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调控磷酸化腺苷活化蛋白激酶沉默调节蛋白信号通路防治阿尔茨海默病的研究进展 认领
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作者 黄洋 姜希娟 +4 位作者 孙英新 甘家丽 黄培锋 曾妙 高青 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期662-664,共3页
据2018年全球阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)报道指出:截止2018年全球约有5千万痴呆患者,且数量还在持续增长,预计2050年将达到1.52亿。而痴呆患者中60%~80%是AD[1]。AD以进行性认知、记忆及行动能力损伤为主要临床特点;脑组织... 据2018年全球阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)报道指出:截止2018年全球约有5千万痴呆患者,且数量还在持续增长,预计2050年将达到1.52亿。而痴呆患者中60%~80%是AD[1]。AD以进行性认知、记忆及行动能力损伤为主要临床特点;脑组织内β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)沉积形成老年斑,tau蛋白高度磷酸化形成神经纤维缠结及神经元丢失是其主要的病理改变[2]。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 淀粉样β肽类 白细胞介素1 白细胞介素6 TAU蛋白质类 AMP活化蛋白激酶类 基因沉默
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MARCH8在宫颈癌组织中的表达及其沉默后对人宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响 认领
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作者 税成愈 向灿 《遵义医科大学学报》 2020年第1期69-75,共7页
目的探索MARCH8表达量对宫颈癌的影响以及MARCH8沉默后宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响,并对其可能存在的机制进行研究。方法选取我院宫颈癌手术切除标本20份作为研究对象,同时选取20例正常宫颈组织人群作为对照。免疫组化检测宫颈癌组织MAR... 目的探索MARCH8表达量对宫颈癌的影响以及MARCH8沉默后宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响,并对其可能存在的机制进行研究。方法选取我院宫颈癌手术切除标本20份作为研究对象,同时选取20例正常宫颈组织人群作为对照。免疫组化检测宫颈癌组织MARCH8表达水平;构建MARCH8的siRNA片段通过脂质体介导转染人宫颈癌Hela细胞(MARCH8-RNAi),Western blot与RT-PCR进行检测验证;MTT法检测MARCH8-RNAi细胞增值率、FCM法检测细胞周期及细胞凋亡率,Hoechst 33342检测凋亡小体形成情况,免疫组化及Western blot检测细胞周期、荧光定量PCR检测凋亡相关蛋白表达水平。结果免疫组化结果显示宫颈癌组织中MARCH8阳性表达率高于正常宫颈组织(P<0.01);Western blot与RT-PCR结果显示MARCH8-RNAi细胞中MARCH8表达量显著低于Ctrl(P<0.01);MARCH8-RNAi细胞增殖率及存活率均降低、处于G 0/G 1期细胞增多、PCNA、CDK2、CyclinD1表达水平降低,与Ctrl差异有统计学意义(P<0.01);FCM及Hoechst 33342结果显示MARCH8-RNAi细胞凋亡率升高、凋亡小体数目增加,Ki67、Bcl-2蛋白水平降低,而Caspase-3、Bax、P53蛋白表达量增加与Ctrl差异有统计学意义(P<0.01)。结论MARCH8在宫颈癌中高表达且MARCH8沉默后可通过调节细胞周期、凋亡相关基因蛋白水平抑制人宫颈癌Hela细胞增殖、促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 宫颈癌 MARCH8 基因沉默 细胞增殖 细胞凋亡
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CYFIP1表达与肝细胞性肝癌发生发展的相关性研究 认领
3
作者 顾炯 崔笑 +3 位作者 侯辉 喻宗繁 张彬 熊奇如 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第4期617-620,共4页
目的研究细胞质FMR1相关蛋白1(CYFIP1)在肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达及与HCC发生发展的相关性。方法利用组织微阵列分析检测80例原发性肝细胞性肝癌的肿瘤组织与癌旁正常肝组织中CYFIP1的表达水平,并分析其与临床特征的相关性;运用An... 目的研究细胞质FMR1相关蛋白1(CYFIP1)在肝细胞性肝癌(HCC)组织中的表达及与HCC发生发展的相关性。方法利用组织微阵列分析检测80例原发性肝细胞性肝癌的肿瘤组织与癌旁正常肝组织中CYFIP1的表达水平,并分析其与临床特征的相关性;运用Annexin V-FITC/PI双染标记法检测HepG2细胞沉默CYFIP1后的凋亡水平;运用Western blot法检测CYFIP1的蛋白表达变化。结果组织芯片染色结果提示肿瘤组织中CYFIP1表达量降低(P=0.031),且与HCC患者的肿瘤分化程度、肿瘤直径及生存期存在相关性。采用shRNA沉默CYFIP1后,HepG2细胞的细胞增殖水平上升(P=0.019),且细胞凋亡水平下降(P=0.021)。结论 CYFIP1是HCC的抑癌基因,可能成为患者临床预后的监测指标。 展开更多
关键词 肝细胞性肝癌 CYFIP1 基因沉默
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趋化因子受体7沉默对人肾癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响 认领
4
作者 吕栋 滕志刚 +1 位作者 周云飞 陈芙蓉 《癌症进展》 2020年第10期1043-1046,1079,共5页
目的探究趋化因子受体7(CXCR7)沉默对人肾癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法采用Western blot法筛选CXCR7高表达的肾癌细胞系,检验慢病毒转染对CXCR7蛋白的沉默效果;沉默CXCR7蛋白的表达后,利用WST-8细胞增殖实验及细胞生长曲线检测... 目的探究趋化因子受体7(CXCR7)沉默对人肾癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法采用Western blot法筛选CXCR7高表达的肾癌细胞系,检验慢病毒转染对CXCR7蛋白的沉默效果;沉默CXCR7蛋白的表达后,利用WST-8细胞增殖实验及细胞生长曲线检测肾癌细胞的增殖能力;采用Transwell实验、划痕实验检测肾癌细胞的侵袭和迁移能力;采用流式细胞仪检测无血清诱导肾癌细胞的凋亡情况;采用Western blot法检测肾癌细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bax、cleaved-caspase-3、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白的表达水平。结果 CXCR7蛋白在肾癌组织中的表达水平高于健康肾组织(P﹤0.05)。Western blot检测结果显示,CXCR7蛋白在786-O肾癌细胞中的表达水平相对较高,选择其用于后续研究CXCR7蛋白对肾癌细胞的影响。慢病毒转染沉默786-O细胞中CXCR7蛋白的表达后,786-O细胞的增殖、侵袭和迁移能力均低于对照组和sh-NC组;无血清诱导后,786-O细胞的凋亡率升高及Bax、cleaved-caspase-3的表达水平均升高,Bcl-2、VEGF、MMP2、MMP9的表达水平均降低(P﹤0.05)。结论 CXCR7通过调控凋亡相关蛋白的表达抑制凋亡信号,促进肿瘤新生血管形成,从而促进人肾癌细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 趋化因子受体7 基因沉默 凋亡 肾癌 增殖 侵袭
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药食两用模式植物苦蘵基因功能研究方法的建立 认领
5
作者 康利花 蒙琪琪 +6 位作者 俞彤苑 蔡佳玲 陈茹意 黄靖汶 阮文茹 蔡晓萱 张弦 《杭州师范大学学报:自然科学版》 CAS 2020年第1期41-46,56共7页
苦蘵中的酸浆苦素R可能有抗癌功效,基因组测序结果预测其生源代谢合成途径缺失环节可能分布于3个基因家族的89个相关同源基因里,这给其药效成分的生源合成阐明带来困难.本实验构建了由植物病毒介导的苦蘵基因功能研究体系,应用狗尾草花... 苦蘵中的酸浆苦素R可能有抗癌功效,基因组测序结果预测其生源代谢合成途径缺失环节可能分布于3个基因家族的89个相关同源基因里,这给其药效成分的生源合成阐明带来困难.本实验构建了由植物病毒介导的苦蘵基因功能研究体系,应用狗尾草花叶病毒(Foxtail mosaic virus,FoMV)来实现相关外源基因(eGFP)的稳定表达;同时,基于烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)建立苦蘵的功能基因表达沉默技术,实验中有效地抑制苦蘵内源的八氢番茄红素脱氢酶基因(PDS)的表达水平.该方法可对候选基因实现差异化表达,对上下游的相关性基因进行分析,可以用于苦蘵的功能基因筛选和鉴定. 展开更多
关键词 苦蘵 药食两用 基因沉默 醉茄类脂R 功能基因
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Toll样受体4抑制过氧化物酶体增殖物激活受体γ加重血脂蓄积的分子机制 认领
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作者 付洁琦 张曼 +2 位作者 张晓璐 李卉 陈红 《山东大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2020年第7期24-31,共8页
目的选取高脂饮食模型大鼠和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)暴露下巨噬细胞模型,验证在血脂蓄积过程中Toll样受体4(TLR4)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的具体干预机制。方法健康雄性Wistar大鼠20只,随机分为对照组和高脂组,每组10... 目的选取高脂饮食模型大鼠和氧化低密度脂蛋白(oxLDL)暴露下巨噬细胞模型,验证在血脂蓄积过程中Toll样受体4(TLR4)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的具体干预机制。方法健康雄性Wistar大鼠20只,随机分为对照组和高脂组,每组10只。测定各组大鼠总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平,采用苏木精-伊红染色检测颈动脉血管内膜中膜厚度比,采用Western blotting法检测TLR4、PPARγ蛋白表达水平。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,以oxLDL(50 mg/L)刺激巨噬细胞制备模型,且应用siRNA-TLR4沉默巨噬细胞内的TLR4因子制备TLR4沉默模型,将细胞分为空白组(A组)、oxLDL组(B组)、oxLDL+siRNA组(C组)、oxLDL+siRNA-TLR4组(D组)、oxLDL+siRNA-TLR4+PPARγ激动剂组(E组)、oxLDL+siRNA-TLR4+PPARγ抑制剂组(F组)。采用油红O染色法观察巨噬细胞内血脂蓄积情况,定量检测巨噬细胞内胆固醇含量,采用Western blotting法检测TLR4、PPARγ蛋白表达水平。结果在动物模型实验中,与对照组相比,高脂组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平、颈动脉内膜中膜厚度比、TLR4蛋白相对表达含量明显增高(P<0.01),血清高密度脂蛋白水平、PPARγ蛋白相对表达含量明显降低(P<0.01),且TLR4与PPARγ呈负相关性(r=-0.9281,P<0.001)。在oxLDL暴露巨噬细胞实验中,与A组比较,B、C组巨噬细胞内胆固醇含量、油红O颗粒、光密度值及TLR4蛋白相对表达含量明显增多(P<0.01),PPARγ蛋白相对表达含量明显减少(P<0.05),且B组TLR4与PPARγ呈负相关性(r=-0.9867,P<0.001)。与B组相比,C组巨噬细胞内胆固醇含量、油红O颗粒、光密度值及TLR4、PPARγ蛋白相对表达含量未见明显改变(P>0.05)。与B组相比,D组巨噬细胞内胆固醇含量、油红O颗粒及光密度值及TLR4蛋白相对表达含量明显减少(P<0.01),PPARγ蛋白相对表达含量明显增多(P<0.05)。与D组相比,E组巨噬细胞内胆固醇 展开更多
关键词 氧化低密度脂蛋白 TOLL样受体4 过氧化物酶体增殖物激活受体Γ 动脉粥样硬化 血脂 胆固醇 巨噬细胞 基因沉默
连朴饮含药血清对肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症反应的干预机制 认领
7
作者 锗璨灿 朱星 +3 位作者 陈云志 师为人 童平珍 徐昌君 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期66-71,共6页
目的:基于GR基因沉默探讨连朴饮改善急性肺损伤(ALI)炎症反应的机制。方法:构建沉默GR基因的慢病毒载体,制备含药血清,将培养的原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)随机分为9组:正常对照组、模型对照组、地塞米松0.2 mg/kg组、连朴饮9.3 g/kg... 目的:基于GR基因沉默探讨连朴饮改善急性肺损伤(ALI)炎症反应的机制。方法:构建沉默GR基因的慢病毒载体,制备含药血清,将培养的原代肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)随机分为9组:正常对照组、模型对照组、地塞米松0.2 mg/kg组、连朴饮9.3 g/kg组、干扰对照组、GR干扰组、GR干扰模型组、GR干扰地塞米松0.2 mg/kg组、GR干扰连朴饮9.3 g/kg组;运用QRT-PCR法检测AECⅡ的GR基因沉默效率,运用QRT-PCR、Western blot法检测各组TNF-αmRNA及蛋白的表达,运用ELISA检测各组细胞上清液IL-8和IL-1β的含量,FITC-Dextran法检测细胞通透性。结果:与干扰对照组比较,GR干扰组的GR mRNA表达水平显著下调,GR mRNA沉默效率达67%(P<0.05或P<0.01);与连朴饮9.3 g/kg 5%含药血清组比较,GR干扰连朴饮组TNF-αmRNA及蛋白的表达显著上调,IL-8和IL-1β的含量、细胞通透性显著增高(P<0.05或P<0.01)。结论:9.3 g/kg连朴饮5%含药血清能抑制TNF-α、IL-8和IL-1β分泌,降低细胞通透性,改善AECⅡ炎症反应,从而防治ALI,其部分通过GR为介导是改善AECⅡ炎症反应的作用途径之一。 展开更多
关键词 连朴饮 肺泡Ⅱ型上皮细胞 急性肺损伤 炎症 糖皮质激素受体 基因沉默
莱茵衣藻E2泛素结合酶CrUBC23调控油脂积累 认领
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作者 李兴涵 费小雯 +1 位作者 李亚军 邓晓东 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期499-511,共13页
【目的】为研究莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzymes,E2)CrUBC23在莱茵衣藻油脂代谢中的作用,为高产油微藻基因工程改良和揭示藻类油脂合成及代谢调控机理奠定基础。【方法】qRT-PCR分析莱茵... 【目的】为研究莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzymes,E2)CrUBC23在莱茵衣藻油脂代谢中的作用,为高产油微藻基因工程改良和揭示藻类油脂合成及代谢调控机理奠定基础。【方法】qRT-PCR分析莱茵衣藻在低氮、低磷胁迫下泛素结合酶CrUBC23表达情况;克隆CrUBC23同源基因干涉片段和全长基因,构建RNAi干涉载体和过量表达载体,转化莱茵衣藻并检测生物量和油脂含量;构建CrUBC23-GFP融合表达载体,用农杆菌浸染洋葱表皮细胞进行亚细胞定位。【结果】莱茵衣藻在低氮、低磷胁迫下CrUBC23基因表达量显著增加,增加幅度分别为正常培养的4.98–5.80倍和1.85–5.20倍。RNAi干扰结果显示,转基因藻细胞中性脂含量降低5.5%,总脂含量降低3.16%–17.6%。过量表达结果显示,转基因藻细胞中性脂含量增加8.8%,总脂含量增加4.51%–14.03%。【结论】CrUBC23正向调控莱茵衣藻油脂代谢,该基因定位于细胞核。 展开更多
关键词 莱茵衣藻 E2 泛素结合酶 基因沉默 亚细胞定位
抑瘤素M受体对慢性自身免疫性荨麻疹发病机制的影响 认领
9
作者 陈贵婧 薄灵芳 +2 位作者 尹晓华 沙丹丹 张甜 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期737-745,共9页
本研究旨在探讨抑瘤素M受体(OSMR)在慢性自身免疫性荨麻疹(CAU)发病机制中的作用。本研究分别检测30例CAU患者及30名健康受试者的皮肤组织中OSMR、JAK和STAT3的表达,研究显示OSMR、JAK和STAT3在CAU患者皮肤组织中高表达(p<0.05)。转... 本研究旨在探讨抑瘤素M受体(OSMR)在慢性自身免疫性荨麻疹(CAU)发病机制中的作用。本研究分别检测30例CAU患者及30名健康受试者的皮肤组织中OSMR、JAK和STAT3的表达,研究显示OSMR、JAK和STAT3在CAU患者皮肤组织中高表达(p<0.05)。转染OSMR-siRNA可显著降低CAU模型小鼠血清炎症因子IL-1、IL-6和IFN-γ水平,而转染JAK/STAT3信号通路激动剂Tyr705则可显著升高炎症因子水平(p<0.05)。转染OSMR-siRNA可显著降低CAU小鼠瘙痒次数、瘙痒时间和嗜酸性粒细胞计数,而转染Tyr705则可显著升高CAU小鼠瘙痒次数、瘙痒时间和嗜酸性粒细胞计数(p<0.05)。转染OSMR-siRNA促进了CAU小鼠上皮细胞的增殖能力,并抑制了细胞凋亡(p<0.05)。而转染Tyr705则抑制了CAU小鼠上皮细胞的增殖能力,并促进了细胞凋亡(p<0.05)。转染OSMR-siRNA下调了上皮细胞中OSMR、JAK和STAT3的表达,而转染Tyr705则上调了OSMR、JAK和STAT3的表达(p<0.05)。总之,本研究表明OSMR基因在CAU患者皮肤组织中高表达。OSMR基因沉默可通过抑制JAK/STAT3信号通路来抑制炎症因子表达及嗜酸性粒细胞数量,促进上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 抑瘤素M受体 慢性自身免疫性荨麻疹 基因沉默 JAK/STAT3信号通路 炎症因子
体外快速获得核酶P中M1RNA基因的研究 认领
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作者 胡兢晶 伍苑宾 +4 位作者 赵小琴 祁丹 谭琪琪 苏海浩 王波 《中华临床医师杂志:电子版》 CAS 2020年第1期48-51,共4页
目的在体外转录快速获得原核生物来源核酶P的核心催化亚基M1RNA。方法以大肠埃希菌DH5α菌液为模板,应用聚合酶链式反应的方法扩增M1RNA基因,并将该基因置于T7启动子下游,其聚合酶链式反应产物经电泳及测序鉴定。以M1RNA基因为模板,以32... 目的在体外转录快速获得原核生物来源核酶P的核心催化亚基M1RNA。方法以大肠埃希菌DH5α菌液为模板,应用聚合酶链式反应的方法扩增M1RNA基因,并将该基因置于T7启动子下游,其聚合酶链式反应产物经电泳及测序鉴定。以M1RNA基因为模板,以32P标记,在T7 RNA聚合酶的作用下体外转录M1RNA。将产物以尿素变性聚丙烯酰胺凝胶分离并观察结果。结果应用聚合酶链式反应的方法从大肠埃希菌基因组扩增M1RNA基因,经凝胶电泳观察及测序鉴定,证实成功在体外扩增M1RNA基因,并置于T7启动子下游。在T7 RNA聚合酶的催化下,应用尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离产物,结果显示377nt处可见与预期相符的条带,证实成功在体外获得M1RNA。结论成功在体外快速获得具有独立催化功能的M1RNA,基于此的基因沉默技术具有发展成新型反义核酸药物的良好前景。 展开更多
关键词 核酶P M1RNA 基因沉默 转录
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梯棱羊肚菌镉胁迫响应基因ATX1功能分析 认领
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作者 陈新 吕首云 +2 位作者 牟春叶 边银丙 康恒 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期827-838,共12页
梯棱羊肚菌Morchella importuna是一种可以大田覆土栽培的珍稀食用菌,而土壤重金属污染状况日益严重,对梯棱羊肚菌菌丝生长和子实体产品质量安全构成了潜在的威胁。本研究先采用镉离子胁迫处理梯棱羊肚菌菌丝体,RT-PCR检测发现候选基因A... 梯棱羊肚菌Morchella importuna是一种可以大田覆土栽培的珍稀食用菌,而土壤重金属污染状况日益严重,对梯棱羊肚菌菌丝生长和子实体产品质量安全构成了潜在的威胁。本研究先采用镉离子胁迫处理梯棱羊肚菌菌丝体,RT-PCR检测发现候选基因ATX1的表达量显著下调。克隆梯棱羊肚菌ATX1基因,对ATX1p蛋白结构进行功能预测,发现ATX1p可能与铜离子转运及重金属胁迫相关。然后分别构建ATX1的超表达和RNAi基因沉默载体,采用农杆菌介导的转化方法,将其转入梯棱羊肚菌同核体菌株A50中,分别筛选到4个ATX1表达显著上调的超表达转化子和4个ATX1表达显著下调的RNAi基因沉默转化子,镉敏感性检测发现ATX1的RNAi基因沉默转化子表现为镉抗性增强,而ATX1超表达转化子则表现为镉抗性减弱。结果表明,梯棱羊肚菌ATX1基因表达与镉抗性呈负相关,ATX1p可能在梯棱羊肚菌镉胁迫响应过程中发挥着某种重要作用。 展开更多
关键词 梯棱羊肚菌 铜伴侣蛋白 镉胁迫 RNAI 基因沉默 基因超表达
Rsk2沉默对大鼠骨髓基质干细胞的成骨分化的影响 认领
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作者 吴伟力 应于康 罗军 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1121-1123,1156,共4页
目的通过对核糖体S6激酶2(Rsk2)进行沉默,探讨Rsk2对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的成骨分化的影响。方法分离出BMSCs,空白对照组不做处理,模型组用Lipofectamine法将siRNA-NC转染到BMSCs细胞,实验组用Lipofectamine法将Rsk2 siRNA转染到B... 目的通过对核糖体S6激酶2(Rsk2)进行沉默,探讨Rsk2对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的成骨分化的影响。方法分离出BMSCs,空白对照组不做处理,模型组用Lipofectamine法将siRNA-NC转染到BMSCs细胞,实验组用Lipofectamine法将Rsk2 siRNA转染到BMSCs细胞用于沉默Rsk2,转染48 h后换用成骨诱导分化培养基,在诱导分化后第7 d检测碱性磷酸酶(ALP)相对活性,Rsk2、骨钙蛋白(OCN)、骨形成蛋白2(BMP2)、Ⅰ型胶原(COLL-Ⅰ)和成骨相关蛋白Runt相关因子2(Runx2)mRNA表达水平。结果在诱导分化第7 d,空白对照组、模型组和实验组的Rsk2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.03,0.95±0.08和0.50±0.07;OCN mRNA相对表达量分别为1.00±0.09,1.07±0.11和0.43±0.06;BMP2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.06,1.06±0.12和0.67±0.07;COLL-ⅠmRNA相对表达量分别为1.00±0.02,1.10±0.09和0.73±0.06;Runx2 mRNA相对表达量分别为1.00±0.08,1.04±0.04和0.52±0.08;实验组与空白对照组和模型组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论对大鼠Rsk2基因进行沉默后,BMSCs转化为成骨细胞的能力减弱。 展开更多
关键词 核糖体S6激酶2 基因沉默 骨髓基质干细胞 成骨分化
长春花CratpA基因沉默对两种生物碱合成的影响 认领
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作者 李娅 周海龙 +3 位作者 李琳 陈秋骏 吴琼 刘志文 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2020年第3期163-168,共6页
根据长春花叶绿体全序列中的CratpA基因编码序列,设计引物并扩增获得特异沉默片段sCratpA,构建基因沉默(VIGS)载体pTRV2-sCratpA,农杆菌瞬时转化长春花幼苗顶端分生组织。结果表明处理后的长春花小苗与空白对照(EV)相比叶片失绿叶色变浅... 根据长春花叶绿体全序列中的CratpA基因编码序列,设计引物并扩增获得特异沉默片段sCratpA,构建基因沉默(VIGS)载体pTRV2-sCratpA,农杆菌瞬时转化长春花幼苗顶端分生组织。结果表明处理后的长春花小苗与空白对照(EV)相比叶片失绿叶色变浅。q-RT-PCR结果表明,CrD4H、Cr7DLS、CrLAMT、CrDL7H相对表达量分别较对照(EV)升高13.85、4.42、18.91和4.31倍。HPLC结果表明,文多灵和长春质碱两种生物碱分别升高了1.05和5.83倍。由此说明,CratpA的基因沉默对长春质碱与文多灵的合成和积累有较大的影响,且呈负相关,即CratpA表达受阻时,长春质碱与文多灵积累量升高。 展开更多
关键词 长春花 文多灵 长春质碱 病毒诱导 基因沉默 实时荧光定量PCR
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苹果ANR基因沉默的原因分析 认领
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作者 印迈 吴玉杰 +3 位作者 蔡梦 续晨 张文学 蔡小宁 《现代农业科技》 2020年第15期57-59,共3页
检测了一个具有紫黑色果肉的苹果的ANR基因,发现了该基因被沉默。为了分析其沉默的原因,通过试验分析了该启动子序列上的顺式作用元件、内含子序列、外显子序列等的变异。结果表明,其ANR基因沉默可能是由内含子产生的变异引起,上述研究... 检测了一个具有紫黑色果肉的苹果的ANR基因,发现了该基因被沉默。为了分析其沉默的原因,通过试验分析了该启动子序列上的顺式作用元件、内含子序列、外显子序列等的变异。结果表明,其ANR基因沉默可能是由内含子产生的变异引起,上述研究结果为今后的进一步研究打下了基础。 展开更多
关键词 苹果 ANR基因 内含子 基因沉默
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HDAC9基因沉默对非小细胞肺癌细胞生物学特性和Wnt信号通路影响 认领
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作者 侯欣 王志伟 +3 位作者 贾梦英 杨芳 宋慧琴 段永建 《青岛大学学报:医学版》 CAS 2020年第3期337-341,共5页
目的探讨组蛋白脱乙酰酶9(HDAC9)基因沉默对非小细胞肺癌细胞生物学特性和Wnt信号通路影响。方法取非小细胞肺癌细胞株A549,设计HDAC9沉默序列,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测HDAC9、JNK、β-catenin、Wn... 目的探讨组蛋白脱乙酰酶9(HDAC9)基因沉默对非小细胞肺癌细胞生物学特性和Wnt信号通路影响。方法取非小细胞肺癌细胞株A549,设计HDAC9沉默序列,使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测HDAC9、JNK、β-catenin、Wnt-5的mRNA及蛋白表达水平。采用CCK8法、划痕实验、Transwell实验和流式细胞术检测细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡等。结果si-HDAC9转染细胞后JNK、β-catenin、Wnt-5表达下降,细胞生长抑制,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显降低,凋亡增加;si-HDAC9+rWnt3a转染可逆转上述趋势(F=9.070~159.400,P均<0.05)。结论HDAC9沉默表达可抑制Wnt信号通路,抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 组蛋白脱乙酰基酶类 基因沉默 非小细胞肺 肿瘤转移 肿瘤侵润 Wnt信号通路
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沉默高表达CDX2胃癌细胞中HNF4α表达水平的变化 认领
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作者 沈和德 杨文秀 +2 位作者 褚明亮 易韦 张著学 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第8期899-903,共5页
目的:探讨沉默高表达尾核同源盒转录因子2(CDX2)胃癌细胞中后对肝细胞核因子4α(HNF4α)表达水平的变化。方法:采用Western blot检测CDX2和HNF4α两种蛋白在AGS、BGC-823、MGC-803、MKN-45和SGC-7901五种胃癌细胞的表达,筛选出2者在同... 目的:探讨沉默高表达尾核同源盒转录因子2(CDX2)胃癌细胞中后对肝细胞核因子4α(HNF4α)表达水平的变化。方法:采用Western blot检测CDX2和HNF4α两种蛋白在AGS、BGC-823、MGC-803、MKN-45和SGC-7901五种胃癌细胞的表达,筛选出2者在同一种细胞蛋白中均高表达的胃癌细胞;选择高表达CDX2和HNF4α的AGS细胞,采用Western lot检测沉默CDX2表达后细胞中HNF4α蛋白表达情况。结果:Western blot结果显示,CDX2与HNF4a蛋白在AGS胃癌细胞均有较高表达;与阴性对照相比,经沉默CDX2表达后的AGS胃癌细胞中CDX2蛋白为低表达,HNF4α蛋白也为低表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在高表达CDX2的AGS胃癌细胞中沉默CDX2后,CDX2与HNF4α蛋白均呈低表达水平。 展开更多
关键词 胃肿瘤 基因沉默 尾核同源盒转录因子2蛋白 肝细胞核因子4α蛋白 蛋白免疫印迹
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沉默人乙酰转移酶样蛋白基因对结直肠癌CL187细胞放射敏感性的影响 认领
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作者 胡乐林 陶慧慧 +2 位作者 杨阳丽 陶欣荣 唐小龙 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2020年第1期23-31,共9页
探讨沉默人乙酰转移酶样蛋白(Human acetytransferase-like protein,hALP)基因表达对结直肠癌CL187细胞放射敏感性的影响。通过临床数据库挖掘hALP基因在结肠癌组织的表达情况;CL187细胞沉默hALP后接受递增剂量(0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy... 探讨沉默人乙酰转移酶样蛋白(Human acetytransferase-like protein,hALP)基因表达对结直肠癌CL187细胞放射敏感性的影响。通过临床数据库挖掘hALP基因在结肠癌组织的表达情况;CL187细胞沉默hALP后接受递增剂量(0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy)射线照射,运用克隆增殖实验和细胞存活率检测实验分析细胞放射敏感性变化;结直肠癌CL187细胞沉默hALP后接受8 Gy射线照射,使用流式细胞分析术检测细胞凋亡情况;CL187细胞沉默hALP基因后接受8 Gy射线照射,使用Western blotting检测hALP基因、P53和BAX的蛋白表达水平。结果显示:CL187细胞沉默hALP基因后接受2 Gy射线照射,沉默hALP基因组与对照组的细胞存活分数分别是0.63、0.5,相对生物学效应1.26;沉默hALP基因后射线照射引起的细胞凋亡从19.53%增高到36.49%(p<0.05);沉默hALP基因后射线照射引起P53、BAX表达水平进一步增高。结果提示,沉默hALP基因表达提高了结直肠癌CL187细胞的放射敏感性。hALP基因的表达水平与细胞放射敏感性之间存在相关性,有可能是预测结直肠癌放射敏感性的分子靶标。 展开更多
关键词 基因沉默 人乙酰转移酶样蛋白(hALP) 结直肠癌 放射敏感性
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沉默beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖HT22细胞凋亡的影响 认领
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作者 张怡 靳晓飞 +5 位作者 周晓红 董贤慧 张颖 于文涛 成媛 高维娟 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期3-8,共6页
目的探讨beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖小鼠海马神经元细胞系HT22细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的HT22细胞,随机分为4组:正常组(normal)、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)模型组(model)、beclin1基因沉默组(beclin1^-/-)、转染对照组(co... 目的探讨beclin1基因对缺氧缺糖/复氧复糖小鼠海马神经元细胞系HT22细胞凋亡的影响。方法取对数生长期的HT22细胞,随机分为4组:正常组(normal)、缺氧缺糖/复氧复糖(OGD/R)模型组(model)、beclin1基因沉默组(beclin1^-/-)、转染对照组(control)。除normal组外,其余各组细胞均在缺氧缺糖6 h后进行复氧复糖。利用RNAi技术,针对小鼠c DNA序列设计beclin1干扰序列,用脂质体Lipo2000包裹后转染至HT22细胞。于转染48 h后用荧光显微镜观察转染效率,Western blotting检测细胞beclin1表达情况。各组细胞均于复氧复糖24 h后采用CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤情况,免疫荧光染色检测Bax、Bcl-2表达及比值变化,Western blotting检测LC3、P62及Caspase-3表达。SPSS 19. 0统计学软件进行数据分析。结果与normal组相比,model组细胞活力及P62蛋白表达显著降低(P<0. 01),乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Caspase-3表达及Bax/Bcl-2均显著升高(P<0. 01)。与model组相比,beclin1^-/-组细胞活力及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著降低(P<0. 01),LDH漏出率、Bax/Bcl-2及P62、Caspase-3表达显著升高(P<0. 01);control组与model组比较差异无显著性。结论沉默beclin1抑制细胞自噬可使缺氧缺糖/复氧复糖处理的HT22细胞损伤加重,细胞凋亡进一步增加。 展开更多
关键词 BECLIN1 基因沉默 缺氧缺糖/复氧复糖 自噬 免疫印迹法
棉花黄萎病相关基因GhAAT的克隆与功能鉴定 认领
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作者 李秀青 李月 +2 位作者 刘超 代培红 刘晓东 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1048-1053,共6页
棉花黄萎病(Verticillium dahliae)是一种土传性真菌维管束病害,严重影响棉花的生产。本研究通过转录组数据分析筛选出一个与棉花黄萎病相关的氨基酸转运蛋白GhAAT基因,该基因在棉花根部响应黄萎病菌诱导表达。利用病毒诱导的基因沉默(v... 棉花黄萎病(Verticillium dahliae)是一种土传性真菌维管束病害,严重影响棉花的生产。本研究通过转录组数据分析筛选出一个与棉花黄萎病相关的氨基酸转运蛋白GhAAT基因,该基因在棉花根部响应黄萎病菌诱导表达。利用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing, VIGS)技术研究其在棉花抗黄萎病中的功能。结果显示将该基因在棉花TM-1的叶片和根部沉默后,棉花对黄萎病抗性减弱,证明GhAAT基因参与调控了棉花抗黄萎病功能。发掘棉花抗黄萎病菌重要调控基因并揭示其分子机制对培育棉花抗病品种具有重要意义。 展开更多
关键词 棉花 黄萎病 抗病基因 基因沉默
siRNA干涉技术在黄曲霉毒素抑制中的研究 认领
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作者 焦健 杜鹏 《中国农学通报》 2020年第5期30-36,共7页
构建真菌基因敲除突变体的传统方法周期较长,为了快速检测和高通量筛选具有特定功能的目标基因,本研究利用小分子RNA干涉技术,沉默了黄曲霉毒素生物合成关键基因,有效降低了黄曲霉毒素B1(AFB1)的生物合成。通过设计合成人工小干涉RNA(ar... 构建真菌基因敲除突变体的传统方法周期较长,为了快速检测和高通量筛选具有特定功能的目标基因,本研究利用小分子RNA干涉技术,沉默了黄曲霉毒素生物合成关键基因,有效降低了黄曲霉毒素B1(AFB1)的生物合成。通过设计合成人工小干涉RNA(artificial siRNA),特异靶向黄曲霉毒素合成路径的关键基因aflR,将siRNA直接转化黄曲霉原生质体,有效沉默了黄曲霉毒素合成的关键调控基因aflR,并导致AFB1的合成明显减少。利用特异靶向黄曲霉毒素合成路径中其他11个靶标基因的siRNAs,通过原生质体转化方法可直接沉默这些基因,沉默后这些基因的转录水平均显著降低,其中hypC和aflW两个基因沉默后AFB1的生物合成量与对照相比下降显著。此外,利用特异靶向黄曲霉毒素合成基因簇外基因的siRNA,如pks-nrps基因,通过siRNA干涉技术沉默该基因同样可显著降低AFB1的合成。因此,本研究借助小分子RNA干涉技术,建立了一种快速检测和高通量筛选黄曲霉毒素生物合成路径相关基因的反向遗传学方法。 展开更多
关键词 小分子RNA 基因沉默 黄曲霉毒素 RNA干涉 反向遗传学技术
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