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颅内畸胎瘤的诊断及治疗 预览
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作者 冯昕 赵学明 《基层医学论坛》 2019年第7期1011-1013,共3页
畸胎瘤属于生殖细胞瘤,是卵巢肿瘤中常见的一种,好发于盆腔,发生于颅内则十分罕见。国内外第一次关于颅内畸胎瘤的报道是在1864 年,但颅内畸胎瘤的发病率仍较低。颅内畸胎瘤是起源于胚胎发育时期的原始生殖细胞的先天性异位瘤,约占所有... 畸胎瘤属于生殖细胞瘤,是卵巢肿瘤中常见的一种,好发于盆腔,发生于颅内则十分罕见。国内外第一次关于颅内畸胎瘤的报道是在1864 年,但颅内畸胎瘤的发病率仍较低。颅内畸胎瘤是起源于胚胎发育时期的原始生殖细胞的先天性异位瘤,约占所有颅内肿瘤的0.5%[1],我国统计的颅内畸胎瘤占颅内生殖细胞肿瘤(intracranial germ cell tumors,ICGCTs)的29.2%。颅内畸胎瘤多发生于20 岁以下的青少年,平均年龄小,反映了新生儿期胚胎发育的因素对畸胎瘤的生长有意义。颅内畸胎瘤的发病性别具有特点,男性的发病率明显高于女性. 展开更多
关键词 颅内畸胎瘤 颅内生殖细胞肿瘤 治疗 诊断 原始生殖细胞 胚胎发育 生殖细胞 发病率
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小鼠和人类生殖干细胞形成、特化和维持
2
作者 张帆 李劲松 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第6期1012-1020,共9页
哺乳动物胚胎植入子宫后,随着原肠运动的发生,胚胎开始向三个胚层分化,同时生殖细胞开始形成和特化。胚胎最早期的生殖细胞被称为原始生殖细胞(primordial germ cell, PGC),雌雄原始生殖细胞增殖并迁移到生殖嵴,持续增殖后分别进入减数... 哺乳动物胚胎植入子宫后,随着原肠运动的发生,胚胎开始向三个胚层分化,同时生殖细胞开始形成和特化。胚胎最早期的生殖细胞被称为原始生殖细胞(primordial germ cell, PGC),雌雄原始生殖细胞增殖并迁移到生殖嵴,持续增殖后分别进入减数分裂前期和有丝分裂阻滞,分化形成卵原细胞和精原干细胞,经过复杂的发育过程分化形成卵母细胞和精子。该文回顾了小鼠和人类的原始生殖细胞的形成和特化过程,并且对小鼠和人类精原干细胞的分子特征和体外培养体系进行了总结。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 精原干细胞
团头鲂nanos3基因的克隆鉴定 预览
3
作者 朱林 王厚鹏 +2 位作者 朱作言 孙永华 叶鼎 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期457-464,共8页
为了标记团头鲂(Megalobrama amblycephala)的原始生殖细胞(Primordial Germ Cells, PGCs),首次克隆并鉴定了团头鲂nanos3基因(mananos3)。mananos3全长1027 bp,包括48 bp 5′UTR (5′untranslated Region),490 bp 3′UTR和489 bp开放... 为了标记团头鲂(Megalobrama amblycephala)的原始生殖细胞(Primordial Germ Cells, PGCs),首次克隆并鉴定了团头鲂nanos3基因(mananos3)。mananos3全长1027 bp,包括48 bp 5′UTR (5′untranslated Region),490 bp 3′UTR和489 bp开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)。该基因编码162个氨基酸。通过序列比对发现Mananos3蛋白和其他物种Nanos蛋白一样,存在一个保守的RNA结合功能域,该功能域包含一个锌指基序(Motif)。系统发育树结果显示, Mananos3与鲤(Cyprinus carpio)的Nanos3最为相近。半定量和定量PCR结果表明, mananos3具有较高的母源表达,并在胚胎发育早期高量表达,而在1000细胞期之后表达量逐渐降低。在成体组织中, mananos3仅在卵巢中检测到表达。mananos3和斑马鱼(Danio rerio) nanos3 (zfnanos3)的3′UTR均可以介导绿色荧光蛋白特异标记团头鲂和斑马鱼胚胎发育早期的PGCs,但是mananos3的3′UTR能够更特异地标记团头鲂的PGCs。通过比对mananos3和zfnanos3的3′UTR发现, mananos3 的3′UTR中有一个非经典的miR430识别位点(GCACTA)。通过对该位点的突变研究证实其有利于nanos3在非PGCs组织中的降解。综上所述,团头鲂mananos3的3′UTR序列中的非经典miR430识别位点(GCACTA)可能与介导报告基因在PGCs中特异表达相关。 展开更多
关键词 Nanos3 团头鲂 原始生殖细胞 斑马鱼
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鱼类性腺发育研究进展 预览
4
作者 刘晨斌 徐革锋 +4 位作者 黄天晴 谷伟 张玉勇 相福生 王炳谦 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期46-54,共9页
性腺发育对鱼类的成功繁殖与种群延续至关重要。鱼类的性腺发育包括原始性腺的形成和分化、性腺的组织结构、形态特征与时相划分以及环境因素对性腺发育的影响等。掌握鱼类原始生殖细胞(Primordial germ cells, PGCs)的起源、迁移和分... 性腺发育对鱼类的成功繁殖与种群延续至关重要。鱼类的性腺发育包括原始性腺的形成和分化、性腺的组织结构、形态特征与时相划分以及环境因素对性腺发育的影响等。掌握鱼类原始生殖细胞(Primordial germ cells, PGCs)的起源、迁移和分化特征是研究性腺发育规律的基础。鱼类的PGCs出现于胚胎发育早期,以不同方式迁移到生殖嵴,与生殖上皮共同形成原始性腺,之后向精巢或卵巢分化。鱼类性别决定和性分化呈多元性,既有雌雄同体也有雌雄异体。遗传和环境因素(如温度、光照、激素和pH等)影响性腺的性别分化,具有可逆可塑性。判断鱼类性腺分化方向依据两方面:一是观察性腺的组织学形态特征变化;二是以性原细胞的出现及其减数分裂的细胞学分化。性腺分化主要包括雌雄异体、雌雄同体和性逆转三种类型;雌雄异体型又分为分化型和未分化型。本文通过综述鱼类原始生殖细胞的起源、迁移和分化、性别分化以及性腺发育的研究进展,以期为鱼类性腺发育的研究提供参考。 展开更多
关键词 性腺发育 原始生殖细胞 性别分化 配子发生
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在胚胎发育的进程中,她找到了答案
5
作者 邢鸿飞(编译) 乔丹娜·卡佩勒维克兹 《世界科学》 2019年第2期42-44,共3页
雷妮·雷霍·佩拉数十年来致力于研究胚胎发育的时机对健康和疾病的影响。'你知道还有什么比精子和卵子结合后形成一个人更有意思的事情吗?'在2018年7月举行的发育生物学学会年会上,干细胞生物学家雷妮·雷霍·... 雷妮·雷霍·佩拉数十年来致力于研究胚胎发育的时机对健康和疾病的影响。'你知道还有什么比精子和卵子结合后形成一个人更有意思的事情吗?'在2018年7月举行的发育生物学学会年会上,干细胞生物学家雷妮·雷霍·佩拉(Renee Reijo Pera)向数百名科学家发表主题演讲时问道。 展开更多
关键词 胚胎发育 胚胎干细胞 逆转录病毒 蒙大拿州立大学 滋养外胚层 原始生殖细胞 帕金森症 细胞命运
颅内生殖细胞肿瘤病因学研究进展
6
作者 齐文婷 顾锋 《中国实用内科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期964-966,共3页
1概述颅内生殖细胞肿瘤(intracranial germ cell tumors,IGCTs)是一类好发于儿童青少年的罕见颅内肿瘤,年发病率约0.5~2.7例/百万人,亚洲国家发病率明显高于西方国家,我国年发病率为1.9/百万人。发病高峰年龄为10~12岁,男女患病比... 1概述颅内生殖细胞肿瘤(intracranial germ cell tumors,IGCTs)是一类好发于儿童青少年的罕见颅内肿瘤,年发病率约0.5~2.7例/百万人,亚洲国家发病率明显高于西方国家,我国年发病率为1.9/百万人。发病高峰年龄为10~12岁,男女患病比例总体接近4~5∶1。IGCTs好发于颅内中线部位,其中发生于松果体区者约占总数的37%~66%. 展开更多
关键词 颅内生殖细胞肿瘤 病因学 原始生殖细胞 分子遗传学 信号通路 基因
哺乳动物原始生殖细胞的体内特化和体外培养 被引量:1
7
作者 张国栋 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期467-472,共6页
原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)是胚胎中最先出现的生殖细胞。PGCs来源于上胚层,最早出现在后肠,随后向生殖嵴迁移。这一过程伴随一系列复杂的分子调控机制,以及DNA甲基化重编程和组蛋白修饰等表观遗传过程。PGCs经过不断... 原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)是胚胎中最先出现的生殖细胞。PGCs来源于上胚层,最早出现在后肠,随后向生殖嵴迁移。这一过程伴随一系列复杂的分子调控机制,以及DNA甲基化重编程和组蛋白修饰等表观遗传过程。PGCs经过不断的分裂、发育及分化,最终形成配子。为了更好地研究PGCs发育与分化的调控和表观遗传过程,体外培养的研究变得越来越重要。本文以小鼠和人为例,介绍了哺乳动物PGCs的特化过程、PGCs特化过程中的表观遗传过程和PGCs的体外培养研究进展。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 表观遗传 甲基化 特化
体外制备原始生殖细胞来源类胚体的一种方法
8
作者 扈清云 王培军 +4 位作者 朱金玲 陈乃峰 韩曦 钟堂武 张东东 《解剖学研究》 CAS 2018年第5期380-384,F0004共6页
目的探讨一种利用鸡原始生殖细胞作为种子细胞,体外制备类胚体的方法。方法采用干细胞体外培养获得干细胞系并制备类胚体,采用免疫荧光染色、HE染色、RT-PCR及诱导分化等技术对干细胞系及类胚体的生物学特性进行鉴定分析。结果通过悬浮... 目的探讨一种利用鸡原始生殖细胞作为种子细胞,体外制备类胚体的方法。方法采用干细胞体外培养获得干细胞系并制备类胚体,采用免疫荧光染色、HE染色、RT-PCR及诱导分化等技术对干细胞系及类胚体的生物学特性进行鉴定分析。结果通过悬浮培养获得了最大体积为440μm的类胚体,并借助共聚焦显微镜活体细胞成像系统捕捉到其向心肌分化后自主收缩的影像。结论本研究提供了一种快速、高效的体外制备大体积类胚体的技术方法。 展开更多
关键词 细胞 原始生殖细胞 类胚体
饲养层种类及密度对体外培养兔原始生殖细胞的影响
9
作者 王亚丹 虎啸 +5 位作者 丁雪粉 朱邯豫 赵玉玺 吕海淼 彭展 王新庄 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第8期1384-1391,共8页
该研究以14-18天胎兔为试验对象,体外分离培养扩增原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),观察其形态变化及集落形成过程。用AKP染色(alkaline phosphatase staining)及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,结果均为阳性,将兔PGCs分别... 该研究以14-18天胎兔为试验对象,体外分离培养扩增原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs),观察其形态变化及集落形成过程。用AKP染色(alkaline phosphatase staining)及分子生物学等方法鉴定兔PGCs,结果均为阳性,将兔PGCs分别接种于鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryo fibroblast,MEF)、兔胚胎成纤维细胞(rabbit embryo fibroblast,REF)制成的不同密度饲养层来确定种属跟密度对体外培养兔PGCs的影响。结果显示,兔PGCs接种于用同源胚胎成纤维细胞所制成的密度为6×104的饲养层上所得到的集落个数最多,集落形态最好,分化速度较慢。 展开更多
关键词 小鼠 胚胎成纤维细胞 饲养层 原始生殖细胞
Nanos2在雄性生殖系统内的研究进展
10
作者 黄振宇(综述) 张贤生(审校) 《中华男科学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期558-561,共4页
Nanos2是Nanos基因家族成员之一,编码一种进化保守的RNA结合蛋白,其表达在胚胎期雄性原始生殖细胞(PGCs)和睾丸的精原干细胞(SSCs)内,是一种雄性生殖细胞特异性基因。胚胎发育期间,Nanos2能促进雄性PGCs发育并抑制其进入减数分裂;... Nanos2是Nanos基因家族成员之一,编码一种进化保守的RNA结合蛋白,其表达在胚胎期雄性原始生殖细胞(PGCs)和睾丸的精原干细胞(SSCs)内,是一种雄性生殖细胞特异性基因。胚胎发育期间,Nanos2能促进雄性PGCs发育并抑制其进入减数分裂;精子生成过程中,Nanos2可抑制睾丸SSCs分化进而维持SSC池稳定。敲除Nanos2基因能导致雄性小鼠生殖细胞的消失和不育,而睾丸Nanos2基因过表达则会引起生精小管内SSCs的累积。此外,Nanos2还参与特定RNAs的降解,并且可能与某些雄性生殖系统疾病相关。本文就近年来Nanos2在雄性生殖系统内的研究进展现予以综述。 展开更多
关键词 Nanos2 原始生殖细胞 精原干细胞 性别分化 信使核糖核蛋白
鱼类生殖细胞移植技术的发展及应用前景 预览 被引量:4
11
作者 赵雅贤 周勤 +3 位作者 于清海 夏连军 任玉芹 林听听 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期414-423,共10页
鱼类生殖细胞移植技术是通过诱导不同物种之间生殖系嵌合体来实现。原始生殖细胞和精原细胞(或卵原细胞)是诱导生殖细胞系嵌合体的关键材料。在过去的十多年中,通过采用不同的供体生殖细胞和不同发育阶段(囊胚期胚胎、初孵仔鱼和成... 鱼类生殖细胞移植技术是通过诱导不同物种之间生殖系嵌合体来实现。原始生殖细胞和精原细胞(或卵原细胞)是诱导生殖细胞系嵌合体的关键材料。在过去的十多年中,通过采用不同的供体生殖细胞和不同发育阶段(囊胚期胚胎、初孵仔鱼和成鱼)的鱼为受体,开发出多种鱼类生殖细胞移植技术。这些成果的取得,为生殖细胞移植技术应用于诸多水产养殖新兴领域打下了坚实基础。该技术可以应用于:(1)生殖细胞生物学和转基因鱼等基础研究;(2)遗传资源和濒危鱼种的保护;(3)鱼类性别选择育种;(4)有效提高放流鱼苗的遗传多样性。 展开更多
关键词 鱼类生殖细胞 原始生殖细胞 精原细胞 小生境 低温保存
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白消安消减鹅胚内源性原始生殖细胞 预览
12
作者 于建宁 陈哲 +4 位作者 闫乐艳 宋永宏 朱欢喜 李辉 戴子淳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期863-867,共5页
降低胚胎内源性原始生殖细胞是提高禽类生殖嵌合体效率的最有效途径,本试验首次研究白消安对鹅胚内源性原始生殖细胞的消减作用。将白消安乳化剂直接注射到鹅种蛋的卵黄内,待鹅胚发育到第8 d时分离生殖腺中的PGCs,并统计PGCs数目。结果... 降低胚胎内源性原始生殖细胞是提高禽类生殖嵌合体效率的最有效途径,本试验首次研究白消安对鹅胚内源性原始生殖细胞的消减作用。将白消安乳化剂直接注射到鹅种蛋的卵黄内,待鹅胚发育到第8 d时分离生殖腺中的PGCs,并统计PGCs数目。结果显示,糖原染色与免疫荧光染色充分证明从鹅胚生殖腺中成功分离到PGCs;较低浓度(每1颗卵注射150μg)的白消安能显著降低鹅胚内源性原始生殖细胞,从对照的单胚约1 200个PGCs降低到处理组的80个左右。鹅相对于鸡而言对白消安更敏感,较低浓度即可显著降低鹅内源性PGCs。 展开更多
关键词 白消安 生殖 原始生殖细胞
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不同胚期分离的鸡原始生殖细胞(PGCs)遗传与培养特性比较
13
作者 陈志胜 张晓芳 +3 位作者 李东升 王丙云 陈胜锋 陈金顶 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1778-1784,共7页
根据家禽原始生殖细胞(PGCs)的迁移路径,分别从孵化24h的鸡胚生殖新月(gcPGC)、2.5d的胚血(cPGC)和5.5d的生殖腺(gPG(:)中分离PGCs,置于完全培养基中培养,表达干细胞标志物SSEA-1和生殖细胞特异标志物DAZI。免疫荧光染... 根据家禽原始生殖细胞(PGCs)的迁移路径,分别从孵化24h的鸡胚生殖新月(gcPGC)、2.5d的胚血(cPGC)和5.5d的生殖腺(gPG(:)中分离PGCs,置于完全培养基中培养,表达干细胞标志物SSEA-1和生殖细胞特异标志物DAZI。免疫荧光染色鉴定结果,表明纯化的细胞为PGCs。CCK-8法细胞增殖检测显示,BRI,-3A饲养层细胞能明显促进PGCs的体外增殖,与无饲养层条件培养的PGCs间有显著性差异(P〈0.05),但不同来源PGCs间无增殖速度的差异。检测这3种不同来源PGCs的集落形成能力,结果显示cPGCs的集落形成率最高,集落体积最大。realtime-PCR结果显示多能性相关基因nanogv和pouV在gcPGCs中的表达量最高,而生殖相关基因dazl和cvh在cPGCs中的表达量最高。结果表明,体外培养的PGCs保持其体内遗传状况,即gcPGC的多能性最好.cPGC开始进入生殖系分化,而gPGC可能已部分进入减数分裂。而从培养特性上来看,gcPGC由于数量过少难以扩大培养,而gPGC混合的分化细胞过多,cPGC是体外培养和增殖分化研究的最佳细胞来源。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 体外培养 增殖 多能性
Regulatory elements and transcriptional control of chicken vasa homologue(CVH)promoter in chicken primordial germ cells 预览
14
作者 So Dam Jin Bo Ram Lee +3 位作者 Young Sun Hwang Hong Jo Lee Jong Seop Rim Jae Yong Han 《畜牧与生物技术杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第2期490-500,共11页
初发的细菌房间(PGC ) ,功能的配偶子的先锋,有不同特征并且展出几唯一的分子的机制与体的房间相比维持 pluripotency 和 germness。他们表示细菌由 modulating 的房间特定的 RNA 有约束力的蛋白质(RBP ) 织物特定的 cis 规章、 trans... 初发的细菌房间(PGC ) ,功能的配偶子的先锋,有不同特征并且展出几唯一的分子的机制与体的房间相比维持 pluripotency 和 germness。他们表示细菌由 modulating 的房间特定的 RNA 有约束力的蛋白质(RBP ) 织物特定的 cis 规章、 trans 规章的元素。鸡 vasa 相当或相同事物(CVH ) 的基因结构上的研究,鸡 RNA 有约束力的蛋白质,在时间、空间的规定包含了不仅为理解调整细菌房间命运的分子的机制,而且为初发的细菌房间的实际应用程序因此是重要的。然而,很有限的研究在控制细菌的规章的元素上是可得到的在鸡肉的房间特定的表示。因此,我们调查了管理 CVH.ResultsWe 的 transcriptional 控制的复杂规章的机制构造绿荧光蛋白质(GFP ) 或包含的酶记者向量各种各样 CVH 的 5 个 flanking 区域基因。从在鸡 PGC 的 5 删除和碎裂的试金,我们识别了与最高的酶活动在 316 点找到到 +275 底对碎片的一个 CVH 倡导者。另外,我们第一次证实包含 intron 的 5 untranslated 区域(UTR ) 1 在鸡 PGC 为 CVH 基因的倡导者活动被要求。而且,使用抄写因素绑定预言, transcriptome 分析并且 调停siRNA 击倒,我们鉴别了一套抄写因素在结果表明的PGC特定的 CVH 基因 expression.ConclusionsThese 起一个作用包括 5 UTR 和 intron 在 5 flanking 区域本地化的那cis元素和抄写因素为在鸡 PGC 的 CVH 基因的 transcriptional 规定是重要的。最后,这个信息将在繁殖生物学的区域贡献研究研究,细菌构造为跟踪象理解为维持在 PGC 的 germness 的 transcriptional 规定一样的初发的细菌房间的房间特定的合成倡导者。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 启动子活性 转录因子 调控元件 鸡胚胎 控制 同源 RNA结合蛋白
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鹅原始生殖细胞体外分离与冷冻保存方法的比较研究 预览
15
作者 于建宁 闫乐艳 +4 位作者 陈哲 邵西兵 戴子淳 应诗家 施振旦 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期401-407,共7页
为了建立针对鹅原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的分离纯化与冷冻保存方法,对血液Ficoll密度梯度离心法、血液ACK裂解法、生殖腺胰酶-EDTA消化法与生殖腺消化结合体外短时间培养法4种PGCs分离方法以及STEM-CELLBANKER、CELL... 为了建立针对鹅原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)的分离纯化与冷冻保存方法,对血液Ficoll密度梯度离心法、血液ACK裂解法、生殖腺胰酶-EDTA消化法与生殖腺消化结合体外短时间培养法4种PGCs分离方法以及STEM-CELLBANKER、CELLBANKER 2与10%DMSO加90%血清等3种冻存液进行了比较研究。通过形态学观察、糖原染色与PGCs特异免疫荧光染色鉴定PGCs,同时利用台盼蓝染色检测PGCs活力等方法对其分离和保存效果进行评价。结果表明,从鹅胚血液与生殖腺中均已经成功分离到鹅PGCs;生殖腺消化结合体外短期培养法与传统的血液分离法相比,获得的鹅PGCs数量、纯度与活力最高,每枚胚胎获得的鹅PGCs数量达到115个、细胞纯度达80.8%、细胞活率达88.3%;而商业化的干细胞冷冻保护液STEM-CELLBANKER同一般的体细胞冻存液相比更适合鹅PGCs的冷冻保存,冷冻解冻后的细胞存活率达90%左右。试验可以得出结论:生殖腺消化结合体外短期培养法成功分离到数量与纯度都可观的鹅PGCs,STEM-CELLBANKER冻存液能够用于鹅PGCs的长期冷冻保存。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 生殖腺消化结合短期培养法 冷冻保存
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卵巢恶性生殖细胞肿瘤保留生育功能的治疗策略 预览
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作者 张英丽 朱笕青 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期805-807,共3页
卵巢恶性生殖细胞肿瘤(malignant ovarian germ cell tumors,MOGCTs)来源于胚胎性腺的原始生殖细胞,在亚洲及我国约占卵巢恶性肿瘤的12%~25%,多发于青少年女性和儿童。
关键词 卵巢恶性生殖细胞肿瘤 保留生育功能 治疗 原始生殖细胞 卵巢恶性肿瘤 青少年女性 cell 胚胎性
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蛋白质代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控 预览
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作者 李东 汤贝贝 +6 位作者 王颖洁 纪艳芹 王飞 路镇宇 王曼 张亚妮 李碧春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第24期4814-4823,共10页
【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制,为完善鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ESC、原始生殖细胞(primordial g... 【目的】探究蛋白质代谢在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用机制,为完善鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)体外向雄性生殖细胞诱导分化体系研究提供依据。【方法】采用流式分选的方法获取高纯度的ESC、原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)和精原干细胞(spermatogonia stem cell,SSCs),分别提取细胞的总RNA,采用RNA-Seq方法对3种细胞的转录本进行深度测序,然后进行WEGO(web gene ontology)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析,筛选出鸡雄性生殖细胞分化过程中参与蛋白质代谢的关键通路及其关键基因,RT-q PCR(Real time Quantitative PCR)检测部分关键差异基因的表达变化,并与RNA-Seq(RNA sequencing)结果进行比较分析,同时分别从体内和体外水平对关键基因NOS2进行抑制,观察各分组不同天数的细胞形态变化及检测NOS2和C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因表达变化情况。【结果】在雄性生殖细胞分化的整个阶段,有697个差异基因参与生物代谢,显著富集于精氨酸-脯氨酸代谢通路、酪氨酸代谢通路以及色氨酸代谢通路,在这3条通路上筛选出NOS2、FAH和IDO等关键性基因,这些基因的在ESCs向SSCs分化过程中表达变化趋势与其在RNA-Seq中的结果一致。体内抑制NOS2基因后,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因在空白组和对照组之间无显著性的差异,而在抑制剂组中,NOS2及C-kit、Cvh、Stra8、Dazl、integrinα6和integrinβ1等生殖标记基因的m RNA表达量均出现了降低;而体外抑制NOS2基因后,对照组中的ESCs在2、4、6、8和10d内细胞不断增殖,但是未出现类胚体;RA诱导组中,2d出现小的类胚体,4d类胚体增大,且数量增多,6d类胚体边缘开始出现破裂,8d类胚体解体,10d出现类精原样细胞;抑制剂组中,ESCs在2、4、6、8和10d内无类胚体出现,且相� 展开更多
关键词 RNA-Seq 鸡胚胎干细胞 原始生殖细胞 精原干细胞 雄性生殖细胞 一氧化氮合成酶2 抑制剂 分化
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卵巢早衰患者来源的诱导多能干细胞的建系、鉴定及诱导分化 预览 被引量:8
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作者 文艳飞 蔡柳洪 +2 位作者 何文 曾敏慧 蒋满波 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期140-145,共6页
目的:建立和鉴定卵巢早衰(又称原发性卵巢功能不全,primary ovarian insufficiency,POI)患者来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),研究其向原始生殖细胞分化的潜能。方法:将表达Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4... 目的:建立和鉴定卵巢早衰(又称原发性卵巢功能不全,primary ovarian insufficiency,POI)患者来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),研究其向原始生殖细胞分化的潜能。方法:将表达Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4和Lin28基因的p EB-C5和表达SV40 T抗原的p EB-Tg质粒转染POI患者的外周血单个核细胞,将其重编程为i PSCs并检测其干细胞多能性特性。添加转化生长因子β1(transfroming growth factor-β1,TGF-β1)和骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)后,应用real-time PCR和Western blot方法分别检测原始生殖细胞标志物的mRNA及蛋白表达水平。结果:通过碱性磷酸酶染色、细胞免疫荧光、拟胚体及畸胎瘤形成检测,证明了POI患者外周血来源的i PSCs可成功向3胚层细胞分化并保持多能性。添加TGF-β1和BMP4后,诱导组原始生殖细胞特异性标志物干细胞生长因子受体(stem cell growth factor receptor,c-Kit)、发育多能性相关蛋白3(developmental pluripotency-associated 3,STELLA/DPPA3)和DEAD盒多肽4(DEAD box polypeptide 4,VASA/DDX4)的mRNA水平明显升高(P〈0.05),VASA/DDX4蛋白表达水平亦明显增加(P〈0.05)。结论:POI患者外周血单个核细胞在体外可被成功诱导成无外源性基因整合的i PSCs,并且具有多能分化特性,添加TGF-β1和BMP4后可向原始生殖细胞分化。 展开更多
关键词 原发性卵巢功能不全 诱导多能干细胞 原始生殖细胞
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25-羟基胆甾醇对鸡原始生殖细胞增殖的影响
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作者 陈东阳 魏巍 +10 位作者 杨蒙蒙 陆振萍 陈美娟 张文馨 谢龙 杨小淦 许惠艳 卢晟盛 张明 卢克焕 陆阳清 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期316-320,共5页
本研究为了优化现有的鸡PGCs(原始生殖细胞)的培养系统,为今后研究生殖细胞发育与生产转基因鸡奠定良好基础。分别用含0μmol/L(对照组)、0.1μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L 25-羟基胆甾醇的培养液培养鸡PGCs,5 d后细胞计数检测... 本研究为了优化现有的鸡PGCs(原始生殖细胞)的培养系统,为今后研究生殖细胞发育与生产转基因鸡奠定良好基础。分别用含0μmol/L(对照组)、0.1μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L 25-羟基胆甾醇的培养液培养鸡PGCs,5 d后细胞计数检测其细胞增殖情况。与对照组(不添加25-羟基胆甾醇的鸡PGCs培养液)相比,0.1μmol/L处理组细胞数目没有显著差异,0.5μmol/L和1μmol/L处理组细胞数目均显著增加。对1.0μmol/L 25-羟基胆甾醇处理的鸡PGCs用RT-PCR、细胞免疫染色、细胞注射迁移的方法检测处理后的生物学特性,发现处理后的鸡PGCs仍然保持正常的生殖细胞生物学特性。本研究表明25-羟基胆甾醇能有效的促进鸡P GCs的增殖,且不改变鸡PGCs的生物学特性。 展开更多
关键词 原始生殖细胞 25-羟基胆甾醇 细胞增殖
胚胎期大鼠性腺生长与分化的研究 预览
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作者 许丽惠 黄景星 王全溪 《福建畜牧兽医》 2016年第6期17-20,共4页
本试验旨在研究胚胎期大鼠性腺生长与分化的情况。选取12.5-15.5 dpc SD大鼠胚胎为研究对象,运用PCR技术进行大鼠胚胎性别鉴定,采用H-E技术对大鼠性腺分化形态进行观察。结果表明:12.5 d的鼠胚肾管已经开始形成,生殖嵴已经建立,此时仍... 本试验旨在研究胚胎期大鼠性腺生长与分化的情况。选取12.5-15.5 dpc SD大鼠胚胎为研究对象,运用PCR技术进行大鼠胚胎性别鉴定,采用H-E技术对大鼠性腺分化形态进行观察。结果表明:12.5 d的鼠胚肾管已经开始形成,生殖嵴已经建立,此时仍无明显的性别分化形态;13.5 d的鼠胚开始出现性别分化的迹象,雄性的原始性索开始形成,雌性性腺分化比雄性稍晚,此期仍不易辨别出典型的卵巢特征结构;14.5 d的鼠胚性腺形态初步成型,此期性别明显分化,雄性的原始性索开始分化为实心原始生精小管,雌性胚胎中性腺分为两层,初步形成卵巢特征;15.5 d的鼠胚,雄性胚胎性腺中已经具有明显的曲精小管的雏形,雌性胚胎卵巢特征也开始明显。大鼠胚胎性腺从13.5 d胚龄时开始分化,15.5 d胚龄性腺特征明显。 展开更多
关键词 大鼠胚胎 原始生殖细胞 性别鉴定 性腺分化
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