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家蝇三龄幼虫Mdctl基因原核表达及生物信息学分析 认领
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作者 常振策 李忠旬 +3 位作者 贾利娜 修江帆 国果 吴建伟 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第2期145-150,共6页
目的:构建家蝇C型凝集素基因(Mdctl)原核表达体系,对Mdctl基因及编码蛋白进行生物信息学分析。方法:采用生物信息学方法,分析Mdctl基因及编码蛋白;将构建的pET28a(+)/Mdctl重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21-DE3中,以异丙基硫代半乳糖苷(I... 目的:构建家蝇C型凝集素基因(Mdctl)原核表达体系,对Mdctl基因及编码蛋白进行生物信息学分析。方法:采用生物信息学方法,分析Mdctl基因及编码蛋白;将构建的pET28a(+)/Mdctl重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21-DE3中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白并通过SDS-PAGE对表达产物进行分析;Ni-IDA法纯化重组蛋白,Western-Blot对其鉴定。结果:生物信息学分析显示,Mdctl基因开放阅读框全长333 bp,共编码110个氨基酸,理论分子量为13.13 kDa,等电点为4.49,信号肽位于1~22位氨基酸之间;Mdctl蛋白中存在Clect结构域,属于C型凝集素超家族;Mdctl重组蛋白在大肠杆菌BL21-DE3中主要以包涵体形式表达,重组蛋白的相对分子质量与Mdctl蛋白两端融合6×His标签后的总分子量相一致。结论:成功构建Mdctl原核表达系统,并获得重组蛋白。 展开更多
关键词 家蝇 Mdctl基因 原核表达 蛋白纯化 生物信息学 基因表达
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烟草BELL基因家族鉴定及其温室条件下的表达模式分析 认领
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作者 宋卫娜 赵森森 +6 位作者 武明珠 王根发 罗朝鹏 王晨 李泽锋 杨军 王中 《烟草科技》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-11,共11页
BELL基因是植物中普遍存在的一类基因,其编码的同源异型结构域转录因子参与调控了植物叶片、花序等多个组织的发育过程。为明确烟草BELL基因的结构和功能,通过同源序列比对和功能域分析鉴定了普通烟草BELL基因,结合系统进化和基因表达... BELL基因是植物中普遍存在的一类基因,其编码的同源异型结构域转录因子参与调控了植物叶片、花序等多个组织的发育过程。为明确烟草BELL基因的结构和功能,通过同源序列比对和功能域分析鉴定了普通烟草BELL基因,结合系统进化和基因表达模式分析对烟草BELL基因的功能进行了初步预测。结果表明,从普通烟草基因组中共鉴定出28个NtBELLs基因,分布于15条不同的染色体上。系统进化分析表明,烟草NtBELLs基因可分为4组,每组参与调控烟草不同的发育过程。NtBELLs基因在6个烟草组织中呈现不同的表达模式,且具有明显的组织特异性。干旱和盐胁迫能显著诱导部分NtBELLs基因的表达,表明该基因家族可能参与了植物抵御非生物胁迫的过程。 展开更多
关键词 烟草 BEL1-like基因家族 基因结构 系统发育 基因表达
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LHR、PRLR基因在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达与定位 认领
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作者 马富龙 褚敏 +6 位作者 常永芳 包鹏甲 郭宪 Qudratullah Kalwar 马启财 潘和平 阎萍 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期672-680,共9页
促黄体素受体(luteinizing hormone receptor, LHR)和催乳素受体(prolactin receptor, PRLR)基因在哺乳动物生殖发育中扮演着重要角色,广泛存在于各种组织。为分析不同年龄牦牛(Bos grunniens)睾丸组织中LHR、PRLR基因表达的变化模式,... 促黄体素受体(luteinizing hormone receptor, LHR)和催乳素受体(prolactin receptor, PRLR)基因在哺乳动物生殖发育中扮演着重要角色,广泛存在于各种组织。为分析不同年龄牦牛(Bos grunniens)睾丸组织中LHR、PRLR基因表达的变化模式,并探究其在成年期牦牛不同器官中的表达差异,分别采集幼年期(6月龄)、初情期(24月龄)、性成熟期(36月龄)、成年期(72月龄)牦牛睾丸组织和72月龄公牦牛的肾脏、肝脏、肺脏、心脏、脾脏、骨骼肌等器官组织。采用qRT-PCR技术检测不同发育时期牦牛睾丸组织和成年牦牛不同器官组织中LHR、PRLR mRNA表达水平,并采用免疫组织化学技术研究不同发育期牦牛睾丸组织的LHR、PRLR蛋白表达定位。结果显示,LHR、PRLR基因在牦牛睾丸组织中的表达量从幼年期到性成熟期极显著增加(P<0.01),成年期与性成熟期差异不显著。成年牦牛不同器官组织LHR基因在睾丸组织中的表达水平高于在肾脏、骨骼肌和肺脏组织中的表达水平(P<0.05),PRLR基因在肾脏的表达量最高,其次为骨骼肌、睾丸和脾脏(P<0.05)。LHR、PRLR免疫阳性标记定位于睾丸支持细胞、间质细胞、初级精母细胞和次级精母细胞,其在细胞中的阳性信号从幼年期到性成熟期逐渐增强,成年期趋于稳定,蛋白表达趋势与mRNA基本相符。说明睾丸组织中LHR、PRLR可能在精子成熟过程中发挥作用并参与间质细胞的生物学功能,LHR还可能参与调节其他非性腺组织的发育。上述研究结果为揭示牦牛睾丸发育与生殖调控的分子机制提供重要理论依据。 展开更多
关键词 牦牛 睾丸 促黄体素受体基因 催乳素受体基因 基因表达 蛋白定位
柳树NAC基因的克隆与表达模式分析 认领
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作者 田雪瑶 周洁 +2 位作者 王保松 何开跃 何旭东 《南京林业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期119-124,共6页
【目的】研究柳树重要抗逆转录因子基因家族,为揭示柳树抗逆分子机制提供理论依据。【方法】以‘苏柳2345'的转录组测序数据为基础,克隆了柳树NAC家族,并分析其序列结构、组织表达特异性以及不同胁迫条件下的表达模式。【结果】克... 【目的】研究柳树重要抗逆转录因子基因家族,为揭示柳树抗逆分子机制提供理论依据。【方法】以‘苏柳2345'的转录组测序数据为基础,克隆了柳树NAC家族,并分析其序列结构、组织表达特异性以及不同胁迫条件下的表达模式。【结果】克隆的两个柳树NAC转录因子基因分别命名为SlNAC1和SlNAC2。生物信息学分析表明:SlNAC1序列全长为1126 bp,编码产物含343个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于细胞核;SlNAC2序列全长为1139 bp,编码产物含291个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于叶绿体。两个基因均具有典型的NAM结构域及A、B、C、D、E 5个亚结构域,还包括共同的LPPG、YPNG和DEE保守基序及NAC抑制结构域。系统进化树分析显示,SlNAC1基因与木薯亲缘关系最近,SlNAC2基因与茄子亲缘关系最近。定量PCR结果显示SlNAC1和SlNAC2均在叶片表达,根中没有表达,为叶片特异性转录因子。定量PCR结果显示SlNAC1基因在脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)处理24 h后显著上调,SlNAC2基因在聚乙二醇(PEG)、ABA和GA胁迫后显著上调。【结论】柳树SlNAC1基因在非生物胁迫下表达较为稳定,受ABA和GA胁迫诱导;SlNAC2受干旱、ABA和GA胁迫诱导,受影响明显高于SlNAC1,不受乙烯剂(ETH)胁迫影响。推测SlNAC1和SlNAC2参与GA、ABA信号传导,可能不参与ETH的信号途径。 展开更多
关键词 柳树 NAC基因家族 基因克隆 基因表达
柑橘属SAUR基因家族的全基因组鉴定及表达分析 认领
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作者 王福生 余洪 +4 位作者 胡洲 管德龙 张盼 朱世平 赵晓春 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期23-40,共18页
分析SAUR(Small auxin up-regulated RNA)基因家族在不同柑橘基因组中的数量、连锁群分布、基因结构、系统进化、基因表达模式等,从香橼、柚、莽山野橘和克里曼丁橘等基因组中分别鉴定到69、62、58和70个SAUR基因。SAUR在基因组上分布不... 分析SAUR(Small auxin up-regulated RNA)基因家族在不同柑橘基因组中的数量、连锁群分布、基因结构、系统进化、基因表达模式等,从香橼、柚、莽山野橘和克里曼丁橘等基因组中分别鉴定到69、62、58和70个SAUR基因。SAUR在基因组上分布不均,呈现明显的串联重复现象,基因家族成员的差异可能是由于串联重复和染色体大片段复制引起。大多数柑橘SAUR基因不含内含子,含有SAUR特有的4个保守motif。系统进化树分析显示,来源于拟南芥、水稻、番茄、马铃薯和柑橘的629个SAUR基因分为9组,每一组都含有5个物种的家族成员,并且同一个物种的SAUR基因具有较近的遗传距离。顺式元件分析表明,CclSAUR基因家族成员的上游序列含有光响应、转录因子结合、激素响应、伤害响应、低温响应、玉米素代谢和类黄酮生物合成相关的元件。q RT-PCR分析结果显示,大多数CclSAUR都能响应外源IAA和低温处理。 展开更多
关键词 柑橘属 SAUR基因家族 基因表达 基因组鉴定
斑节对虾胸腺素β5的克隆、表达与功能分析 认领
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作者 陈鸣 赵超 +4 位作者 范嗣刚 王鹏飞 闫路路 王芳 邱丽华 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期383-392,共10页
β-胸腺素(β-thymosin)是一类高度保守的功能多肽,在伤口愈合、血管生成、抗菌和抗病毒免疫等生理活动中起重要的调控作用。本研究从斑节对虾(Penaeus monodon)中成功克隆了一种β-thymosin cDNA序列(β-thymosin 5),其全长为1495 bp,... β-胸腺素(β-thymosin)是一类高度保守的功能多肽,在伤口愈合、血管生成、抗菌和抗病毒免疫等生理活动中起重要的调控作用。本研究从斑节对虾(Penaeus monodon)中成功克隆了一种β-thymosin cDNA序列(β-thymosin 5),其全长为1495 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)为615 bp,编码204个氨基酸。多重序列比对和系统进化树分析结果表明Pmβ5与对虾属的日本囊对虾(Penaeus japonicus)和凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)的胸腺素β5聚为一支,其中与日本囊对虾的胸腺素β5同源性最高,相似性高达77%。组织分布研究显示Pmβ5 mRNA在肝胰腺和淋巴等免疫相关组织中的表达量明显高于其他组织。在灭活的副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)刺激下,Pmβ5基因的表达量显著升高(P<0.05),这说明Pmβ5参与了对虾的抗菌免疫反应。此外,用原核表达技术获得了Pmβ5的体外重组蛋白,抗菌实验(牛津杯法)检测证明,Pmβ5对哈维氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和枯草芽孢杆菌均有抗菌活性。 展开更多
关键词 斑节对虾 β-thymosin 基因表达 原核表达 抗菌活性
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海洋创伤弧菌反式翻译系统关键因子SmpB基因的克隆及原核表达 认领
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作者 刘鹏 岑妍慧 +4 位作者 林江 梁忠秀 兰太进 韩丝银 陈振兴 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期100-106,共7页
创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种重要的"人鱼共患病"病原菌。通过克隆创伤弧菌反式翻译系统核心因子小蛋白B(Small molecular protein B,SmpB)基因,构建携带目的基因的原核表达质粒,为后续研究SmpB蛋白的互作网络、SmpB蛋... 创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种重要的"人鱼共患病"病原菌。通过克隆创伤弧菌反式翻译系统核心因子小蛋白B(Small molecular protein B,SmpB)基因,构建携带目的基因的原核表达质粒,为后续研究SmpB蛋白的互作网络、SmpB蛋白与创伤弧菌致病性之间的关系并以此开发新型的抑菌靶标奠定基础。使用LiCl沉淀法提取创伤弧菌基因组DNA,以它为模板,PCR扩增目的基因,并构建到pET-28a原核表达载体上测序鉴定后对SmpB序列进行生物信息学分析,将正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定。结果表明使用LiCl沉淀法成功提取到高质量创伤弧菌基因组DNA,以其为模板,扩增到smpB基因,并成功构建pET-28a原核表达重组质粒,测序鉴定正确;smpB基因全长为486 bp,编码161个氨基酸,分子量为18.41 kD,理论等电点为10.28,不稳定系数为35.02,总平均亲水性为-0.635,SmpB蛋白整体表现为稳定亲水性蛋白。生物信息学分析显示其高级结构核心部分为5个β折叠组成的桶状结构,外围由3个α螺旋组成,SmpB C-端亦为α螺旋。诱导表达的重组融合蛋白相对分子质量大小在25.0 kD附近,显示在E.coli中成功表达了SmpB蛋白。 展开更多
关键词 创伤弧菌 小蛋白B 原核表达质粒构建 基因表达
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茶叶CHS基因表达特性及其与儿茶素积累的关系 认领
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作者 施婧 张雪 +3 位作者 张媛媛 林晓蓉 李斌 陈忠正 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第5期101-106,112共7页
本研究用高效液相色谱法(HPLC)测定两种茶叶的儿茶素含量,通过RT-PCR克隆英红9号(YH)和南昆山毛叶茶(MY)的CHS基因进行比对分析,借助烟草瞬时表达技术对基因表达蛋白进行亚细胞定位;结合生物信息学分析选取特定肽段经人工合成后作为抗... 本研究用高效液相色谱法(HPLC)测定两种茶叶的儿茶素含量,通过RT-PCR克隆英红9号(YH)和南昆山毛叶茶(MY)的CHS基因进行比对分析,借助烟草瞬时表达技术对基因表达蛋白进行亚细胞定位;结合生物信息学分析选取特定肽段经人工合成后作为抗原制备CHS基因特异抗体;用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和Western blot技术测定比较两种茶叶CHS基因在转录、翻译水平的差异,并对比分析了两种茶叶间儿茶素含量差异与相应CHS基因表达的关系。结果表明:YH和MY中的儿茶素含量分别为181.51 mg/g和106.02 mg/g,前者显著高于后者并达到1.71倍;两种茶叶中所克隆的CHS基因具有单核苷酸差异但编码相同的氨基酸序列,其表达蛋白亚细胞定位于细胞质、细胞膜和细胞核;制备的CHS蛋白兔源抗体效价为1∶80000;CHS基因在YH中的表达无论在转录水平还是在翻译水平均显著高于MY,前者分别是后者的3.9倍和1.7倍,两种茶叶中CHS合成酶基因在转录、翻译水平的表达均与其对应的儿茶素积累水平一致。实验研究证明,茶叶儿茶素积累水平与其合成通路关键酶基因CHS的表达呈正相关。 展开更多
关键词 茶叶 儿茶素 查尔酮合成酶 基因表达 蛋白表达
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合浦珠母贝丝氨酸蛋白酶抑制因子基因pfser1克隆与表达 认领
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作者 陈爽 梁健 张荣庆 《广东海洋大学学报》 CAS 2020年第1期1-7,共7页
【目的】克隆合浦珠母贝(Pinctada fucata)丝氨酸蛋白酶抑制因子pfser1基因,探讨该基因的组织表达及其在天然免疫过程中的作用,以及与生物矿化过程的关系。【方法】通过RACE技术获得pfser1基因的全长,通过生物信息学分析其序列结构特征... 【目的】克隆合浦珠母贝(Pinctada fucata)丝氨酸蛋白酶抑制因子pfser1基因,探讨该基因的组织表达及其在天然免疫过程中的作用,以及与生物矿化过程的关系。【方法】通过RACE技术获得pfser1基因的全长,通过生物信息学分析其序列结构特征,利用实时荧光定量PCR方法检测pfser1基因在不同组织中的表达,检测健康合浦珠母贝在被大肠杆菌(Escherichia coli)MG1655刺激后和在贝壳损伤修复实验中pfser1基因表达量的变化。【结果】合浦珠母贝pfser1基因cDNA全长为1240 bp,包含1035 bp的开放阅读框(ORF),编码344个氨基酸,氨基酸序列的功能结构域含有丝氨酸蛋白酶抑制因子Serpin家族保守结构域。pfser1基因在合浦珠母贝各个组织中均有表达,在外套膜边缘膜中表达量最高;大肠杆菌MG1655刺激后,该基因表达量显著升高;在贝壳损伤修复过程中,pfser1基因表达先升高后受到抑制。【结论】pfser1基因所表达的蛋白参与了合浦珠母贝的天然免疫应答过程,并与生物矿化过程有一定关系。 展开更多
关键词 合浦珠母贝 丝氨酸蛋白酶抑制因子 基因克隆 基因表达 天然免疫
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桂花OfFCA基因的克隆及在花芽分化时期的表达分析 认领
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作者 吴琪 吴鸿飞 +4 位作者 周敏舒 徐倩霞 杨丽媛 赵宏波 董彬 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期195-200,共6页
【目的】桂花Osmanthus fragrans是著名的香化植物,其花芽分化受到环境温度影响。研究环境温度对桂花花芽分化的影响对桂花的花期调控具有重要的指导意义。【方法】以桂花品种‘堰虹桂’O.fragrans‘Yanhonggui’为材料,采用石蜡切片观... 【目的】桂花Osmanthus fragrans是著名的香化植物,其花芽分化受到环境温度影响。研究环境温度对桂花花芽分化的影响对桂花的花期调控具有重要的指导意义。【方法】以桂花品种‘堰虹桂’O.fragrans‘Yanhonggui’为材料,采用石蜡切片观察其花芽分化进程,运用聚合酶链式反应和实时荧光定量技术对影响温度FCA(FLOWERING LOCUS CA)基因分别进行克隆及表达特异性分析。【结果】克隆得到OfFCA cDNA序列长为1319 bp,其开放阅读框为864 bp,编码287个氨基酸。序列比对及进化分析发现:OfFCA与木犀科Oleaceae油橄榄Olea europaea和胡麻科Pedaliaceae芝麻Sesamum indicum的FCA相似度较高,同源性可达68%以上。在桂花花芽分化的不同时期,无论叶还是花芽中,19℃环境低温下OfFCA基因的表达水平均显著高于25℃常温生长条件下的表达水平。【结论】桂花OfFCA基因响应环境相对低温的变化,参与桂花的花芽分化,使桂花的花期提前。 展开更多
关键词 林木育种学 桂花 FCA基因 花芽分化 基因表达
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巨桉EgrBBX基因家族鉴定及其在非生物逆境处理下的表达分析 认领
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作者 杨宁 从青 +2 位作者 王晓荣 倪晓祥 程龙军 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期658-671,共14页
BBX (B-box)蛋白是锌指结构转录因子蛋白家族的一个亚家族,广泛参与植物的生长和发育,在非生物逆境响应中也具有重要作用。桉树(Eucalyptus)是我国南方用材树种,但其抗逆性较差,限制了桉树栽培范围的扩大和栽培效益提高。为丰富桉树抗... BBX (B-box)蛋白是锌指结构转录因子蛋白家族的一个亚家族,广泛参与植物的生长和发育,在非生物逆境响应中也具有重要作用。桉树(Eucalyptus)是我国南方用材树种,但其抗逆性较差,限制了桉树栽培范围的扩大和栽培效益提高。为丰富桉树抗逆基因资源,给桉树抗逆分子辅助育种提供参考依据,本研究从巨桉(Eucalyptus grandis)全基因组范围内搜寻并鉴定出21个BBX基因家族成员,利用mg2c、Protparam、MEGA和PlantCARE软件进行染色体分布、序列结构特征以及启动子上顺式作用元件的种类和分布等分析,并对EgrBBX家族基因的组织特异性表达及其在低温、干旱及高盐处理下的表达模式进行qRT-PCR检测分析。结果表明,21个EgrBBX基因分别分布在9条染色体上;编码蛋白序列中含有典型的B1、B2和CCT结构域,可分为B1+B2+CCTⅠ和Ⅱ型、B1+B2、B1+CCT以及B1五个类型。启动子元件分析结果表明,EgrBBX家族基因启动子上除含有大量光响应元件,还含有ABRE (ABA-responsive element)、MBS (MYB binding site)、LTR (low-temperature responsiveness)、HSE (heat-stress responsive element)等非生物逆境响应相关元件。以qRT-PCR方法进行根、茎和叶的组织表达分析表明,EgrBBX1、EgrBBX7、EgrBBX9、EgrBBX13和EgrBBX18主要在叶片中表达,EgrBBX3、EgrBBX6和EgrBBX15在茎中具有相对较高的表达量。在不同时间低温、干旱和高盐的非生物逆境胁迫条件下,大部分EgrBBX基因发生响应:低温处理下EgrBBX4、EgrBBX7、EgrBBX8、EgrBBX14、EgrBBX16和EgrBBX17在整个处理时间周期内均表现为强烈的表达抑制;EgrBBX8、EgrBBX11、EgrBBX12和EgrBBX18在干旱处理1 d即出现明显的上调表达,2 d后该诱导效应减弱或消失;高盐处理下,21个EgrBBX基因中13个在12 h后表达达到峰值,然后逐渐回落。本研究可为深入揭示EgrBBX基因家族在非生物逆境胁迫响应中的具体功能,筛选桉树抗逆性EgrBBX基因资源提供参� 展开更多
关键词 巨桉 BBX(B-box)基因家族 转录因子 基因表达 非生物逆境胁迫响应
忽地笑ABCG5转运蛋白基因(LaABCG5)的克隆和表达分析 认领
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作者 刘彦彤 王蓉 汪仁 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期8-15,27共9页
通过分析忽地笑〔Lycoris aurea(L'Hér.)Herb.〕比较转录组数据,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆到1个ABC转运蛋白基因LaABCG5。LaABCG5基因全长1896 bp,编码631个氨基酸。LaABCG5的理论相对分子质量为70451,理论等电点为p... 通过分析忽地笑〔Lycoris aurea(L'Hér.)Herb.〕比较转录组数据,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆到1个ABC转运蛋白基因LaABCG5。LaABCG5基因全长1896 bp,编码631个氨基酸。LaABCG5的理论相对分子质量为70451,理论等电点为pI 8.37。LaABCG5的二级结构中,α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲的氨基酸所占比例分别为48.81%、13.47%、5.07%和32.65%。聚类分析结果显示:LaABCG5与拟南芥〔Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.〕ABCG5转运蛋白的亲缘关系最近。LaABCG5与海枣(Phoenix dactylifera Linn.)、油棕(Elaeis guineensis Jacq.)、番木瓜(Carica papaya Linn.)、毛果杨(Populus trichocarpa Torr.et Gray)和银白杨(Populus alba Linn.)的ABCG5转运蛋白的同源性在62%~67%之间。qRT-PCR检测结果显示:LaABCG5基因在忽地笑的根、鳞茎、叶片、花瓣和雌蕊中均有表达,其中,在叶片和雌蕊中的相对表达量显著高于其他组织;100μmol·L^-1 MeJA处理后6 h,忽地笑叶片中LaABCG5基因的相对表达量显著高于对照(DMSO处理后6 h)。跨膜结构域和亚细胞定位结果显示:LaABCG5定位于细胞膜。研究结果显示:LaABCG5基因的表达具有组织特异性,且受MeJA调控;LaABCG5的定位与其功能相吻合。 展开更多
关键词 忽地笑 ABC转运蛋白 基因克隆 基因表达 亚细胞定位
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核桃TT1类转录因子的筛选及干旱响应分析 认领
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作者 王艺 张尚昆 +4 位作者 赵翔 刘玉梅 赵焕元 杨桂燕 马凯恒 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期86-93,共8页
TT1基因(transparent testa1)在植物逆境响应中有重要作用。核桃是重要的经济树种,其产量和质量均受环境影响。为进一步探索核桃(Juglans regia)抗逆机制,以‘香玲’核桃为试验材料,克隆获得核桃JrTT1基因,并进行基因表达和生物信息学分... TT1基因(transparent testa1)在植物逆境响应中有重要作用。核桃是重要的经济树种,其产量和质量均受环境影响。为进一步探索核桃(Juglans regia)抗逆机制,以‘香玲’核桃为试验材料,克隆获得核桃JrTT1基因,并进行基因表达和生物信息学分析,预测该基因的基本生物功能。结果表明,JrTT1-1、JrTT1-2、JrTT1-3基因的开放阅读框(OFR)分别为1014、1023、1029 bp,蛋白分子量分别为37763.51、38492.94、38136.36 u,含有氨基酸数分别为337、340、342,理论等电点分别为7.88、7.19、8.89。与其他物种的同源TT1蛋白具有较近的进化关系。且其上游1200 bp启动子中含有多种与干旱逆境响应相关的顺式作用元件。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)发现,JrTT1-1、JrTT1-2、JrTT1-3基因在PEG 6000胁迫下能不同程度地被诱导表达,且在叶和根中的表达趋势不同。表明JrTT1基因可以响应干旱胁迫诱导,并具有组织表达特异性,推测其在核桃逆境响应中具有一定作用。 展开更多
关键词 核桃 TT1基因 基因表达 干旱胁迫
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SV2A基因真核表达质粒构建及其在HEK293T细胞中的表达 认领
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作者 张晓敏 王培昌 刘静 《国际检验医学杂志》 CAS 2020年第3期274-277,共4页
目的构建鼠突触囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表达质粒,并瞬时转染至人胚肾细胞(HEK293T)中,对其表达进行鉴定。方法以APP/PS1双转基因小鼠海马组织的cDNA为模板,扩增得到长2239 bp的SV2A基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体p3×... 目的构建鼠突触囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表达质粒,并瞬时转染至人胚肾细胞(HEK293T)中,对其表达进行鉴定。方法以APP/PS1双转基因小鼠海马组织的cDNA为模板,扩增得到长2239 bp的SV2A基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体p3×Flag-CMV-10多克隆位点区域中,得到真核表达质粒p3×Flag-CMV-10-SV2A,转化后挑取单克隆菌落经双酶切鉴定后送公司测序,将构建成功的重组质粒转染至HEK293T细胞中,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测SV2A基因的表达情况。结果成功构建p3×Flag-CMV-10-SV2A重组质粒,并在转染至HEK293T细胞后,验证了相应蛋白表达。结论利用分子克隆技术成功构建了p3×Flag-CMV-10-SV2A真核表达质粒并在HEK293T细胞中正确表达,为后续实验奠定了基础。 展开更多
关键词 SV2A基因 分子克隆 重组质粒 基因表达
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水稻OsNCED4基因的克隆及功能初探 认领
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作者 周丽 李梦婷 +6 位作者 朱骞 Sadia Nadir 李伟 郭效琼 冯天 陈丽娟 李东宣 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期2087-2096,共10页
脱落酸(abscisic acid,ABA)是一种抑制植物生长的植物激素,因能促使叶子脱落而得名,在植物逆胁迫中发挥关键作用。由NCED基因编码的9-顺-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED),是ABA在高等植物中的关键酶。本研究已成功从水稻Ilmibyeo(O.sativa... 脱落酸(abscisic acid,ABA)是一种抑制植物生长的植物激素,因能促使叶子脱落而得名,在植物逆胁迫中发挥关键作用。由NCED基因编码的9-顺-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED),是ABA在高等植物中的关键酶。本研究已成功从水稻Ilmibyeo(O.sativa L.ssp.japonica)基因组中克隆得到Os NCED4,生物信息学分析表明,Os NCED4基因位于水稻第7号染色体上,ORF全长1749 bp,无内含子结构,编码582个氨基酸,具有NCED家族的RPE65保守结构;以该基因和其启动子序列构建组织表达载体pOsNCED4::GUS、pCaMV35S::OsNCED4:EGFP和RNAi干扰载体p Ca MV35S::OsNCED4:RNAi,用于基因表达和功能分析,并利用农杆菌介导的方法,成功获得了相应遗传载体的转基因植株;GUS染色结果表明,该基因在叶片、叶耳、小穗等组织部位均有表达;RT-PCR结果显示,Os NCED4在水稻不同生育期的根、茎、叶、叶鞘和穗子中均有不同程度的表达,但表达量具有明显的差异;亚细胞定位结果显示,OsNCED4基因编码的蛋白定位于细胞核;与野生型植株相比,RNAi植株的花粉育性无明显差异,而结实率显著下降。该研究结果为进一步研究水稻OsNCED4基因表达的调控,以及为水稻生长发育上的功能研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 水稻(Oryza sativa L.) OsNCED4 基因克隆 生物信息学分析 基因表达
转iaaM基因黄花蒿中基因表达量与其腺毛密度相关性分析 认领
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作者 钟烨冰 肖楠 +3 位作者 胡晴 黄妤 赵燕 张学文 《作物研究》 2020年第2期161-165,共5页
以转化腺毛中特异表达iaa M基因的13株黄花蒿单株为材料,用半定量RT-PCR法对转基因各单株中转基因的表达进行定量,并利用荧光显微镜对这些转基因个体叶片腺毛的密度进行观察。结果:iaa M基因在转基因黄花蒿植株中均有表达,基因表达量与... 以转化腺毛中特异表达iaa M基因的13株黄花蒿单株为材料,用半定量RT-PCR法对转基因各单株中转基因的表达进行定量,并利用荧光显微镜对这些转基因个体叶片腺毛的密度进行观察。结果:iaa M基因在转基因黄花蒿植株中均有表达,基因表达量与腺毛密度呈正相关,其中表达量最高的转基因植株个体iaa M-2腺毛密度达到59.9枚/mm^2,为对照的2倍以上,表明腺毛特异启动子调控的iaa M基因转化黄花蒿,能显著促进黄花蒿腺毛的发育,增加其腺毛密度。由于黄花蒿腺毛是其有效成分青蒿素的主要合成和贮存部位,可望通过这种特异的转基因手段有效提高黄花蒿中青蒿素的含量。 展开更多
关键词 黄花蒿 转iaa M基因 基因表达 腺毛密度
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STYK1激活Akt信号通路促进肺癌细胞增殖 认领
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作者 刘威 张艳 朱剑军 《实用肿瘤杂志》 CAS 2020年第2期134-139,共6页
目的探讨酪氨酸蛋白激酶1(tyrosine-protein kinase 1,STYK1)在肺癌组织中的表达水平、对肺癌细胞生存的影响及其作用机制。方法定量PCR检测STYK1在35例肺癌组织中的表达水平,分析其与患者临床病理特征间的关系。沉默肺癌细胞A549和HCC... 目的探讨酪氨酸蛋白激酶1(tyrosine-protein kinase 1,STYK1)在肺癌组织中的表达水平、对肺癌细胞生存的影响及其作用机制。方法定量PCR检测STYK1在35例肺癌组织中的表达水平,分析其与患者临床病理特征间的关系。沉默肺癌细胞A549和HCC827中STYK1基因,定量PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果STYK1在肺癌组织中表达水平升高(P<0.01)。其表达水平在肺癌病理分期方面比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。沉默STYK1后,肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。沉默STYK1抑制Akt磷酸化,下调Bcl-2和Bcl-xL表达水平(均P<0.01)。结论STYK1在肺癌组织中呈高表达。其可能通过激活Akt信号通路,促进肺癌细胞增殖。 展开更多
关键词 肺肿瘤/病理学 蛋白酪氨酸激酶类 蛋白激酶类 基因表达 基因沉默 衔接蛋白质类 信号转导/生理学 细胞存活
晚期胃癌患者血浆RUNX3和p16基因甲基化与化疗疗效的相关性 认领
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作者 孙成晖 曾奇 孙钦文 《实用肿瘤杂志》 CAS 2020年第2期145-150,共6页
目的探讨晚期胃癌患者血浆RUNT相关转录因子3(human RUNT-related transcription factor 3,RUNX3)和p16基因甲基化与临床病理特征和氟尿嘧啶化疗敏感性的关系。方法收集行一线氟尿嘧啶联合化疗的晚期胃癌患者67例和体检健康42例。应用... 目的探讨晚期胃癌患者血浆RUNT相关转录因子3(human RUNT-related transcription factor 3,RUNX3)和p16基因甲基化与临床病理特征和氟尿嘧啶化疗敏感性的关系。方法收集行一线氟尿嘧啶联合化疗的晚期胃癌患者67例和体检健康42例。应用甲基化特异性PCR法检测血浆中RUNX3和p16基因甲基化,分析基因甲基化和临床病理特征、化疗疗效的关系。结果化疗前胃癌患者p16和RUNX3的甲基化频率均高于对照组[61.2%(41/67)vs 0.0%(0/42),70.1%(47/67)vs 11.9%(5/42);均P<0.01]。化疗后胃癌患者p16和RUNX3的甲基化频率分别降低至47.8%(32/67;χ^2=5.05,P=0.025)和47.8%(38/67;χ^2=2.61,P=0.106)。以胃为主要肿瘤部位的患者血浆标本中p16和RUNX3的甲基化频率均高于以胃食管交界处为主要肿瘤部位的患者(均P<0.05)。p16和RUNX3甲基化阳性患者对氟尿嘧啶化疗的应答率均低于甲基化阴性患者(17.1%vs 42.3%,P=0.023;19.1%vs45.0%,P=0.029)。结论p16和RUNX3的甲基化在胃癌患者血浆中较为常见且特异性强,二者与患者对氟尿嘧啶化疗的反应密切相关。 展开更多
关键词 胃肿瘤/病理学 胃肿瘤/血液 胃肿瘤/药物疗法 基因 p16 基因表达 甲基化 转录因子 氟尿嘧啶/治疗应用 药物疗法 联合 治疗结果
甘蔗乙烯信号转导途径关键基因CTR1的克隆与表达分析 认领
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作者 王凡伟 肖冬 +2 位作者 李杨瑞 何龙飞 王爱勤 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期827-833,共7页
为了研究CTR1基因与甘蔗糖分积累的关系,本研究利用同源克隆的方法,以甘蔗品种‘桂糖28’(GT28)幼嫩叶片的cDNA为模板,成功克隆得到2103 bp的甘蔗CTR1基因(ScCTR1;GenBank登录号为MK158246)。ScCTR1基因的开放阅读框(ORF)序列长1656 bp... 为了研究CTR1基因与甘蔗糖分积累的关系,本研究利用同源克隆的方法,以甘蔗品种‘桂糖28’(GT28)幼嫩叶片的cDNA为模板,成功克隆得到2103 bp的甘蔗CTR1基因(ScCTR1;GenBank登录号为MK158246)。ScCTR1基因的开放阅读框(ORF)序列长1656 bp,编码551个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为62.78 kD。ScCTR1蛋白具有CTR1同源蛋白典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域。实时荧光定量PCR结果表明,ScCTR1基因在茎和叶中都有表达,在茎中其表达量呈先增加后降低的趋势,在未成熟叶、成熟叶和老叶中,其基因表达呈降低的趋势。本研究结果对阐明乙烯调控甘蔗茎糖分积累和叶发育的机理提供了重要的参考依据。 展开更多
关键词 甘蔗(Saccharum ssp.Hybrids) CTR1 基因克隆 基因表达
辣椒β–酮脂酰辅酶A合酶基因家族的鉴定与表达分析 认领
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作者 易婷 张志硕 +2 位作者 汤冰倩 谢玲玲 邹学校 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期370-380,共11页
为深入了解β–酮脂酰辅酶A合酶(β-ketoacyl-CoAsynthase,KCS)基因家族在辣椒基因组中的特征,利用生物信息学方法鉴定所有KCS基因家族成员,对基因染色体定位、系统发育关系、基因结构、蛋白保守基序和组织表达模式等进行分析,并通过qRT... 为深入了解β–酮脂酰辅酶A合酶(β-ketoacyl-CoAsynthase,KCS)基因家族在辣椒基因组中的特征,利用生物信息学方法鉴定所有KCS基因家族成员,对基因染色体定位、系统发育关系、基因结构、蛋白保守基序和组织表达模式等进行分析,并通过qRT-PCR方法检测基因在高温、低温和NaCl胁迫下的响应。从辣椒基因组中共鉴定出22个KCS家族基因,其不均匀地分布在辣椒的9条染色体上;系统发育分析表明辣椒KCS基因家族可分为4组,每组含有不同数量的基因;该家族成员含有0~3个内含子,保守基序有6~14个;KCS家族基因具有不同的表达模式;高温、低温和NaCl处理可以抑制或激活该家族成员的表达。 展开更多
关键词 辣椒 KCS基因家族 基因表达
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