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口蹄疫兔化弱毒疫苗ZB株L蛋白N^2D、M^143L和E^147G氨基酸突变对病毒毒力影响的研究 预览
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作者 赵国洪 王继华 +3 位作者 李华春 何于雯 朱明旺 信爱国 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期822-827,共6页
口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白L~(pro)是病毒的毒力因子之一。前期研究发现,FMDV兔化弱毒疫苗ZB株传代减毒致弱后,前导蛋白L~(pro)内仅存在3个氨基酸点突变(N~2D、M~(143)L和E~(147)G)。为确定这3个突变对病毒生物学特性的影响... 口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白L~(pro)是病毒的毒力因子之一。前期研究发现,FMDV兔化弱毒疫苗ZB株传代减毒致弱后,前导蛋白L~(pro)内仅存在3个氨基酸点突变(N~2D、M~(143)L和E~(147)G)。为确定这3个突变对病毒生物学特性的影响,本研究利用弱毒疫苗ZB株感染性分子克隆为骨架,构建获得含有这3个氨基酸回复突变的重组病毒rZBatt-L,并比较其与亲本病毒rZBatt生物学特性。结果显示,rZBatt-L和rZBatt在BHK-21细胞中均可以产生细胞病变效应,形成大小相似的噬斑,而在牛原代肾细胞(BK)中均不产生CPE;二者在BHK-21细胞中的生长曲线与病毒RNA复制动态相似(p〉0.05),对乳鼠的致病性也无显著差异;测定了rZBatt-L和rZBatt分别感染BK诱导I型干扰素(IFN-α和β)能力,结果显示rZBatt-L和rZBatt均可以在感染早期诱导IFN-α表达,而感染晚期抑制IFN-α表达。相对的是,rZBatt-L和rZBatt感染细胞后均可以诱导IFN-β含量增加,并且二者诱导IFN-β含量无差异(p〉0.05)。结果表明,FMDV弱毒疫苗ZB株L~(pro)蛋白中的N~2D、M~(143)L和E~(147)G突变不改变病毒的生物学特性,对病毒毒力不产生明显的影响。本研究明确了L~(pro)蛋白突变不是ZB株致弱的关键氨基酸位点。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 兔化弱毒疫苗株 ZB株 前导蛋白 点突变
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口蹄疫病毒前导蛋白酶的研究进展
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作者 马琪 孙东杰 +1 位作者 张杰 薛慧文 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第4期106-109,共4页
前导蛋白酶(leader protease,L^pro)是FMDV基因组编码具有酶学活性的病毒产物之一。其可被2个串联的翻译起始密码子进行翻译表达,且以第2个翻译起始密码子进行翻译起始的产物居多。L^pro含有球状区域,碳端有一柔性杆状结构,其执... 前导蛋白酶(leader protease,L^pro)是FMDV基因组编码具有酶学活性的病毒产物之一。其可被2个串联的翻译起始密码子进行翻译表达,且以第2个翻译起始密码子进行翻译起始的产物居多。L^pro含有球状区域,碳端有一柔性杆状结构,其执行蛋白酶生物学功能的活性集团的氨基酸序列可能是第144位的Lys、148位的His和163位的Asp。保守区氨基酸残基在维持蛋白的空间结构和功能方面具有重要作用。此种蛋白酶的c端编码序列区中的同义密码子使用模式在病毒蛋白的翻译过程具有重要的生物学意义。L^pro能够剪切病毒编码的多聚蛋白,且使能宿主细胞中特定的蛋白质降解,是FMDV的重要毒力因子。L^pro通过抑制干扰素(IFN)的分泌降低免疫监视系统对FMDV的监视能力,从而逃避感染动物对FMDV侵染的抵抗力。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 前导蛋白 密码子使用模式 结构 毒力
口蹄疫病毒O/CHN/Mya98/33-P株前导蛋白对病毒感染性的影响 被引量:1
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作者 张萌 白兴文 +7 位作者 李平花 范朋举 包慧芳 孙普 卢曾军 曹轶梅 陈应理 刘在新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期2052-2060,共9页
【目的】研究口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)前导蛋白对于病毒感染性的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,以O/CHN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,分别构建了含口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P和O/CHN/Mya9... 【目的】研究口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)前导蛋白对于病毒感染性的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,以O/CHN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,分别构建了含口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P和O/CHN/Mya98/HN1前导蛋白的两株嵌合全长cDNA感染性克隆,采用实时荧光定量PCR检测两株不同的嵌合病毒感染猪肾原代细胞后细胞内IFNβ和OAS mRNA的转录情况。【结果】嵌合病毒rOHN1Lab增殖能力较弱,其对应诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较高,而嵌合毒rO33Lab相对于rOHN1Lab增殖能力较强,他们诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较低。【结论】研究表明口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P前导蛋白具有更强的抗IFNβmRNA转录的能力,该研究能够为进一步鉴定FMDV前导蛋白抗宿主先天性免疫的关键性位点奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 嵌合病毒 前导蛋白 IFNβ 转录 影响
口蹄疫病毒前导蛋白的分子生物学研究进展 预览 被引量:1
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作者 张萌 白兴文 +6 位作者 李平花 范朋举 包慧芳 孙普 卢曾军 曹轶梅 刘在新 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第1期73-79,共7页
口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus ,FMDV)编码的前导蛋白,不仅是一个重要的蛋白酶,而且对于病毒来说是一个重要的毒力因子,其能够作用于宿主细胞的特异性蛋白,抵抗宿主细胞所产生的抗病毒效应。本文章简述了口蹄疫病毒... 口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus ,FMDV)编码的前导蛋白,不仅是一个重要的蛋白酶,而且对于病毒来说是一个重要的毒力因子,其能够作用于宿主细胞的特异性蛋白,抵抗宿主细胞所产生的抗病毒效应。本文章简述了口蹄疫病毒前导蛋白酶的基本特性,例如前导蛋白的基因结构与病毒复制的关系,前导蛋白酶活性的具体特点,以及前导蛋白影响病毒毒力的分子机制。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 前导蛋白 先天性免疫
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Asia 1型口蹄疫病毒前导蛋白(L^pro)亚细胞定位
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作者 刘永杰 张克山 +4 位作者 尚佑军 杨顺利 卢国栋 刘湘涛 吴润 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期687-691,共5页
为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L... 为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白(Lpro)亚细胞定位,利用RT-PCR方法获得L基因,将其定向克隆入pEGFP-N1真核表达载体,经PCR扩增、酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pEGFP-L。利用脂质体介导法将pEGFP-L转染BHK-21细胞,用荧光显微镜观察和Western blotting方法检测目的基因的表达,经碘化丙啶(PI)染色后在激光共聚焦显微镜下观察Lpro的亚细胞定位。结果表明,成功构建重组表达质粒pEGFP-L;FMDV L基因在BHK-21细胞中得到表达;Western blotting证实表达的Lpro具有反应活性;激光共聚焦显微镜观察发现Lpro在BHK-21细胞中呈弥散性分布。 展开更多
关键词 ASIA1型口蹄疫病毒 前导蛋白 亚细胞定位
携带FMDV前导蛋白基因逆转录病毒载体的构建及其在牛肾细胞中的表达 预览 被引量:3
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作者 丛国正 周建华 +5 位作者 高闪电 独军政 邵军军 林彤 常惠芸 谢庆阁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期 740-745,共6页
以口蹄疫病毒株OA/58RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA。通过分子克隆技术将前导蛋白编码序列Lab与逆转录病毒载体pBPSTR1连接,将构建正确的重组载体命名为pBPSTR1-Lab。通过分别利用不同浓度的嘌呤霉素和四环素来确定最佳筛选浓度和最... 以口蹄疫病毒株OA/58RNA为模板,反转录并扩增目的cDNA。通过分子克隆技术将前导蛋白编码序列Lab与逆转录病毒载体pBPSTR1连接,将构建正确的重组载体命名为pBPSTR1-Lab。通过分别利用不同浓度的嘌呤霉素和四环素来确定最佳筛选浓度和最佳调控浓度,结果显示嘌呤霉素的最佳筛选浓度为3μg/mL,四环素的最佳调控浓度为1μg/mL。利用pBPSTR1-Lab和包装质粒pVSV-G双质粒瞬时转染Gp2-293包装细胞来获得重组逆转录病毒。利用重组逆转录病毒来感染牛肾细胞,并连续筛选12天来获得阳性克隆。通过除去四环素来诱导目的基因在牛肾细胞中表达,发现牛肾细胞病变死亡。经过PCR和蛋白质免疫印迹证实稳定表达前导蛋白的牛肾细胞系已经建立,为今后研究前导蛋白致病机理提供了平台。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 前导蛋白 嘌呤霉素 四环素 逆转录病毒载体
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口蹄疫病毒前导蛋白的研究进展 预览 被引量:4
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作者 周建华 丛国正 +1 位作者 高闪电 常惠芸 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第3期 63-66,共4页
FMDV基因组编码的所有蛋白质是以多聚蛋白质的形式产生的。前导蛋白是FMDV基因组编码的第一个具有酶切活性的蛋白质。它是剪切多聚蛋白质的共翻译分子内部的一个蛋白酶。FMDV是在多聚蛋白质的N端剪切前导蛋白。此外,前导蛋白不仅能剪切... FMDV基因组编码的所有蛋白质是以多聚蛋白质的形式产生的。前导蛋白是FMDV基因组编码的第一个具有酶切活性的蛋白质。它是剪切多聚蛋白质的共翻译分子内部的一个蛋白酶。FMDV是在多聚蛋白质的N端剪切前导蛋白。此外,前导蛋白不仅能剪切病毒编码的多聚蛋白,而且能降解宿主细胞中特定的蛋白质,由此极大提高了病毒的毒力。前导蛋白可以抑制I型干扰素的分泌,降低免疫监视系统对FMDV的监视能力,以此逃避宿主的非特异性免疫系统的攻击。关于前导蛋白与细胞凋亡的关系,细胞凋亡产生的eIF4G片段与前导蛋白裂解eIF4G产生的碎片是不同的。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 前导蛋白
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口蹄疫病毒前导蛋白酶抑制宿主先天性免疫应答的机制 预览
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作者 李夏莹 许文涛 汪其怀 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第4期1028-1031,共4页
口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot—and—mouth disease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性动物疫病。口蹄疫病毒有多种机制对抗宿主的先天性免疫应答,在这个过程中病毒的前导蛋白酶(L^pro)发挥了关键作用。L-可切断宿... 口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot—and—mouth disease virus,FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性动物疫病。口蹄疫病毒有多种机制对抗宿主的先天性免疫应答,在这个过程中病毒的前导蛋白酶(L^pro)发挥了关键作用。L-可切断宿主细胞帽子依赖性的蛋白翻译,抑制干扰素蛋白的合成;L^pro通过破坏核转录因子-κB(NF-κB)的完整性或减少干扰素调节因子3/7(IRF3/7)的表达,从而抑制IFNmRNA的产生;L^pro还会参与维甲酸诱导基因I(RIG-I)、TANK结合激酶1(TBK1)、TNF受体相关因子3(TRAF3)和TRAF6的去泛素化,从而影响I型干扰素信号通路的活化。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 前导蛋白 I型干扰素 先天性免疫应答
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