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B16细胞与HaCaT细胞体外共培养模型的建立 预览
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作者 朱祯慧 朱丽清 +2 位作者 陈金妹 林娇芬 潘裕添 《陕西科技大学学报》 2017年第4期132-137,共6页
初步建立小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)和人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)的共培养模型,利用熊果苷和8-甲氧补骨脂素(8-MOP)对此模型进行作用验证.使用10%DMEM完全培养基对B16细胞和HaCaT细胞进行培养,尝试不同的细胞接种顺序和细... 初步建立小鼠黑色素瘤细胞(B16细胞)和人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)的共培养模型,利用熊果苷和8-甲氧补骨脂素(8-MOP)对此模型进行作用验证.使用10%DMEM完全培养基对B16细胞和HaCaT细胞进行培养,尝试不同的细胞接种顺序和细胞接种浓度构建共培养模型;将不同浓度的熊果苷和8-MOP作用到共培养模型中,通过测细胞毒性、黑色素含量和酪氨酸酶含量来验证模型的可靠性.结果表明,细胞接种顺序对共培养模型没有影响,采用B16细胞数量:HaCaT细胞数量为1∶4为最终细胞接种浓度比例;当熊果苷为100μg/mL时对黑色素含量和酪氨酸酶含量达到最高抑制效果;当8-MOP为20μg/mL时对黑色素含量和酪氨酸酶含量达到最高促进效果,均与单独B16细胞实验结果趋势一致.有效构建了B16细胞和HaCaT细胞共培养模型,并且可以将该模型运用于筛选抑制/促进黑色素药物中. 展开更多
关键词 B16细胞 HACAT细胞 共培养模型 熊果苷 8-MOP
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不同纯度高良姜素对A375-HaCaT共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响 预览 被引量:3
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作者 彭晓明 霍仕霞 +2 位作者 赵萍萍 高莉 闫明 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2014年第1期58-61,共4页
目的:研究不同纯度高良姜素对人黑色素瘤细胞-人永生化角质形成细胞(A375-HaCaT)共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响。方法利用Transwell技术建立A375-HaCaT共培养体系,以0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良... 目的:研究不同纯度高良姜素对人黑色素瘤细胞-人永生化角质形成细胞(A375-HaCaT)共培养模型中黑素细胞增殖及黑素合成的影响。方法利用Transwell技术建立A375-HaCaT共培养体系,以0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素作用于共培养模型。采用MTT比色法检测细胞增殖,NaOH裂解法测定黑素含量,多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,ELISA法检测HaCaT细胞因子干细胞生长因子(SCF)、内皮素(ET)-1的表达。结果 A375-HaCaT共培养模型中的A375细胞生长良好,0.1、0.5、1.0、5.0、10μg/mL纯度为70%和90%的高良姜素对共培养体系中的A375细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均具有上调作用。各纯度高良姜素浓度≥0.5μg/mL时,能够提高HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平,且纯度70%的高良姜素作用强度优于90%的高良姜素。结论高良姜素能显著促进A375-HaCaT共培养模型中A375的细胞增殖及黑素合成,其作用机制可能与高良姜素上调HaCaT细胞中的ET-1和SCF等细胞因子的表达水平有关。 展开更多
关键词 高良姜素 黑色素瘤细胞 角质形成细胞 共培养模型 细胞增殖 黑素 内皮素
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肿瘤血管内皮细胞的体外模拟培养
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作者 卢松 陈婷婷 +2 位作者 别明江 吴家玉 熊中华 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期308-312,共5页
目的探讨一种肿瘤血管内皮细胞(TECs)体外模拟培养模型,为后续实验做准备。方法利用半透膜孔径为1.0um的间接共培养双层培养皿建立肿瘤细胞株A549、内皮细胞(HUVECs)体外共培养模型,模拟TECs体内生长环境,对共培养细胞的形态、... 目的探讨一种肿瘤血管内皮细胞(TECs)体外模拟培养模型,为后续实验做准备。方法利用半透膜孔径为1.0um的间接共培养双层培养皿建立肿瘤细胞株A549、内皮细胞(HUVECs)体外共培养模型,模拟TECs体内生长环境,对共培养细胞的形态、生长特性、增殖力及染色体核型、端粒酶活性等遗传特性进行初步分析。结果在共培养条件下,共培养A549一HUVECs细胞呈游走迁徙状态,细胞能量代谢旺盛,细胞通透性增加,细胞增殖能力持续增加,处于自稳态调节紊乱所导致细胞增殖与凋亡的平衡失调的状态,细胞染色体核型表现为亚三倍体,端粒酶活性增高,发生表型转化,从而表现为类似癌前病变的病理特征。结论处于体外模拟共培养模型中的A549-HUVECs细胞所发生的特征性变化,类似于体内肿瘤组织中血管内皮细胞的状态,为我们所需要的TECs,说明肿瘤血管内皮细胞的体外模拟培养方法是可行的。 展开更多
关键词 肿瘤血管内皮细胞 共培养模型 染色体核型 端粒酶活性
熊果苷对A375与HACAT共培养模型中黑素细胞酪氨酸酶活性的影响 预览 被引量:1
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作者 陈凤江 郭云辉 陈巧云 《四川医学》 CAS 2013年第4期445-447,共3页
目的体外构建黑素瘤细胞(A375)与人永生角质形成细胞(HACAT)直接接触共培养模型,观察熊果苷对该模型酪氨酸酶活性的影响同时观察熊果苷对该模型黑素合成及细胞的增殖的影响。方法分别培养A375与HACAT,体外构建黑素瘤细胞与人永生角... 目的体外构建黑素瘤细胞(A375)与人永生角质形成细胞(HACAT)直接接触共培养模型,观察熊果苷对该模型酪氨酸酶活性的影响同时观察熊果苷对该模型黑素合成及细胞的增殖的影响。方法分别培养A375与HACAT,体外构建黑素瘤细胞与人永生角质形成细胞直接接触的共培养模型;将不同浓度熊果苷作用于此模型,用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法检测酪氨酸酶活性、黑素合成以及细胞增殖的。结果 A375与HACAT能共同存活;分别用1mg/ml,0.5mg/ml和0.2mg/ml的熊果苷对共培养细胞的增殖、黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成均有较强的剂量相关的抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01)。结论熊果苷对A375与HACAT共培养模型中细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均呈浓度依赖性抑制作用。 展开更多
关键词 共培养模型 黑素瘤细胞 角质形成细胞 熊果苷
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PD-L2融合蛋白对角质形成细胞/T细胞共培养模型的作用 被引量:1
5
作者 杜观环 李琴 +2 位作者 周永梅 沈雪敏 唐国瑶 《临床口腔医学杂志》 2010年第6期337-340,共4页
目的:探讨人PD-L2融合蛋白对体外模拟口腔扁平苔藓(OLP)局部发病机制的角质形成细胞/T细胞共培养模型的影响。方法:分离培养健康人的角质形成细胞、T细胞,建立共培养模型。实验组加入人PD-L2融合蛋白,阴性对照组加入人IgG1,空白对... 目的:探讨人PD-L2融合蛋白对体外模拟口腔扁平苔藓(OLP)局部发病机制的角质形成细胞/T细胞共培养模型的影响。方法:分离培养健康人的角质形成细胞、T细胞,建立共培养模型。实验组加入人PD-L2融合蛋白,阴性对照组加入人IgG1,空白对照组加入含0.1%BSA的PBS,分别继续共培养72h。流式细胞术检测共培养模型中T细胞凋亡及生长周期的改变,MTT法检测T细胞增殖状态,ELISA检测共培养上清中IL-2、IFN-γ表达水平。结果:人PD-L2融合蛋白抑制了共培养模型中T细胞增殖及细胞因子IL-2、IFN-γ的表达,促进了T细胞凋亡,但是对T细胞生长周期没有明显的影响。结论:人PD-L2融合蛋白对体外角质形成细胞/T细胞共培养模型中T细胞增殖活化有一定负性作用,可能是该融合蛋白拮抗了PD-L2与其第二受体配接后促进T细胞增殖的效应,人PD-L2融合蛋白有望成为OLP新的有效的免疫治疗方法。 展开更多
关键词 口腔扁平苔藓 共培养模型 人PD-L2融合蛋白 免疫治疗
熊果苷对A375细胞与HACAT共培养模型中黑素合成的影响 预览 被引量:2
6
作者 王兴焱 王天晔 +3 位作者 陈巧云 张宁 李绍民 陈景华 《中国美容医学》 CAS 2010年第9期 1321-1323,共3页
目的:体外构建研究色素问题的黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(HACAT)直接接触的共培养模型,利用熊果苷对此共培养体系进行验证。方法:MEM培养基分别培养A375细胞与HACAT细胞,A375细胞与HACAT以1:2的比例共培养,构建黑素瘤细胞... 目的:体外构建研究色素问题的黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(HACAT)直接接触的共培养模型,利用熊果苷对此共培养体系进行验证。方法:MEM培养基分别培养A375细胞与HACAT细胞,A375细胞与HACAT以1:2的比例共培养,构建黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的共培养模型;将不同浓度熊果苷作用于此模型,用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法检测熊果苷对细胞增殖、酪氨酸酶活性以及黑素合成的影响。结果:A375细胞与HACAT能共同存活,1.0mg/ml、0.5mg/ml和0.2mg/ml熊果苷对共培养细胞的增殖、黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成均有较强的剂量相关的抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01)。结论:成功构建了A375细胞与HACAT细胞直接接触的共培养模型;脱色药熊果苷作用于本模型后引起酪氨酸酶及黑素的变化与预期结果一致;本模型为进一步研究色素问题奠定了基础。 展开更多
关键词 共培养模型 黑素瘤细胞 角质形成细胞 熊果苷
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白消一号方作用于黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型中黑素小体转运的观察 预览 被引量:1
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作者 李杰 顾军 毕新岭 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 CAS 2010年第3期 140-142,共3页
目的体外建立黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的培养模型,观察白消一号方对此模型中黑素小体转运的影响,探讨其治疗白癜风的药理作用。方法体外培养黑素瘤细胞和角质形成细胞,用二乙酰羧基荧光素一琥珀酰亚胺酯(CFDA—SE)标记黑... 目的体外建立黑素瘤细胞与角质形成细胞直接接触的培养模型,观察白消一号方对此模型中黑素小体转运的影响,探讨其治疗白癜风的药理作用。方法体外培养黑素瘤细胞和角质形成细胞,用二乙酰羧基荧光素一琥珀酰亚胺酯(CFDA—SE)标记黑素瘤细胞内的黑素小体,然后将标记的黑素瘤细胞与角质形成细胞共同培养。大鼠中药灌胃后取血清加入此模型中,在倒置显微镜下观察混合细胞模型生长及共聚焦显微镜下观察共培养模型中黑素小体由黑素瘤细胞向角质形成细胞的转运情况。结果含药血清可使黑素小体由黑素瘤细胞向角质形成细胞的转运增加。结论在共聚焦显微镜下观察到白消一号方可以促进黑素小体转运,此途径可能为白消一号方治疗白癜风的作用机制之一。 展开更多
关键词 白消一号方 黑素瘤细胞 角质形成细胞 共培养模型 二乙酰羧基荧光素-琥珀酰亚胺酯 白癜风
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舌癌中淋巴管内皮细胞具有特定的生物学表型 预览 被引量:2
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作者 张壮 潘剑 +2 位作者 李一 夏辉 李龙江 《北京口腔医学》 CAS 2010年第3期 121-124,共4页
目的探讨舌癌细胞对淋巴管内皮细胞(LECs)表型及功能特性的影响以及LECs在舌癌淋巴道转移中的作用。方法LECs与舌癌细胞进行共培养,模拟肿瘤中LECs的变化。对肿瘤中LECs的生物学行为,如增殖、淋巴管生成及凋亡进行检测。同时,在转... 目的探讨舌癌细胞对淋巴管内皮细胞(LECs)表型及功能特性的影响以及LECs在舌癌淋巴道转移中的作用。方法LECs与舌癌细胞进行共培养,模拟肿瘤中LECs的变化。对肿瘤中LECs的生物学行为,如增殖、淋巴管生成及凋亡进行检测。同时,在转录水平对与淋巴管内皮细胞生物学行为改变相关的一组基因应用荧光实时定量PCR进行检测。结果与LECs比较,肿瘤中LECs具有更高的增殖活性、淋巴管生成及抵抗凋亡的能力。肿瘤中LECs中EDIL3、NRP1、ANGPTIA、VEGFR1、VEGFC、VEGFA及FN1在转录水平基因表达明显上调。结论在舌癌细胞的影响下,淋巴管内皮细胞的生物学行为发生了改变,并且伴随着基因表达差异,可能会促进舌癌细胞的淋巴道转移。 展开更多
关键词 舌癌 淋巴管内皮细胞 淋巴道转移 共培养模型
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小鼠囊胚在子宫内膜体外共培养模型上着床的超微结构观察 预览
9
作者 王丽 周剑萍 +1 位作者 刘银坤 张炜 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期 330-332,343,i002,共5页
目的:进一步证明已建立的体外着床模型的可行性.方法:将妊娠d 4的小鼠囊胚培养在已建立的体外子宫内膜共培养模型上,电镜观察胚胎植入时囊胚与子宫内膜上皮细胞相互关系的超微结构.结果:小鼠囊胚能正常脱透明带、黏附和扩展.扫描电镜见... 目的:进一步证明已建立的体外着床模型的可行性.方法:将妊娠d 4的小鼠囊胚培养在已建立的体外子宫内膜共培养模型上,电镜观察胚胎植入时囊胚与子宫内膜上皮细胞相互关系的超微结构.结果:小鼠囊胚能正常脱透明带、黏附和扩展.扫描电镜见黏附在子宫内膜上的囊胚呈椭圆形或扁平形;胚胎表面具微绒毛;在胚胎与子宫内膜细胞接触点可见胚胎滋养细胞黏附于胞饮突上.透射电镜观察显示,胚胎滋养细胞通过微绒毛黏附于上皮细胞上,有些滋养细胞通过微绒毛开始植入,局部滋养细胞与上皮细胞形成紧密连接.胚胎滋养细胞与上皮细胞间形成许多镶嵌连接.超微结构显示粗面内质网、线粒体、溶酶体和核糖体非常丰富.结论:小鼠囊胚在子宫内膜体外模型上生长发育良好,该胚胎与子宫内膜共培养系统是研究胚胎着床机理的理想体外模型. 展开更多
关键词 胚胎着床 共培养模型 超微结构
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氯化镧和柠檬酸镧在胃肠道以磷酸镧微粒为转化物种且主要通过M细胞进行转运吸收
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作者 黄慧霞 刘会雪 +2 位作者 马孝杰 管辉 杨晓改 《中国药学:英文版》 CAS CSCD 2018年第8期553-564,共12页
本工作以氯化镧(LaCl3)和柠檬酸镧(LaCit)为代表性化合物,对稀土在消化道内的物种存在形式及吸收转运机制进行了研究和探讨。研究采用了人工胃液和肠液模拟体内消化道环境。电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)检测结果表明,大于99.9%... 本工作以氯化镧(LaCl3)和柠檬酸镧(LaCit)为代表性化合物,对稀土在消化道内的物种存在形式及吸收转运机制进行了研究和探讨。研究采用了人工胃液和肠液模拟体内消化道环境。电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)检测结果表明,大于99.9%的La发生了沉淀。散射光粒度(DLS)分析结果显示,这些微粒的平均粒径由200nm(孵育2h)增大到600nm左右(孵育24h),这表明微粒之间发生了聚集。傅立叶变换红外光谱(FTIR)研究表明,稀土微粒的主要成分为稀土磷酸盐。为研究稀土在肠道中的吸收转运机制,以LaCit(2或100mg/kg/day)对小鼠灌胃给药7天,取小肠的普通肠段和派氏结进行了ICP-MS分析。派氏结中的La含量明显高于普通肠段,这提示稀土微粒可能主要由派氏结上淋巴滤泡上皮中的M细胞吞噬转运。此外,建立了Caco-2细胞单培养模型和Caco-2/RajiB细胞共培养模型分别模拟小肠上皮和滤泡上皮。结果显示,Caco-2/RajiB细胞共培养模型转运的La含量显著高于Caco-2细胞单培养模型(大约60倍左右),且Caco-2细胞单层透过的镧的量极低,这说明M细胞是吸收转运磷酸镧的主要途径。以上结果表明氯化镧和柠檬酸镧在胃肠道主要以磷酸镧微粒形式通过M细胞进行转运吸收。本研究将为稀土在农业和医学中的合理应用提供科学依据。 展开更多
关键词 氯化镧 柠檬酸镧 磷酸镧 人工肠液 派氏结 M细胞 Caco-2细胞单培养模型 Caco-2/Raji B细胞共培养模型 吸收转运
三维共培养模型下人脐静脉内皮细胞对T24膀胱癌细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响 预览
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作者 高超 王琪 +5 位作者 刘翰楠 吴健勇 李宇虹 庞波 梁霞 唐勇 《广西医科大学学报》 CAS 2017年第3期337-341,共5页
目的:研究人脐静脉内皮细胞(HuVEc)对T24膀胱癌细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响。方法:构建HUVEC和T24膀胱癌细胞的Trans-well共培养模型(共培养组),与T24膀胱癌细胞非共培养组进行比较,分别应用Trans-well小室、Matri-gel胶及C... 目的:研究人脐静脉内皮细胞(HuVEc)对T24膀胱癌细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响。方法:构建HUVEC和T24膀胱癌细胞的Trans-well共培养模型(共培养组),与T24膀胱癌细胞非共培养组进行比较,分别应用Trans-well小室、Matri-gel胶及CCK-8法比较两组细胞的侵袭、迁移及增殖能力。结果:侵袭实验24h后,共培养组与非共培养组的侵袭细胞数目分别为(93.22±27.35)个、(52.04±22.54)个,共培养组侵袭细胞数显著高于非共培养组(P〈0.01)。迁移实验24h后,共培养组与非共培养组的迁移细胞数目分别为(183.62土62.07)个、(66.80±23.36)个,共培养组迁移细胞数显著高于非共培养组(P〈0.01)。在增殖实验中,共培养组和非共培养组的吸光度(OD)值在第3、第4、第5天分别为(1.128±0.125)、(O.866±0.068)、(1.536±0.098)和(1.103±0.153)、(1.910±0.139)、(1.550±0.177)。共培养组的细胞增殖率显著高于非共培养组(P〈0.01)。结论:在三维共培养条件下,HUVEC对T24膀胱癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力均有促进作用。 展开更多
关键词 三维共培养模型 T24膀胱癌细胞 人脐静脉内皮细胞 侵袭 迁移 增殖
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三维共培养模型下人脐静脉内皮细胞对鼻咽癌CNE2细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响 预览
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作者 梁霞 高超 +5 位作者 唐勇 刘翰楠 吴健勇 李宇虹 庞波 陈玉 《中国医药科学》 2016年第19期36-39,43共5页
目的探讨三维共培养下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对CNE2细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响。方法采用Transwell小室对HUVEC细胞和CNE2细胞进行共培养,CCK-8法比较两组实验中CNE2细胞增殖能力,细胞计数法比较细胞迁移能力,以及Matrigel胶... 目的探讨三维共培养下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)对CNE2细胞侵袭、迁移及增殖能力的影响。方法采用Transwell小室对HUVEC细胞和CNE2细胞进行共培养,CCK-8法比较两组实验中CNE2细胞增殖能力,细胞计数法比较细胞迁移能力,以及Matrigel胶法比较侵袭能力。结果 HUVEC与CNE2共培养条件下,共培养组迁移能力显著高于非共培养组(P〈0.01)。共培养组侵袭能力显著高于非共培养组(P〈0.01)。在增殖实验中,共培养组和非共培养组的OD值第3天,第4天及第5天,共培养组的细胞增殖率显著高于非共培养组(P〈0.05)。结论在三维共培养条件下,HUVEC对CNE2鼻咽癌细胞的侵袭、迁移及增殖能力有促进作用。 展开更多
关键词 三维共培养模型 CNE2鼻咽癌细胞 人脐静脉内皮细胞 增殖 迁移 侵袭
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MDCK/L02共培养模型评价小肠吸收对雷公藤甲素诱导肝细胞活性氧的影响 被引量:1
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作者 淡墨 于敏 +1 位作者 刘丽 李佐刚 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期700-704,共5页
目的建立MDCK/L02体外肝肠共培养模型,评价小肠吸收对雷公藤甲素(triptolide,TP)肝脏毒性的影响。方法利用Transwell培养体系,建立MDCK/L02模型。通过测定细胞间隙标记物荧光素钠的通透速率,评价共培养的模型,并进一步观察雷... 目的建立MDCK/L02体外肝肠共培养模型,评价小肠吸收对雷公藤甲素(triptolide,TP)肝脏毒性的影响。方法利用Transwell培养体系,建立MDCK/L02模型。通过测定细胞间隙标记物荧光素钠的通透速率,评价共培养的模型,并进一步观察雷公藤甲素对小肠通透的影响。CCK-8法测定雷公藤甲素对MDCK的毒性。利用活性氧(ROS)探针结合高内涵,研究小肠吸收对雷公藤甲素诱导肝脏活性氧的影响。结果MDCK/L02共培养模型形成良好的小肠吸收屏障,荧光素钠测得表观渗透系数为(4.10±0.36)×10^-8cm·s^-1。CCK-8法测定雷公藤甲素与MDCK孵育1、2和4h的IC50分别为14、8和7μg·mL^-1。雷公藤甲素加入MDCK/L02模型受池孵育1h后,显著性增强小肠通透。经过小肠吸收后,雷公藤甲素对ID2诱导活性氧的水平显著性降低。结论本实验成功建立MDCK/L02模型,并利用该模型评价显示雷公藤甲素显著性增强了小肠吸收通透,雷公藤甲素经小肠吸收后显著性减低雷公藤甲素的肝脏毒性。 展开更多
关键词 MDCK/L02共培养模型 小肠吸收 雷公藤甲素 肝脏毒性
体外直接或间接共培养条件下压力经上皮细胞层对气道平滑肌细胞的影响 预览
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作者 邓林红 赵国栋 +2 位作者 石晓灏 张治国 王悦 《常州大学学报:自然科学版》 CAS 2013年第1期1-8,共8页
通过建立气道上皮细胞与平滑肌细胞体外共培养模型,研究气体压力经上皮细胞对气道平滑肌细胞的作用和机制,为理解真实气道内气体压力作用下气道上皮与平滑肌细胞层之间的信息交流方式及其生理病理效应提供科学依据。首先在体外分别单独... 通过建立气道上皮细胞与平滑肌细胞体外共培养模型,研究气体压力经上皮细胞对气道平滑肌细胞的作用和机制,为理解真实气道内气体压力作用下气道上皮与平滑肌细胞层之间的信息交流方式及其生理病理效应提供科学依据。首先在体外分别单独培养原代大鼠气道上皮细胞和气道平滑肌细胞,然后以聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜为介质建立气道上皮细胞与气道平滑肌细胞直接或间接的共培养模型,同时利用自制的气体增压装置对共培养模型中的上皮细胞层施加0-6kPa的压力。之后,采用倒置显微镜、MTT法和原子力显微镜(AFM)等观测共培养模型中气道平滑肌细胞在不同压力作用下和不同时间点的形态特征、细胞增殖和杨氏模量。无论在直接和间接共培养模型中,经上皮细胞施加外部压力都导致气道平滑肌细胞形态变宽、变扁,促进细胞增殖和硬化。而且在直接共培养模型下,气道平滑肌细胞对外加压力的响应更为明显。外加压力透过气道上皮细胞确实能够影响气道平滑肌细胞的结构与功能,这种影响很可能随着上皮细胞和平滑肌细胞间的距离靠近而增强。这一发现对于揭示不同细胞之间的力学信号传导方式有重要的意义,特别是有助于理解哮喘病中气道上皮细胞挤压与气道平滑肌细胞病理变化的关系及其在哮喘病理机制中的作用。 展开更多
关键词 气道上皮细胞 气道平滑肌细胞 体外共培养模型 气体压力 细胞力学
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前列腺增生上皮细胞对间质细胞周期素I表达影响 被引量:1
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作者 杨小丽 宣强 莫曾南 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期 484-485,共2页
目的观察前列腺增生上皮细胞对间质细胞细胞周期素I(cyclin I)基因表达的影响。方法分离良性前列腺增生(BPH)组织的间质细胞与上皮细胞,经细胞形态学及免疫组织化学方法证实后,构建上皮/间质细胞共培养模型;分别提取单独、共培养条... 目的观察前列腺增生上皮细胞对间质细胞细胞周期素I(cyclin I)基因表达的影响。方法分离良性前列腺增生(BPH)组织的间质细胞与上皮细胞,经细胞形态学及免疫组织化学方法证实后,构建上皮/间质细胞共培养模型;分别提取单独、共培养条件下间质细胞的mRNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测cyclin I表达的变化。结果成功分离2种不同形态的细胞,并仅在上皮细胞中检测到前列腺特异性抗原(PSA)阳性表达,间质细胞中检测结蛋白(desmin)的阳性表达;共培养模型后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测发现,在有上皮细胞共培养的间质细胞中,cyclin I基因mRNA的表达低于在单独培养的间质细胞的表达;cyclin I/甘油醛3磷酸盐脱氢酶(G3PDH)的灰度比值分别为(1.001±0.29)和(1.117±0.31),差异有统计学意义(P〈0.05)。结论前列腺增生上皮细胞可抑制间质细胞cyclin I基因的表达。 展开更多
关键词 良性前列腺增生(BPH) 间质/上皮细胞共培养模型 CYCLIN I
前列腺增生间质对上皮细胞组织激肽释放酶7表达的影响 被引量:2
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作者 杨小丽 宣强 +2 位作者 黄逢雨 庞友红 莫曾南 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期305-309,共5页
目的:研究前列腺增生间质细胞对上皮细胞组织激肽释放酶7(KLK7)表达的影响。方法:分离良性前列腺增生(BPH)组织的间质细胞与上皮细胞,经细胞形态学及化学发光微粒子免疫分析(CMIA)方法证实后,构建上皮/间质细胞共培养模型;... 目的:研究前列腺增生间质细胞对上皮细胞组织激肽释放酶7(KLK7)表达的影响。方法:分离良性前列腺增生(BPH)组织的间质细胞与上皮细胞,经细胞形态学及化学发光微粒子免疫分析(CMIA)方法证实后,构建上皮/间质细胞共培养模型;分别提取单独、共培养条件下上皮细胞的mRNA与蛋白;RT—PCR检测KLK7 mRNA表达变化,Western印迹检测KLK7基因编码蛋白(hK7)表达的改变。结果:细胞形态学、CMIA结果显示成功分离上皮与间质细胞,并构建前列腺间质/上皮细胞共培养模型;RT-PCR检测发现,KLK7基因mRNA的表达在有间质细胞共培养的上皮细胞中均高于单独培养的上皮细胞。KLK7/GAPDH的灰度比值分别为1.41±0.04、1.78±0.10,具有显著差异(P〈0.01);Western印迹与RT—PCR结果一致。结论:前列腺增生间质细胞抑制上皮细胞KLK7基因表达,KLK7可能是前列腺上皮细胞应对间质细胞调控的一种效应物质。 展开更多
关键词 良性前列腺增生 间质/上皮细胞共培养模型 组织激肽释放酶7
良性前列腺增生上皮对间质细胞S100A11基因表达的影响 预览
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作者 杨小丽 宣强 莫曾南 《广西医科大学学报》 CAS 2010年第4期 501-503,共3页
目的:研究良性前列腺增生(BPH)上皮对间质细胞S100A11基因表达的影响。方法:分离BPH的间质细胞与上皮细胞,经形态学及免疫学方法证实后,构建共培养模型,并提取单独/共培养条件下间质细胞的mRNA,RT-PCR检测S100A11表达变化。结果:... 目的:研究良性前列腺增生(BPH)上皮对间质细胞S100A11基因表达的影响。方法:分离BPH的间质细胞与上皮细胞,经形态学及免疫学方法证实后,构建共培养模型,并提取单独/共培养条件下间质细胞的mRNA,RT-PCR检测S100A11表达变化。结果:成功分离前列腺间质与上皮细胞并构建共培养模型,S100A11基因mRNA的表达在有上皮细胞共培养的间质细胞中表达低于无上皮细胞共培养的间质细胞,S100A11/G3PDH的灰度比值分别为0.865±0.10、0.963±0.13,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论:BPH上皮细胞可抑制间质细胞S100A11基因表达。 展开更多
关键词 间质/上皮细胞共培养模型 S100A11 良性前列腺增生
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前列腺增生上皮对间质细胞Latexin基因表达的影响 预览 被引量:3
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作者 杨小丽 宣强 莫曾南 《广西医学》 CAS 2010年第6期 633-635,共3页
目的研究前列腺增生上皮对间质细胞Latexin基因表达的影响。方法分离良性前列腺增生(BPH)的间质细胞与上皮细胞,经形态学及免疫组织化学方法证实后,构建共培养模型,并提取单独/共培养条件下间质细胞的mRNA,用RT-PCR检测Latexin基因表... 目的研究前列腺增生上皮对间质细胞Latexin基因表达的影响。方法分离良性前列腺增生(BPH)的间质细胞与上皮细胞,经形态学及免疫组织化学方法证实后,构建共培养模型,并提取单独/共培养条件下间质细胞的mRNA,用RT-PCR检测Latexin基因表达情况。结果成功分离前列腺间质与上皮细胞并构建共培养模型,Latexin基因mRNA的表达在单独培养的间质细胞中表达,高于有上皮细胞共培养的间质细胞;Latexin/G3PDH的灰度比值单独培养的间质细胞为(1.122±0.30),有上皮细胞共培养的间质细胞为(0.917±0.24),差异有统计学意义(P〈0.05)。结论前列腺增生上皮细胞可抑制间质细胞Latexin基因表达。 展开更多
关键词 前列腺增生 间质/上皮细胞共培养模型 Latexin基因
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人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型的建立及鉴定 预览 被引量:7
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作者 陈威中 吴满平 《复旦学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期 768-775,共8页
目的建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,以体外模拟人动脉壁,为动脉粥样硬化及炎症等疾病的发病机制和治疗研究打下基础。方法采用胶原酶灌注消化法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉内皮细胞(human umbilical artery endothe... 目的建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,以体外模拟人动脉壁,为动脉粥样硬化及炎症等疾病的发病机制和治疗研究打下基础。方法采用胶原酶灌注消化法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉内皮细胞(human umbilical artery endothelial cell,HUAEC),采用组织块贴块法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth muscle cell,HUASMC)。用含有抗坏血酸(≥50μg/mL)的培养基孵育平滑肌细胞,使之合成并分泌胶原蛋白,形成内皮细胞的生长基质;然后将内皮细胞以饱和密度接种到平滑肌细胞上,使内皮细胞和平滑肌细胞直接接触并整合形成内皮细胞-平滑肌细胞共培养(EC-SMC co-culture)模型。分别用免疫荧光染色和Dil-Ac-LDL吞噬实验对共培养模型进行形态学和功能学的鉴定。结果形态学鉴定结果显示,两种细胞已成功整合,模拟出体内动脉壁的形态。Dil-Ac-LDL吞噬实验的结果显示共培养模型的内皮细胞中有荧光信号,并且共培养模型中内皮细胞Dil-Ac-LDL的内吞量显著高于单纯内皮细胞(EC monoculture or ECmonolayer),证明共培养模型中内皮细胞与平滑肌细胞已建立联系。结论本实验成功建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,可在体外更好地模拟人动脉壁形态和基本功能。 展开更多
关键词 人脐动脉内皮细胞 人脐动脉平滑肌细胞 动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型 免疫荧光染色 Dil-Ac-LDL吞噬
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聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒在Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型的转运研究 被引量:4
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作者 闻真 李刚 +3 位作者 林东海 王俊腾 秦利芳 郭桂萍 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1829-1835,共7页
建立Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型,研究不同表面化学性质的PLGA纳米粒在覆盖黏液层的Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型的转运能力。以聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,通过单甲氧基聚乙二醇(mPEG)及壳聚糖(chitosan)对... 建立Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型,研究不同表面化学性质的PLGA纳米粒在覆盖黏液层的Caco-2/HT29-MTX共培养细胞模型的转运能力。以聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,通过单甲氧基聚乙二醇(mPEG)及壳聚糖(chitosan)对其进行表面修饰,采用纳米沉淀法制备PLGA-NPs、mPEG.PLGA-NPs和壳聚糖包裹的PLGA-NPs,并测定其平均粒径及zeta电位。以香豆素-6(coumarin6)为荧光标记物,通过激光共聚焦显微镜观察纳米粒的转运情况;以呋喃二烯(FDE)为模型药物,HPLC测定纳米粒的转运量。通过加入内吞阻断剂秋水仙素及诺可唑研究纳米粒的转运机制。采用免疫荧光法考察不同表面化学性质的纳米粒对细胞紧密连接蛋白ZO-1的影响。结果表明,纳米粒分散均匀,PLGA-NPs表面荷负电,经mPEG修饰后zeta电位近电中性,壳聚糖包裹后表面荷正电。呋喃二烯的包封率均〉75%。mPEG-PLGA.NPs在Caco-2/HT29-MTX共培养细胞的转运能力高于PLGA-NPs和CS.PLGA-NPs,在秋水仙素及诺可唑作用下转运量明显降低,并影响ZO-1蛋白的分布。说明PLGA-NPs和mPEG-PLGA-NPs可能通过胞吞作用和细胞旁路途径进行转运,CS-PLGA-NPs主要以胞吞作用进行转运;mPEG-PLGA-NPs因其表面的亲水性及电荷近中性,具有较好的抗黏性能,能够快速穿过黏液层到达细胞并转运。 展开更多
关键词 PLGA纳米粒 呋喃二烯 CACO-2 HT29-MTX共培养细胞模型 黏液 转运
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