下降,平均寿命随孔石莼生物量的增加而减少;孔石莼共培养体系显著优于对照组单一蒙古裸腹溞培养效果(P<0.05),而肠浒苔共培养体系与对照组相差不显著(P>0.05)。研究结果证明了孔石莼对共培养体系水质和养殖动物的有利作用,即共培养一定生物量(2.5~3.5 g·L-1)的孔石莼不但有利于培养水体中NH3-N、DO等水质净化,还可以促进蒙古裸腹溞的生长与繁殖,为蒙古裸腹溞规模化培养工艺优化与新模式构建提供了科学依据。 展开更多
关键词 共培养 蒙古裸腹溞 孔石莼 肠浒苔 种群增长
表乳糖对长双歧杆菌抑制产气荚膜梭菌生长的影响
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作者 魏晨阳 彭晴 +7 位作者 乔宇 徐小轻 张宇微 谢静静 王凯强 田丹丹 张鹏博 石波 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期54-61,共8页
产气荚膜梭菌是一种常见的人畜禽共患的病原菌,可引起人的急性食物中毒和慢性肠道感染,或导致动物的坏死性肠炎等,严重危害人体健康和畜禽养殖业的发展。采用对长双歧杆菌和产气荚膜梭菌单独培养和共培养的方式,研究表乳糖及其同分异构... 产气荚膜梭菌是一种常见的人畜禽共患的病原菌,可引起人的急性食物中毒和慢性肠道感染,或导致动物的坏死性肠炎等,严重危害人体健康和畜禽养殖业的发展。采用对长双歧杆菌和产气荚膜梭菌单独培养和共培养的方式,研究表乳糖及其同分异构体乳糖、乳果糖等特异性碳源对双歧杆菌的生长特性及其抑制产气荚膜梭菌生长的影响。结果表明,长双歧杆菌能够在以表乳糖为碳源的mTPY培养基中生长良好,并显现出与乳糖相似的生长趋势。在与产气荚膜梭菌共培养的过程中,长双歧杆菌能够显著地抑制产气荚膜梭菌的生长,且表乳糖相较于乳糖和乳果糖,能显著提高长双岐杆菌的存活率。还利用牛津杯法对长双歧杆菌培养上清液对产气荚膜梭菌的抑菌效果进行评价,证明其培养上清液对于产气荚膜梭菌具有较好的抑菌活性。上述结果为应用长双歧杆菌抑制产气荚膜梭菌提供理论依据,对深入研究表乳糖调控机制具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 长双歧杆菌 表乳糖 共培养 抑菌
胰腺癌细胞与神经相互作用对MIA PaCa-2转移侵袭的影响及机制研究
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作者 罗萍 辛贝贝 《南开大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期62-68,共7页
为了探讨胰腺癌细胞MIAPaCa-2与神经的相互作用对MIAPaCa-2增殖、凋亡、转移和侵袭能力的影响,及其在上皮间质转化和嗜神经侵袭进程中的作用,建立了MIA PaCa-2和小鼠神经共培养模型,收集上清,用其处理MIAPaCa-2细胞,通过流式细胞术观察C... 为了探讨胰腺癌细胞MIAPaCa-2与神经的相互作用对MIAPaCa-2增殖、凋亡、转移和侵袭能力的影响,及其在上皮间质转化和嗜神经侵袭进程中的作用,建立了MIA PaCa-2和小鼠神经共培养模型,收集上清,用其处理MIAPaCa-2细胞,通过流式细胞术观察CD133+/CXCR4+双染比例变化;Transwell实验检测MIA PaCa-2/神经相互作用和CD133对胰腺癌细胞转移侵袭能力的影响;Western blotting检测不同处理组相关蛋白的表达;CCK-8检测其对MIA PaCa-2增殖能力的影响.结果显示共培养上清处理过的MIA PaCa-2细胞中CD133+/CXCR4+双阳性比例显著高于普通培养基组(P<0.05),MIA PaCa-2/神经相互作用和CD133促进MIA PaCa-2增殖、转移和侵袭,提高其抗凋亡能力,上调Vimentin和Slug的表达.表明MIA PaCa-2/神经相互作用可提高胰腺癌细胞中CD133+/CXCR4+双阳比例,促进细胞增殖,抑制凋亡,调控细胞上皮间质转化进程,并诱导其转移侵袭. 展开更多
关键词 胰腺癌 共培养 转移 侵袭
人胎盘来源间充质干细胞对T淋巴细胞分泌白细胞介素-4和γ干扰素影响的实验研究 预览
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作者 张莉 吴素琴 孙晓 《中国中西医结合儿科学》 2019年第1期12-14,共3页
目的观察人胎盘来源间充质干细胞对活化的T淋巴细胞分泌白细胞介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)能力的影响,推测人胎盘来源间充质干细胞应用于临床治疗多种疾病的可能性。方法分离两个健康人来源的T淋巴细胞,制备混合淋巴细胞培养(MLC)... 目的观察人胎盘来源间充质干细胞对活化的T淋巴细胞分泌白细胞介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)能力的影响,推测人胎盘来源间充质干细胞应用于临床治疗多种疾病的可能性。方法分离两个健康人来源的T淋巴细胞,制备混合淋巴细胞培养(MLC)体系。再获取人胎盘来源间充质干细胞,将人胎盘来源间充质干细胞与MLC体系混合共培养。共分为4组,分别是同源T细胞Ⅰ组、同源T细胞Ⅱ组、共培养组、阳性对照组,每组接种10孔。培养72h。采用ELISA法检测各组细胞培养上清液中IL-4、IFN-γ的含量。结果同源T细胞Ⅰ、Ⅱ组组间细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ比较差异无统计学意义(P>0.05);与同源T细胞Ⅰ、Ⅱ组比较,共培养组和阳性对照组细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ浓度显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与共培养组比较,阳性对照组细胞培养上清液中IL-4浓度显著升高,IFN-γ浓度显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论人胎盘来源间充质干细胞可抑制活化的T淋巴细胞分泌IL-4的能力、促进IFN-γ的能力,胎盘间充质干细胞可能具有促进Th0向Th1细胞分化的作用。 展开更多
关键词 人胎盘来源间充质干细胞 MLC体系 共培养 白细胞介素-4 Γ干扰素
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前交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞共培养条件下前列腺素E2的作用 预览
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作者 蔡林奕 皮彩霞 谢静 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第13期2094-2100,共7页
背景:滑膜细胞与前交叉韧带成纤维细胞共培养体系的建立能在较大程度上模拟韧带损伤后的微环境变化。在前列腺素E2等炎症因子的刺激下,基质金属蛋白酶家族与基质金属蛋白酶组织抑制剂家族(tissue inhibitorsof metalloproteinases,TIMPs... 背景:滑膜细胞与前交叉韧带成纤维细胞共培养体系的建立能在较大程度上模拟韧带损伤后的微环境变化。在前列腺素E2等炎症因子的刺激下,基质金属蛋白酶家族与基质金属蛋白酶组织抑制剂家族(tissue inhibitorsof metalloproteinases,TIMPs)表达量的严重失衡可在一定程度上解释前交叉韧带的不可自我修复特性。目的:在前交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞共培养的条件下,研究前列腺素E2对滑膜细胞迁移和TIMPs基因表达的影响。方法:体外分别进行人滑膜细胞的单培养以及前交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞的Transwell共培养,用前列腺素E2干预后,细胞划痕实验检测24 h时的滑膜细胞迁移率;半定量PCR分析滑膜细胞中TIMPs基因表达的变化。结果与结论:①前列腺素E2处理单培养的滑膜细胞后,细胞迁移率显著下降(P <0.05);与共培养滑膜细胞比较,前列腺素E2对单培养滑膜细胞迁移的抑制作用更为显著(P <0.05);②在单培养滑膜细胞中,前列腺素E2呈浓度依赖性地抑制TIMPs基因的表达(P <0.05);对TIMP2和TIMP4而言,这种抑制作用具有时间依赖性;对TIMP1和TIMP3而言,随时间增加,基因表达上调;③共培养滑膜细胞TIMPs基因表达的变化幅度不如单培养细胞显著,且各个时间点的TIMPs基因表达量均高于单培养处理组(P <0.05);④结果提示,前列腺素E2能显著抑制滑膜细胞的迁移和TIMPs的基因表达,而共培养的旁分泌作用可在一定程度上解除这种抑制。 展开更多
关键词 前列腺素E2 前交叉韧带 滑膜细胞 成纤维细胞 共培养 TIMPS 基质金属蛋白酶组织抑制剂家族 基质金属蛋白酶类 细胞迁移 前列腺素 组织工程
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关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞不同共培养方式对细胞增殖与分化的影响 预览 被引量:1
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作者 赵文慧 皮洪涛 +13 位作者 冯万文 李向东 王建伟 刘岳鹏 姜洋 马建新 夏亚一 王翠芳 邵林林 李春辉 郁洪阳 刘尚林 董言斌 马亚辉 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第1期24-29,共6页
背景:在关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养环境中,软骨细胞功能活跃,增殖速度加快,骨髓间充质干细胞促进了软骨细胞的表型维持,而且少量软骨细胞提供的微环境能够诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,降低了软骨分化过程中出现的肥大表... 背景:在关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养环境中,软骨细胞功能活跃,增殖速度加快,骨髓间充质干细胞促进了软骨细胞的表型维持,而且少量软骨细胞提供的微环境能够诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,降低了软骨分化过程中出现的肥大表型和软骨内骨化,但是影响共培养系统中细胞增殖分化的因素和细胞间相互作用的机制尚不明确。目的:观察软骨细胞和骨髓间充质干细胞接触共培养对细胞增殖分化的影响,进一步优化共培养方式,为探讨共培养系统中二者的相互作用机制提供依据。方法:分离和培养新西兰兔(南京医科大学实验动物中心提供)软骨细胞和骨髓间充质干细胞,取第2代软骨细胞和骨髓间充质干细胞,以1∶3的比例直接混合在24孔板进行接触共培养为接触共培养组,以1∶3比例分别在Transwell的上室和下室进行非接触共培养为非接触共培养组,共培养21 d。细胞爬片进行甲苯胺蓝染色、COL2a1及Cx43细胞免疫化学染色。应用CCK8检测共培养系统中细胞的增殖情况,ELISA检测共培养细胞上清液中糖胺聚糖和转化生长因子β3水平,Western blot检测共培养细胞COL2a1和Cx43的表达。然后添加转化生长因子β3进行软骨细胞和骨髓间充质干细胞接触共培养和非接触共培养,比较细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43蛋白表达的变化。结果与结论:①随着共培养时间的延长,细胞增殖能力逐渐增高,接触共培养组细胞吸光度值明显高于非接触共培养组(P<0.05),糖胺聚糖和转化生长因子β3水平以及COL2a1和Cx43的蛋白表达明显高于非接触共培养组;②添加10μg/L转化生长因子β3共培养21 d,接触共培养组细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43的表达与未添加转化生长因子β3比较无明显变化(P>0.05),而非接触共培养组的细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43蛋白表达明显提高(P<0.05), 展开更多
关键词 关节软骨细胞 骨髓间充质干细胞 共培养 增殖 分化 糖胺聚糖 Ⅱ型胶原 转化生长因子Β3 缝隙连接 连接蛋白 干细胞 软骨细胞 骨髓 间质干细胞 培养技术 转化生长因子Β3 连接蛋白43 组织工程
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S100β基因修饰的大鼠嗅鞘细胞与脱细胞异种神经桥接体共培养体系的生物学特性研究
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作者 梁雪云 段昉 +3 位作者 王贺颖 贾桦 牛建国 何仲义 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期127-133,共7页
目的:通过观察S100β基因修饰的SD乳鼠嗅鞘细胞(OECs)在脱细胞异种神经桥接体(ANX)的黏附情况及分泌功能,研究S100β修饰的OECs与ANX共培养体系的生物学特性。方法:用表达S100β的重组慢病毒感染SD乳鼠的OECs (S100β-OECs),利用流式细... 目的:通过观察S100β基因修饰的SD乳鼠嗅鞘细胞(OECs)在脱细胞异种神经桥接体(ANX)的黏附情况及分泌功能,研究S100β修饰的OECs与ANX共培养体系的生物学特性。方法:用表达S100β的重组慢病毒感染SD乳鼠的OECs (S100β-OECs),利用流式细胞术检测细胞的感染效率;将感染成功的细胞注入通过化学萃取法制作的ANX内,通过扫描电镜及免疫荧光染色法观察各组OECs的黏附情况及分泌功能。结果:GFPOECs及S100β-OECs的感染效率分别为(73. 10±2. 69)%和(73. 50±4. 59)%;通过扫描电镜观察到ANX内原有细胞主要结构基本完全去除,仅保留了细胞的的基膜结构,GFP-OECs及S100β-OECs在ANX内沿基膜纵轴方向聚集生长;免疫荧光染色结果发现,生长在ANX上的OECs、GFP-OECs、S100β-OECs均表达NGF、BDNF等神经营养因子,且S100β-OECs组S100β蛋白表达高于其他两组(P <0. 05)。结论:S100β-OECs可稳定的过表达S100β蛋白,在S100β-OECs与ANX共培养体系中,S100β-OECs与ANX的生物相容性良好。 展开更多
关键词 S100Β 嗅鞘细胞 脱细胞异种神经桥接体 共培养
牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞不同混合比例共培养细胞活性的比较 预览
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作者 吴森 《青海畜牧兽医杂志》 2019年第2期14-20,50共8页
为探索不同细胞混合比例对牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞共培养体系细胞活性的影响,本研究采集新生秦川犊牛背最长肌和肾周脂肪,分离提取肌卫星细胞和前体脂肪细胞,采用DMEM/F12培养基,建立不同血清浓度(5%、10%、15%、20%的胎牛血... 为探索不同细胞混合比例对牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞共培养体系细胞活性的影响,本研究采集新生秦川犊牛背最长肌和肾周脂肪,分离提取肌卫星细胞和前体脂肪细胞,采用DMEM/F12培养基,建立不同血清浓度(5%、10%、15%、20%的胎牛血清,FBS)的牛原代肌肉卫星细胞和前体脂肪细胞的共培养体系,然后通过分别调整各共培养体系中肌卫星细胞和前体脂肪细胞的混合比例(肌肉细胞∶脂肪细胞=10∶1、5∶1、2∶1),来研究细胞混合比例对各共培养体系的影响。共培养14d,每两天更换培养基,并采用MTT染色法测定细胞活性。统计分析后发现∶随着共培养体系中前体脂肪细胞比例增加,共培养细胞活性增加;共培养10d以后不同混合比例细胞活性有着显著差异(P<0.05);混合比例为2∶1时共培养细胞活性最高。综上,为了获得最好的牛肌卫星细胞和前体脂肪细胞共培养效果,达到较高的细胞培养活性,建议牛肌卫星细胞和前体脂肪细胞按5∶1或2∶1的混合比例进行共培养。 展开更多
关键词 前体脂肪细胞 肌卫星细胞 共培养 牛原代细胞
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回转模拟失重对共培养体系血管内皮细胞Notch3信号通路相关蛋白表达的影响 预览
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作者 潘益凯 李程飞 +6 位作者 孟欣 高原 石菲 赵疆东 杨长斌 孙喜庆 王永春 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第3期269-273,278共6页
目的:探讨模拟失重条件下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)共培养的细胞模型体系中HUVECs的Notch3信号通路相关蛋白表达。方法:分别取HUVECs和HASMCs,分为正常重力组和模拟失重组,共培养48h时,观察HUVECs形态;提... 目的:探讨模拟失重条件下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)和人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)共培养的细胞模型体系中HUVECs的Notch3信号通路相关蛋白表达。方法:分别取HUVECs和HASMCs,分为正常重力组和模拟失重组,共培养48h时,观察HUVECs形态;提取两组HUVECs细胞的总蛋白,采用Westernblot技术检测Notch3、Jagged1、c-Src和RBP-Jκ蛋白表达。结果:共培养48h时,正常重力组HUVECs细胞呈现为多角形、以“铺路石”样紧密排列,模拟失重组HUVECs则多为圆形、边角变钝;与正常重力组比较,模拟失重组HUVECs中Notch通路相关蛋白Notch3、Jagged1、c-Src及RBP-Jκ的表达显著降低(P<0.05)。结论:模拟失重可引起共培养模型中HUVECs细胞Jagged1和Notch3的蛋白表达降低,其机制可能与c-Src表达降低有关。 展开更多
关键词 失重模拟 内皮细胞 平滑肌细胞 共培养 NOTCH3
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回转模拟失重对共培养体系中平滑肌细胞增殖及凋亡的影响 预览
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作者 高原 潘益凯 +6 位作者 李程飞 孟欣 石菲 赵疆东 杨长斌 孙喜庆 王永春 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第3期274-278,共5页
目的:探讨回转模拟失重对与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养的人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)增殖及凋亡的影响。方法:建立HUVECs与HASMCs共培养模型,以细胞回转器模拟失重效应,分为正常重力组和模拟失重组;共培养48h时,观察HASMCs形态,采... 目的:探讨回转模拟失重对与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)共培养的人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)增殖及凋亡的影响。方法:建立HUVECs与HASMCs共培养模型,以细胞回转器模拟失重效应,分为正常重力组和模拟失重组;共培养48h时,观察HASMCs形态,采用Western blot检测2组HASMCs细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达,分析模拟失重对共培养的HASMCs细胞增殖及凋亡的影响。结果:共培养48h时,与正常重力组比较,模拟失重组HASMCs形态由长梭形变为多角形或不规则形;PCNA及Bax蛋白表达显著下降(P<0.05)、Bcl-2蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论:模拟失重48h可抑制与HUVECs共培养的HASMCs增殖和凋亡。 展开更多
关键词 失重模拟 平滑肌细胞 共培养 增殖 凋亡
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骨髓基质细胞体外诱导小鼠肌源性干细胞造血分化初步研究
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作者 刘志强 李妍 +4 位作者 杨小娟 李慧宁 韩远豪 王晓玲 汪涛 《生物医学工程与临床》 CAS 2019年第3期264-268,共5页
目的研究骨髓基质细胞(BMSC)对小鼠肌源性干细胞(MDSC)体外造血分化的影响并探讨作用机制。方法选择6~8周龄C57BL/6雄性小鼠4只;5 d龄C57BL/6小鼠10只,雌雄不限。采用密度梯度离心法获取6~8周龄小鼠BMSC;同时利用混合酶消化联合磁珠分... 目的研究骨髓基质细胞(BMSC)对小鼠肌源性干细胞(MDSC)体外造血分化的影响并探讨作用机制。方法选择6~8周龄C57BL/6雄性小鼠4只;5 d龄C57BL/6小鼠10只,雌雄不限。采用密度梯度离心法获取6~8周龄小鼠BMSC;同时利用混合酶消化联合磁珠分选法分离5d龄小鼠后肢骨骼肌干细胞抗原1阳性(SCA-1^+)MDSC,建立以BMSC为饲养细胞的共培养体系。MDSC随机分为3组,对照组为新鲜分离的MDSC,单培养组和共培养组分别进行单独培养或与BMSC共培养7 d。采用相差显微镜观察细胞形态;免疫细胞化学(ICC)法检测SCA-1表达;Western blot检测造血相关分子CD34和CD45表达,相对灰度法分析数据;real-time RT-PCR检测Wnt信号通路相关分子的转录水平,数据采用AACt相对定量法分析。结果富集的MDSC胞体小而圆,表达SCA-1;单培养组细胞贴壁生长,呈梭形或纺锤形,可形成多核肌管;共培养组除少量细胞贴壁生长外,可见大量小圆细胞悬浮生长;与对照组相比,单培养组CD34和CD45表达未见显著变化,共培养组显著提高,差异有明显统计学意义(CD34,t=9.068,P=0.010;CD45,t=4.860,P=0.018);在基因转录水平,与对照组比较,单培养组Wnt5a转录水平提高(t=7.395,P=0.018),共培养组Wnt2、Wnt3、CCND1和myc表达上调(Wnt2, t=4.964,P=0.008;Wnt3,t=9.513,P=0.010;CCND1,t=9.688,P=0.010;myc,t=7.985,P=0.005)。结论 MDSC单独培养时以成肌分化为主;与BMSC共培养时发生造血分化,机制可能与激活经典Wnt信号通路有关。 展开更多
关键词 肌源性干细胞 共培养 骨髓基质细胞 造血分化 细胞治疗 WNT信号通路
大鼠施万细胞与成纤维细胞联合移植对大鼠失神经支配穿支皮瓣神经再生的影响及其机制
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作者 陈伟 魏在荣 +6 位作者 吴必华 杨成兰 金文虎 龚飞宇 孙广峰 聂开瑜 王达利 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期134-142,共9页
目的 探讨大鼠施万细胞与成纤维细胞(Fb)联合移植对大鼠失神经支配穿支皮瓣神经再生的影响及其机制. 方法 (1)从2只孕14 ~16 d SD大鼠胚胎躯干分离培养Fb并观察细胞形态,取第3代细胞用于后续实验.免疫组织化学法观察细胞纤维粘连蛋白和E... 目的 探讨大鼠施万细胞与成纤维细胞(Fb)联合移植对大鼠失神经支配穿支皮瓣神经再生的影响及其机制. 方法 (1)从2只孕14 ~16 d SD大鼠胚胎躯干分离培养Fb并观察细胞形态,取第3代细胞用于后续实验.免疫组织化学法观察细胞纤维粘连蛋白和Ephrin-B2蛋白的表达,实时荧光定量反转录PCR法检测细胞Ephrin-B2 mRNA的表达(样本数为3).(2)从45只出生1~3dSD大鼠双侧坐骨神经和臂丛神经分离培养施万细胞并观察细胞形态,取第3代细胞用于后续实验.免疫荧光法及流式细胞仪检测S100阳性细胞率,样本数分别为9、3.(3)于DMEM高糖培养基中,取1×105个/mL Fb、施万细胞各1 mL共培养,设为施万细胞+Fb共培养组;另取1×105个/mL施万细胞2 mL单独培养,设为施万细胞单独培养组.每组5孔细胞.培养6、24 h于倒置相差显微镜下观察2组施万细胞的成簇群情况并计数,另用免疫荧光法观察培养24 h时施万细胞+Fb共培养组施万细胞的成簇群情况,蛋白质印迹法检测培养24 h时2组施万细胞EphB2、Sox2和N-钙黏蛋白的蛋白表达(样本数为20).(4)取100只8周龄雄性SD大鼠,每只大鼠腹壁制成1个原位回植失神经支配穿支皮瓣,按随机数字表法分为单纯皮瓣组、Fb单独移植组、施万细胞单独移植组、施万细胞+Fb共移植组,每组25只.Fb单独移植组、施万细胞单独移植组大鼠皮瓣分别注射0.4 mL Fb、施万细胞(均为2×106个),施万细胞+ Fb共移植组大鼠皮瓣注射0.4 mL Fb与施万细胞混合细胞(共2×106个,细胞数量比为1∶1),单纯皮瓣组大鼠皮瓣注射等体积的DMEM高糖培养基.注射后2、5、7、9、14 d,按随机数字表法每组分别取5只大鼠,取皮瓣组织,免疫荧光法观察再生神经数量、直径及排列.对数据行完全随机设计t检验、重复测量方差分析、t检验及Bonferroni校正. 结果 (1)从大鼠胚胎躯干分离培养的第3代细胞大小、形态较均一,呈长梭形,细胞核� 展开更多
关键词 外科皮瓣 成纤维细胞 神经再生 施万细胞 共培养
少根紫萍对湿地污染水体的修复研究 预览
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作者 乐思秀 王静 +4 位作者 李国林 李师 王鑫 白九元 赵云 《四川林业科技》 2019年第3期13-21,共9页
大量含氮、磷的污水未经处理直接排放到当地河流湖泊等自然水体中,导致湿地环境越来越恶劣,水体富营养化程度加剧,对污染水体的修复已迫在眉睫。本实验以1/5的Hoagland溶液为培养液,设置0 mL·L^-1、20 mL·L^-1、40 mL·L... 大量含氮、磷的污水未经处理直接排放到当地河流湖泊等自然水体中,导致湿地环境越来越恶劣,水体富营养化程度加剧,对污染水体的修复已迫在眉睫。本实验以1/5的Hoagland溶液为培养液,设置0 mL·L^-1、20 mL·L^-1、40 mL·L^-1、80 mL·L^-1、160 mL·L^-1五个铜绿微囊藻接种浓度梯度与0 mg·m^-2、100 mg·m^-2、200 mg·m^-2、400 mg·m^-2、800 mg·m^-2 5个少根紫萍接种浓度梯度进行双因素正交试验。结果发现,在0~15 d内,所有少根紫萍接种浓度和铜绿微囊藻接种浓度处理下,水体中总氮(TN)、磷(TP)含量随着接种时间的增加而降低,且铜绿微囊藻和少根紫萍共培养比各自单独培养对污染水体具有更好的修复效果。15d后测定培养液中藻毒素和少根紫萍体内藻毒素含量,结果表明少根紫萍可有效吸收培养液中的藻毒素。以上结果表明,低浓度铜绿微囊藻可促进少根紫萍生长,高浓度铜绿微囊藻抑制少根紫萍生长,少根紫萍可有效吸收培养液中的TN、TP和藻毒素。在铜绿微囊藻浓度为20 mL·L^-1、少根紫萍接种浓度为400 mg·m^-2时,浮萍生长状况最好,对培养液中TN、TP及藻毒素的去除率也达到最高。综上所述,低浓度铜绿微囊藻和100%覆盖率的少根紫萍共培养用于湿地水体修复具有良好的修复效果。 展开更多
关键词 少根紫萍 铜绿微囊藻 共培养 富营养化
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复合菌株共培养制曲改善郫县豆瓣成曲酶系活力 预览
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作者 陈廷廷 胡琼 +4 位作者 唐洁 雷丹 朱纯莹 张庆 向文良 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期62-69,共8页
为改善郫县豆瓣成曲酶系活力,对传统酿造酱制品中高产蛋白酶霉菌进行分离鉴定,并以蚕豆瓣为原料,利用单一菌株和复合菌株共培养制曲,比较2种制曲方式主要酶活力。实验中分离到2株高产蛋白酶菌株QM-6和QH-3,经形态学和生物学鉴定分别为... 为改善郫县豆瓣成曲酶系活力,对传统酿造酱制品中高产蛋白酶霉菌进行分离鉴定,并以蚕豆瓣为原料,利用单一菌株和复合菌株共培养制曲,比较2种制曲方式主要酶活力。实验中分离到2株高产蛋白酶菌株QM-6和QH-3,经形态学和生物学鉴定分别为米曲霉(Aspergillus oryzae)和黑曲霉(Aspergillus niger)。米曲霉QM-6和黑曲霉QH-3共培养制曲比单一菌株周期短,且豆瓣成曲曲香浓郁;利用复合菌株制曲,中性蛋白酶、碱性蛋白酶、氨肽酶比单一米曲霉制曲酶活力高,最高分别为1532、1164和151U/g,酸性蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶活力最高分别为513、121和574U/g,比单一米曲霉或黑曲霉制曲提高约1倍。综合制曲过程中的曲料菌丝、孢子、颜色、气味、质地等变化与酶活力比较,米曲霉QM-6和黑曲霉QH-3共培养复合制曲能有效提高蚕豆曲酶系活力,弥补单菌株制曲酶活力不足的缺陷,且成曲品质优良。 展开更多
关键词 郫县豆瓣 米曲霉 黑曲霉 共培养 酶活力
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癌相关成纤维细胞对上皮性卵巢癌细胞耐药性影响及机制初步研究
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作者 董丽华 孙玮 傅士龙 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期191-195,共5页
目的:探讨癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)对卵巢癌细胞化疗耐药性影响及机制。方法:通过CAFs和卵巢癌细胞Ovcar3共培养,采用流式细胞术检测顺铂(cis-diammin-odichloroplatinum,DDP)对共培养前后卵巢癌细胞... 目的:探讨癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)对卵巢癌细胞化疗耐药性影响及机制。方法:通过CAFs和卵巢癌细胞Ovcar3共培养,采用流式细胞术检测顺铂(cis-diammin-odichloroplatinum,DDP)对共培养前后卵巢癌细胞凋亡率的改变;应用实时定量PCR、Western blot其蛋白水平的变化;以及AKT体外特异性阻断剂LY294002对CAFs引起化疗耐药的逆转作用。结果:CAFs与卵巢癌细胞共培养后,DDP诱导的卵巢癌细胞凋亡显著减少(P<0.05);共培养组卵巢癌细胞中PI3K及XIAP的mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05);共培养后PI3K/XIAP蛋白表达显著升高(P<0.05);磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达显著升高(P<0.01)。抑制剂LY294002可显著降低XIAP蛋白表达。结论:CAFs可通过影响PI3K/AKT/XIAP信号通路,影响卵巢癌化疗耐药效应。 展开更多
关键词 癌相关成纤维细胞 卵巢癌 共培养 化疗耐药
27-羟基胆固醇对神经细胞和星形胶质细胞溶酶体胆固醇转运相关因子表达的影响 预览
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作者 陈思 周催 +3 位作者 余辉艳 陶领伟 王玉珊 肖荣 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第2期269-275,共7页
目的探讨27-羟基胆固醇(27-hydroxycholesterol,27-OHC)在神经细胞(SH-SY5Y)和星形胶质细胞(C6)共培养体系中对细胞溶酶体胆固醇转运相关因子表达的影响。方法采用Trans-well小室进行SH-SY5Y细胞和C6细胞共培养,使用不同剂量的27-OHC对... 目的探讨27-羟基胆固醇(27-hydroxycholesterol,27-OHC)在神经细胞(SH-SY5Y)和星形胶质细胞(C6)共培养体系中对细胞溶酶体胆固醇转运相关因子表达的影响。方法采用Trans-well小室进行SH-SY5Y细胞和C6细胞共培养,使用不同剂量的27-OHC对共培养体系下细胞进行处理,分为对照组(DMEM组)、低剂量组(27-OHC 5μmol/L)、中剂量组(27-OHC 10μmol/L)及高剂量组(27-OHC 20μmol/L)。采用COD-PAP法检测两种细胞中的总胆固醇浓度;采用Real-time PCR和Western blotting检测两种细胞溶酶体内特异性胆固醇转运蛋白质——尼曼匹克蛋白质1(Niemann-Pick C protein 1,NPC1)、NPC2的基因表达水平和蛋白质表达水平。结果随着27-OHC处理浓度的升高,SH-SY5Y细胞内胆固醇浓度逐渐上升(P <0. 05),C6细胞内胆固醇浓度逐渐降低(P <0. 05);SH-SY5Y细胞溶酶体内NPC基因及蛋白质表达水平显著下调(P <0. 05);C6细胞内溶酶体NPC基因及蛋白质表达水平显著上调(P <0. 05)。结论 27-OHC可引起神经细胞及星形胶质细胞溶酶体内胆固醇转运障碍,使胆固醇在神经细胞溶酶体内蓄积。 展开更多
关键词 27-羟基胆固醇 神经细胞 星形胶质细胞 溶酶体 转运 共培养
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脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖影响的分子机制 预览
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作者 李响 吴志贤 +2 位作者 刘宏伟 梁杰 莫自增 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第1期61-67,共7页
背景:脂肪来源干细胞已广泛用于组织填充修复,但是其对皮肤瘢痕抑制和修复的作用机制还不清楚。目的:探讨脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物活性的影响及分子机制。方法:取第3代人脂肪来源干细胞,分别以0,3×104,6×104,1... 背景:脂肪来源干细胞已广泛用于组织填充修复,但是其对皮肤瘢痕抑制和修复的作用机制还不清楚。目的:探讨脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物活性的影响及分子机制。方法:取第3代人脂肪来源干细胞,分别以0,3×104,6×104,1.2×105/孔接种于Transwell小室的上室(0为对照组,只含细胞培养液),取第4代对数生长期的瘢痕疙瘩成纤维细胞,以6×104/孔接种于下室(脂肪干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞比例分别为0.5∶1,1∶1和2∶1),进行人脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养,培养24 h取下室瘢痕疙瘩成纤维细胞进行相关指标检测。结果与结论:①人脂肪来源干细胞能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、迁移和胶原合成能力,并且随着脂肪干细胞所占比例的升高,抑制作用显著增强;②人脂肪来源干细胞能够显著促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,并且随着脂肪干细胞所占比例的升高,促进作用显著增强;③Western blot检测显示人脂肪来源干细胞能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞p-ERK、Bcl-2和β-catenin蛋白表达;④结果表明,脂肪来源干细胞通过抑制ERK/β-catenin通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移,并促进凋亡。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 瘢痕疙瘩成纤维细胞 共培养 细胞增殖 细胞凋亡 ERK通路 干细胞 国家自然科学基金 干细胞 脂肪组织 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 培养技术 细胞增殖 细胞凋亡 组织工程
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合成微生物组:当“合成生物学”遇见“微生物组学”
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作者 朱彤 吴边 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第17期1791-1798,共8页
合成微生物组是指运用合成生物学方法构建的功能菌群.合成微生物组以代谢通路模块化为核心特征,每个代谢模块的工作由一个菌株完成,从而实现多个菌株的分工与合作.与单菌株相比,合成微生物组具有降低菌株代谢负担与遗传改造难度、提供... 合成微生物组是指运用合成生物学方法构建的功能菌群.合成微生物组以代谢通路模块化为核心特征,每个代谢模块的工作由一个菌株完成,从而实现多个菌株的分工与合作.与单菌株相比,合成微生物组具有降低菌株代谢负担与遗传改造难度、提供多样的元件表达平台、实现'即插即用'的模块替换等优势.在合成生物学与微生物组学快速发展、交汇融合的影响下,合成微生物组已成为近些年微生物领域新的研究热点,在生物合成平台化合物、复杂大分子以及生产生物燃料等方面具有广阔的应用前景.本文介绍了合成微生物组的设计原理与优势,总结了近些年的主要研究成果,阐述其目前面临的挑战与机遇,最后对其未来的发展进行展望. 展开更多
关键词 合成微生物组 模块化 共培养 合成生物学 代谢工程
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