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可诱导型PLK1shRNA的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立及PLK1敲低对细胞增殖的影响
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作者 薛慧 郭欣 +4 位作者 李娜 李志红 彭帆 肖方祥 袁成福 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期1400-1405,共6页
目的:建立稳定表达可诱导型polo样激酶1(polo-likekinase1,PLKl)小发夹RNA(smallhairpinRNA,shRNA)的乳腺癌MDA-MB-231细胞系并研究PLKl敲低对MDA-MB-231细胞增殖、细胞周期的影响并探讨其可能的机制。方法:根据siRNA的原理设计... 目的:建立稳定表达可诱导型polo样激酶1(polo-likekinase1,PLKl)小发夹RNA(smallhairpinRNA,shRNA)的乳腺癌MDA-MB-231细胞系并研究PLKl敲低对MDA-MB-231细胞增殖、细胞周期的影响并探讨其可能的机制。方法:根据siRNA的原理设计2对靶向PLKl的shRNA序列,构建慢病毒表达质粒(PLKlshRNA重组质粒);先用pLV-tTR/KRAB-Red空载体制备慢病毒并感染MDA-MB-231细胞;在此基础上再用PLKlshRNA重组质粒制备慢病毒并感染上述MDA-MB-231细胞;对上述2次慢病毒感染的MDA-MB-231细胞用强力霉素(doxycycline.DOX)处理96h后.用qRT-PCR及Westernblot检测PLKlmRNA及蛋白的表达;用MTI'法检测细胞增殖;用流式细胞术及碘化吡啶(PI)染色检测细胞周期。结果:成功构建靶向PLK1的shRNA慢病毒表达质粒,包装出慢病毒并感染MDA-MB-231细胞;成功建立稳定表达可诱导型PLK1shRNA的MDA-MB-231细胞系,通过DOX诱导,可明显抑制该细胞系中PLKl在mRNA及蛋白水平的表达(P〈0.01);PLK1敲低可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P〈0.05);流式细胞术检测发现PLK1敲低可阻滞MDA-MB-231细胞于G2/M期(P〈0.05)。结论:DOX诱导的PLK1敲低可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并阻滞细胞于G2/M期;经PLK1介导的肿瘤生物学行为变化,其机制可能涉及ERK1/2/Fra1/ZEB1信号通路。 展开更多
关键词 POLO样激酶1 诱导型shRNA 乳腺癌
稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系的建立与鉴定 预览 被引量:2
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作者 董梦梦 孙倩玲 +4 位作者 张灵芝 黄梦庭 卢红艳 张佳乐 袁成福 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第3期301-306,共6页
目的 建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系并研究CKS2敲除对卵巢癌OVCAR3细胞增殖的影响.方法 根据siRNA的原理设计2对靶向CKS2的shRNA序列,构建慢病毒表达质粒(pLVTHM/CKS2 shRNA重组质粒);先用pLV-tTR/KRAB-Red空... 目的 建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的卵巢癌OVCAR3细胞系并研究CKS2敲除对卵巢癌OVCAR3细胞增殖的影响.方法 根据siRNA的原理设计2对靶向CKS2的shRNA序列,构建慢病毒表达质粒(pLVTHM/CKS2 shRNA重组质粒);先用pLV-tTR/KRAB-Red空载体制备慢病毒并感染OVCAR3细胞;在此基础上再用pLVTHM/CKS2 shRNA重组质粒制备慢病毒并感染上述OVCAR3细胞;对上述两次慢病毒感染的OVCAR3细胞,用强力霉素(DOX)处理72 h后,用real time PCR及Western blot检测CKS2 mRNA及蛋白的表达;用MTT法检测细胞增殖.结果 构建靶向CKS2的shRNA慢病毒表达质粒,包装出慢病毒并感染OVCAR3细胞;建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的OVCAR3细胞系,通过DOX诱导,可明显抑制该细胞系中CKS2在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.05,P<0.01);CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞的增殖.结论 建立稳定表达可诱导型CKS2 shRNA的OVCAR3细胞系,DOX诱导的CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞增殖. 展开更多
关键词 CKS2 诱导型shRNA 卵巢癌
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