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文章速递关于重组腺相关病毒基因治疗制品药学评价的思考 认领
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作者 刘伯宁 徐隆昌 +1 位作者 韩冬梅 罗建辉 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1965-1970,共6页
重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体与其他病毒载体相比,具备感染能力强、可持续表达目的基因、无致病性和非基因组整合等优点,已成为体内基因治疗的主要病毒载体。目前,国际上已有3个rAAV相关的基因治疗产... 重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus,rAAV)载体与其他病毒载体相比,具备感染能力强、可持续表达目的基因、无致病性和非基因组整合等优点,已成为体内基因治疗的主要病毒载体。目前,国际上已有3个rAAV相关的基因治疗产品获批上市,另有两百余个候选药物正在开展临床试验。但是,国内工业界在开发临床应用级rAAV产品时面临诸多挑战,监管方对于此类产品的药学评价也缺乏实际审评经验。为此,本文总结了rAAV基因治疗产品的最新研究进展,从原材料、生产工艺及质量控制等方面对此类产品的药学评价考虑要点展开讨论,以期促进此类产品的临床转化与应用。 展开更多
关键词 重组腺相关病毒 基因治疗 药学评价 生产工艺 质量控制
文章速递辐射联合脂质体介导的胞嘧啶脱氨基酶/5-氟胞嘧啶系统体外抑杀人胰腺癌细胞的研究 认领
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作者 孙胜 孙诚谊 +2 位作者 潘耀振 邓小强 李红伟 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2020年第9期1078-1083,共6页
目的探讨辐射联合脂质体介导的胞嘧啶脱氨基酶(CD)/5-氟胞嘧啶(5-FC)系统对胰腺癌的协同治疗作用。方法在脂质体介导下,将CD基因导入人胰腺癌PC3细胞,经G418筛选出稳定表达的克隆。用RT-PCR法鉴定CD基因的整合及表达;MTT法检测给入前药5... 目的探讨辐射联合脂质体介导的胞嘧啶脱氨基酶(CD)/5-氟胞嘧啶(5-FC)系统对胰腺癌的协同治疗作用。方法在脂质体介导下,将CD基因导入人胰腺癌PC3细胞,经G418筛选出稳定表达的克隆。用RT-PCR法鉴定CD基因的整合及表达;MTT法检测给入前药5-FC后细胞的存活率及其旁观者效应;细胞克隆形成实验检测钴-60(60Co)体外照射传代培养后细胞的辐射敏感性。结果CD基因在转染了CD基因细胞中获得了稳定表达;5-FC对转染CD基因细胞具有较强的杀伤及旁观者杀伤效应(P<0.05),联合辐射能进一步增强这一杀伤效应(P<0.05);5-FC处理过的转染了CD基因的PC3细胞对辐射的敏感性明显提高(P<0.05),临床相关剂量(2 Gy)照射时转染CD基因细胞的放射增敏比达到1.5。结论CD/5-FC系统对转染了CD基因的细胞具有明显的辐射增敏效应,联合应用辐射和CD/5-FC系统能显著增强CD/5-FC系统对PC3细胞的杀伤作用。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 辐射 胞嘧啶脱氨基酶 5-氟胞嘧啶 基因治疗 放射增敏
骨质疏松症的药物防治:难点与展望 认领
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作者 崔燎 《广东医科大学学报》 2020年第2期127-133,共7页
该文围绕骨质疏松症(OP)的流行病学认识和分子发病机制新进展,指出当今OP药物治疗的热点和难点,在OP的分子信号通路药物、细胞治疗、基因治疗和多靶点治疗等方面进行了评述,为OP药物防治提供新的策略与展望。
关键词 骨质疏松症 骨折 疾病相关骨质疏松 抗骨质疏松药物 分子信号通路 细胞治疗 基因治疗 多靶点治疗
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多重连接探针扩增和二代测序技术检测Duchenne型肌营养不良基因分析 认领
4
作者 何展文 陈启慧 +5 位作者 李平甘 吴若豪 李栋方 李宇 周小琳 罗向阳 《中国实用神经疾病杂志》 2020年第14期1209-1212,共4页
目的探讨联合应用MLPA和二代基因测序技术对Duchenne型肌营养不良症分子遗传学诊断的作用。方法收集2012-01-2019-12在中山大学孙逸仙纪念医院儿童神经内分泌专科就诊经临床和肌肉活检明确诊断Duchenne型肌营养不良症患儿,联合应用MLPA... 目的探讨联合应用MLPA和二代基因测序技术对Duchenne型肌营养不良症分子遗传学诊断的作用。方法收集2012-01-2019-12在中山大学孙逸仙纪念医院儿童神经内分泌专科就诊经临床和肌肉活检明确诊断Duchenne型肌营养不良症患儿,联合应用MLPA和二代测序技术,分析其DMD基因单个外显子的缺失情况。结果纳入Duchenne型肌营养不良症患儿59例,均为男性,就诊年龄(4.72±2.42)岁。58例患儿确定了致病基因突变位点,基因诊断阳性率为98.30%。其中缺失突变28例(47.46%),以第45-55号外显子缺失频率最高;重复突变7例(11.86%),23例(38.98%)微小突变,其中包括无义突变8例(13.55%),移码突变6例(10.17%),错义突变6例(10.17%),微缺失3例(5.08%)。结论联合应用MLPA和二代测序技术是明确Duchenne型肌营养不良症致病基因突变位点最佳策略,能为Duchenne型肌营养不良症的精准诊治和家系成员的遗传咨询提供准确的依据。 展开更多
关键词 肌营养不良 DMD基因 外显子 MLPA 二代测序 基因治疗
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内皮抑素和血管抑素融合基因在杆状病毒中的表达及抗肝癌效果评价 认领
5
作者 王志昇 李梦婷 +1 位作者 姬勇敢 杨萌萌 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第15期2053-2058,共6页
目的评价杆状病毒介导的内皮抑素和血管抑素融合蛋白(hEA)的抗肝癌效果。方法以质粒pFastBac DUAL为骨架,将pPh启动子替换为CMV,然后在其下游插入hEA基因,获得重组质粒pBac-ChEA,将pBac-ChEA转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选获得重组... 目的评价杆状病毒介导的内皮抑素和血管抑素融合蛋白(hEA)的抗肝癌效果。方法以质粒pFastBac DUAL为骨架,将pPh启动子替换为CMV,然后在其下游插入hEA基因,获得重组质粒pBac-ChEA,将pBac-ChEA转化DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选获得重组Bacmid,然后经脂质体法转染Sf-9昆虫细胞,获得重组杆状病毒Bac-ChEA。将重组病毒转导HUVEC细胞,通过ELISA、MTT、细胞划痕和血管网络形成检测hEA蛋白的表达以及对HUVEC细胞的增殖、迁移和血管形成的影响;建立裸鼠皮下肝癌肿瘤模型,评价杆状病毒介导的hEA的抗肝癌效果。结果经PCR鉴定成功构建了重组杆状病毒Bac-ChEA;hEA蛋白在Bac-ChEA转导的HUVEC细胞中成功获得了表达并且能够有效抑制HUVEC细胞的增殖、迁移以及血管网络的形成;体内结果表明Bac-ChEA组能有效抑制肝癌肿瘤体积的增长,小鼠寿命(中位生存期)从Bac-CMV组的24 d显著延长至Bac-ChEA组的36 d(P <0.05)。结论本研究成功让hEA蛋白在杆状病毒中获得了表达,并且能够有效地抑制HUVEC细胞的增殖、迁移和血管形成以及小鼠肝癌肿瘤体积的增长和提高小鼠生存率。 展开更多
关键词 杆状病毒 内皮抑素 血管抑素 肝癌 基因治疗
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microRNA在亨廷顿病中的研究进展 认领
6
作者 姜兵兵 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2020年第6期677-685,共9页
亨廷顿病(Huntington’s disease,HD)是神经退行性疾病(neurodegenerative disorders)中一种单基因遗传病,由亨廷顿基因(the huntingtin gene,HTT)第一个外显子中的CAG三核苷酸序列重复扩增引起,尚无法治愈。HTT编码的蛋白产物被称为亨... 亨廷顿病(Huntington’s disease,HD)是神经退行性疾病(neurodegenerative disorders)中一种单基因遗传病,由亨廷顿基因(the huntingtin gene,HTT)第一个外显子中的CAG三核苷酸序列重复扩增引起,尚无法治愈。HTT编码的蛋白产物被称为亨廷顿蛋白(Huntingtin protein,Htt)。突变亨廷顿蛋白(mutated huntingtin protein,mHtt)容易形成聚集体,具有毒性,导致一系列细胞学异常和神经元功能障碍。microRNA(miRNA)在基因转录后水平调控中起重要作用,其表达的改变与HD病理过程有关,成为治疗HD的潜在生物标志物。近年来,对一些特定miRNA在HD中调控机制及靶基因预测方面的研究可为HD提供潜在的治疗方法。本文就miRNA在HD中的相关研究进展进行综述。 展开更多
关键词 MICRORNA 亨廷顿病 调控机制 基因治疗
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miR-200b调控PDCD4的表达对乳腺癌细胞增殖和侵袭的影响 认领
7
作者 李娟 高青山 +1 位作者 牟成金 何力 《局解手术学杂志》 2020年第5期358-362,共5页
目的探讨miR-200b对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响及其可能的分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测人乳腺癌组织及乳腺癌细胞株中miR-200b的表达差异;利用生物信息学方法预测miR-200b的靶基因,并使用免疫蛋白印迹实验对靶基因的表达进... 目的探讨miR-200b对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响及其可能的分子机制。方法利用荧光实时定量PCR检测人乳腺癌组织及乳腺癌细胞株中miR-200b的表达差异;利用生物信息学方法预测miR-200b的靶基因,并使用免疫蛋白印迹实验对靶基因的表达进行验证;分别将miR-200b siRNA、PDCD4 mimics以及相应对照miRNA转染MCF-7细胞,通过CCK-8实验检测细胞的增殖能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果miR-200b在乳腺癌组织中呈低表达水平,进一步抑制miR-200b的表达,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力显著增强(P<0.05);将miR-200b siRNA、PDCD43′-UTR共转染到乳腺癌MCF-7细胞中,双荧光素酶报告基因结果显示抑制miR-200b的表达后,PDCD4的表达及活性相应上调(P<0.05);同时通过蛋白免疫印迹实验可以发现,抑制miR-200b表达后,PDCD4蛋白表达含量降低,乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显增强(P<0.05);而过表达PDCD4后PDCD4蛋白表达含量增加(P<0.05),乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论miR-200b可靶向上调PDCD4基因的表达,从而抑制乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力。 展开更多
关键词 miR-200b 乳腺癌 PDCD4 增殖 侵袭 基因治疗
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腺病毒介导的B结构域缺失的人凝血因子Ⅷ在SD大鼠ADSC中的表达 认领
8
作者 朱益文 谢燕燕 +3 位作者 王馨 李杰 王霖虹 闫振宇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期948-955,共8页
目的:将一含B结构域缺失的人凝血因子Ⅷ的重组腺病毒载体体外转染SD大鼠脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cell,ADSC),为ADSC联合BDDhFⅧ基因治疗血友病A奠定实验基础。方法:取SD大鼠2侧腹股沟脂肪组织分离培养ADSC,传至第3代并... 目的:将一含B结构域缺失的人凝血因子Ⅷ的重组腺病毒载体体外转染SD大鼠脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cell,ADSC),为ADSC联合BDDhFⅧ基因治疗血友病A奠定实验基础。方法:取SD大鼠2侧腹股沟脂肪组织分离培养ADSC,传至第3代并进行鉴定;用重组腺病毒载体Ad-BDDhFⅧ-GFP体外感染第3代ADSC,实验分为Ad-BDDhFⅧ-GFP转染ADSC(A组)、Ad-GFP转染ADSC(B组)及未转染ADSC(C组)3组,采用CCK-8法检测3组感染后细胞增殖情况,ELISA法检测细胞上清中hFⅧ抗原表达水平,RT-PCR及Western blot分别检测感染后3组细胞内BDDhFⅧ基因和蛋白表达情况。结果:经鉴定分离培养的第3代细胞生长曲线呈倒"S"形;流式细胞术检测显示,第3代细胞CD29、CD90、CD44表达阳性、CD45表达阴性;经成脂及成骨诱导后可向成骨及成脂方向转化。CCK-8检测显示,转染后3组细胞的增殖未受影响。ELISA结果显示,转染后3组细胞在72 h A组hFⅧAg表达较B、C组明显升高(P<0.05)。RT-PCR结果显示,与A组相比,B、C组未见任何目的条带,无BDDhFⅧ目的基因表达;A组结果与扩增片段长度相符,有BDDhFⅧ目的基因表达。Western blot检测显示,A组hFⅧ蛋白表达水平较B、C组明显升高(P<0.05)。结论:重组腺病毒Ad-BDDhFⅧ-GFP在体外可高效转染大鼠ADSC,为血友病A的基因治疗奠定了实验基础。 展开更多
关键词 血友病A 脂肪干细胞 腺病毒载体 基因治疗
血红素加氧酶-1基因过表达对脊髓神经元损伤的保护作用 认领
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作者 林文平 黄晶 +2 位作者 贺旭 陈文凯 吴世龙 《中国骨与关节损伤杂志》 2020年第5期473-476,共4页
目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)基因过表达对脊髓神经元损伤的保护作用。方法利用腺相关病毒(AAV)构建HO-1过表达载体,运用免疫荧光标记神经元特异性标志物鉴定原代脊髓神经元,比较正常培养(对照组)、磷酸缓冲盐溶液(PBS)+H2O2(单纯损伤... 目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)基因过表达对脊髓神经元损伤的保护作用。方法利用腺相关病毒(AAV)构建HO-1过表达载体,运用免疫荧光标记神经元特异性标志物鉴定原代脊髓神经元,比较正常培养(对照组)、磷酸缓冲盐溶液(PBS)+H2O2(单纯损伤组)、PBS+AAV-EGFP+H2O2(AAV-EGFP组)、PBS+AAV-HO-1+H2O2(AAV-HO-1组)的HO-1、IL-6、TNF-α的蛋白表达与神经凋亡情况。结果HO-1重组腺相关病毒基因测序结果表明,获得的克隆片段和目的基因的DNA序列完全一致。β-tubulin-Ⅲ标记神经元,DAPI用于核定位呈现蓝色,其他细胞不显色。AAV-HO-1组HO-1蛋白表达比对照组高,单纯损伤组、AAV-EGFP组、AAV-HO-1组IL-6蛋白与TNF-α蛋白表达比对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),单纯损伤组、AAV-EGFP组IL-6蛋白与TNF-α蛋白表达比AAV-HO-1组高差异有统计学意义(P<0.05)。单纯损伤组与AAV-EGFP组比较细胞凋亡水平差异没有统计学意义(P>0.05)。AAV-HO-1组的细胞凋亡比单纯损伤组和AAV-EGFP组的细胞凋亡比例小,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达HO-1通过抑制炎症反应减少氧化应激损伤后细胞凋亡,对原代大鼠脊髓神经元氧化应激损伤起保护作用。 展开更多
关键词 血红素加氧酶-1 脊髓神经元 基因治疗
反义寡核苷酸药物在精准治疗中的应用进展及其作用机制 认领
10
作者 周海燕 《精准医学杂志》 2020年第4期283-286,291,共5页
反义寡核苷酸是一类新的基因靶向药物。随着基因组学与新一代基因测序技术的发展,以及各种新的核苷酸合成技术的出现,反义寡核苷酸药物在转化医学与精准医学中的应用取得了飞速的发展。该类药物为很多过去无法治疗的疾病提供了全新的治... 反义寡核苷酸是一类新的基因靶向药物。随着基因组学与新一代基因测序技术的发展,以及各种新的核苷酸合成技术的出现,反义寡核苷酸药物在转化医学与精准医学中的应用取得了飞速的发展。该类药物为很多过去无法治疗的疾病提供了全新的治疗策略。本文以目前上市的几种代表性药物为例,集中阐释反义寡核苷酸药物在相关疾病治疗中的主要应用进展及作用机制,同时对该类药物开发中亟待解决的问题进行了分析。 展开更多
关键词 寡核苷酸类 反义 遗传性疾病 先天性 基因治疗 基因修复 分子靶向治疗 精准医学
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治疗杜兴肌肉萎缩症的新药及其开发 认领
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作者 卜鑫珏 奚鑫 +1 位作者 刘松青 杜倩 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期165-169,共5页
杜兴肌肉萎缩症(DMD)是由抗肌萎缩(dystrophin)蛋白基因发生突变导致的一种进行性、致死性的疾病,患者多为男性,治疗过程涉及多学科、多专业。目前糖皮质激素治疗是应用最广泛的治疗方法,但该方法并不能恢复肌肉中dystrophin蛋白表达,... 杜兴肌肉萎缩症(DMD)是由抗肌萎缩(dystrophin)蛋白基因发生突变导致的一种进行性、致死性的疾病,患者多为男性,治疗过程涉及多学科、多专业。目前糖皮质激素治疗是应用最广泛的治疗方法,但该方法并不能恢复肌肉中dystrophin蛋白表达,因此治疗效果有限。近年来,随着治疗技术的发展,基因治疗取得了丰硕的成果,是该病目前唯一有效的根治方法,并且已有新药上市。本文对糖皮质类激素治疗和基因治疗的研究进展等加以阐述。 展开更多
关键词 抗肌萎缩蛋白 基因治疗 杜兴肌肉萎缩症 地氟可特
超声微泡在乳腺癌基因治疗中的研究进展 认领
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作者 赖晓舒 徐金锋 《影像研究与医学应用》 2020年第6期1-2,共2页
乳腺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,成为女性疾病致死的首要病因。近年来,随着超声造影技术的不断发展,超声微泡介导基因治疗成为当前肿瘤治疗的研究热点之一,有望成为一种新型的肿瘤治疗方法。本文将针对超声微泡在乳腺癌基因治... 乳腺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,成为女性疾病致死的首要病因。近年来,随着超声造影技术的不断发展,超声微泡介导基因治疗成为当前肿瘤治疗的研究热点之一,有望成为一种新型的肿瘤治疗方法。本文将针对超声微泡在乳腺癌基因治疗中的研究现状作一综述。 展开更多
关键词 超声微泡 乳腺癌 基因治疗
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生物起搏器:从生物实验到计算机模拟 认领
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作者 Yacong LI Kuanquan WANG +1 位作者 Qince LI Henggui ZHANG 《浙江大学学报:B卷英文版》 SCIE CAS CSCD 2020年第7期524-536,共13页
起搏功能障碍已成为威胁人类健康的一种重大疾病,严重时可能导致心律失常、晕厥,甚至死亡。到目前为止,治疗起搏功能障碍的最佳方案是植入电子起搏器。但是它存在一些缺点,例如电池寿命有限,手术过程具有感染的风险,起搏频率单一等。因... 起搏功能障碍已成为威胁人类健康的一种重大疾病,严重时可能导致心律失常、晕厥,甚至死亡。到目前为止,治疗起搏功能障碍的最佳方案是植入电子起搏器。但是它存在一些缺点,例如电池寿命有限,手术过程具有感染的风险,起搏频率单一等。因此,对生物起搏器的研究显得尤为迫切。生物起搏器不但引起并发症的风险较低,而且能够对生理情绪做出反应,从而有望替代电子起搏器,进行心脏起搏障碍治疗。本文从生物实验和计算机模拟两方面对生物起搏器的发展进行综述。前者主要包括基因疗法和细胞疗法的实验成果,而后者介绍了多尺度的心脏建模从单个细胞到组织切片进行起搏器研究的进展。迄今为止,生物起搏器已被应用于大型哺乳动物实验,但将其应用于临床心脏病治疗,仍有很长的路要走。利用计算机模型对生物起搏器诱发过程进行建模,有望加速研究进程。在本文中,我们首先回顾了生物起搏器实验研究的发展,然后介绍了生物起搏器计算机模型的目前的相关工作。最后,我们提出了基于心脏计算机模型研究生物起搏器的潜在研究方向。 展开更多
关键词 生物起搏器 基因治疗 细胞治疗 心脏模拟 计算机模型
Alipogene Tiparvovec基因治疗家族脂肪酶缺陷症的现状 认领
14
作者 全海燕 江兴 《中南医学科学杂志》 CAS 2020年第4期443-446,共4页
基因治疗目前主要用于治疗免疫缺陷性疾病、肿瘤及心血管疾病等。脂蛋白脂肪酶缺乏症(LPLD)是一种罕见的染色体隐性遗传病,主要由严重的高血脂和高甘油三酯血症引起。Alipogene Tiparvovec(Glybera,AMT-011,AAV1-LPLS447X)于2012年11月... 基因治疗目前主要用于治疗免疫缺陷性疾病、肿瘤及心血管疾病等。脂蛋白脂肪酶缺乏症(LPLD)是一种罕见的染色体隐性遗传病,主要由严重的高血脂和高甘油三酯血症引起。Alipogene Tiparvovec(Glybera,AMT-011,AAV1-LPLS447X)于2012年11月获欧盟委员会批准,成为西方国家首个上市的基因治疗药物。同时,也是第一个用于治疗LPLD导致胰腺炎的药物。Alipogene Tiparvovec基因治疗一般耐受性良好,不良反应主要是短暂的注射部位的局部反应。本文就基因治疗药物Alipogene Tiparvovec用于治疗青少年脂蛋白脂肪酶缺陷症的药效学、临床研究及其现状做一介绍。 展开更多
关键词 Alipogene Tiparvovec 脂蛋白脂肪酶缺乏症 基因治疗 临床研究
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基因治疗制品质量分析专栏 认领
15
作者 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-3,共3页
基因治疗是应用DNA重组技术、基因编辑技术等发展起来的最具革命性的医疗技术之一,它是以遗传物质为基础的生物医学治疗手段。基因治疗最初用于单基因遗传性疾病的治疗,如镰型细胞贫血症、血友病等,现已扩展到多种疾病的临床研究,如癌... 基因治疗是应用DNA重组技术、基因编辑技术等发展起来的最具革命性的医疗技术之一,它是以遗传物质为基础的生物医学治疗手段。基因治疗最初用于单基因遗传性疾病的治疗,如镰型细胞贫血症、血友病等,现已扩展到多种疾病的临床研究,如癌症、感染性疾病、心血管疾病、自身免疫病和代谢性疾病等。基因治疗经过近30年的曲折发展,在重大疾病的治疗方面已显露出了独特优势。 展开更多
关键词 基因治疗 制品质量
腺相关病毒包装条件优化及重组AAV8/hFⅧ基因治疗血友病A小鼠的实验研究 认领
16
作者 毛建华 沈艳 +3 位作者 王嫱 王韵 阮铮 奚晓东 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期34-39,共6页
目的评价携带人凝血因子FⅧ(hFⅧ)的重组腺相关病毒(AAV)血清型8(AAV8/hFⅧ)病毒治疗血友病A(HA)小鼠效果。方法应用pAAV-CB-EGFP,pH22(AAV2血清型)和pfΔ6(腺病毒辅助质粒)摸索在HEK-293细胞中AAV的包装条件,pH22、pfΔ6及pAAV-CB-EGF... 目的评价携带人凝血因子FⅧ(hFⅧ)的重组腺相关病毒(AAV)血清型8(AAV8/hFⅧ)病毒治疗血友病A(HA)小鼠效果。方法应用pAAV-CB-EGFP,pH22(AAV2血清型)和pfΔ6(腺病毒辅助质粒)摸索在HEK-293细胞中AAV的包装条件,pH22、pfΔ6及pAAV-CB-EGFP质粒按照1∶1∶1的比例进行转染,免疫荧光显微镜观察四个条件(包括10 cm培养皿转10μg质粒,20 cm培养皿分别转20、30和40μg质粒)的病毒包装效果。应用最佳包装条件在HEK-293细胞中包装AAV2-EGFP,通过冻融法获得AAV2粗提液,感染HEK-293细胞和16095细胞,应用荧光显微镜观察包装效果。应用最佳转染条件将pAAV-TTR-hFⅧ、pH28、pfΔ6按1∶1∶1的比例转染HEK-293细胞获得AAV8/hFⅧ,两轮的氯化铯梯度离心法纯化病毒,以8×10^12 vg/kg剂量经尾静脉注射HA小鼠进行基因治疗,活化部分凝血活酶时间(APTT)测定分析FⅧ的活性。结果20 cm培养皿转染20μg质粒的条件能够在24、48和72 h都达到最佳的转染效果,且该条件包装的AAV2粗提液在16095细胞中具有较高的感染率。HA小鼠体内AAV8/hFⅧ能够在注射后12周仍有维持在治疗水平的FⅧ活性。结论利用优化包装条件制备的AAV8/hFⅧ能够在HA小鼠体内有效维持治疗水平的FⅧ活性达12周。 展开更多
关键词 腺相关病毒 人凝血因子FⅧ 血友病A 基因治疗
携带IL-2/NK4双基因减毒沙门氏菌TPIN的遗传稳定性研究 认领
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作者 蒋如如 魏静 +1 位作者 李欣 哈小琴 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第3期33-40,共8页
对携带IL-2/NK4双基因减毒沙门氏菌TPIN的遗传稳定性进行研究。将TPIN连续传40代,取10代、20代、30代、40代菌落进行鉴定,包括菌落和菌体的形态、质粒的纯度和浓度、目的基因片段、双酶切结果及转染人肝癌细胞(HepG2)后目的基因体外表... 对携带IL-2/NK4双基因减毒沙门氏菌TPIN的遗传稳定性进行研究。将TPIN连续传40代,取10代、20代、30代、40代菌落进行鉴定,包括菌落和菌体的形态、质粒的纯度和浓度、目的基因片段、双酶切结果及转染人肝癌细胞(HepG2)后目的基因体外表达活性。结果表明,每10代的菌落和菌体形态一致,其所含质粒的纯度和浓度在传代过程中无明显变化,PCR扩增的目的基因条带大小一致,双酶切鉴定结果正确,转染HepG2细胞后,每代间所表达目的蛋白浓度无明显差异。TPIN作为消化道肿瘤的生物治疗药物,在遗传方面有较好的稳定性,可进一步进行大量生产。 展开更多
关键词 基因治疗 减毒沙门氏菌 遗传稳定性 IL-2基因 NK4基因
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临床前研究中内皮集落形成细胞的治疗作用 认领
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作者 李洁(综述) 李海霞(综述) +1 位作者 阎春生(审校) 哈小琴(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第7期829-831,836,共4页
内皮集落形成细胞(endothelial colony forming cell,ECFC)具有克隆潜力,能够在体内外生成成熟的内皮细胞,促进血管形成,可作为损伤组织血运重建的手段,应用前景良好。且ECFC具有可从外周血中无创分离和扩增、细胞培养时基因组稳定及操... 内皮集落形成细胞(endothelial colony forming cell,ECFC)具有克隆潜力,能够在体内外生成成熟的内皮细胞,促进血管形成,可作为损伤组织血运重建的手段,应用前景良好。且ECFC具有可从外周血中无创分离和扩增、细胞培养时基因组稳定及操作简易等优点。本文就ECFC在临床前研究中细胞治疗(血管形成机制、旁分泌机制、外泌体机制)和基因治疗(血友病A、血管性血友病、贫血、癌症)方面的作用作一综述。 展开更多
关键词 内皮集落形成细胞 内皮祖细胞 血管再生 细胞治疗 基因治疗
昆虫杆状病毒表达载体系统关键技术及应用研究进展 认领
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作者 吴清胜 李媛媛 《国际病毒学杂志》 2020年第4期348-352,共5页
昆虫杆状病毒表达载体系统是基于昆虫杆状病毒及其宿主细胞建立的真核表达体系,具有安全性高、重组蛋白表达水平高、能同时表达多个基因,可对重组蛋白进行正确折叠和翻译后修饰等优势,主要应用于预防性及治疗性疫苗和基因治疗药物的研... 昆虫杆状病毒表达载体系统是基于昆虫杆状病毒及其宿主细胞建立的真核表达体系,具有安全性高、重组蛋白表达水平高、能同时表达多个基因,可对重组蛋白进行正确折叠和翻译后修饰等优势,主要应用于预防性及治疗性疫苗和基因治疗药物的研发及生产。本文对该载体系统的关键技术及应用进展作一综述。 展开更多
关键词 昆虫细胞 杆状病毒 培养工艺 重组蛋白 基因治疗
单基因遗传性皮肤病研究的历史、现状与展望 认领
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作者 杨勇 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期244-247,共4页
单基因遗传性皮肤病包括近1000种表型不同的疾病,其病因及发病机制研究在近30年中取得很多重大进展,我国皮肤科专家也在其中发挥了重要作用。随着技术的进步,基因检测现已成为明确诊断的常规手段,发现和探明新型和重要单基因遗传性皮肤... 单基因遗传性皮肤病包括近1000种表型不同的疾病,其病因及发病机制研究在近30年中取得很多重大进展,我国皮肤科专家也在其中发挥了重要作用。随着技术的进步,基因检测现已成为明确诊断的常规手段,发现和探明新型和重要单基因遗传性皮肤病的机会在逐渐减少,本领域研究的重心将逐步过渡到非经典的遗传性皮肤病及基因治疗。 展开更多
关键词 遗传性疾病 先天性 皮肤疾病 DNA突变分析 基因诊断 基因治疗
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