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冷鲜猪肉中单增李斯特菌快速检测试纸条的初步研制 预览
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作者 赵鑫 张帅 +2 位作者 祁文婧 齐颖颖 张红星 《北京农学院学报》 2019年第1期92-96,共5页
【目的】建立一种可快速检测单增李斯特菌的胶体金试纸条的制备方法.【方法】用自制的单核增生性李斯特菌作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,之后通过杂交瘤技术进行细胞融合制备出特异性良好的单克隆抗体,并通过双抗夹心ELISA体系筛选出2... 【目的】建立一种可快速检测单增李斯特菌的胶体金试纸条的制备方法.【方法】用自制的单核增生性李斯特菌作为抗原对BALB/c小鼠进行免疫,之后通过杂交瘤技术进行细胞融合制备出特异性良好的单克隆抗体,并通过双抗夹心ELISA体系筛选出2株稳定且配对最佳的抗体,利用胶体金免疫层析技术组装试纸条并分析其特性.【结果】筛选出的2株单抗命名为3B7、5C9,测得其灵敏度均为10^4CFU/mL,抗体的最适pH值是8.0,最佳抗体标记是24μg,试纸条的灵敏度为10^6CFU/mL且特异性良好.【结论】初步制备出可快速、准确检测冷鲜猪肉中单增李斯特菌的试纸条. 展开更多
关键词 增李斯特菌 单克隆抗体 胶体金免疫层析试纸条
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分子靶向治疗药物在子宫内膜癌中的研究进展 预览
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作者 刘莉 《世界最新医学信息文摘(电子版)》 2019年第23期130-130,134共2页
肿瘤分子靶向治疗是以肿瘤细胞的标志性分子为靶点,研制出有效的阻断剂,有效干预细胞发生癌变的环节,从分子水平来逆转这种细胞恶性生物学行为的出现,从而抑制肿瘤细胞生长。本文针对靶向治疗药物在子宫内膜癌的研究现状、应用前景进行... 肿瘤分子靶向治疗是以肿瘤细胞的标志性分子为靶点,研制出有效的阻断剂,有效干预细胞发生癌变的环节,从分子水平来逆转这种细胞恶性生物学行为的出现,从而抑制肿瘤细胞生长。本文针对靶向治疗药物在子宫内膜癌的研究现状、应用前景进行总结及展望。 展开更多
关键词 分子靶向治疗 单克隆抗体 酪氨酸酶抑制剂 子宫内膜癌
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抗人脂蛋白相关磷脂酶A2单抗制备及应用
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作者 许雯 陆兆新 曹林 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期482-491,共10页
本研究旨在制备抗人脂蛋白相关磷脂酶A2 (Lp-PLA2)单克隆抗体,对单抗进行初步评价,采用免疫层析方法学,建立一种可在社区医疗机构应用的Lp-PLA2快速检测方法。首先从NCBI获得人Lp-PLA2全长基因序列构建表达载体,在CHO-K1细胞中表达Lp-P... 本研究旨在制备抗人脂蛋白相关磷脂酶A2 (Lp-PLA2)单克隆抗体,对单抗进行初步评价,采用免疫层析方法学,建立一种可在社区医疗机构应用的Lp-PLA2快速检测方法。首先从NCBI获得人Lp-PLA2全长基因序列构建表达载体,在CHO-K1细胞中表达Lp-PLA2重组蛋白。以获得的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术筛选杂交瘤细胞,小鼠腹水诱生单克隆抗体。通过SDS-PAGE、ELISA等方法评价抗体性能。利用双抗夹心法制备Lp-PLA2量子点荧光免疫层析检测试剂,并使用便携式检测仪器评估试剂性能。制备并筛选得到亲和力达到1×10–8的配对单克隆抗体PLA1与PLA5,抗体亚类为IgG1,能特异性识别血液中Lp-PLA2蛋白。自制Lp-PLA2量子点荧光免疫检测试剂可检测线性范围为20–2000ng/mL,与进口试剂的检测相关系数R达到0.99。综上,本研究制备得到一对高亲和力、高特异性的抗人Lp-PLA2单克隆抗体,并建立了Lp-PLA2免疫层析检测方法,该方法检测准确、操作简便,适合Lp-PLA2检测应用于社区医疗机构,为居民心血管健康管理提供了新途径。 展开更多
关键词 脂蛋白相关磷脂酶A2 (Lp-PLA2) 单克隆抗体 免疫层析 动脉粥样硬化 真核表达
鼠抗人CD86单克隆抗体的制备及对肿瘤细胞生长与迁移的影响 预览
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作者 王玉玉 颜天铭 +4 位作者 孔永 沈立军 王婧 周慧君 邱玉华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期458-462,共5页
目的:制备鼠抗人CD86分子的单克隆抗体(mAb),分析其对天然表达CD86分子的恶性肿瘤细胞株的生长与迁移的影响。方法:采用小鼠腹水诱生法制备CD86 mAb,Protein A亲和层析法纯化抗体。采用流式细胞术(FCM)检测抗体对细胞膜型CD86分子的识... 目的:制备鼠抗人CD86分子的单克隆抗体(mAb),分析其对天然表达CD86分子的恶性肿瘤细胞株的生长与迁移的影响。方法:采用小鼠腹水诱生法制备CD86 mAb,Protein A亲和层析法纯化抗体。采用流式细胞术(FCM)检测抗体对细胞膜型CD86分子的识别。以Raji、Daudi和8266细胞为观察对象,加入CD86 mAb共同孵育,用FCM检测抗体对细胞凋亡的诱导作用,MTT检测抗体对细胞增殖的影响,Transwell TM研究抗体对细胞迁移的影响。结果:本实验获得的CD86 mAb能很好地识别细胞膜型分子,其与Raji、Daudi和8266细胞的结合率分别为96.5%、99.0%和83.9%。FCM结果显示,共同孵育24 h,当抗体浓度为20μg/ml时,上述细胞的凋亡率分别为16%、18%及14%,均明显高于同型对照组(P<0.05)。MTT结果显示,共同孵育48 h,20μg/ml抗体对细胞的增殖己可产生抑制作用,40μg/ml抗体对上述细胞增殖的抑制效果更明显(P<0.05),抑制率依次为23%、25%及26%。Transwell TM结果显示,共同孵育48 h,20μg/ml抗体组的Raji、Daudi和8266细胞的迁移率分别为26%、23%和24%,均明显低于同型对照组(P<0.05)。结论:本实验制备的抗体能很好地识别细胞膜型分子,其对表达CD86分子的肿瘤细胞的增殖及迁移具有抑制作用,同时可诱导肿瘤细胞发生凋亡,提示该抗体对表达相应抗原分子的肿瘤具有一定的抗瘤效应。 展开更多
关键词 CD86分子 单克隆抗体 恶性肿瘤细胞 凋亡 增殖 迁移
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慢性阻塞性肺疾病单克隆抗体治疗新进展 预览
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作者 邬祚虹 程德云 《临床肺科杂志》 2019年第1期170-173,共4页
慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)以持续性呼吸系统症状及气流受限为主要特征,是一种常见的、可以预防和治疗的疾病。据统计,COPD目前居全球疾病死亡原因的第4位,预计到2020年将升至第3位,在严重影响人类... 慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)以持续性呼吸系统症状及气流受限为主要特征,是一种常见的、可以预防和治疗的疾病。据统计,COPD目前居全球疾病死亡原因的第4位,预计到2020年将升至第3位,在严重影响人类健康的同时对社会经济亦造成严重负担。 展开更多
关键词 慢性阻塞性肺疾病 单克隆抗体 治疗 PULMONARY 呼吸系统症状 COPD 气流受限 死亡原因
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建立雌酮硫酸钠胶体金免疫层析快速限量检测方法
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作者 巩月红 段新宇 +4 位作者 王建华 赵军 罗俊 温浩 高晓黎 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期352-360,共9页
目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫... 目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫描鉴定并计算偶联率。ESS-17-肟-BSA免疫BALB/C小鼠,取血清高滴度小鼠脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用ELISA法进行阳性筛选。获得阳性克隆细胞株后于BALB/C小鼠体内诱生腹水制备单克隆抗体,抗体纯化后用胶体金标记,通过正交设计确定最佳实验参数,研制出雌酮硫酸钠胶体金免疫层析试纸条。结果:获得经化学结构修饰后的目标抗原ESS-17-肟-BSA,融合克隆后得到4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2D1、7G4、5F3、2A7,其中2D1抗体纯化后特异强,效价达1.0×106。该抗体制备的胶体金层析试纸条的检测限为1μg·L-1,与结构类似物均无交叉反应,此法检测样品结果与高效液相色谱法测定结果比对阳性符合率为85.45%(45/52),阴性符合率为89.58%(43/48),总符合率为88.00%(88/100),结果一致性较好。结论:本研究制备了雌酮硫酸钠免疫原,融合制得抗雌酮硫酸钠特异性单克隆抗体,并研制出以雌酮硫酸钠单克隆抗体为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够快速、灵敏地检测孕马尿中的雌酮硫酸钠。 展开更多
关键词 雌酮硫酸钠 半抗原 免疫原 偶联率 细胞融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体 胶体金免疫层析法
猪圆环病毒3型Cap蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫组化试验中的初步应用 预览
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作者 赵冬 王小波 +4 位作者 高清清 郇长超 王万彬 高崧 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期174-178,共5页
为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白单克隆抗体(MAb),并初步应用于感染细胞或组织样品中PCV3抗原的间接免疫荧光试验(IFA)或免疫组化(IHC)检测,本研究将PCV3 Cap蛋白的去核定位信号肽基因克隆于原核表达载体pET-28a中,经IPTG诱导表达了... 为制备猪圆环病毒3型(PCV3)Cap蛋白单克隆抗体(MAb),并初步应用于感染细胞或组织样品中PCV3抗原的间接免疫荧光试验(IFA)或免疫组化(IHC)检测,本研究将PCV3 Cap蛋白的去核定位信号肽基因克隆于原核表达载体pET-28a中,经IPTG诱导表达了具有免疫原性的融合蛋白。以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,共获得8株能够稳定分泌针对PCV3 Cap蛋白的MAb杂交瘤细胞株。Western blot与IFA试验结果显示,8株MAbs均能够与真核表达的重组Cap蛋白反应。选取3株杂交瘤细胞制备3株MAbs,小鼠腹水效价分别为1∶409 600、1∶204 800和1∶409 600。利用3株MAbs对自然感染PCV3临床病猪的腹股沟淋巴结进行IHC检测,结果显示3株MAbs的腹水均能够与感染PCV3的临床样品发生特异性的免疫反应。本研究制备的MAbs具有较好的特异性,为深入研究Cap蛋白的结构和PCV3快速诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 CAP蛋白 单克隆抗体 免疫组化
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ANKRD22检测抗体制备及其在结直肠癌中的表达 预览
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作者 林云华 柳景文 +2 位作者 杨赛赛 刘希永 王宏平 《预防医学》 2019年第3期231-235,共5页
目的制备特异性锚蛋白重复结构域蛋白22 (ANKRD22)抗体,了解ANKRD22在结直肠癌中的表达。方法用pET-42a表达系统从大肠杆菌中表达重组人ANKRD22蛋白,纯化后免疫Balb/c小鼠,以高表达ANKRD22的293T细胞裂解液为抗原,采用免疫印迹法筛选抗... 目的制备特异性锚蛋白重复结构域蛋白22 (ANKRD22)抗体,了解ANKRD22在结直肠癌中的表达。方法用pET-42a表达系统从大肠杆菌中表达重组人ANKRD22蛋白,纯化后免疫Balb/c小鼠,以高表达ANKRD22的293T细胞裂解液为抗原,采用免疫印迹法筛选抗人ANKRD22特异性单克隆抗体;采用免疫组织化学染色法检测112例结直肠癌患者组织芯片中ANKRD22的表达。结果本研究获得了93个杂交瘤细胞,筛选出4株抗人ANKRD22特异性单克隆抗体,均与天然的人ANKRD22呈良好反应。ANKRD22主要分布于结直肠癌细胞的细胞质。在112例患者结直肠癌组织中,ANKRD22表达阳性94例,阳性率为83.93%。ANKRD22表达阳性与p53表达和β-catenin表达存在统计学关联(P<0.05),而与年龄、性别、结直肠肿瘤位置、临床AJCC分期、Dukes分期、肿瘤分化程度、有无淋巴结转移和错配修复基因表达均无统计学关联(P>0.05)。结论 ANKRD22在结直肠癌组织中表达水平较高,可能参与了结直肠上皮的癌变过程,是一个潜在的辅助诊断标志。 展开更多
关键词 结直肠癌 ANKRD22 表达 单克隆抗体 免疫组织化学染色法
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小鼠抗人B7-2单克隆抗体的制备及对8266细胞表面Fas及FasL的诱导作用
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作者 王玉玉 颜天铭 +2 位作者 王志遥 沈立军 邱玉华 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期50-56,共7页
目的制备鼠抗人B7-2单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),研究其对表达该分子的肿瘤细胞表面的死亡相关分子的诱导作用。方法以转基因细胞L929-B7-2为免疫原,免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、免疫荧光标记法多次筛选及连续亚克隆,获得能... 目的制备鼠抗人B7-2单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),研究其对表达该分子的肿瘤细胞表面的死亡相关分子的诱导作用。方法以转基因细胞L929-B7-2为免疫原,免疫BALB/c小鼠。经细胞融合、免疫荧光标记法多次筛选及连续亚克隆,获得能分泌B7-2McAb的杂交瘤细胞株。采用Ig亚类鉴定试纸条、抗原位点竞争抑制试验、效价的测定及细胞膜型分子的识别作用对McAb进行生物学特性的分析。通过小鼠诱生腹水法制备McAb并经ProteinG亲和层析法进行纯化。以天然高表达B7-2分子的多发性骨髓瘤细胞8266为观察对象,加入McAb共同孵育,流式细胞仪(FCM)检测其对细胞表面死亡相关分子Fas及FasL的诱导作用。结果成功获得一株B7-2McAb,标记为12G4,其重链为IgG2b,轻链为κ。12G4McAb的效价为0.1μg/5×10^5个细胞,纯化后得到腹水型抗体的含量为1.61mg/ml。FCM结果显示,12G4McAb能很好地识别细胞膜型分子,其与8266细胞的阳性结合率为89.6%,当20μg/ml12G4McAb与细胞孵育12h,细胞表面Fas分子的平均值(mean)开始上调,48h达到最大值(62575.8),与IgG对照组(57135.4)比较差异有统计学意义(P<0.05)。20μg/ml12G4与细胞孵育12h,细胞表面FasL分子的表达也开始上调,48h达到最大值(7.98%),与IgG对照组(1.10%)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功制备了B7-2McAb,其能诱导表达该分子的肿瘤细胞表面的部分死亡相关分子的表达。 展开更多
关键词 B7-2分子 杂交瘤细胞 单克隆抗体 FASL FAS
儿童支气管哮喘药物治疗研究与进展 预览
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作者 杨祎 姜明燕 《系统医学》 2019年第2期193-195,共3页
支气管哮喘是严重危害我国儿童健康的疾病。全文就目前国内外儿童支气管哮喘治疗药物进行综述,分析一线治疗药物的优势和不足,同时介绍国内外新型药物治疗方法,特别是新型生物制剂单克隆抗体的应用。为儿童支气管哮喘的临床治疗提供依据。
关键词 支气管哮喘 治疗药物 单克隆抗体 儿童
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致病性嗜水气单胞菌单克隆抗体的制备及特性鉴定 预览
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作者 胡谦 翟绪昭 +9 位作者 谢曼曼 曾海娟 马兰 丁承超 王淑娟 孙静娟 李杰 王艳 董庆利 刘箐 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期84-90,共7页
嗜水气单胞菌是一种人-兽-鱼共患的条件致病菌,本研究旨在利用单克隆抗体技术,制备抗致病性嗜水气单胞菌抗体。以嗜水气单胞菌CCTCC M2014157野生型菌株免疫BALB/c小鼠,利用间接酶联免疫吸附测定技术筛选,获得能够稳定分泌抗嗜水气单胞... 嗜水气单胞菌是一种人-兽-鱼共患的条件致病菌,本研究旨在利用单克隆抗体技术,制备抗致病性嗜水气单胞菌抗体。以嗜水气单胞菌CCTCC M2014157野生型菌株免疫BALB/c小鼠,利用间接酶联免疫吸附测定技术筛选,获得能够稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备的腹水依次采用饱和硫酸铵沉淀和Protein-G柱亲和层析纯化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析抗体纯度。制备的腹水抗体效价达16 000,纯化后(4 mg/mL)效价达8 000,亚型鉴定为IgG2a。特异性分析显示,纯化后抗体能与嗜水气单胞菌结合,与11株常见的致病菌均无交叉反应。本研究为快速检测致病性嗜水气单胞菌提供参考。 展开更多
关键词 致病性 嗜水气胞菌 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定 特性鉴定
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茄科劳尔氏菌单克隆抗体的制备及其特性鉴定 预览
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作者 马兰 曾海娟 +9 位作者 谢曼曼 胡谦 丁承超 王淑娟 翟绪昭 孙静娟 李杰 王艳 董庆利 刘箐 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期95-100,共6页
茄科劳尔氏菌( Ralstonia solanacearum ,RS)是番茄、茄子、辣椒、马铃薯等茄科蔬菜青枯病害的致病菌。为实现对RS的快速高效检测,以茄科劳尔氏菌株1.76免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后利用间接酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked Immunosorbe... 茄科劳尔氏菌( Ralstonia solanacearum ,RS)是番茄、茄子、辣椒、马铃薯等茄科蔬菜青枯病害的致病菌。为实现对RS的快速高效检测,以茄科劳尔氏菌株1.76免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后利用间接酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)筛选出3株能稳定分泌抗茄科劳尔氏菌株1.76的单克隆杂交瘤细胞株1C1、1B3和9D7。然后利用小鼠体内诱生腹水,1C1、1B3和9D7效价分别为11 024 000、 1 64 000、1 256 000。采用饱和硫酸铵沉淀及Protein-G亲和层析法纯化腹水,经SDS-PAGE鉴定显示纯化后的单克隆抗体(Monoclonal Antibodies,mAb)纯度较高。纯化后单克隆抗体(2 mg/mL)效价分别为1 17 529、1 35 819、1 50 000,抗体亚型均为IgG1。对3株抗体进行特异性检测结果显示,1C1和9D7均不能与RS-5结合,1B3不能结合1.74和RS-5。此外,检测结果还表明3株单克隆抗体与桑肠杆菌JX-6、苏云金芽胞杆菌SYJ及实验室现有11株燕麦嗜酸菌卡特莱兰亚种、燕麦嗜酸菌西瓜亚种、玉米细菌性条斑菌、嗜酸菌魔芋亚种,梨火疫病菌QB0809、 XL-4,玉米细菌性枯萎病菌QB0241、QB0242,水稻细菌性谷枯病菌QB0017、QB0753、QB0755均无交叉情况。此次茄科劳尔氏菌抗体的制备,为后期青枯病菌的快速检测提供参考。 展开更多
关键词 茄科劳尔氏菌 ELISA 单克隆抗体
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双抗夹心ELISA快速检测冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a
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作者 王怡雯 张帅 +4 位作者 张红星 齐颖颖 谢远红 刘慧 鲁舟 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第2期230-235,共6页
为建立冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a双抗夹心ELISA检测体系,采用福氏志贺氏菌2a抗原免疫获得多克隆抗体,应用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选出1株福氏志贺氏菌2a单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为2C10。试验结果表明,2C10杂交瘤细胞株抗体效价为1... 为建立冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a双抗夹心ELISA检测体系,采用福氏志贺氏菌2a抗原免疫获得多克隆抗体,应用杂交瘤技术进行细胞融合,筛选出1株福氏志贺氏菌2a单克隆抗体杂交瘤细胞株,命名为2C10。试验结果表明,2C10杂交瘤细胞株抗体效价为1∶10.24×104,抗体纯度为96%,免疫球蛋白亚型为IgG2a。用此单克隆抗体作为检测抗体,多克隆抗体为捕捉抗体,建立双抗夹心ELISA体系,检测限为1 000 CFU/g。用此体系检测宋内志贺氏菌、大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、单增李斯特菌、枯草芽孢杆菌及阪崎肠杆菌,均无交叉反应。本研究可为冷鲜肉中福氏志贺氏菌2a的检测提供一种特异性强,准确度高的ELISA检测方法。 展开更多
关键词 福氏志贺氏菌2a 双抗夹心ELISA 单克隆抗体 克隆抗体
一种人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的瞬时表达及性质分析 预览
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作者 宋宪铭 安晨 +3 位作者 张超 熊颖 张祺 陈继军 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期17-21,共5页
目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFFIT... 目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)分析抗体体外抗狂犬病病毒中和活性,ELISA分析抗体与3aG、CTN、PV及CVS株的结合。结果提取瞬时表达质粒的A260/280nm比值在2.0~2.1之间纯化后抗体非还原CE-SDS单体纯度为74.4%;还原CE-SDS抗体轻、重链峰合计占比超过95%;抗体RFFIT体外中和活性为293.37IU/mL,比活达628.21IU/mg,抗体与3aG、CTN、PV及CVS株交叉反应均为阳性。结论该株抗体具有较高体外抗狂犬病病毒中和活性,与主要疫苗株均有较强结合。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 单克隆抗体 快速荧光灶抑制试验(RFFIT) 瞬时表达
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肺炎链球菌C多糖含量检测方法的建立 预览
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作者 吴元元 李雄雄 +1 位作者 沈荣 应莲芳 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期22-28,共7页
目的使用肺炎链球菌C多糖单克隆抗体(单抗),建立检测荚膜多糖中残留的C多糖含量的方法。方法选择BALB/c雌性小鼠,采用体内诱生单抗腹水,放大生产肺炎链球菌C多糖单抗;使用间接ELISA、抑制性ELISA对其进行特异性鉴定;用特异性和亲和力高... 目的使用肺炎链球菌C多糖单克隆抗体(单抗),建立检测荚膜多糖中残留的C多糖含量的方法。方法选择BALB/c雌性小鼠,采用体内诱生单抗腹水,放大生产肺炎链球菌C多糖单抗;使用间接ELISA、抑制性ELISA对其进行特异性鉴定;用特异性和亲和力高的单抗尝试建立肺炎链球菌荚膜多糖中C多糖含量检测的速率比浊法,并对该方法的线性、精密度、特异性进行验证。结果所制4株单抗的抗体类别均为IgM,识别的抗原表位互不相同,亲和力也不同。间接ELISA、抑制性ELISA结果均显示,所获得的单抗能够作用于肺炎链球菌C多糖上的磷酸胆碱位点,具有很好的特异性。选择单抗E8建立速率比浊检测方法的线性、精密度和特异性均良好,检测结果表明肺炎链球菌23个血清型荚膜多糖中C多糖含量不同。结论利用单抗建立了检测肺炎链球菌荚膜多糖中残留的C多糖的含量的速率比浊法。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 C多糖 单克隆抗体
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基于纳米磁珠和双标记抗体的玉米赤霉烯酮快速、高灵敏检测方法的建立及应用
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作者 肖佳丽 叶青 +3 位作者 方云 方维焕 宋厚辉 章先 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期440-450,共11页
玉米赤霉烯酮(zeralenone,ZEN)具有雌激素活性,主要污染谷物和饲料,大量聚积可导致流产和死胎,给动物和人类健康带来严重威胁。本研究通过将ZEN偶联抗原ZEN-BSA包被于纳米磁珠(magnetic nanoparticles,MNPs),制备纳米磁珠-偶联抗原复合... 玉米赤霉烯酮(zeralenone,ZEN)具有雌激素活性,主要污染谷物和饲料,大量聚积可导致流产和死胎,给动物和人类健康带来严重威胁。本研究通过将ZEN偶联抗原ZEN-BSA包被于纳米磁珠(magnetic nanoparticles,MNPs),制备纳米磁珠-偶联抗原复合物(MNPs-BSA-ZEN),同时使用金颗粒(Au nanoparticles,AuNPs)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)双标记的ZEN单克隆抗体,建立新型酶联免疫检测方法(MNPs-HRP-AuNPsIC-ELISA)。检测下限(IC10)达到0.03ng/mL,检测区间(IC20–IC80)为0.05–0.89ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.22ng/mL,与ZEN类似物(α-zearalanol、zearalanone、α-zearalenol、β-zearalenol和β-zearalanol)的交叉反应性依次为19.2%、11.7%、8.3%、1.2%和4.3%,与黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、伏马毒素B1、桔青霉素和展青霉毒素几乎不存在交叉反应。在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达81.6%–113.5%,与LC-MS/MS同时对天然样本中ZEN含量的检测结果表明,两种方法相关性良好。本研究建立的MNPs-HRP-AuNPs IC-ELISA具备快速和高灵敏的双重优势,也可为其他霉菌毒素精准检测技术的开发提供参考。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 纳米磁珠 金颗粒 辣根过氧化物酶 单克隆抗体
单个B细胞制备CRP单克隆抗体及其ELISA检测体系的初步建立 预览
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作者 林骏 山云 +3 位作者 刘谦 王晓炜 王洪涛 刘尧 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期69-73,共5页
目的:用单个B细胞抗体制备技术结合Exip293真核表达系统制备hs-CRP单克隆抗体。方法:用重组CRP蛋白免疫小鼠,荧光标记探针和流式分选技术分离出表达CRP单克隆抗体的单个B细胞,通过PCR方法扩增出编码CRP单克隆抗体蛋白的轻重链核酸序列... 目的:用单个B细胞抗体制备技术结合Exip293真核表达系统制备hs-CRP单克隆抗体。方法:用重组CRP蛋白免疫小鼠,荧光标记探针和流式分选技术分离出表达CRP单克隆抗体的单个B细胞,通过PCR方法扩增出编码CRP单克隆抗体蛋白的轻重链核酸序列并构建重组质粒,质粒转染到Expi 293细胞中制备出单克隆抗体蛋白。结果:用间接ELISA法筛选出两个具有良好特异性的单克隆抗体20#,22#,将这两个抗体配对并建立ELISA双抗体夹心检测方法,CRP浓度在15~250 ng/ml范围内有较好的检测线性(y=0.003x-0.035 8,R 2=0.997 4),精密度分析的批内变异系数CV为6.7%~9.37%,批间变异系数为8.52%~9.10%,平均回收率为98%,与临床血清检测值具有良好的相关性,达到CRP检测要求。结论:本研究所用的单个B细胞分离分选方法结合Expi 293真核表达系统在制备单克隆抗体方面具有省时、高效、特异性好、灵敏度高的特点,具有很好的应用价值。 展开更多
关键词 个B细胞 CRP 单克隆抗体 真核表达系统 ELISA
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苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立 预览
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作者 项自来 王玲 +6 位作者 夏苏干 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期849-857,共9页
为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利... 为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5~1000ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845(R^2=0.990),其IC50为58.88ng/mL,LOD为3.83ng/mL,回收率在85.96%~104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。 展开更多
关键词 苯乙醇胺A(PA) 杂交瘤 单克隆抗体 间接竞争ELISA 回收试验
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洛克沙胂完全抗原的制备及其单克隆抗体的研制 预览
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作者 刘红亮 王奇奇 +5 位作者 张改平 祁艳华 周景明 刘燕凯 马丽萍 王爱萍 《中国动物检疫》 CAS 2019年第2期97-102,共6页
本研究以洛克沙胂(ROX)的结构类似物3-氨基-4-羟基苯胂酸(HAPA)为小分子半抗原,采用碳二亚胺法,分别将其与载体蛋白——牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原HAPA-BSA和检测抗原HAPA-OVA。经紫外光谱扫描及聚丙烯酰... 本研究以洛克沙胂(ROX)的结构类似物3-氨基-4-羟基苯胂酸(HAPA)为小分子半抗原,采用碳二亚胺法,分别将其与载体蛋白——牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原HAPA-BSA和检测抗原HAPA-OVA。经紫外光谱扫描及聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后,以20μg/只剂量的HAPA-BSA免疫BALB/c小鼠;选择血清效价高、敏感性强的小鼠,取脾脏进行细胞融合,制备杂交瘤细胞株。利用间接ELISA法筛选得到1株可以稳定分泌抗ROX单克隆抗体的细胞株,命名为G12;间接ELISA法测定其细胞上清效价为1:512,间接竞争ELISA测定其半数抑制浓度IC50为3.147ng/μL。经小鼠体内诱生腹水,辛酸-硫酸铵法纯化获得纯度较高的单克隆抗体,间接ELISA测定其效价为1:102400,IC50为1.433ng/μL,且具有良好的特异性。本试验成功合成了ROX人工抗原,并制备了可以分泌高敏感性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为ROX免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 洛克沙胂 3-氨基-4羟基苯胂酸 完全抗原 碳二亚胺法 单克隆抗体
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猪圆环病毒3型夹心ELISA诊断方法的建立 预览
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作者 于俊楠 陈媛 +3 位作者 彭尧舜 金宜顺 罗莉妍 陈梅芳 《福建畜牧兽医》 2019年第2期17-20,共4页
本研究基于实验室制备的PCV3 Cap蛋白单克隆抗体,建立检测PCV3的夹心ELISA方法。通过筛选最佳包被浓度、包被时间、一抗和二抗浓度来建立夹心ELISA方法并确定临界值。探讨该方法的特异性和重复性,并进行临床应用。结果表明,单抗包被10μ... 本研究基于实验室制备的PCV3 Cap蛋白单克隆抗体,建立检测PCV3的夹心ELISA方法。通过筛选最佳包被浓度、包被时间、一抗和二抗浓度来建立夹心ELISA方法并确定临界值。探讨该方法的特异性和重复性,并进行临床应用。结果表明,单抗包被10μg/mL(1:200)、一抗1:4 000稀释、二抗1:5 000稀释后的作用浓度为最佳工作浓度;特异性试验表明,该诊断方法特异性良好,与PCV2等多种病毒蛋白不存在交叉反应;重复测试结果表明,测定内和测定间的变异小于5%。研究结果表明,建立的夹心ELISA试验可用于临床检测PCV3。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 夹心ELISA 单克隆抗体
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