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广东地区猪群新发塞内卡病毒流行株的分离鉴定及遗传进化分析 预览
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作者 林秀银 温肖会 +5 位作者 吕殿红 翟少伦 霍玮 翟颀 魏文康 杨彩娟 《广东农业科学》 CAS 2019年第6期125-132,共8页
【目的】检测广东两猪场新发的鼻镜与蹄冠水疱病病原,获得新发塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)流行株,为后续研究提供材料。【方法】应用SVA RT-PCR、荧光PCR等方法对采集的病料进行初步筛查,再将水泡皮进行处理接种于ST细胞、BHK-21细胞... 【目的】检测广东两猪场新发的鼻镜与蹄冠水疱病病原,获得新发塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)流行株,为后续研究提供材料。【方法】应用SVA RT-PCR、荧光PCR等方法对采集的病料进行初步筛查,再将水泡皮进行处理接种于ST细胞、BHK-21细胞上,用SVA特异性引物对细胞上清液进行扩增,测序并分析序列,采用蔗糖浓度梯度方法纯化病毒进行电子显微镜形态观察,并对病毒分离株的TCID50进行测定。【结果】经SVA RT-PCR与荧光PCR方法初步诊断该猪群为SVA感染;细胞接毒培养发现,自第6代起,细胞出现典型CPE,电镜观察可见25 nm左右的病毒颗粒,扩增序列提交NCBI Blastn比对鉴定为SVA;测得毒株SVA CH-GDBL1-2016的TCID50为106.8,毒株SVA CH-GDBL2-2016的TCID50为106.7。【结论】SVACH-GDBL1-2016和SVA CH-GDBL2-2016可为后续塞内卡病毒病的诊断和疫苗研制提供材料基础。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 口蹄疫 猪原发性水疱病 分离鉴定 序列分析
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猪塞内卡病毒感染的最新研究进展(续1) 预览
2
作者 唐彩琰(译/图) 张配配(审) +2 位作者 Raquel A. Leme Alice F. Alfieri Amauri A. Alfieri 《国外畜牧学:猪与禽》 2019年第3期20-22,共3页
主要介绍2015年及以后猪群塞内卡病毒感染情况以及塞内卡病毒感染的流行病学特征。
关键词 塞内卡病毒 水疱性疾病
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猪塞内卡病毒感染的最新研究进展(续3) 预览
3
作者 唐彩琰 张配配(审) +2 位作者 Raquel A.Leme Alice F.Alfieri Amauri A.Alfieri 《国外畜牧学:猪与禽》 2019年第5期10-11,共2页
目前养猪界尚无可用的疫苗或治疗方法用于塞内卡病毒感染,文章主要介绍塞内卡病毒的预防控制管理和未来愿景。
关键词 塞内卡病毒 水疱性疾病
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猪塞内卡病毒研究进展 预览
4
作者 黄健强 吴静波 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期82-88,共7页
塞内卡病毒属小RNA病毒科塞内卡病毒属,可感染各个年龄段的猪群引发猪自发性水疱病,临床表现与口蹄疫、猪水疱病、水疱性口炎、猪传染性水疱病相似,但感染发病率较低,临床症状较轻。2015年以来,塞内卡病毒相关猪自发性水疱病的流行区域... 塞内卡病毒属小RNA病毒科塞内卡病毒属,可感染各个年龄段的猪群引发猪自发性水疱病,临床表现与口蹄疫、猪水疱病、水疱性口炎、猪传染性水疱病相似,但感染发病率较低,临床症状较轻。2015年以来,塞内卡病毒相关猪自发性水疱病的流行区域迅速扩大,包括巴西、美国、加拿大、中国、泰国和哥伦比亚都相继暴发疫情。另外还出现临床症状加重、新生猪病死率升高等新变化,这些变化给生猪养殖业带来了不小的恐慌,也引起了研究人员的高度重视。为充分了解和掌握塞内卡病毒的最新信息,认清研究的重点和方向,论文对病毒生物学与流行病学特征、临床特性、实验室诊断技术等方面进行了综述。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 猪自发性水疱病 流行病学 临床表现 诊断
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猪塞内卡病毒感染的最新研究进展(续2) 预览
5
作者 唐彩琰(译) Raquel A. Leme +1 位作者 Alice F. Alfieri Amauri A. Alfieri 《国外畜牧学:猪与禽》 2019年第4期25-26,共2页
主要介绍塞内卡病毒的致病性证据、免疫应答和诊断等。
关键词 塞内卡病毒 水疱性疾病
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一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 预览
6
作者 王秀明 陈君彦 +7 位作者 魏学峰 刘国英 关平原 范秀丽 张贵刚 武瑾贤 王艳杰 刘建奇 《畜牧兽医科学(电子版)》 2019年第4期1-5,共5页
为建立一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR方法,研究针对塞内卡病毒3C基因保守区域设计了一对引物和探针,将3C基因克隆到pCR-4TOPO载体中,以重组质粒为标准品,通过优化PCR反应条件,建立了一种检测SVA的实时荧光定量PCR方法。结果表明,该检... 为建立一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR方法,研究针对塞内卡病毒3C基因保守区域设计了一对引物和探针,将3C基因克隆到pCR-4TOPO载体中,以重组质粒为标准品,通过优化PCR反应条件,建立了一种检测SVA的实时荧光定量PCR方法。结果表明,该检测方法的敏感性达到2.5×10copies/μL,灵敏度高于普通PCR;与其他相关病毒及细菌均不发生交叉反应,批内和批间试验重复性的变异系数(CV)均小于4%,具有良好的稳定性。研究建立的一种塞内卡病毒实时荧光定量PCR方法可以检测SVA的定性和定量,对SVA快速诊断检测具有重要意义。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 实时荧光定量PCR 探针
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塞内卡病毒A的RT-PCR检测方法的建立和应用 预览
7
作者 范慧 李亮 +3 位作者 姜平 王先炜 李玉峰 白娟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1312-1318,共7页
塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,可引起成年母猪水疱性病变,并导致新生仔猪死亡。为建立SVA的快速检测方法,本研究对NCBI发表的40株SVA的基因序列进行同源比较,选择保守区域设计了3对引物P1、P2和P3,从... 塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是一种无囊膜的单股正链RNA病毒,可引起成年母猪水疱性病变,并导致新生仔猪死亡。为建立SVA的快速检测方法,本研究对NCBI发表的40株SVA的基因序列进行同源比较,选择保守区域设计了3对引物P1、P2和P3,从中筛选出最佳扩增引物,通过对引物浓度、退火温度、延长时间、循环次数进行优化,成功建立了SVA的RT-PCR检测方法。用该方法检测SVA、脑心肌炎病毒(EMCV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)无交叉反应,具有良好的特异性。敏感性试验结果显示,病毒检测限可达1TCID50,比国外文献报道的检测方法灵敏性更高。用该方法检测山东省的100份猪组织样品,阳性率为2%。本研究所建立的方法特异性强、敏感性高、可靠性好,为SVA的快速检测及流行病学调查提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 塞内卡病毒A RT-PCR 检测
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塞内卡病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 预览
8
作者 王淑娟 王东方 +6 位作者 赵月龙 谢彩华 赵雪丽 马震原 王华俊 杨朋霞 闫若潜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期479-483,共5页
为建立塞内卡病毒(SVA)荧光定量RT-PCR(FQ-PCR)检测方法,本研究根据GenBank中SVA 3D基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以SVA cDNA为模板,经优化反应条件,建立了SVA FQ-PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、... 为建立塞内卡病毒(SVA)荧光定量RT-PCR(FQ-PCR)检测方法,本研究根据GenBank中SVA 3D基因保守区域序列设计了一对特异性引物和一条特异性探针,以SVA cDNA为模板,经优化反应条件,建立了SVA FQ-PCR检测方法,并对其进行了特异性、敏感性、重复性试验;利用所建立的方法对28份临床疑似SVA感染样品进行了检测,并与本实验室建立的SVA RT-PCR方法检测结果及测序结果比较分析。结果显示,该方法仅对SVA出现阳性扩增信号,对BHK-21正常细胞对照和口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪伪狂犬病毒等5种病原均未出现扩增,特异性较强;该方法最低检测限为10.4拷贝/μL质粒标准品,比常规RT-PCR敏感性高10倍,敏感性较高;该方法批内及批间变异系数均小于4%,重复性好。利用该方法对28份疑似SVA感染样品检测显示,检出9份阳性样品,与测序结果一致,而常规RT-PCR仅检出6份阳性样品,其敏感性高于常规RT-PCR方法,两种方法的符合率为89.3%。本研究为SVA的早期检测提供了特异、敏感、快速的方法。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 荧光定量RT-PCR 建立 应用
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塞内卡病毒A结构蛋白VP1诱导PK-15细胞凋亡 预览
9
作者 王咏 毛箬青 +2 位作者 张克山 郑海学 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期811-820,共10页
塞内卡病毒A(SVA)作为一种新发病病原,致病机制仍不清楚。通过显微镜观察发现,SVA感染PK-15细胞后能使细胞产生明显的细胞病变(CPE),同时伴随着严重的细胞凋亡。为了深入研究SVA诱导凋亡的情况,在验证SVA各蛋白真核质粒正常表达后,通过A... 塞内卡病毒A(SVA)作为一种新发病病原,致病机制仍不清楚。通过显微镜观察发现,SVA感染PK-15细胞后能使细胞产生明显的细胞病变(CPE),同时伴随着严重的细胞凋亡。为了深入研究SVA诱导凋亡的情况,在验证SVA各蛋白真核质粒正常表达后,通过AnnexinV-FITC/PI双染流式方法检测SVA各蛋白诱导凋亡的情况,AnnexinV-FITC/PI和Hoechst染色后显微镜观察磷脂酰丝氨酸和核凝聚程度,通过Westernblotting和RT-PCR技术分析SVA-VP1对凋亡通路中主要调控分子Caspase3、Caspase8和Bax蛋白质和mRNA水平的影响,发现SVA-VP1能够显著诱导细胞发生早期和晚期凋亡,并且能够促进凋亡蛋白Caspase3、Caspase8及Bax蛋白和mRNA水平的上调。本研究结果为深入研究SVA调控宿主细胞凋亡的分子机制和致病机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 塞内卡病毒A PK-15细胞 细胞凋亡 流式细胞术
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阳江地区某猪场塞内卡病毒抗原和抗体的检测与分析 预览 被引量:1
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作者 黄元 刘涛 +5 位作者 陈锦良 王晓虎 陈晶 梁培新 黄武 向华 《广东农业科学》 CAS 2018年第12期107-111,共5页
塞内卡病毒是新发现的一种小RNA病毒,能使猪产生类似水疱样病变,并引起仔猪死亡。塞内卡病毒作为外来病原,近几年呈现蔓延趋势。从广东阳江地区某猪场采集病变组织和血清进行检测分析,针对塞内卡病毒VP1-2A基因进行RT-PCR扩增,得到特异... 塞内卡病毒是新发现的一种小RNA病毒,能使猪产生类似水疱样病变,并引起仔猪死亡。塞内卡病毒作为外来病原,近几年呈现蔓延趋势。从广东阳江地区某猪场采集病变组织和血清进行检测分析,针对塞内卡病毒VP1-2A基因进行RT-PCR扩增,得到特异性的单一条带。对PCR产物序列分析表明,与2015年美国毒株USA/GBI29/2015的同源性最高、为99.2%,而与我国2017年毒株CH-HN-2017的同源性为97.1%。将水泡皮处理后接种PK-15细胞,盲传4代产生显著病变,滴度可达107TCID50/0.1mL。对采集的16份血清进行抗体中和试验表明,发病种猪的抗体效价最高达到1︰4096,9头种猪全部感染SVA,发病率为66.7%,总感染率为68.8%。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 病毒分离 序列分析 抗体中和试验
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值得注意的猪的潜在病原塞内卡病毒 被引量:1
11
作者 卢昌 辛俊宝 +4 位作者 黄凯 倪春霞 苟东东 吴国华 张强 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第11期1401-1405,共5页
自2015年起我国广东、福建、湖北、河南、黑龙江等省份出现了塞内卡病疫情,虽未给养猪业造成较大的经济损失,但该病的潜在危害引起了人们重视。本文介绍了塞内卡病毒的病原学特征、临床症状及病理变化,重点阐述了塞内卡病毒的流行病学... 自2015年起我国广东、福建、湖北、河南、黑龙江等省份出现了塞内卡病疫情,虽未给养猪业造成较大的经济损失,但该病的潜在危害引起了人们重视。本文介绍了塞内卡病毒的病原学特征、临床症状及病理变化,重点阐述了塞内卡病毒的流行病学、诊断方法及防治措施等方面取得的最新进展。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 水疱 猪原发性水疱疫病 仔猪死亡
塞内卡病毒病的特征及防控概述 预览 被引量:1
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作者 方静 赵明 《贵州畜牧兽医》 2018年第6期46-48,共3页
文章通过对塞内卡病毒病的流行病学、临床症状、病理变化、诊断方法及防控等方面进行概述,旨在提高畜牧兽医工作者对该病的认识及防控意识,为科学防控提供参考。
关键词 塞内卡病毒 流行病学 诊断 防控
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A型塞内卡病毒CH-HNXC株的分离鉴定及其致病性研究 预览 被引量:1
13
作者 胡东波 李雪锋 +2 位作者 晋春霞 刘栓 孙哲 《动物医学进展》 北大核心 2019年第8期18-23,共6页
自2007年A型塞内卡病毒(SVA)在猪体内被发现以来,给全球养猪业造成了严重的经济损失,SVA感染的典型症状包括猪口鼻部囊泡的形成及破裂,以及蹄部冠状带水疱引起的跛行。用RT-PCR从河南某猪场具有水疱样病变的猪水疱皮或水疱液中检测到了... 自2007年A型塞内卡病毒(SVA)在猪体内被发现以来,给全球养猪业造成了严重的经济损失,SVA感染的典型症状包括猪口鼻部囊泡的形成及破裂,以及蹄部冠状带水疱引起的跛行。用RT-PCR从河南某猪场具有水疱样病变的猪水疱皮或水疱液中检测到了SVA的特异性核酸片段,并通过IBRS-2细胞进行SVA的分离和传代,将分离得到的SVA命名为CH-HNXC,扩增和测定了VP1基因序列后分析发现,分离株CH-HNXC与之前报道的2017年河南和福建分离株位于较近的进化分支中,与加拿大和泰国分离株亲缘关系较远,表明SVA流行和进化中由相近时间点和较近地理位置带来高的同源性;分离株攻毒猪鼻吻部和蹄部可见水疱和溃烂、跛行等,表明本分离株能引起SVA所致的典型临床症状,为SVA在国内的流行提供了新的证据,为进一步研究SVA的致病机制、开发诊断试剂和疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 病毒分离 序列分析 致病性试验
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A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备 预览
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作者 张永宁 张舟 +4 位作者 诸明欣 梅琳 王彩霞 吴绍强 林祥梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期256-263,共8页
本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质... 本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 衣壳蛋白 原核表达 多克隆抗体
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不可小觑的猪塞内卡病毒病 预览
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作者 汤慧连 罗元华 +3 位作者 郑四清 周根龙 罗鹏 蒋才智 《中国动物保健》 2019年第6期18-20,共3页
猪塞内卡病毒病是塞内卡病毒A引起的一种以吻突、口鼻、蹄部等部位的皮肤或黏膜水疱和糜烂为特征的猪病毒性传染性疾病。可以危害任何品种和性别以及所有年龄阶段的生猪,且可致新生仔猪成批急性死亡,在临床上很难通过肉眼观察而把本病... 猪塞内卡病毒病是塞内卡病毒A引起的一种以吻突、口鼻、蹄部等部位的皮肤或黏膜水疱和糜烂为特征的猪病毒性传染性疾病。可以危害任何品种和性别以及所有年龄阶段的生猪,且可致新生仔猪成批急性死亡,在临床上很难通过肉眼观察而把本病与水疱性跨境动物疾病相区别,严重困扰养猪业,因此不可小觑。文章从病原特性、流行病学、临床症状、病理变化、诊断技术、防制措施等6个方面对该病进行了描述,说明了为什么猪塞内卡病毒病不可小觑,供参考。 展开更多
关键词 塞内卡病毒 不可小觑
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A型塞内卡病毒衣壳蛋白的原核表达及其五聚体的组装
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作者 莫亚霞 宋品 +5 位作者 穆素雨 董虎 曹随忠 郭慧琛 姚学萍 孙世琪 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期969-976,共8页
为实现A型塞内卡病毒(SVA)衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并组装为五聚体,本试验以带His标签和SUMO(小泛素样修饰系统)标签的pSMK及pSMA为载体,将塞内卡病毒衣壳蛋白基因VP0、VP1和VP3构建为重组质粒pSMA-VP0、pSMK-VP1、pSMK-VP3,... 为实现A型塞内卡病毒(SVA)衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并组装为五聚体,本试验以带His标签和SUMO(小泛素样修饰系统)标签的pSMK及pSMA为载体,将塞内卡病毒衣壳蛋白基因VP0、VP1和VP3构建为重组质粒pSMA-VP0、pSMK-VP1、pSMK-VP3,在大肠杆菌原核表达系统中对其进行共表达并优化诱导表达条件,包括诱导温度、诱导剂IPTG浓度、诱导前细菌D600值以及诱导时间,纯化后获得SVA衣壳蛋白后进行免疫印迹分析,之后利用His-SUMO蛋白酶切除标签蛋白,在体外进行组装和鉴定。结果,A型塞内卡病毒衣壳蛋白VP0、VP1、VP3在20℃下、D600值为1.1、 IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导12 h后蛋白表达效果最好。经超声破碎、镍柱纯化后获得VP0、VP1、VP3蛋白,免疫印迹结果表明,目的蛋白能与SVA阳性血清发生特异性反应,证实该蛋白具有良好的反应原性。动态光散射和扫描电镜检测结果显示,去除His-MUMO后还原天然构象的目的蛋白可组装成五聚体。上述研究结果为制备SVA病毒样颗粒奠定了物质基础。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 重组质粒 原核表达 五聚体
警惕A型塞内卡病毒的流行 预览
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作者 李娇 祖立闯 +1 位作者 李峰 沈志强 《养猪》 2019年第3期119-120,共2页
A型塞内卡病毒(SVA)是小RNA病毒科塞内卡病毒属成员,该病毒引起的临床症状与口蹄疫病毒感染十分相似,主要引起猪的口鼻部形成囊泡并破溃,蹄部形成水疱,该病毒先后在加拿大、美国、巴西、泰国等国家均有流行,于2015年首次传入我国,目前SV... A型塞内卡病毒(SVA)是小RNA病毒科塞内卡病毒属成员,该病毒引起的临床症状与口蹄疫病毒感染十分相似,主要引起猪的口鼻部形成囊泡并破溃,蹄部形成水疱,该病毒先后在加拿大、美国、巴西、泰国等国家均有流行,于2015年首次传入我国,目前SVA在我国呈现出零星散发性流行趋势,而且发病情况逐年增多。文章主要阐述SVA的流行病学特征及诊断和防控常识,希望引起广大养殖单位对该病的关注和重视,防止SVA在国内的暴发和流行。 展开更多
关键词 警惕 A型塞内卡病毒 流行
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猪A型塞内卡病毒分离鉴定及其VP1基因变异分析 预览
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作者 李秀博 刘存 +3 位作者 崔玉东 梁琳 张建伟 崔尚金 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1747-1752,共6页
2017年7月,南方某猪场发生不明病原引起的猪水疱性疾病。为了确诊本次水疱性疾病的病因及了解病原的遗传演化关系,笔者通过RT-PCR方法对引起该场水疱性疾病的病原进行检测,利用BHK21细胞分离病毒,RT-PCR、电镜观察等方法对分离病毒进行... 2017年7月,南方某猪场发生不明病原引起的猪水疱性疾病。为了确诊本次水疱性疾病的病因及了解病原的遗传演化关系,笔者通过RT-PCR方法对引起该场水疱性疾病的病原进行检测,利用BHK21细胞分离病毒,RT-PCR、电镜观察等方法对分离病毒进行鉴定,同时对其主要的抗原基因VP1进行比对分析。RT-PCR检测结果表明导致该猪场发生水疱性疾病的病原为A型塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA),将利用BHK21细胞分离并经鉴定的病毒命名为CH/FuJ1/2017株。同源性分析结果显示,CH/FuJ1/2017株与报道的SVV-001株的相似性最低,与分离自美国的USA-GBI29-2015株的相似性最高。基于SVA VP1基因氨基酸序列的分析结果表明,SVA分离株形成一个独立的小分支,与SVV-001株相比,SVA分离株在VP1蛋白的59、62、63、93、97、172位氨基酸存在突变,且位于VP1蛋白的B-C环上和CD-Ⅱ环上,这可能与SVA的细胞嗜性改变有关。综上表明我国SVA分离株具有遗传多样性,部分国内分离株与国外SVA分离株间具有密切的相关性。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 分离 VP1 遗传演化
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A型塞内卡病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用 预览
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作者 杨钰楚 王晨曦 +3 位作者 周雪珂 赵军 徐志文 朱玲 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期868-873,共6页
为建立一种利用逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,从SVA细胞培养液中提取总RNA,根据SVA VP1基因序列,设计一套对应目的片段6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP检测方法。利用建立的RT-L... 为建立一种利用逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,从SVA细胞培养液中提取总RNA,根据SVA VP1基因序列,设计一套对应目的片段6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP检测方法。利用建立的RT-LAMP检测方法对口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒与塞内卡病毒进行特异性试验。将SVA VP1质粒10倍梯度稀释液作为模板(1×10~0~1×10~7拷贝)进行RT-LAMP和RT-PCR反应,测试RT-LAMP检测方法的灵敏性。采集疑似发病猪的鼻腔拭子和水疱液共126份样品,应用RT-LAMP和RT-PCR检测,加入SYBR GreenⅠ进行可视化鉴定。结果表明,与传统RT-PCR相比,RT-LAMP检测方法灵敏度高1 000倍,且与其他病毒无交叉反应,具有高度敏感性和特异性。临床样品检测结果显示,鼻腔拭子样本SVA阳性率为29.6%,水疱液样本SVA阳性率为100.0%,2种方法检测结果一致,符合率为100%。综上所述,本研究建立的RT-LAMP检测方法准确、简便、经济有效,尤其适用于现场和基层实验室对SVA的快速诊断。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 RT-LAMP 快速检测
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A型猪塞内卡病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立 预览 被引量:1
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作者 李秀博 刘存 +2 位作者 鄢明华 崔玉东 崔尚金 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期33-38,共6页
本研究针对A型猪塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)基因组保守区域设计了特异性引物及探针,建立了快速检测SVA的Taq Man荧光定量PCR方法。结果显示,以构建的重组质粒为标准品建立的Taq Man荧光定量PCR方法,标准曲线具有良好的线性关系,线... 本研究针对A型猪塞内卡病毒(Senecavirus A, SVA)基因组保守区域设计了特异性引物及探针,建立了快速检测SVA的Taq Man荧光定量PCR方法。结果显示,以构建的重组质粒为标准品建立的Taq Man荧光定量PCR方法,标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数达0.9974;特异性良好,与口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒不存在交叉反应;对SVA核酸最低检测下限为3.75 copies/μL,而普通PCR最低检测下限为3.75×103 copies/μL;批内和批间的变异系数为均小于5%,重复性良好。本研究建立的SVA TaqMan荧光定量PCR方法为检测猪水疱性疾病病原提供了一种快速、灵敏的检测方法,为开展SVA流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 A型猪塞内卡病毒 TaqMan荧光定量PCR 诊断
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