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不同启动子驱动下GL6基因表达对水稻叶表皮毛发育的影响 预览
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作者 朱永生 肖开转 +8 位作者 王福祥 连玲 何炜 许惠滨 魏毅东 陈丽萍 蒋家焕 谢华安 张建福 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期139-145,共7页
【目的】研究水稻茸毛发育机制及相关基因的功能与调控模式,为深入研究相关基因功能及其在生产上的应用提供理论支撑。【方法】从不同水稻品种中克隆叶片表皮毛发育相关基因GL6的启动子序列,并将具有显著表皮毛特征的突变体品种75-1-127... 【目的】研究水稻茸毛发育机制及相关基因的功能与调控模式,为深入研究相关基因功能及其在生产上的应用提供理论支撑。【方法】从不同水稻品种中克隆叶片表皮毛发育相关基因GL6的启动子序列,并将具有显著表皮毛特征的突变体品种75-1-127的GL6基因启动子与叶表无显著表皮毛特征的野生型品种相应基因的启动子序列进行比对,同时克隆突变体品种75-1-127中GL6基因的CDS序列,并分别构建以玉米泛素蛋白Ubiquitin和花椰菜花叶病毒CaMV35S为启动子驱动的过表达载体,以农杆菌介导的方法转化野生型粳稻品种Kitaake。【结果】不同品种中克隆的启动子序列区存在显著的序列差异,以玉米泛素蛋白Ubiquitin启动子驱动的过表达载体获得的转基因水稻出现了显著的表皮毛特征,以花椰菜花叶病毒CaMV35S为启动子驱动的过表达载体的转基因水稻则未出现典型的表皮毛特征。【结论】目标基因GL6的表达调控受启动子的影响,突变体品种75-1-127的叶表皮毛发育特征是因启动子区序列差异所致。 展开更多
关键词 水稻 启动子 基因表达 表皮毛发育
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ALOX5基因启动子SP-1结合位点多态性与急性髓系白血病易感性的关系 预览
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作者 张娟娟 梅芬 +5 位作者 李瑞玮 左荣霞 郑永钦 沈涛 杨同华 撒亚莲 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期670-673,678共5页
目的探讨花生四烯5-脂氧合酶基因(arachidonate 5-lipoxygenase gene, ALOX5)基因启动子SP-1结合位点的多态性与成人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)的相关性。方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析236例成... 目的探讨花生四烯5-脂氧合酶基因(arachidonate 5-lipoxygenase gene, ALOX5)基因启动子SP-1结合位点的多态性与成人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)的相关性。方法 采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析236例成人AML(实验组)和179例健康体检者(对照组)中ALOX5基因启动子SP-1结合位点的多态性,经PCR产物直接测序法进行验证,利用DNAStar软件对测序结果进行分析。结果 检测到ALOX5基因启动子SP-1结合位点有6种基因型,包括4/4、4/5、4/6、5/5、5/6和6/6。在实验组和对照组中,基因型4/4的分布频率为20.30%和10.10%( OR =1.976,95% CI :1.050~3.719,χ 2=4.539, P <0.05);基因型4/6的分布频率为10.60%和26.80%( OR =0.386,95% CI :0.215~0.692,χ 2=10.513, P <0.05);等位基因6的分布频率为26.90%和30.20%( OR =0.736,95% CI :0.528~1.025,χ 2=3.291, P <0.05);SP-1位点的其余基因型、等位基因在实验组和对照组中分布频率差异无统计学意义( P >0.05),其可能不是成人AML发病风险的预警指标。结论 ALOX5基因启动子区SP-1结合位点的基因型4/6,等位基因6可能与AML发病风险降低有关,而携带基因型4/4人群可能易患AML。 展开更多
关键词 髓系白血病 ALOX5基因 启动子 单核苷酸多态性 易感性
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青杄PwPEBP基因及其启动子序列的克隆与表达分析
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作者 李兴芬 苗雅慧 +2 位作者 孙永江 张孟娟 张凌云 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期8-20,共13页
【目的】通过研究青杄中的PwPEBP基因及其启动子的表达特性及生物学功能,探究PEBP基因在植物生长发育过程中响应逆境胁迫的功能及作用机制。【方法】本研究从青杄转录组测序中获得PwPEBP的c DNA序列,利用TMHMM、GOR4等在线软件对PwPEBP... 【目的】通过研究青杄中的PwPEBP基因及其启动子的表达特性及生物学功能,探究PEBP基因在植物生长发育过程中响应逆境胁迫的功能及作用机制。【方法】本研究从青杄转录组测序中获得PwPEBP的c DNA序列,利用TMHMM、GOR4等在线软件对PwPEBP蛋白进行生物信息学分析,以此为基础通过PCR技术克隆得到PwPEBP开放阅读框(ORF)序列;同时对其在不同组织与不同逆境及激素处理中的表达水平进行了RT-qPCR技术分析;采用染色体步移法克隆PwPEBP的启动子序列,并利用在线软件BDGP和PlantCARE对PwPEBP启动子序列进行基础启动子区域、转录起始位点和顺式作用元件的预测;最后通过农杆菌瞬时转化烟草法验证PwPEBP启动子的功能。【结果】PwPEBP cDNA长度为1 408 bp,开放阅读框共585 bp,编码194个氨基酸。PwPEBP蛋白分子式为C966H1 484N250O299S6,无信号肽和跨膜结构域,为亲水蛋白,含有25个磷酸化位点;进化树分析显示,PwPEBP蛋白与北美云杉的PEBP单独聚成一簇,属于新的PEBP蛋白。组织特异性分析显示,PwPEBP在成熟叶中表达量最高,嫩叶中表达量最低;PwPEBP在各激素及逆境诱导下均有表达,但对盐处理无响应。克隆的PwPEBP启动子序列长度为903 bp,其具有响应GA、ABA、SA、MeJA的顺式作用元件。GUS染色及Luc定量实验显示,PwPEBP启动子均能响应GA、ABA、MeJA和SA外源激素及干旱、高温、低温等逆境胁迫。【结论】青杄中PwPEBP基因广泛响应干旱、低温、高温等非生物胁迫,其中对干旱胁迫最为敏感,同时还参与了ABA、GA、MeJA和SA激素的信号通路。 展开更多
关键词 青杄 PEBP 启动子 基因表达 胁迫响应
牛Ankrd2基因启动子遗传多态性及启动效率分析
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作者 冯雨阳 靳子康 +4 位作者 王梦岩 白紫彤 杨润军 房希碧 赵志辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期561-567,共7页
采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术,检测462头中国西门塔尔牛Ankrd2基因启动子区域的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点,分析了SNP位点与牛肉质和胴体性状的关联性,利用生物信息学网站和软件... 采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)技术,检测462头中国西门塔尔牛Ankrd2基因启动子区域的单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点,分析了SNP位点与牛肉质和胴体性状的关联性,利用生物信息学网站和软件对启动子序列进行预测分析;另一方面,采用点突变构建含有SNP位点不同基因型的双荧光素酶报告基因载体,分别瞬时转染293T细胞和牛胎儿成纤维细胞,测定荧光素酶的相对活性并进行统计学分析。结果显示:牛Ankrd2基因启动子区域(-2101~+436 bp)中存在1个SNP位点:g.-171G>T,该位点在检测的牛群体中仅存在2种基因型:GG和GT,其中G为优势基因,且该位点对牛肺和气管重影响达到显著水平(P<0.05),当G突变为T时,启动子序列减少2个ZF5转录因子结合位点,增加了1个FACB转录因子结合位点,pGL4-Ankrd2-TT启动子启动效率极显著低于野生型载体pGL4-Ankrd2-GG(P<0.01)。结果表明,在中国西门塔尔牛群体Ankrd2基因启动子区存在g.-171G>T,位点与牛胴体性状存在相关性,且该位点可能通过改变转录因子结合位点,从而影响基因的启动子转录活性。 展开更多
关键词 Ankrd2基因 单核苷酸多态性(SNPs) 启动子 双荧光素酶报告基因
人cGAS基因启动子的克隆鉴定及功能初探
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作者 陈海燕 徐妍妍 +1 位作者 周国平 徐华国 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期856-861,共6页
目的:构建人环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS)基因启动子,确认其活性,进而对转录调控机制进行初步探究。方法:采用PCR方法扩增人cGAS基因5′上游1 254 bp(-1 178~+76 bp)... 目的:构建人环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,cGAS)基因启动子,确认其活性,进而对转录调控机制进行初步探究。方法:采用PCR方法扩增人cGAS基因5′上游1 254 bp(-1 178~+76 bp)的片段,酶切后连接到pGL3-basic质粒,以该质粒为模板合成不同长度的启动子质粒。通过双荧光素酶报告基因实验验证不同质粒在Hela细胞中的活性,利用生物信息学方法预测启动子区存在的转录因子结合位点。通过点突变实验验证潜在的转录因子结合位点。结果:人cGAS启动子质粒初步构建成功。转染后,cGAS启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加(P<0.05)。人cGAS近端启动子区域(-414~+76 bp)经生物信息学软件分析可能含有Sp1、CREB、USF1、RAP1、C-JUN、OCT-1等转录因子的结合位点。点突变实验证实Sp1、CREB正向调控该启动子区域。结论:人cGAS近端启动子区域(-414~+76bp)存在较强的启动子活性,该区域含有多个潜在的转录因子结合位点。转录因子Sp1、CREB调控人cGAS启动子区。 展开更多
关键词 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶 启动子 转录调控
人FAT1基因启动子的克隆鉴定及其功能浅析
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作者 乔春敏 乔笑芹 周国平 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期862-866,共5页
目的:克隆人脂肪非典型钙黏蛋白1(FAT atypical cadherin 1,FAT1)基因启动子,找到核心启动子区域并对其转录调控机制进行初步分析。方法:通过PCR方法获得人FAT1基因5′上游1 163 bp(-1 029~+134 bp)的片段,亚克隆至pGL3-basic载体;通过... 目的:克隆人脂肪非典型钙黏蛋白1(FAT atypical cadherin 1,FAT1)基因启动子,找到核心启动子区域并对其转录调控机制进行初步分析。方法:通过PCR方法获得人FAT1基因5′上游1 163 bp(-1 029~+134 bp)的片段,亚克隆至pGL3-basic载体;通过步移缺失构建不同缺失片段的重组质粒。双荧光素酶报告活性分析检测各重组质粒在A549细胞和HEK293T细胞中的活性,找到核心启动子区域。利用生物信息学方法预测核心区域的转录因子结合位点。结果:经测序、酶切鉴定,成功构建了人FAT1启动子荧光素酶活性报告基因重组质粒。与pGL3-basic质粒相比,人FAT1启动子重组质粒的相对荧光素酶活性增加(P <0.05)。通过生物信息学软件预测人FAT1启动子区域(-233~-110 bp)可能含有TFAP2C、KLF5等转录因子结合位点。结论:成功构建人FAT1启动子不同缺失片段的荧光素酶报告基因重组质粒。通过荧光素酶活性比较,推测人FAT1的核心启动子区域位于-233~+134 bp区域,其中可能含有若干转录因子结合位点。 展开更多
关键词 脂肪非典型钙黏蛋白1 启动子 转录调控
紫化茶树UDP-糖基转移酶启动子的克隆及其生物信息学分析 预览
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作者 唐秀华 陈志丹 +4 位作者 陈祖枝 林子琪 曹士先 孙威江 谢凤 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第3期303-308,共6页
以紫化茶树武夷奇种C18的叶片为材料,采用染色体步移技术获得该材料的UDP糖基转移酶(UDPG)基因5′端上游启动子序列大小为902 bp,利用软件进行生物信息学分析.结果表明,该调控序列含有启动子核心元件TATA box、CAAT mo tif以及多个光响... 以紫化茶树武夷奇种C18的叶片为材料,采用染色体步移技术获得该材料的UDP糖基转移酶(UDPG)基因5′端上游启动子序列大小为902 bp,利用软件进行生物信息学分析.结果表明,该调控序列含有启动子核心元件TATA box、CAAT mo tif以及多个光响应元件(GT1 motif、GATA motif等)、胚乳特异性表达元件(GCN4 motif、Skn 1 motif)、水杨酸响应元件(TCA element)等特殊顺式作用元件. 展开更多
关键词 紫化茶树 UDP糖基转移酶基因 启动子 生物信息学分析
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茉莉花MVD基因及其启动子的克隆与表达 预览
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作者 陈笛 王鹏杰 +4 位作者 郑玉成 林浥 郑知临 陈桂信 叶乃兴 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第3期309-315,共7页
根据茉莉花转录组数据,采用RT PCR技术,克隆了茉莉花甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶(MVD)基因,命名为JsMVD(Gen Bank登录号为MH311041.1).采用染色体步移技术分离JsMVD基因5′端上游调控序列,通过实时荧光定量PCR技术检测JsMVD基因在茉莉花植株... 根据茉莉花转录组数据,采用RT PCR技术,克隆了茉莉花甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶(MVD)基因,命名为JsMVD(Gen Bank登录号为MH311041.1).采用染色体步移技术分离JsMVD基因5′端上游调控序列,通过实时荧光定量PCR技术检测JsMVD基因在茉莉花植株不同组织及不同激素处理下的表达水平.测序结果表明,JsMVD基因全长cDNA序列的长度为1500bp,包含长度为1269bp的开放阅读框(ORF),共编码422个氨基酸,亚细胞定位预测该蛋白可能位于细胞质上.JsMVD蛋白含有GHMP激酶N端和C端保守结构域,具有多个保守氨基酸残基及ATP结合位点,与野生油橄榄的相似性最高,相似系数达到88%,且进化树显示两者的亲缘关系最近.JsMVD基因5′端启动子序列长度为893 bp,该调控序列包含多种植物激素响应元件和光响应元件.实时荧光定量PCR技术检测结果表明,JsMVD基因在成熟花中的表达量最高,从高到低依次为成熟花、花蕾、茎、叶、根,且受GA、IAA和ABA不同程度的诱导. 展开更多
关键词 茉莉花 甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶(MVD) 启动子 组织特异性表达
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甜樱桃砧木PcMPK3基因启动子的克隆及对病原菌感染的响应 预览
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作者 赵烨 国静 +7 位作者 王甲威 徐丽 谭钺 陈新 魏海蓉 朱东姿 刘庆忠 宗晓娟 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期689-696,共8页
【目的】探明PcMPK3基因的表达调控规律。【方法】利用染色体步移技术从甜樱桃矮化砧木Gisela 6中克隆PcMPK3基因的启动子序列PcMPK3pro。利用Neural Network Promotor Prediction、softberry、PLACE和PlantCARE网站在线预测PcMPK3基因... 【目的】探明PcMPK3基因的表达调控规律。【方法】利用染色体步移技术从甜樱桃矮化砧木Gisela 6中克隆PcMPK3基因的启动子序列PcMPK3pro。利用Neural Network Promotor Prediction、softberry、PLACE和PlantCARE网站在线预测PcMPK3基因的基础启动子、转录起始位点和顺式作用元件。将PcMPK3pro定向替换植物表达载体pBI121-SN1的CaMV35S组成型启动子,构建重组表达载体pBI-PcMPK3pro:GUS,瞬时转化烟草叶片。【结果】结果表明,PcMPK3pro含有启动子核心元件TATA-box和CAAT-box等多种响应胁迫的顺式作用元件。受病原菌丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000,Pst DC3000)侵染,PcMPK3pro能驱动GUS报告基因表达且GUS酶活性显著提高。【结论】推测PcMPK3基因参与植物响应病原菌感染的胁迫过程。 展开更多
关键词 甜樱桃 砧木 PcMPK3 启动子 GUS基因
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枇杷果实EjNADP-ME2基因及启动子克隆与表达分析 预览
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作者 杨俊 郑雪莲 +4 位作者 高欢欢 寇燕 陈旭 郭傲 郑国华 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期490-498,共9页
以‘解放钟’和‘白梨’果实为材料,研究基于转录组筛选出的表达量较高且在2个品种中有差异的EjNADP-ME2(Unigene0001461)基因,采用RACE和RT-PCR技术成功克隆EjNADP-ME2的cDNA全长。系统进化树分析表明,EjNADP-ME2与苹果的NADP-ME基因... 以‘解放钟’和‘白梨’果实为材料,研究基于转录组筛选出的表达量较高且在2个品种中有差异的EjNADP-ME2(Unigene0001461)基因,采用RACE和RT-PCR技术成功克隆EjNADP-ME2的cDNA全长。系统进化树分析表明,EjNADP-ME2与苹果的NADP-ME基因关系最近。生物信息学预测结果显示,EjNADP-ME2蛋白应该位于细胞质中。用染色体步移法成功克隆了EjNADP-ME2的启动子序列,序列预测该基因启动子区域含有水杨酸、茉莉酸、脱落酸响应的顺式作用元件,此外还有厌氧诱导元件、MYB和MYC参与黄化和干旱诱导的结合位点MBS。荧光定量PCR分析表明,EjNADP-ME2基因的表达量变化趋势在2个品种中大致相同,均呈现出先降低后升高又降低的趋势,且该基因在低酸品种的表达量稍低于高酸品种。相关性分析结果显示,低酸品种EjNADP-ME2基因转录水平与苹果酸含量呈显著负相关。本研究的结果为进一步探究EjNADP-ME2基因在苹果酸代谢途径中的功能奠定坚实基础。 展开更多
关键词 枇杷 果实 细胞质型苹果酸酶 基因表达分析 启动子
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miRNA-32启动子区域相互作用蛋白的分析 预览
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作者 吴巍芸 《重庆医学》 CAS 2019年第10期1657-1660,共4页
目的检测及分析与微RNA-32(miRNA-32)基因上游启动子区域相互作用的蛋白。方法采用DNA pulldown技术联合质谱鉴定的方法检测miRNA-32启动子区域相互作用的蛋白,并用生物信息学方法对这些蛋白进行GO富集及KEGG通路分析。结果在大肠癌HCT-... 目的检测及分析与微RNA-32(miRNA-32)基因上游启动子区域相互作用的蛋白。方法采用DNA pulldown技术联合质谱鉴定的方法检测miRNA-32启动子区域相互作用的蛋白,并用生物信息学方法对这些蛋白进行GO富集及KEGG通路分析。结果在大肠癌HCT-116细胞中总共鉴定到191个与miRNA-32启动子区域特异性结合的蛋白。GO功能富集分析显示,这些蛋白涉及多种生物学功能,包括参与核酸代谢、基因转录、细胞周期、细胞生长和再生等过程。KEGG通路分析表明这些蛋白参与多条信号通路,包括间隙连接、细胞周期信号通路、MAPK信号通路等。结论与miRNA-32启动子区域有相互作用的蛋白具有多种生物学功能及参与多条信号通路。 展开更多
关键词 质谱分析法 启动子 DNA pulldown GO富集 KEGG信号通路
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苹果MdLsi1基因的克隆及生物信息学分析
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作者 刘海莉 杨蕾蕾 +1 位作者 辛苗苗 刘晶莹 《北方园艺》 CAS 北大核心 2019年第9期27-33,共7页
以"秦冠"苹果叶片为试材,采用RT-PCR技术,克隆了苹果硅转运蛋白基因MdLsi1,并应用生物信息学分析其特征,以期为进一步深入研究硅促进苹果植株生长的分子机制提供参考依据。结果表明:MdLsi1基因全长873 bp,编码290个氨基酸,相... 以"秦冠"苹果叶片为试材,采用RT-PCR技术,克隆了苹果硅转运蛋白基因MdLsi1,并应用生物信息学分析其特征,以期为进一步深入研究硅促进苹果植株生长的分子机制提供参考依据。结果表明:MdLsi1基因全长873 bp,编码290个氨基酸,相对分子量为30.456 kDa。MdLsi1蛋白包含已知硅转运蛋白所具有的特征结构,6个跨膜结构域,2个天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸序列(Asn-Pro-Ala,NPA模体),1个由甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸-精氨酸(GRGS)组成的ar/R选择性过滤器,并且2个NPA模体之间间隔108个氨基酸。MdLsi1基因起始编码位点前1 500 bp序列中除了包含有基本的基因启动子元件外,还含有与多种逆境胁迫相关的顺式调控元件。以上结果提示MdLsi1在苹果植株硅的积累及植株抵御逆境胁迫中发挥重要功能。 展开更多
关键词 苹果 硅转运蛋白基因 启动子 生物信息学
骨保护素启动子区域T149C和T 950 C基因多态性及血清骨保护素水平与冠心病的关系
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作者 赵福梅 赵辉 +8 位作者 张蕊 任珉 刘超 刘珊 马静 宋衍秋 刘婷 张旭 丛洪良 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期319-324,共6页
目的探讨骨保护素(OPG)启动子区域T149C、T950C基因多态性及血清OPG、可溶性核转录因子-κB受体活化因子配体(sRANKL)含量与冠心病(CHD)发病风险的关系。方法选择2017年4月至2018年12月天津市胸科医院心内科收治的天津地区疑似CHD入院... 目的探讨骨保护素(OPG)启动子区域T149C、T950C基因多态性及血清OPG、可溶性核转录因子-κB受体活化因子配体(sRANKL)含量与冠心病(CHD)发病风险的关系。方法选择2017年4月至2018年12月天津市胸科医院心内科收治的天津地区疑似CHD入院并接受冠状动脉造影(CAG)的528例患者,根据CAG检查结果将患者分为CHD组(302例)和非CHD组(226例)。记录所有受试对象的性别、年龄、高血压史、CHD家族史、糖尿病、血脂指标等临床资料;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清OPG、sRANKL水平;应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测T149C、T950C基因多态性,等位基因进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验;采用二分类多因素非条件Logistic回归法分析T149C、T950C基因多态性及血清OPG、sRANKL水平与CHD的关系。结果所有患者均纳入最终分析。CHD组血清OPG水平明显高于非CHD组(μg/L:1.76±0.49比1.47±0.29,P<0.01),血清sRANKL水平明显低于非CHD组(ng/L:342.14±121.38比376.63±108.66,P<0.05)。Logistic回归分析显示,在调整了年龄、性别、血脂指标、糖尿病等因素后,血清OPG升高为发生CHD的独立危险因素〔优势比(OR)=1.995,95%可信区间(95%CI)=1.935~2.066,P=0.012〕。PCR-RFLP检测结果显示,OPG基因启动子区域T149C、T950C均有TT、TC、CC 3种基因型。经Hardy-Weinberg平衡检验,OPG T149C及OPG T950C基因多态性符合Hardy-Weinberg定律,达到遗传平衡,具有群体代表性。非CHD组T149C基因型TT、TC、CC及等位基因T、C的频率分别为53.5%、42.9%、3.6%、75.0%和25.0%,CHD组分别为43.1%、50.3%、6.6%、68.2%和31.8%,两组间基因型和等位基因频率比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析显示,T149C位点的TC+CC基因型发生CHD的风险是TT基因型的1.86倍(OR=1.86,95%CI=1.24~2.78,P=0.003),提示C等位基因可能为发生CHD的易感基因。非CHD组T950C基因型TT、TC、CC及等位基因T、C的� 展开更多
关键词 骨保护素 基因多态性 启动子 可溶性核转录因-κB受体活化因配体 冠心病
黄颡鱼bmp2a与bmp4基因启动子的克隆及分析 预览
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作者 邰志鹏 徐异桓 +1 位作者 张电光 谭肖英 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期91-96,共6页
为研究黄颡鱼bmp2a与bmp4基因的功能及其相关转录因子的调控网络,采用RLM-5′RACE方法确定bmp2a与bmp4基因的转录起始位点,通过hiTAIL-PCR方法克隆bmp2a与bmp4基因启动子序列并运用生物信息学方法预测启动子序列上的关键转录因子结合位... 为研究黄颡鱼bmp2a与bmp4基因的功能及其相关转录因子的调控网络,采用RLM-5′RACE方法确定bmp2a与bmp4基因的转录起始位点,通过hiTAIL-PCR方法克隆bmp2a与bmp4基因启动子序列并运用生物信息学方法预测启动子序列上的关键转录因子结合位点。结果显示,bmp2a与bmp4基因的转录起始位点分别位于bmp2a与bmp4基因编码区上游的391 bp与351 bp处。克隆bmp2a与bmp4的1 830 bp、1 962 bp启动子序列,在启动子序列的基础上预测出AP1、SP1、E-box、GATA1、CREB、PPARγ、SOX5、SOX6和SOX9等转录因子的结合位点,提示这些转录因子对bmp2a与bmp4基因的转录调控发挥潜在的重要作用。 展开更多
关键词 黄颡鱼 骨形态形成蛋白 启动子 转录因
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枯草芽孢杆菌麦芽糖诱导型启动子Pglv-M1的改造 预览
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作者 程媛 汪桂萍 +2 位作者 孙畅 米慧芝 韦宇拓 《广西科学》 CAS 2019年第2期228-232,共5页
通过定点突变对麦芽糖诱导型启动子Pglv-M1进行改造,提高启动子启动能力。分析Pglv-M1的Sextama-35区与Pri-bmow-10区,通过对这些区域模拟随机突变,软件打分后获得最高分的新片段。将新启动子与载体pHCMC04-sva 连接,并在枯草芽孢杆菌 B... 通过定点突变对麦芽糖诱导型启动子Pglv-M1进行改造,提高启动子启动能力。分析Pglv-M1的Sextama-35区与Pri-bmow-10区,通过对这些区域模拟随机突变,软件打分后获得最高分的新片段。将新启动子与载体pHCMC04-sva 连接,并在枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 1A857中诱导表达,每12 h取粗酶液进行酶活测定。研究结果表明:除突变启动子Pglv-35以外,其余突变体启动效果均有所下降,有突变体构成的表达载体Pglv-35-pHCMC04-sva 诱导表达后,得到的单位粗酶活力最高点出现在36 h处,较突变前提高1.31倍。Pglv-M1作为诱导型启动子 Pglv 的改造产物,其各个区域的相互影响较为紧密。通过对启动子关键区域单独或同时突变,仅获得一组启动能力有所提高的启动子Pglv-35,这为今后针对启动子的思考、研究方向提供参考。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 Pglv 启动子 改造
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茶树CCoAOMT基因克隆及启动子的结构分析
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作者 林海燕 罗勇 +5 位作者 陈丝 禹双双 曾泽媛 刘仲华 王坤波 黄建安 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1804-1813,共10页
茶树咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT)是甲基化EGCG生物合成的一种重要酶,为探明CCoAOMT基因的表达调控规律,进一步解析甲基化EGCG生物合成的调控机制。本研究采用同源克隆法获得了茶树CCoAOMT的cDNA全长序列,采用染色体步移技术(Geno... 茶树咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶(CCoAOMT)是甲基化EGCG生物合成的一种重要酶,为探明CCoAOMT基因的表达调控规律,进一步解析甲基化EGCG生物合成的调控机制。本研究采用同源克隆法获得了茶树CCoAOMT的cDNA全长序列,采用染色体步移技术(Genome walking)获得了该基因的启动子序列,并对其序列进行了生物信息学分析。结果表明,CCo AOMT全长cDNA为1 000 bp,其中开放阅读框长735 bp,编码245个氨基酸,含有caffeoyl-CoA O-methyltransferase和SAM功能结构域;进一步分离得到CCoAOMT基因上游调控序列1 624 bp,发现其含启动子核心元件TATA-box、CAAT-box及5’UTR Py-rich stretch (高水平转录顺式作用元件)、MYB (干旱诱导时的MYB结合位点)、G-box、GAG-motif、GATA-motif、GT1-motif、Sp1 (光响应元件)、CGTCA-motif、TGACG-motif (茉莉酸甲酯响应元件)等重要顺式作用元件。由结果推测,CCoAOMT基因在转录水平受各类转录因子的调控,该结论为进一步研究CCoAOMT基因的转录调控机制提供了理论指导。 展开更多
关键词 茶树 CCOAOMT 基因克隆 启动子
mCherry红色荧光标记乳酸菌的融合表达系统构建及应用
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作者 陈英 王培娟 +2 位作者 张文君 杨丘旭 杨瑶 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期492-504,共13页
为开发新型荧光蛋白标记乳酸菌以填补国内研究空白,利用pSIP载体,构建了以红色荧光蛋白mCherry为标记,并以乳酸菌胆盐水解酶基因bsh为报告基因的乳酸菌融合表达系统。在4种不同启动子(PsppA、PldhL、P32和PslpA)调节下,相继实现了融合... 为开发新型荧光蛋白标记乳酸菌以填补国内研究空白,利用pSIP载体,构建了以红色荧光蛋白mCherry为标记,并以乳酸菌胆盐水解酶基因bsh为报告基因的乳酸菌融合表达系统。在4种不同启动子(PsppA、PldhL、P32和PslpA)调节下,相继实现了融合基因的诱导型和组成型表达,表达的融合重组蛋白mCherry-BSH同时检测出红色荧光活性和胆盐水解酶BSH活性。mCherry红色荧光标记的乳酸菌融合表达系统的成功构建不仅为研究乳酸菌在生物体内的分布、定植及存活情况从而揭示其益生功能的作用机理提供有利条件,也为更多活性蛋白在乳酸菌宿主中的表达、细胞定位、功能鉴定的研究奠定基础。 展开更多
关键词 mCherry红色荧光标记 pSIP载体 启动子 植物乳杆菌 融合表达 胆盐水解酶
调控民猪ZBED6基因转录元件的筛选与分析 预览
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作者 张冬杰 刘洋 +2 位作者 汪亮 李忠秋 刘娣 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第7期76-81,共6页
ZBED6是锌指蛋白家族的一员,在胎盘哺乳动物中极其保守,可通过对IGF2的调控参与骨骼肌生长。为进一步探究ZBED6基因自身的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过常规PCR扩增ZBED6基因启动子区系列截短片段,构建克隆质粒,通过... ZBED6是锌指蛋白家族的一员,在胎盘哺乳动物中极其保守,可通过对IGF2的调控参与骨骼肌生长。为进一步探究ZBED6基因自身的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过常规PCR扩增ZBED6基因启动子区系列截短片段,构建克隆质粒,通过双酶切和连接反应定向连入pGL3-basic载体,利用PK15细胞和双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;利用在线软件预测启动子区的转录因子结合位点,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点,构建突变载体并在PK15细胞中检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明:ZBED6基因启动子区-2053~-1777 bp存在多个转录因子结合位点,尤其是-1808~-1777 bp,该片段缺失造成启动子活性下降(P<0.01);利用在线软件在该区间预测到3个转录因子HINFP、Adf-1和CREB3,经实验验证后发现这3个转录因子均可调控ZBED6基因的转录,其中Adf-1效果最为明显。据此推测,民猪ZBED6基因的转录调控机制较为复杂,其启动子区存在HINFP、Adf-1和CREB3等多个调控元件的结合位点。 展开更多
关键词 ZBED6基因 启动子 荧光素酶活性 重叠PCR 民猪
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人WRAP53基因启动子区的生物信息学分析 预览
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作者 杨潮 曾旭芳 +3 位作者 张小艳 戴京 张欣宇 陈慧 《赣南师范大学学报》 2019年第3期73-77,共5页
人WRAP53基因隶属于WD重复蛋白家族,被发现在端粒酶的组装、卡哈尔体的形成和DNA损伤的修复等过程中发挥着重要作用,但WRAP53基因表达调控的分子机制尚不明确.利用生物信息学软件对人WRAP53基因近端启动子-2 000 bp~-1 bp区域的结构特... 人WRAP53基因隶属于WD重复蛋白家族,被发现在端粒酶的组装、卡哈尔体的形成和DNA损伤的修复等过程中发挥着重要作用,但WRAP53基因表达调控的分子机制尚不明确.利用生物信息学软件对人WRAP53基因近端启动子-2 000 bp~-1 bp区域的结构特征、转录因子结合位点和CpG岛进行预测分析.Promotor 2.0和NNPP均预测出人WRAP53β基因有2个启动子;JASPAR和AliBaba 2.1发现有众多转录因子潜在结合位点存在该序列上;CpG Plot、CpG Finder和MethPrimer软件均预测出人WRAP53基因启动子-2 000 bp~-1 bp区域存在1个CpG岛.对人WRAP53基因启动子区开展的生物信息学分析,有助于了解该基因启动子区的结构和功能,为后续开展人WRAP53基因表达调控机制研究奠定了基础. 展开更多
关键词 WRAP53 启动子 生物信息学
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NR6A1在HepG2细胞中抑制HBV转录与复制的初步研究
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作者 魏强 魏霞飞 +3 位作者 甘春杨 张文露 黄爱龙 胡接力 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期289-295,共7页
目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海... 目的:筛选核受体家族中对乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)增强子或核心启动子转录活性有影响的基因,初步研究生殖细胞核因子(germ cell nuclear factor,NR6A1)对HBV转录与复制的调控作用。方法:克隆带有核受体家族基因的表达质粒,与海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc共转染,转染后检测荧光素酶活性,筛选对增强子或核心启动子转录活性有影响的核受体基因。然后在Hep G2细胞中共转染HBV1,3倍体质粒与NR6A1表达质粒;通过Southern blot检测细胞内复制的HBV DNA;Northern blot检测HBV RNA的转录情况。结果:筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基因NR6A1,其作用与对照组(空载和pcore-Rluc共转染)相比,Rluc活性下降约80%,对照组为1,000±0.319,NR6A1组为0.198±0.009(P=0.000)。NR6A1过表达时,BCP(核心启动子,PCH9^-1744-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.504±0.023)较对照组(空载和PCH9^-1744-Rluc共转染,1.000±0.099)下降约50%(t=6.534,P=0.0226),BCP(核心启动子)+EnhⅡ(PCH9^-1636-Rluc)实验组荧光素酶活性相对值(0.089±0.002)比对照组(空载和PCH9^-1636-Rluc共转染,1.000±0.042)下降约92%(t=31.59,P=0.001)。NR6A1N(NR6A1DBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.000±0.170)(P>0.05)。NR6A1C(NR6A1LBD+Hinge)荧光素酶活性相对值相对于阳性对照组(NR6A1和pcore-Rluc共转染,1.150±0.141)无统计学差异,其荧光素酶活性相对值为(1.160±0.078)(P>0.05)。结论:过表达NR6A1通过抑制核心启动子和增强子II的活性能够显著抑制乙肝病毒的复制。 展开更多
关键词 乙肝病毒 核受体 生殖细胞核因(NR6A1) 启动子 增强
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