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脐带间充质干细胞与卵巢早衰中颗粒细胞交互作用的研究进展 预览
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作者 李慧 陈曦 昌晓红 《中国医药生物技术》 2019年第3期263-265,共3页
卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是指女性在40岁之前出现的以卵巢功能过早衰竭(如月经稀发、闭经、不孕等)为主要临床表现的综合征[1]。雌激素水平低和不孕是对育龄妇女的两大威胁。近年来,癌症在育龄期女性中的发病率逐渐增加... 卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)是指女性在40岁之前出现的以卵巢功能过早衰竭(如月经稀发、闭经、不孕等)为主要临床表现的综合征[1]。雌激素水平低和不孕是对育龄妇女的两大威胁。近年来,癌症在育龄期女性中的发病率逐渐增加,虽然化疗可延长癌症患者生存时间,但也会出现一些副作用,其中化疗引起的POF越来越受到关注。有研究报道化疗药物主要通过损害卵巢颗粒细胞DNA及激活细胞凋亡通路等诱导颗粒细胞凋亡,继而引起卵泡闭锁,降低卵巢功能[2]。 展开更多
关键词 卵巢颗粒细胞 脐带间充质干细胞 卵巢早衰 交互作用 育龄期女性 化疗药物 卵巢功能 癌症患者
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顺铂诱导颗粒细胞损伤及二仙汤含药血清保护颗粒细胞的作用机制 预览
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作者 杨蕾 饶晨晨 +6 位作者 孙丽萍 王燕霞 赵丕文 高文雅 牛建昭 陶仕英 杨阳 《世界中医药》 CAS 2019年第7期1668-1671,共4页
目的:探讨顺铂对卵巢颗粒细胞的影响及二仙汤含药血清改善大鼠卵巢颗粒细胞损伤的作用机制。方法:选取大鼠原代卵巢颗粒细胞体外培养及顺铂处理的方法,将顺铂处理后卵巢颗粒细胞随机分为:cDDP组、cDDP+雌二醇组、cDDP+二仙汤组,另设正常... 目的:探讨顺铂对卵巢颗粒细胞的影响及二仙汤含药血清改善大鼠卵巢颗粒细胞损伤的作用机制。方法:选取大鼠原代卵巢颗粒细胞体外培养及顺铂处理的方法,将顺铂处理后卵巢颗粒细胞随机分为:cDDP组、cDDP+雌二醇组、cDDP+二仙汤组,另设正常组,加入相应药理血清连续培养48 h。采用Western Blotting法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞bcl-2、bax蛋白表达;RT-PCR法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞bcl-2、bax mRNA表达。结果:与正常对照组比较,cDDP组bax mRNA及蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与cDDP组比较,CDDP+雌二醇组及cDDP+二仙汤组Bax mRNA及蛋白表达均下调,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,cDDP组bcl-2 mRNA水平及蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。与cDDP组比较,CDDP+雌二醇组及cDDP+二仙汤组bcl-2 mRNA转录及蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:二仙汤能够抑制cDDP诱导的卵巢颗粒细胞损伤,其作用机制可能与调节bcl-2/bax平衡有关。 展开更多
关键词 二仙汤 顺铂 含药血清 卵巢颗粒细胞 卵巢功能低下 不孕 B细胞淋巴瘤2蛋白家族
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RNA干扰HAS2基因表达对多囊卵巢综合征大鼠卵巢颗粒细胞生物学特性及免疫因子的影响 预览
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作者 徐鸿婕 孙勤国 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期800-804,共5页
目的:探讨透明质酸合成酶2(HAS2)基因在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠表达及RNA干扰其表达对卵巢颗粒细胞活力、凋亡及免疫抑制因子TGF-β1和VEGF表达的影响。方法:建立DHEA致雌性SD大鼠PCOS模型,Western blot检测PCOS大鼠卵巢组织中HAS2的... 目的:探讨透明质酸合成酶2(HAS2)基因在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠表达及RNA干扰其表达对卵巢颗粒细胞活力、凋亡及免疫抑制因子TGF-β1和VEGF表达的影响。方法:建立DHEA致雌性SD大鼠PCOS模型,Western blot检测PCOS大鼠卵巢组织中HAS2的蛋白表达;培养原代PCOS大鼠卵巢颗粒细胞,将合成的靶向抑制HAS2表达的siRNA转染到细胞中,Western blot检测转染效果及转染后48 h各组细胞中免疫抑制因子TGF-β1、VEGF和NF-κB信号通路相关蛋白的表达。CCK8及流式细胞仪分别检测细胞活力和凋亡率。结果:HAS2在PCOS大鼠卵巢组织中高表达,转染si-HAS2的大鼠卵巢颗粒细胞中HAS2的表达显著低于NC组和对照组(P <0.05);与NC组比较,si-HAS2组细胞活力显著降低,凋亡率增加,TGF-β1、VEGF及NF-κB信号通路p-NF-κB、p-IκBα和下游cyclin D1、survivin的蛋白表达均显著降低(P <0.05)。结论:HAS2在PCOS大鼠卵巢组织中高表达,抑制大鼠卵巢颗粒细胞中HAS2表达可降低细胞活力,诱导细胞凋亡,下调免疫抑制因子TGF-β1、VEGF及NF-κB信号通路表达。 展开更多
关键词 HAS2基因 多囊卵巢综合征 卵巢颗粒细胞 免疫因子 NF-ΚB信号通路
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对体外授精-胚胎移植中多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞FSHR LHR mRNA表达研究 预览
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作者 吴媛霞 刘俊芬 +2 位作者 刘艳玲 张新 武学清 《中国药物与临床》 CAS 2019年第19期3315-3316,共2页
多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的女性内分泌疾病,其主要表现为高雄激素血症、高胰岛素血症、黄体生成素(LH)水平升高等[1]。PCOS是导致不孕的常见因素,顽固的PCOS也是体外授精-胚胎移植(IVF-ET)指征之一。与卵巢功能正常女性相比,PCO... 多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的女性内分泌疾病,其主要表现为高雄激素血症、高胰岛素血症、黄体生成素(LH)水平升高等[1]。PCOS是导致不孕的常见因素,顽固的PCOS也是体外授精-胚胎移植(IVF-ET)指征之一。与卵巢功能正常女性相比,PCOS患者常出现卵泡发育迟缓或过度敏感、卵子质量下降,导致IVF妊娠率较低。故本研究通过观察对我中心接受IVF-ET的PCOS患者与卵巢功能正常的妇女在应用促排卵药物后,卵巢颗粒细胞中促卵泡激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)的mRNA表达,并结合相关激素水平变化,进一步探讨卵巢的颗粒细胞对外源性促性腺激素的反应与受体表达的关系。 展开更多
关键词 黄体生成素受体 促排卵药物 高雄激素血症 激素水平变化 常见因素 多囊卵巢综合征 体外授精 卵巢颗粒细胞
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多囊卵巢综合征中卵巢颗粒细胞的研究进展
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作者 张馨怡 谭季春 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期134-136,共3页
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期女性常见的生殖内分泌与代谢性疾病,也是导致原发性不孕症的主要原因[1]。本病的临床表现具有异质性,包括月经不规律、排卵障碍、多毛、痤疮、肥胖等,常伴有生殖内分泌激素紊乱... 多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期女性常见的生殖内分泌与代谢性疾病,也是导致原发性不孕症的主要原因[1]。本病的临床表现具有异质性,包括月经不规律、排卵障碍、多毛、痤疮、肥胖等,常伴有生殖内分泌激素紊乱、胰岛素抵抗、脂代谢异常等特点[2-3]。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 卵巢颗粒细胞 雄激素增高 胰岛素抵抗 慢性炎症
MiR-184通过MAPK信号通路促进多囊卵巢综合征卵巢颗粒细胞的增殖 预览
6
作者 陈龙 王曼 刘利平 《临床与病理杂志》 2019年第1期1-8,共8页
目的:研究microRNA-184(miR-184)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)中的作用,并初步探讨其潜在的作用机制。方法:采用qRT-PCR检测24例PCOS卵巢组织标本、20例正常卵巢组织标本及人卵巢颗粒细胞KGN和人正常卵巢上皮细胞I... 目的:研究microRNA-184(miR-184)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)中的作用,并初步探讨其潜在的作用机制。方法:采用qRT-PCR检测24例PCOS卵巢组织标本、20例正常卵巢组织标本及人卵巢颗粒细胞KGN和人正常卵巢上皮细胞IOSE80中miR-184的表达情况。通过细胞转染法抑制KGN细胞中miR-184的表达,MTT法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Western印迹法检测细胞中p-p38 MAPK和p-ERK1/2蛋白表达水平。以终浓度为20 μmol/L的MAPK信号通路特异性抑制剂SB203580处理下调miR-184的KGN细胞,按照上述方法检测对细胞增殖的影响。结果:PCOS卵巢组织和KGN细胞中miR-184的表达显著上调。在KGN细胞中转染miR-184抑制剂可显著抑制miR-184的表达。下调miR-184的表达后,KGN细胞增殖和细胞克隆形成能力显著降低,细胞中p-p38 MAPK和p-ERK1/2蛋白表达水平显著下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制剂SB203580处理下调miR-184的KGN细胞,细胞增殖和细胞克隆形成能力显著降低,与单纯下调miR-184的细胞相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MiR-184能够促进卵巢颗粒细胞的增殖,其作用机制与MAPK信号通路的激活有关,可为PCOS的治疗提供潜在的作用靶点。 展开更多
关键词 miR-184 MAPK信号通路 多囊卵巢综合征 卵巢颗粒细胞
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过表达miR-21的骨髓间充质干细胞对化疗性卵巢早衰的修复作用 预览
7
作者 汪庆如 陈小莹 +2 位作者 李欣然 王清 付霞霏 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期203-209,共7页
目的 探讨过表达miR-21的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对化疗性卵巢早衰大鼠模型的修复作用。方法 构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21),转染BMSCs构建miR-21-BMSCs。实验分为5组:正常组、模型组、miR-21 组、BMSCs组、miR-21-BMSCs组,每... 目的 探讨过表达miR-21的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对化疗性卵巢早衰大鼠模型的修复作用。方法 构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21),转染BMSCs构建miR-21-BMSCs。实验分为5组:正常组、模型组、miR-21 组、BMSCs组、miR-21-BMSCs组,每组20只大鼠。大鼠腹腔内注射环磷酰胺(CTX)构建化疗性卵巢早衰大鼠模型。正常组及模型组大鼠双侧卵巢注射生理盐水,其余3组分别注射LV-miR-21、BMSCs、miR-21-BMSCs。检测各组大鼠动情周期、雌二醇(E2)及卵泡刺激素(FSH)水平、卵巢重量及各级卵泡计数、卵巢颗粒细胞凋亡率。结果 正常组大鼠动情周期不变,其余4组注射CTX后均出现动情周期紊乱,其中miR-21-BMSCs组恢复动情周期的大鼠数量明显多于其余3组。在注射CTX后30、45、60d,miR-21-BMSCs组卵巢重量及各级卵泡计数明显高于模型组、miR-21及BMSCs组(P<0.05);各组大鼠基础E2、FSH水平差异无统计学意义,正常组大鼠E2、FSH在实验期间无明显改变,其余4组大鼠E2 浓度下降、FSH浓度升高,miR-21-BMSCs组激素水平与miR-21组及BMSCs组相比差异均有统计学意义[E2:F30d=43.10, F45d=43.57,F60d=44.98,P<0.05;FSH:F30d=14.71,F45d=13.16,F60d=15.20,P<0.05)];与模型组、miR-21组、BMSCs组相比,miR-21-BMSCs组颗粒细胞凋亡率明显下降(F15d=27.20,F30d=23.60,F45d=21.80,F60d=21.20,P<0.05)。结论 miR-21 能增强BMSCs对化疗性卵巢早衰的治疗作用,显著减轻卵巢结构及功能损伤。 展开更多
关键词 MIR-21 骨髓间充质干细胞 卵巢早衰 卵巢颗粒细胞
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苍附导痰汤通过miR-29a靶向调节PGC-1α表达对大鼠卵巢颗粒细胞代谢的影响
8
作者 金小琴 崔琳 +5 位作者 刘卫红 王幼平 王娜梅 丁玉 马春芬 康宁 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期311-314,共4页
目的探讨苍附导痰汤通过miR-29a及其靶向PGC-1α信号通路对多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)胰岛素抵抗大鼠卵巢颗粒细胞能量代谢相关基因表达的影响。方法利用TargetScan4.0及Pictar程序预测miR-29a可能的靶基因为PGC-1... 目的探讨苍附导痰汤通过miR-29a及其靶向PGC-1α信号通路对多囊卵巢综合征(Polycystic Ovary Syndrome,PCOS)胰岛素抵抗大鼠卵巢颗粒细胞能量代谢相关基因表达的影响。方法利用TargetScan4.0及Pictar程序预测miR-29a可能的靶基因为PGC-1α,体外培养Sprague-Dawley(SD)大鼠卵巢颗粒细胞(Ovarian granulosa cells,OGCs),用脂质体Lipofectamine2000转染miR-29a mimic进入OGCs,转染48h后分别用实时荧光定量PCR和Western blotting检测PGC-1α的mRNA和蛋白的表达变化;构建含野生型及其突变型PGC-1α3’端非翻译区(UTR)双荧光素酶报告基因(DLR)表达系统(pMIR-PGC-1α-3’UTR)的pEGFP质粒,将细胞分为正常组,空载体组,转染miR-29a组,PGC-1α3’组,PGC-1α3’突变组,分别转染至大鼠胰岛素抵抗细胞模型OGCs中,双萤光素酶报告基因系统检测各组萤光素酶活性变化,并采用RT-PCR确定PGC-1α、NRF-1、ERRα的mRNA表达量。结果 OGCs转染miR-29a mimic 48h后,PGC-1的mRNA和蛋白的水平均下调,与正常组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。双萤光素酶报告基因系统显示,转染miR-29a组可特异抑制带有PGC-1α的3’UTR报告基因表达(P<0.05),转染组PGC-1α、NRF-1、ERRα的mRNA表达量表达下降,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);苍附导痰汤组可逆转转染miR-29a造成的PGC-1α、NRF-1、ERRα的mRNA表达量表达下降,与转染miR-29a组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论经验证PGC-1α是miR-29a的靶基因,在OGCs中过表达miR-29a能特异抑制带有PGC-1α的3’UTR报告基因表达;苍附导痰汤通过miR-29a靶向PGC-1α信号通路改善PCOS胰岛素抵抗大鼠卵巢颗粒细胞胰岛素抵抗,其机制可能是苍附导痰汤通过抑制miR-29a靶向结合PGC-1α的3’UTR,促进PGC-1α及其下游的NRF-1、ERRα的mRNA表达量,促进线粒体进行生物合成、葡萄糖的利用、脂肪酸氧化来实现的。 展开更多
关键词 苍附导痰汤 多囊卵巢综合征 miR-29a PGC-1Α 卵巢颗粒细胞 胰岛素抵抗
HMGA2基因对卵巢颗粒细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响研究
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作者 黄亚哲 王芳 +2 位作者 陈建玲 吴佩蔚 李莹 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2019年第1期81-85,共5页
目的探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因对卵巢颗粒细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法分离培养原代多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞,将HMGA2重组质粒转染细胞,同时转染空载体pcDNA3.1,并设置空白组,转染48h,通过免疫印迹检测... 目的探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)基因对卵巢颗粒细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法分离培养原代多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞,将HMGA2重组质粒转染细胞,同时转染空载体pcDNA3.1,并设置空白组,转染48h,通过免疫印迹检测转染后的细胞HMGA2蛋白表达。MTT法、流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。免疫印迹检测凋亡相关的Bcl-2、Bax和Cleaved caspase3及PI3K/AKT信号通路PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达。结果转染HMGA2重组质粒的卵巢颗粒细胞HMGA2表达明显升高(P<0.05)。过表达HMGA2可明显抑制卵巢颗粒细胞活力,诱导细胞凋亡,下调Bcl-2、PI3K和p-AKT表达,上调Bax和Cleaved caspase3表达(P<0.05)。结论HMGA2基因可诱导卵巢颗粒细胞凋亡,机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 卵巢颗粒细胞 HMGA2基因 PI3K/AKT信号通路 凋亡
激活素A调节人卵巢颗粒细胞Smad2和CYP19A表达的研究 预览
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作者 刘超群 马会明 +6 位作者 侯巧妮 何艳桃 杨玲玲 徐仙 王燕蓉 赵海燕 裴秀英 《发育医学电子杂志》 2019年第3期196-202,共7页
目的 探讨激活素A通过Smad2和CYP19A表达促进颗粒细胞增殖的作用途径。方法2017年3~8月,在宁夏医科大学总医院生殖医学中心就诊的患者中,选取体外受精-胚胎移植(IVFET)或卵胞质内单精子注射(ICSI)两种助孕方式治疗的15例患者为研究对象... 目的 探讨激活素A通过Smad2和CYP19A表达促进颗粒细胞增殖的作用途径。方法2017年3~8月,在宁夏医科大学总医院生殖医学中心就诊的患者中,选取体外受精-胚胎移植(IVFET)或卵胞质内单精子注射(ICSI)两种助孕方式治疗的15例患者为研究对象。取分离纯化的卵巢颗粒细胞,经原代培养48h后分组:激活素A组添加50μg/ml的激活素A,Bimagrumab组添加5μM选择性ActRⅡ抑制剂Bimagrumab,混合组同时添加50μg/ml的激活素A与20μM的Bimagrumab,再继续培养24h。采用Western印迹法检测蛋白表达水平,逆转录及实时PCR检测mRNA表达水平,细胞免疫荧光化学检测蛋白定位。采用单因素方差分析、t检验进行统计学分析。结果 激活素A组中ActRⅡ、p-Smad2/Smad2蛋白表达水平均高于空白对照组,Bimagrumab组中ActRⅡ和p-Smad2/Smad2蛋白表达水平低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),提示Bimagrumab对ActRⅡ有抑制效果,激活素A对ActRⅡ有促进效果。混合组中CYP19A1蛋白表达低于空白对照组,激活素A组中CYP19A1蛋白表达水平高于空白对照组;差异有统计学意义(P<0.05)。激活素A组中Smad2和CYP19A1mRNA表达水平高于空白对照组,混合组中Smad2和CYP19A1mRNA表达水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫化学染色显示,Smad2和CYP19A1存在于卵巢颗粒细胞中,Smad2阳性染色定位于细胞胞浆,CYP19A1阳性染色定位于细胞胞浆和细胞膜。结论 颗粒细胞分泌因子激活素A激活ActRⅡ信号通路,增加p-Smad2/Smad2和CYP19A1的表达水平,进一步促进颗粒细胞增殖和分化。 展开更多
关键词 SMAD2 CYP19A 卵巢颗粒细胞 激活素A 卵泡液
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水提、醇提二至丸对小鼠脾脏和卵巢细胞的影响
11
作者 张伟伟 陈逸琳 +2 位作者 宋文婷 孙沂 佟书娟 《上海中医药杂志》 2019年第6期80-85,共6页
目的探讨水提、醇提二至丸对小鼠脾脏和卵巢颗粒细胞相互作用的影响。方法取小鼠脾单个核细胞和卵巢颗粒细胞体外培养。①二至丸水提组在脾细胞中加入浓度为0.96 g/L的二至丸水提物,二至丸醇提组加入浓度为1.920 g/L的醇提物,阳性对照... 目的探讨水提、醇提二至丸对小鼠脾脏和卵巢颗粒细胞相互作用的影响。方法取小鼠脾单个核细胞和卵巢颗粒细胞体外培养。①二至丸水提组在脾细胞中加入浓度为0.96 g/L的二至丸水提物,二至丸醇提组加入浓度为1.920 g/L的醇提物,阳性对照组加入浓度为0.1 g/L的香菇多糖,空白对照组加入培养液;②二至丸水提组在卵巢颗粒细胞中加入浓度为0.96 g/L的二至丸水提物,二至丸醇提组加入浓度为0.72 g/L的醇提物,阳性对照组加入浓度为0.2 g/L的香菇多糖,空白对照组加入培养液。采用MTT检测细胞增殖情况;ELISA检测培养上清中IL-1、E2的浓度;荧光实时定量PCR(QRT-PCR)检测IL-1受体(IL-1R)、雌激素受体(ERα)的mRNA表达水平;流式细胞术检测IL-1R、ERα的蛋白水平。结果①与空白对照组比较,二至丸水提物、醇提物对脾细胞、卵巢颗粒细胞均具有明显的促增殖作用(P<0.01),且醇提物对脾细胞的增殖作用强于水提物(P<0.05)。②水提、醇提二至丸均能促进卵巢颗粒细胞产生更多的E2(P<0.05),促进脾细胞产生更多的IL-1(P<0.01)。③与空白对照组比较,二至丸水提、醇提组脾细胞ERα的表达水平显著升高(P<0.01),此结果与香菇多糖组一致(P>0.05),且二至丸醇提物组ERα的表达水平高于二至丸水提组(P<0.05)。④二至丸水提组和醇提组卵巢颗粒细胞表面IL-1R的表达水平显著升高(P<0.05),与香菇多糖效果一样(P>0.05),但两者之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论二至丸水提物、醇提物可通过直接调控卵巢颗粒细胞和脾细胞对小鼠生殖内分泌和免疫系统发挥良好的双向促进作用,且二至丸醇提物的效果优于水提物。 展开更多
关键词 细胞 卵巢颗粒细胞 细胞培养 二至丸 水提 醇提
二仙汤对过氧化氢诱导的人卵巢颗粒细胞氧化损伤的保护作用
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作者 李杨 谢莉 +2 位作者 刘建 聂广宁 杨洪艳 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期317-322,共6页
目的探讨二仙汤对过氧化氢(H2O2)诱导人卵巢颗粒细胞(COV434)氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法体外培养COV434细胞,0.5 mmol/L H2O2诱导COV434氧化损伤。将细胞分为空白组、模型组(H2O2 0.5 mmol/L)、二仙汤水提液低、中、高剂量组... 目的探讨二仙汤对过氧化氢(H2O2)诱导人卵巢颗粒细胞(COV434)氧化损伤的保护作用及其可能机制。方法体外培养COV434细胞,0.5 mmol/L H2O2诱导COV434氧化损伤。将细胞分为空白组、模型组(H2O2 0.5 mmol/L)、二仙汤水提液低、中、高剂量组(0.5、1、5 mg/mL+H2O2 0.5 mmol/L)。MTT分析细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧族(ROS)水平,微量酶标法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放。Annexin V-FITC/PI双染和PI染色,分别检测细胞凋亡和周期。Western blot检测HO-1、NQO-1、P-JNK、P-44/42、P-p38、Bax、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达。结果与空白组比较,模型组细胞存活率下降,ROS及LDH水平增加,S期百分率、早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡比例显著增高(P<0.01),Bax、Caspase-9及P-JNK蛋白表达升高(P<0.05)。与模型组比较,二仙汤水提液低、中、高剂量组LDH、S期百分率降低,G2/M期百分率升高(P<0.05),二仙汤水提液中、高剂量组细胞存活率升高,ROS释放量、早期凋亡及总凋亡比例降低(P<0.05,P<0.01),二仙汤水提液低、中剂量组P-44/42蛋白表达升高(P<0.05)。结论二仙汤在一定剂量范围内对H2O2诱导的COV434细胞损伤具有明显的保护作用,其保护效应可能与清除ROS,减轻DNA氧化损伤,调控MAPK-Nrf2信号通路及线粒体通路介导的细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 过氧化氢 二仙汤 氧化应激 卵巢颗粒细胞
miR-143在卵泡刺激素介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成中的作用 预览
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作者 高小博 姚楠 +3 位作者 郑盼盼 骆海燕 马旭 陆彩玲 《生殖医学杂志》 CAS 2019年第6期684-688,共5页
目的 探讨miR-143在卵泡刺激素(FSH)介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成中的作用。方法 实时定量RT-PCR检测FSH诱导原代颗粒细胞后miR-143的表达;重组腺病毒感染颗粒细胞进行miR-143的过表达;放射免疫法(RIA)测定孕酮的水平。结果 50ng/ml的FS... 目的 探讨miR-143在卵泡刺激素(FSH)介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成中的作用。方法 实时定量RT-PCR检测FSH诱导原代颗粒细胞后miR-143的表达;重组腺病毒感染颗粒细胞进行miR-143的过表达;放射免疫法(RIA)测定孕酮的水平。结果 50ng/ml的FSH处理原代颗粒细胞24h后颗粒细胞分泌孕酮显著增加(P<0.001),建立了FSH刺激原代颗粒细胞分泌孕酮模型。miR-143在FSH处理颗粒细胞6、12h后表达没有显著变化,在24h后表达显著增加(P<0.01),在48h时表达量最高(P<0.001)。与感染对照病毒Ad-miRNC组相比,感染Ad-miR143组的细胞miR-143表达水平显著增加(P<0.01)。感染Ad-miR143后颗粒细胞与空白对照组和感染对照病毒组相比,孕酮分泌水平显著升高(P<0.01)。结论 miR-143可以促进FSH介导的卵巢颗粒细胞孕酮生成。 展开更多
关键词 MIR-143 卵泡刺激素 卵巢颗粒细胞 孕酮
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雷公藤甲素通过PI3K/AKT/mTOR通路诱导卵巢颗粒细胞自噬的实验研究
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作者 白俊 吴也可 +4 位作者 吴克明 朱虹丽 李楠 陈梅 刘丽秀 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第16期3429-3434,共6页
研究雷公藤甲素(triptolide,TP)诱导卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,OGCs)自噬所需的浓度、时间及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响。采用CCK-8法比较不同浓度的TP对原代培养大鼠OGCs的抑制作用并计算IC50;Western blot法检测不同浓度... 研究雷公藤甲素(triptolide,TP)诱导卵巢颗粒细胞(ovarian granulosa cells,OGCs)自噬所需的浓度、时间及对PI3K/AKT/mTOR通路的影响。采用CCK-8法比较不同浓度的TP对原代培养大鼠OGCs的抑制作用并计算IC50;Western blot法检测不同浓度、时间点下TP对OGCs自噬相关因子蛋白表达的影响,同时检测TP、自噬诱导剂(brefeldin A)、PI3K/mTOR抑制剂(NVP-BEZ235)分别干预OGCs对PI3K/AKT/mTOR通路及自噬相关因子蛋白表达的影响。结果显示,不同浓度TP作用于大鼠OGCs的IC50为14.65μmol•L,其中最小抑制浓度为0.1μmol•L^-1(100 nmol•L^-1);与空白对照组相比,各组beclin1,LC3Ⅱ蛋白表达水平均升高,LC3Ⅰ及p62蛋白表达水平均下降,其中100 nmol•L^-1 TP作用于大鼠OGCs 12 h,各指标变化显著(P<0.05或P<0.01);TP,brefeldin A,NVP-BEZ235分别处理大鼠OGCs 12 h后,与空白对照组相比,TP可显著促进下游自噬效应分子beclin1,LC3Ⅱ蛋白表达水平并抑制LC3Ⅰ,p62蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),且TP组beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达高于brefeldin A组,p62的表达低于brefeldin A组(P<0.05或P<0.01)。同时,TP能显著抑制p-PI3K,p-AKT,p-mTOR蛋白表达水平,且TP抑制效果优于NVP-BEZ235组。因此,该研究提示100 nmol•L^-1 TP作用于离体培养大鼠OGCs 12 h,可成功诱导OGCs自噬;TP可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导OGCs自噬。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 卵巢颗粒细胞 自噬 PI3K/AKT/MTOR
脂肪因子Chemerin对牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的影响 预览
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作者 段银平 薛瑛 +3 位作者 周爽 张敏 张宾 李惠侠 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期145-151,共7页
[目的]本试验旨在探讨脂肪因子Chemerin在牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬中的作用。[方法]体外培养牛卵巢颗粒细胞并用重组Chemerin蛋白(0.2μg·mL^-1)处理24h,采用流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡,通过免疫荧光检测细胞中活性氧(ROS)含... [目的]本试验旨在探讨脂肪因子Chemerin在牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬中的作用。[方法]体外培养牛卵巢颗粒细胞并用重组Chemerin蛋白(0.2μg·mL^-1)处理24h,采用流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡,通过免疫荧光检测细胞中活性氧(ROS)含量变化,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;RT-qPCR分析凋亡与自噬相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3、P62和Atg7mRNA表达,Westernblot技术检测凋亡与自噬相关蛋白表达情况。[结果]与对照组相比,Chemerin处理卵巢颗粒细胞后,细胞中ROS和MDA含量显著上升(P<0.05),SOD和GSH-px活性极显著降低(P<0.01)。凋亡相关基因Bax和Caspase-3mRNA及蛋白表达水平显著升高,P62和Atg7mRNA等的表达也显著上调(P<0.05)。[结论]Chemerin可通过调控相关基因的表达诱导牛卵巢颗粒细胞凋亡并伴随自噬的发生。 展开更多
关键词 CHEMERIN 自噬 凋亡 卵巢颗粒细胞
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PGRMC1介导孕酮抑制卵泡发育的作用及机制研究 预览
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作者 袁晓华 张莉莉 +2 位作者 盛喜霞 杨春荣 王亚琴 《海南医学》 CAS 2019年第1期1-5,共5页
目的探讨孕酮膜受体(PGRMC1)在孕激素抑制卵泡发育及颗粒细胞分化中的作用及作用机制。方法将10只21 d的SD大鼠按随机数表法分为两组(n=5),其中一组注射孕马血清促性腺激素(PMSG)(20 IU/mL)48 h后取卵巢,另外一组注射PMSG 24 h后注射孕... 目的探讨孕酮膜受体(PGRMC1)在孕激素抑制卵泡发育及颗粒细胞分化中的作用及作用机制。方法将10只21 d的SD大鼠按随机数表法分为两组(n=5),其中一组注射孕马血清促性腺激素(PMSG)(20 IU/mL)48 h后取卵巢,另外一组注射PMSG 24 h后注射孕酮(30μg/只),再经过24 h后取卵巢,通过测量卵巢大小、HE染色研究孕酮对卵泡发育的影响。PMSG (20 IU/mL)促排卵48 h后取卵巢,后通过免疫组化观察PGRMC1受体分布情况。用PMSG促排卵48 h后分离卵泡颗粒细胞,加入孕酮(100 ng/mL、250 ng/mL)和PGRMC1抑制剂AG205(10μmol/L)后,采用Western blot检测卵巢颗粒细胞甾体激素生成相关的细胞外信号调节酶(ERK1/2)、甾体激素快速调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链切割酶(P450scc)的表达情况,采用ELISA试剂盒检测培养上清中的孕烯醇酮分泌情况。结果 PMSG处理组卵巢大小为(8.6±0.93) mm,明显大于PMSG联合孕酮处理组的(5.2±0.58) mm,差异有统计学意义(P<0.05);PMSG联合孕酮处理组始基卵泡数明显高于PMSG处理组[(62±8.6) vs(39±2.9)],而有腔卵泡及成熟卵泡显著低于PMSG处理组[(3.8±1.0) vs (8.0±1.2)、(3.7±0.4) vs (8.1±0.6)],差异均有统计学意义(P<0.05);孕酮(100 ng/mL、250 ng/mL)抑制甾体激素生成相关的pERK1/2、StAR、p450scc的表达,进而抑制甾体激素的前体孕烯醇酮的合成[(2.9±0.23) ng/mL vs (5.3±0.18) ng/mL、[(3.0±0.67) ng/mL vs (5.3±0.18) ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);然而PGRMC1抑制剂AG205(10μM)逆转孕酮的这种抑制作用升高pERK1/2、StAR、p450scc的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);AG205逆转孕酮(100 ng/mL、250 ng/mL)对孕烯醇酮合成的抑制作用[(9.6±0.67) ng/mL vs (2.9±0.18) ng/mL、(9.8±0.91) ng/mL vs (3.0±0.67) ng/mL]差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论孕酮抑制卵泡的发育,孕酮的这种抑制作用主要体现在对窦前卵泡的抑制作用。孕酮对卵巢颗粒细胞甾体激素的合� 展开更多
关键词 卵巢颗粒细胞 孕酮膜受体 孕酮 孕烯醇酮 卵泡发育
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G蛋白偶联受体30在烹调油烟诱导大鼠卵巢颗粒细胞毒性中的作用
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作者 徐幽琼 张晓阳 +3 位作者 李红 刘建华 曹祥玉 黄若酩 《环境与职业医学》 CSCD 北大核心 2019年第3期248-253,共6页
[目的]分析G蛋白偶联受体30(GPR30)在烹调油烟(COFs)诱导大鼠卵巢颗粒细胞毒性中作用,为COFs预防控制提供基础数据。[方法]提取雌性Wistar大鼠的卵巢颗粒细胞,5、25、100、400、800、1 600μg/mL COFs体外染毒24 h后,MTT法检测细胞生存... [目的]分析G蛋白偶联受体30(GPR30)在烹调油烟(COFs)诱导大鼠卵巢颗粒细胞毒性中作用,为COFs预防控制提供基础数据。[方法]提取雌性Wistar大鼠的卵巢颗粒细胞,5、25、100、400、800、1 600μg/mL COFs体外染毒24 h后,MTT法检测细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡,放射免疫检测雌激素(E2)、孕酮(P4)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)水平,RT-PCR检测GPR30、表皮生长因子受体(EGFR)、信号传导与转录激活因子3(STAT3)和胞外信号调节激酶(ERK)mRNA表达水平。[结果] COFs染毒24 h后,100~1 600μg/mL剂量组颗粒细胞生存率明显低于对照组(P <0.001);25~400μg/mL剂量组颗粒细胞凋亡率明显高于对照组(P <0.05),而100~400μg/mL剂量组P4、E2激素水平均明显低于对照组(P <0.01)。100~400μg/mL剂量组GPR30 mRNA及400μg/mL剂量组EGFR mRNA均明显低于对照组(P <0.05或P <0.01),100~400μg/mL剂量组STAT3、ERK mRNA均明显高于对照组(P <0.01)。[结论]一定剂量COFs可导致卵巢颗粒细胞凋亡率上升和P4、E2激素水平下降。COFs这些不利影响与STAT3和ERK mRNA的表达水平上升有关。GPR30可能参与了雌激素对卵巢颗粒细胞调节作用。 展开更多
关键词 烹调油烟 G蛋白偶联受体30 卵巢颗粒细胞 凋亡 性激素水平
二仙汤对自然衰老小鼠卵巢颗粒细胞线粒体的改善作用
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作者 赵新永 王丽君 周飞 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期10-14,共5页
目的:观察二仙汤对自然衰老小鼠卵巢颗粒细胞线粒体的改善作用。方法:昆明种小鼠分为3组:2月龄青年对照组,11月龄老年空白对照和11月龄二仙汤30 g/kg实验组。分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续用药60天。实验结束后分离卵巢颗粒细胞... 目的:观察二仙汤对自然衰老小鼠卵巢颗粒细胞线粒体的改善作用。方法:昆明种小鼠分为3组:2月龄青年对照组,11月龄老年空白对照和11月龄二仙汤30 g/kg实验组。分别灌胃给予相应药物或生理盐水,连续用药60天。实验结束后分离卵巢颗粒细胞。采用生物发光法测定ATP含量,测定线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ活性,电镜和荧光染色观察线粒体的数目、形态和结构,JC-1染色观察线粒体膜电位,Western blot法检测PCG-1α、OPA1和PINK1的蛋白表达水平。结果:和青年小鼠比,衰老小鼠卵巢颗粒细胞ATP含量明显降低,线粒体呼吸链复合物Ⅰ和Ⅲ活性显著提高,线粒体数目减少,碎片物增多,膜电位降低,PCG-1α和PINK1蛋白水平下调,而二仙汤30 g/kg组可以显著提高衰老细胞的ATP含量,改善线粒体数目和结构,提高线粒体膜电位,促进PCG-1α和PINK1的表达。结论:线粒体功能降低可能是小鼠卵巢颗粒细胞衰老的机制之一,而二仙汤能够改善衰老的线粒体功能,这种改善很可能是通过促进线粒体自我更新的动力过程进行的。 展开更多
关键词 二仙汤 衰老 卵巢颗粒细胞 线 能量代谢
小鼠鸡卵巢颗粒细胞分离培养方法的比较与优化 预览
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作者 扆妍妍 侯雅鑫 +3 位作者 张宇瞳 孙娜 孙耀贵 李宏全 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期23-27,I0001共6页
本试验通过分离与培养小鼠、鸡不同等级卵泡颗粒细胞,比较其培养和形态差异,并对提取方法进行优化。试验选取3周龄雌性昆明系小鼠,200日龄的海蓝褐蛋鸡,分别采用优化的方法分离培养卵巢颗粒细胞,通过观察细胞形态、H.E.染色和间接免疫荧... 本试验通过分离与培养小鼠、鸡不同等级卵泡颗粒细胞,比较其培养和形态差异,并对提取方法进行优化。试验选取3周龄雌性昆明系小鼠,200日龄的海蓝褐蛋鸡,分别采用优化的方法分离培养卵巢颗粒细胞,通过观察细胞形态、H.E.染色和间接免疫荧光,对比不同种属颗粒细胞提取方法、培养条件及生长状态。结果表明,与采用机械法分离的小鼠卵巢颗粒细胞相比,采用酶消化法分离的鸡不同等级卵泡颗粒细胞贴壁较快、生长速度快、伪足较多。分析得出小鼠与鸡不同等级卵泡颗粒细胞的分离,培养条件均有差异,且对已有提取方法进行优化,所培养的颗粒细胞状态良好。 展开更多
关键词 小鼠 不同等级卵泡 卵巢颗粒细胞 体外培养
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Genistein对雌性大鼠卵巢颗粒细胞FSHR基因表达的影响 预览
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作者 温海霞 张亚楠 《中国医药导报》 CAS 2019年第14期16-18,共3页
目的观察Genistein对雌性大鼠卵巢颗粒细胞卵泡刺激素受体(FSHR)基因表达的影响,及其与雌激素受体(ER)的关系。方法选取25~28日龄雌性大鼠,皮下注射孕马血清促性腺激素,建立促卵泡发育模型,分离卵巢颗粒细胞进行培养,分别给予Genistein(... 目的观察Genistein对雌性大鼠卵巢颗粒细胞卵泡刺激素受体(FSHR)基因表达的影响,及其与雌激素受体(ER)的关系。方法选取25~28日龄雌性大鼠,皮下注射孕马血清促性腺激素,建立促卵泡发育模型,分离卵巢颗粒细胞进行培养,分别给予Genistein(0、0.1、1、5、10、100μmol/L)及雌激素受体阻断剂ICI182,780(1μmol/L)处理24h后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测芳香化酶基因上游调控因子FSHR mRNA的表达。结果与空白对照组比较,10μmol/LGenistein组FSHR mRNA表达显著增加(P<0.05)。ICI 182,780(1μmol/L)预处理细胞30min后加入1和10μmol/L Genistein,其FSHR mRNA表达分别较1和10μmol/L Genistein组显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论10μmol/L的Genistein可上调雌性大鼠卵巢颗粒细胞中FSHR表达,且该作用可能是通过ER介导的。 展开更多
关键词 GENISTEIN 雌性大鼠 卵巢颗粒细胞 卵泡刺激素受体
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