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多房棘球蚴四跨膜蛋白的生物信息学分析
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作者 杨宇 张耀刚 +2 位作者 张灵强 任利 樊海宁 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期165-170,177共7页
目的采用生物信息学方法分析多房棘球蚴四跨膜蛋白(EmTspan)的结构与抗原表位。方法从NCBI数据库中下载EmTspan蛋白的氨基酸序列,运用ProtParam、ProtScale、SOSUI、DNASTAR、SignalP、Cell-PLoc、SOMPA、NetPhos、Motif Scan、Phyre 2... 目的采用生物信息学方法分析多房棘球蚴四跨膜蛋白(EmTspan)的结构与抗原表位。方法从NCBI数据库中下载EmTspan蛋白的氨基酸序列,运用ProtParam、ProtScale、SOSUI、DNASTAR、SignalP、Cell-PLoc、SOMPA、NetPhos、Motif Scan、Phyre 2、TMHMM等生物信息学软件分析蛋白质的理化性质、亚细胞定位、跨膜区域、磷酸化和翻译后修饰位点及二、三级结构,利用ABCpred、IEDB、SYFPEITHI软件分析并预测B细胞、T细胞的抗原表位,通过MEGA-X软件构建Tspan的分子进化树。结果 EmTspan蛋白是由236个氨基酸序列组成,分子式为C1163H1853N291O315S21,不稳定指数为32.77,为稳定蛋白;有4个跨膜区,定位于细胞膜;二级结构中,α螺旋占46.19%,β折叠占20.34%,β转角占8.05%,无规则卷曲占25.42%;EmTspan蛋白含有的B细胞、TCL细胞及Th细胞的抗原表位分别为7、15、8个;分子进化分析多房棘球蚴的Tspan和小口膜壳绦虫的Tspan亲缘关系较近。结论生物信息学预测EmTspan蛋白存在多个潜在的B细胞及T细胞表位,抗原性好,可为多房棘球蚴疫苗的研制、免疫诊断等提供理论依据。 展开更多
关键词 房棘球 四跨膜蛋白 生物信息学 抗原表位
小鼠肝多房棘球蚴中血管新生与病程发展的相关性研究
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作者 周青 杨雄峰 +7 位作者 韩欢欢 郭黎姣 姜慧娇 王小义 李林林 廖振宇 陈雪玲 吴向未 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期302-310,共9页
目的初步探讨小鼠肝多房棘球蚴中血管新生与疾病发生发展的相关性。方法将60只6~8周龄的C57BL/6雌性小鼠随机分成实验组和对照组,每组30只。小鼠经5%水合氯醛溶液麻醉后开腹,实验组小鼠肝脏注射多房棘球蚴原头节混悬液100μl (约400个... 目的初步探讨小鼠肝多房棘球蚴中血管新生与疾病发生发展的相关性。方法将60只6~8周龄的C57BL/6雌性小鼠随机分成实验组和对照组,每组30只。小鼠经5%水合氯醛溶液麻醉后开腹,实验组小鼠肝脏注射多房棘球蚴原头节混悬液100μl (约400个原头节),对照组注射等量PBS,无菌缝合关腹。分别于感染后30、 60、 90、 120 d,肝脏灌注法观察病变组织血管分布和新生情况;尾静脉采血, ELISA检测小鼠血清中血管内皮生长因子A (VEGFA)的表达;实验组取棘球蚴组织和棘球蚴周围肝组织,对照组取相应肝组织,制备石蜡切片,苏木素-伊红(HE)染色观察病理组织学改变;免疫组织化学染色法观察不同感染时间、不同部位肝脏组织中VEGFA、 CD34和CD31的表达情况。结果肝脏灌注法结果显示,随着感染时间的延长,实验组小鼠肝脏棘球蚴组织逐渐增大,周围可见明显的血管分布。ELISA检测结果显示,感染后30、 60、 90和120 d,实验组小鼠血清中VEGFA浓度分别为269.00、 420.62、 539.00和271.73 pg/ml,差异有统计学意义(P <0.01),且均高于相应对照组的VEGFA浓度(194.00、 173.00、 234.00和127.00 pg/ml)(P <0.05)。HE染色结果显示,随着感染时间的延长,实验组小鼠棘球蚴组织体积逐渐增大,并伴有嗜酸性粒细胞浸润、结核样肉芽组织形成和纤维组织增生,病变内部区域可见原头节和钙化灶。免疫组织化学结果显示,感染后棘球蚴组织中均可见VEGFA、 CD34和CD31不同程度的表达,阳性染色定位于棘球蚴组织内皮细胞。感染后30、 60、 90和120 d,棘球蚴组织中VEGFA免疫组织化学评分分别为(1.60±0.52)、(3.10±0.87)、(4.80±1.32)和(2.40±1.07)分,其中感染后30 d与感染后60 d、 90 d比较差异均有统计学意义(P <0.05, P <0.01);棘球蚴组织与棘球蚴周围组织(VEGFA评分均为0)和对照组(VEGFA评分均为0)比较差异均有统计学意义(P <0.01)。感染后30、 60、 90和120 展开更多
关键词 房棘球 血管内皮生长因子A 微血管密度 血管新生
两种棘球绦虫的水通道蛋白基因克隆及功能特性的比较 预览 被引量:1
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作者 刘许诺 王芬 +3 位作者 吴宏烨 李锴 范俊杰 叶彬 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期501-508,共8页
目的探索棘球绦虫水通道蛋白(aquaporin,AQP)在棘球蚴、泡球蚴囊液形成中的作用,为阐明棘球蚴、泡球蚴囊液的形成过程以及筛选棘球蚴病新的药物治疗靶点提供理论依据。方法利用RT-PCR扩增棘球蚴、泡球蚴AQPs基因,构建AQPs体外转录载体... 目的探索棘球绦虫水通道蛋白(aquaporin,AQP)在棘球蚴、泡球蚴囊液形成中的作用,为阐明棘球蚴、泡球蚴囊液的形成过程以及筛选棘球蚴病新的药物治疗靶点提供理论依据。方法利用RT-PCR扩增棘球蚴、泡球蚴AQPs基因,构建AQPs体外转录载体,并在非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞中进行异源表达,以验证其水通道功能。利用生物信息学方法分析两种棘球绦虫水通道蛋白跨膜结构域特点及差异,并对棘球绦虫和人AQPs进行多序列比对,分析棘球绦虫AQPs序列结构与人AQPs的差异。结果通过RT-PCR成功克隆了棘球蚴EgAQP4和EgAQP9、泡球蚴EmAQP4和EmAQP9四个基因,注射了这些基因cRNA的卵母细胞与注射DEPC水的对照组卵母细胞的体积变化率(V/V0)差别无统计学意义(F=1.143,P〉0.05),透水系数差别亦无统计学意义(F=1.416,P〉0.05),这四个AQPs基因在非洲爪蟾卵母细胞中未表现出水通道的功能。跨膜结构域预测及多序列比对结果表明,与经典的水通道蛋白相比,EgAQP4和EmAQP4虽然N和C末端均位于胞质侧,但跨膜结构域数目为4个,NPA基序替换为NPM和NPT;而EgAQP9和EmAQP9虽然具有2个保守的NPA基序,但跨膜结构域数目为5个,N末端位于胞外侧、C末端位于胞质侧。棘球绦虫AQPs蛋白结构存在的这些差异,可能与其在卵母细胞中未表现水通道蛋白的功能有关。结论两种棘球绦虫基因组中都存在编码AQPs的基因,但这些AQPs基因的功能验证试验未见到水通道功能。该结果可能正好说明了囊液的水分子既不能通过AQPs进入生发层细胞而致使细胞肿胀坏死,也不能以AQPs为通道从生发层细胞转移出囊壁,致使囊液累积、棘球蚴包囊或泡球蚴囊泡体积长大。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 房棘球绦虫 房棘球 房棘球 水通道蛋白
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氯舒隆和奥硝唑体外抗细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴的效果评价
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作者 辛奇 高海军 +5 位作者 宋晓霞 孙旭东 吕薇 Nabil PERVAIZ 鲁俊 景涛 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期352-356,共5页
目的研究氯舒隆和奥硝唑体外抗细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴的效果。方法从感染细粒棘球蚴绵羊肝脏中收集原头节;从感染长爪沙鼠腹腔中分离多房棘球蚴,加入预先接种人肝癌细胞的DMEM培养基中培养2个月后,收集直径为1-5 mm囊泡。实验分... 目的研究氯舒隆和奥硝唑体外抗细粒棘球蚴原头节和多房棘球蚴的效果。方法从感染细粒棘球蚴绵羊肝脏中收集原头节;从感染长爪沙鼠腹腔中分离多房棘球蚴,加入预先接种人肝癌细胞的DMEM培养基中培养2个月后,收集直径为1-5 mm囊泡。实验分氯舒隆组(实验组)、奥硝唑组(实验组)、阿苯达唑组(阳性对照)和0.2%二甲基亚砜(DMSO)组(溶剂对照组)。每种药物设2个平行孔,终浓度均为40μmol/L,重复2次。每孔加细粒棘球蚴原头节约100个或多房棘球蚴囊泡25-35个。药物处理细粒棘球蚴原头节24、48、72、96、120、144和168 h后,显微镜下观察原头节形态,用台盼蓝染色,计算原头节存活率,组间存活率的比较采用方差分析。药物处理多房棘球蚴囊泡36 h和120 h后,显微镜下观察囊泡的形态学改变,测定培养上清液中碱性磷酸酶的活性,组间酶活性的比较采用卡方分析。结果氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑作用于原头节后,原头节颜色变深、钙颗粒减少、头钩脱落、头节外翻并伸长,0.2%DMSO对原头节形态无影响。氯舒隆、臭硝唑和阿苯达唑作用24、48、72、96、120、144和168 h后,原头节存活率分别为79%、70%、56%、42%、33%、16%、15%,86%、67%、63%、48%、32%、28%、21%和85%、71%、45%、36%、21%、15%、8%;0.2%DMSO组原头节存活率为100%。氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑组原头节存活率与0.2% DMSO组相比差异均有统计学意义(χ-2=147.83、130.58、170.37,P〈0.05)。氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑作用后,多房棘球蚴囊泡均塌陷、皱缩,0.2%DMSO对多房棘球蚴囊泡形态无影响。作用36 h后氯舒隆、奥硝唑、阿苯达唑和0.2% DMSO组培养上清液碱性磷酸酶的吸光度(A405)值分别为0.196±0.030、0.186±0.004、0.244±0.049和0.131±0.020,作用120 h后分别为0.431±0.006、0.271±0.004、0.423±0.007和0.116±0.004。氯舒隆、奥硝唑和阿苯达唑组� 展开更多
关键词 细粒棘球原头节 房棘球 氯舒隆 奥硝唑
多房棘球蚴蛋白TSP3的原核表达及分离纯化 预览
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作者 刁晓艳 周虎 +4 位作者 李润乐 彭海 李子安 汤锋 杨全余 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2018年第3期191-196,共6页
目的构建适合融合基因pCzn1-TSP3的原核表达系统,纯化获得多房棘球蚴蛋白TSP3。方法 TSP3的基因序列在GenBank中获取,采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法,构建原核表达质粒pCzn1-TSP3,并转化于大肠杆菌Arctic Express(... 目的构建适合融合基因pCzn1-TSP3的原核表达系统,纯化获得多房棘球蚴蛋白TSP3。方法 TSP3的基因序列在GenBank中获取,采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法,构建原核表达质粒pCzn1-TSP3,并转化于大肠杆菌Arctic Express(DE3)中,经IPTG诱导,获得目的蛋白,利用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化获得目的蛋白。结果经生物公司测序及酶切鉴定结果证明重组质粒p Czn1-TSP3构建成功。进一步实验结果表明TSP3在原核表达系统中主要以可溶蛋白形式存在。继而经Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化获得TSP3纯蛋白,并经过Western Blot证实。结论大肠杆菌Arctic Express(DE3)中能够成功表达蛋白TSP3,且Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱能够纯化目的蛋白TSP3。 展开更多
关键词 房棘球 蛋白 TSP3 表达 分离 纯化
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他克林对多房棘球蚴抑制作用的实验研究
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作者 刘丛珊 尹建海 +2 位作者 姚嘉青 张晶 张皓冰 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期238-242,共5页
目的观察他克林体外抗多房棘球蚴的作用以及抗小鼠多房棘球蚴感染的疗效。方法在含50-200个多房棘球蚴原头节的96孔板中加入浓度为100.00、50.00、25.00、12.50和6.25μmol/L的他克林,给药后1、3、5和7 d用亚甲基蓝法测定原头节的活性... 目的观察他克林体外抗多房棘球蚴的作用以及抗小鼠多房棘球蚴感染的疗效。方法在含50-200个多房棘球蚴原头节的96孔板中加入浓度为100.00、50.00、25.00、12.50和6.25μmol/L的他克林,给药后1、3、5和7 d用亚甲基蓝法测定原头节的活性。同时用细胞增殖-毒性检测(CCK-8法)测定他克林对3种正常宿主细胞(L929细胞、HK-2细胞和Chang liver)以及3种肿瘤细胞(A172细胞、A2058细胞和HCT-8细胞)的细胞毒性。40只感染多房棘球蚴6个月的BALB/c小鼠随机均分为4组,分别为30 mg/kg他克林组、15 mg/kg他克林组、25 mg/kg甲苯达唑组和1%西黄芪胶对照组。各组小鼠连续灌胃给药28 d,停药14 d后处死小鼠,剖取小鼠体内多房棘球蚴囊,称取囊重并计算囊重抑制率,采用SPSS 17.0中的非参检验法进行统计学分析。结果他克林体外对多房棘球蚴原头节的作用呈现明显的剂量效应关系,随着药物浓度和培养天数的增加,原头节的活性显著降低。100μmol/L的他克林作用3 d后,原头节全部死亡且形态发生强烈改变,难以观察到完整的超微结构。他克林作用7 d后,100.00、50.00、25.00、12.50和6.25μmol/L组的原头节死亡率分别为(100±0)%、(91.2±2.5)%、(80.3±5.1)%、(71.6±2.4)%和(51.7±2.9)%。他克林对正常宿主细胞活性影响较小,药物浓度增加至250.0μmol/L,对L929细胞、HK-2细胞和Chang liver细胞的活性抑制率分别为(27.6±4.7)%、(29.6±3.9)%和(26.9±2.1)%。但是对肿瘤细胞的细胞毒性较大,A172细胞、A2058细胞和HCT-8细胞的半数抑制浓度(Tox50)分别为(178.2±3.2)、(133.2±5.2)和(128.8±4.0)μmol/L。30 mg/kg他克林组、15 mg/kg他克林组和25 mg/kg甲苯达唑组囊重抑制率分别为-3.4%、9.4%和38.2%,上述各组小鼠体内多房棘球蚴囊重的减少与1%西黄芪胶组相比均无统计学意义(P〉0.05)。4组小鼠在实验周期中分别有3、6、2和 展开更多
关键词 他克林 房棘球 原头节 细胞毒性
藏药烈香杜鹃挥发油在体外杀伤多房棘球蚴药效研究 预览 被引量:1
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作者 李润乐 李占强 +3 位作者 廖梦娇 汤锋 杨全余 格日力 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2018年第1期62-66,共5页
目的明确烈香杜鹃挥发油在体外对多房棘球蚴的杀伤作用。方法采用水蒸气蒸馏法分离烈香杜鹃叶中的挥发油成分,并以不同的浓度在体外与原头蚴共培养,在光镜下观察原头蚴的死亡率及结构变化。结果浓度为10mg/mL的烈香杜鹃挥发油体外培... 目的明确烈香杜鹃挥发油在体外对多房棘球蚴的杀伤作用。方法采用水蒸气蒸馏法分离烈香杜鹃叶中的挥发油成分,并以不同的浓度在体外与原头蚴共培养,在光镜下观察原头蚴的死亡率及结构变化。结果浓度为10mg/mL的烈香杜鹃挥发油体外培养作用0.75h后原头蚴的死亡率是99.00±1.000%(P〈0.001);浓度为5mg/mL时作用12h是80.00±2.000%(P〈O.001);浓度为lmg/mL时作用12h是43.00±2.000%(P〈O.001)。扫描电镜观察发现死亡原头蚴体表微绒毛消失,体表受到损伤。结论烈香杜鹃挥发油在体外对多房棘球蚴具有较强的杀伤作用。 展开更多
关键词 烈香杜鹃 挥发油 房棘球 作用
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多房棘球蚴表面抗原EMY162的原核表达及抗体制备 预览
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作者 冯琳 李润乐 +3 位作者 刘川川 廖瑜 杨全余 汤锋 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2017年第4期235-241,共7页
目的建立多房棘球蚴表面抗原EMY162原核表达系统及制备兔多克隆抗体。方法构建表达载体pCznl-EMY162并转入ArcticExpress菌株,用IPTG诱导、Ni柱纯化获得目的蛋白后免疫新西兰兔,以ELISA、SDS-PAGE考察纯化后抗体的效价、浓度及纯度。... 目的建立多房棘球蚴表面抗原EMY162原核表达系统及制备兔多克隆抗体。方法构建表达载体pCznl-EMY162并转入ArcticExpress菌株,用IPTG诱导、Ni柱纯化获得目的蛋白后免疫新西兰兔,以ELISA、SDS-PAGE考察纯化后抗体的效价、浓度及纯度。结果酶切鉴定和测序结果表明重组质粒pCznl-EMY162构建成功,且EMY162在包涵体部位中表达、可溶部位微量表达。通过Ni-NTA柱亲和层析纯化获得高纯度的EMY162蛋白。免疫兔后收集血清,其ELISA结果表明,抗血清可以特异性结合目标蛋白,抗体效价大于512K,SDS—PAGE结果表明,纯化后获得了较高纯度的多克隆抗体,可用于后续实验研究。结论成功建立EMY162原核表达系统并制备了高纯度、高效价的多克隆抗体。 展开更多
关键词 EMY162 房棘球 克隆抗体 原核表达
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藏药格尔琼体外杀伤多房棘球蚴药效作用及活性部位的研究 预览
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作者 刘文磊 蒋巧艳 +4 位作者 洛桑达哇 杨宝良 樊海宁 邓勇 汤锋 《中国高原医学与生物学杂志》 CAS 2017年第1期55-62,共8页
目的明确藏药纽方格尔琼体外对抗多房棘球蚴药效学.活性及其活性部位。方法将格尔琼经醇提、萃取、凝胶柱层析、硅胶柱层析、液相制备等方法分离纯化得到24个不同部位的化合物,将所得化合物以不同的浓度在体外与原头节共培养,光镜下... 目的明确藏药纽方格尔琼体外对抗多房棘球蚴药效学.活性及其活性部位。方法将格尔琼经醇提、萃取、凝胶柱层析、硅胶柱层析、液相制备等方法分离纯化得到24个不同部位的化合物,将所得化合物以不同的浓度在体外与原头节共培养,光镜下观察原头节死亡率及结构改变。结果空白组原头节死亡率为13.67±0.577,格尔琼醇提物组为93.67±1.523(P〈O.oooo),阿苯达唑组为47.67±2.08(P〈O.oooo),且格尔琼醇提物组原头节死亡后形态与阿苯达唑组有明显差异。继而对格尔琼醇提物进行萃取分离,获得乙酸乙酯部位、正丁醇部位、石油醚部位三个部分,药效学实验发现乙酸乙酯部位组原头节死亡率为93.67±0.577(P〈0.0000)。对乙酸乙酯部位进行凝胶柱层析分离,获得Fractioni、Fraction2、Fraction3、Fraction4、Fraction5五个部位,药效学实验发现Fraction3组原头节死亡率为97.33±1.528(P〈0.0000)。对Fraction3进行硅胶柱层析分离,获得Fraction3.1、Fraction3.2、Fraction3.3、Fraction3.4、Fraction3.5、Fraction3.6、Fraction3.7、Fraction3.8八个部位,药物实验发现Fraction3.1组原头节死亡率为83.00±4.583(P〈0.0000)。对Fraction3.1进行液相制备分离,获得Fraction3.1.1、Fraction3.1.2、Fraction3.1.3、Fraction3.1.4、Fraction3.1.5、Fraction3.1.6、Fraction3.1.7七个部位,药物实验发现Fraction3.1.2组原头节死亡率为83.33±3.06(P〈0.0000)。结论格尔琼相比阿苯达唑对体外多房棘球蚴具有较强的杀伤作用,其活性组分为大分子非极性化合物。 展开更多
关键词 藏药 体外培养 房棘球 药效活性部位
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多房棘球蚴LDH基因的克隆表达及免疫原性研究 预览
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作者 何顺伟 李洪清 +2 位作者 李晓燕 赵瑞雪 魏晓星 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2017年第11期967-971,共5页
目的克隆表达青海省多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,初步评价其免疫诊断价值。方法 采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因,将其连接入pET15b表达载体中... 目的克隆表达青海省多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)基因,鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,初步评价其免疫诊断价值。方法 采用RT-PCR方法克隆EmLDH基因,将其连接入pET15b表达载体中,构建重组表达质粒pET15b-EmLDH,转化至E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测重组蛋白的表达形式,Ni-IDA树脂亲和层析纯化重组蛋白。通过Western blotting法鉴定EmLDH重组蛋白的免疫原性,ELISA法检测泡型包虫病患者(57例)、囊型包虫病患者(33例)和正常人(50例)血清,初步评价EmLDH重组蛋白的免疫诊断效果。结果 成功克隆了EmLDH基因并表达纯化出相应的重组蛋白。Western blotting结果显示,EmLDH重组蛋白可被泡型和囊型包虫病患者血清识别,而不被正常人血清识别。ELISA结果显示,EmLDH重组蛋白对泡型和囊型包虫病患者血清的诊断敏感性分别为84.21%和84.85%。结论 EmLDH重组蛋白具有较高的免疫原性,对包虫病具有较好的免疫诊断价值。 展开更多
关键词 房棘球 LDH基因 克隆 表达 免疫原性
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基于线粒体COI、NDI和12S rRNA基因序列的包虫病标本的分子分类学研究
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作者 李伟 高金亮 王洪波 《中国卫生检验杂志》 CAS 2017年第14期1983-1986,共4页
目的克隆一例临床包虫病标本的线粒体基因COI、ND1和12S rRNA的基因序列,在基因水平上对包虫病病原体进行诊断,分析棘球绦虫线粒体基因序列差异。方法根据Gen Bank中登录的棘球绦虫线粒体基因COI、NDI和12S rRNA的序列信息分别设计3对引... 目的克隆一例临床包虫病标本的线粒体基因COI、ND1和12S rRNA的基因序列,在基因水平上对包虫病病原体进行诊断,分析棘球绦虫线粒体基因序列差异。方法根据Gen Bank中登录的棘球绦虫线粒体基因COI、NDI和12S rRNA的序列信息分别设计3对引物,扩增临床包虫病标本的COI、NDI和12S rRNA基因,并进行测序。对所克隆的目的基因序列进行BLAST分析并与Gen Bank中已收录的部分棘球绦虫的COI、NDI和12S rRNA基因序列进行对比分析,并制做系统发生树。结果从包虫囊液DNA中成功克隆了长度分别为528 bp、1 001 bp和246 bp的基因片段,序列分析表明所克隆的基因片段为多房棘球绦虫的COI、NDI和12S rRNA基因。其中基因COI和NDI可以用于棘球绦虫的种间分类,而基因片段12S rRNA不能用于棘球绦虫的种间分类。结论从基因水平上确诊了此例包虫病患者的病原体为多房棘球蚴。 展开更多
关键词 包虫病 房棘球 线粒体DNA 分子分类学
青南高原多房棘球蚴SBACT5基因的克隆和生物信息学分析 预览
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作者 何顺伟 李晓燕 +2 位作者 李洪清 赵瑞雪 魏晓星 《医学研究生学报》 北大核心 2017年第8期818-823,共6页
目的 胆汁酸钠协同转运蛋白在棘球绦虫发育过程中起着重要作用。文中研究克隆多房棘球蚴(Em)的胆汁酸钠协同转运蛋白5(EmSBACT5)基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析。方法 采用RT-PCR技术扩增EmSBACT5基因并测序,采用生物信息... 目的 胆汁酸钠协同转运蛋白在棘球绦虫发育过程中起着重要作用。文中研究克隆多房棘球蚴(Em)的胆汁酸钠协同转运蛋白5(EmSBACT5)基因,并对其编码蛋白进行生物信息学分析。方法 采用RT-PCR技术扩增EmSBACT5基因并测序,采用生物信息学软件对编码蛋白的理化性质、亲/疏水性、跨膜域、翻译后修饰位点、结构域、二级结构、三级结构、亚细胞定位和生物学功能进行预测分析。结果 扩增出654 bp的完整开放阅读框,其编码217个氨基酸,与公布的细粒棘球蚴(Eg)的EgSBACT5基因核苷酸和氨基酸同源性分别达98%和96%。蛋白分析结果显示,EmSBACT5蛋白分子式为C1141H1797N273O284S11,相对分子量为24 240,pI为8.99。含有9个翻译后修饰位点和4处典型的结构域。α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲所占的比例分别为29.95%、31.80%、7.83%和30.41%。该蛋白为疏水性跨膜蛋白,主要定位于细胞质膜中,可能在物质转运和信号传递过程中发挥作用。结论 成功克隆出EmSBACT5基因并获得其编码蛋白的的信息学特征,为包虫病防治提供基础信息。 展开更多
关键词 房棘球 胆汁酸协同转运蛋白5 基因 克隆 生物信息学 分析
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微囊法棘球蚴继发感染小鼠动物模型的建立 预览 被引量:5
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作者 王慧 李军 +2 位作者 郭宝平 温浩 张文宝 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期784-788,共5页
目的 通过体外培养原头蚴发育成微囊,经腹腔注射建立稳定的细粒棘球蚴和多房棘球蚴继发感染小鼠动物模型。方法 无菌条件下采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴和鼠源多房棘球绦虫原头蚴,经胃蛋白酶消化后检测虫体活力并计数,于37℃、5%CO2条件... 目的 通过体外培养原头蚴发育成微囊,经腹腔注射建立稳定的细粒棘球蚴和多房棘球蚴继发感染小鼠动物模型。方法 无菌条件下采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴和鼠源多房棘球绦虫原头蚴,经胃蛋白酶消化后检测虫体活力并计数,于37℃、5%CO2条件下进行体外培养至发育成微囊,以每鼠50个微囊的剂量经腹腔注射的途径分别接种BALB/c小鼠。接种6个月后,通过腹部解剖大体观察和病理检测分析各组小鼠的感染情况及包虫囊的生长情况。结果 原头蚴在体外培养60d时发育成微囊,显微镜下观察Eg具有明显的透明角质层结构,而Em微囊角质层较薄。小鼠细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率均为100%,Eg包虫囊为游离单囊,成囊率达70%,囊内无原头蚴;Em包虫囊为类似肿瘤的团块状组织,病灶内有生发囊及原头蚴。结论 采用微囊法可建立稳定的棘球蚴继发感染小鼠动物模型,为疫苗研制、药物筛选和疗效判定提供研究动物模型。 展开更多
关键词 细粒棘球 房棘球 原头 微囊 小鼠 感染动物模型
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藏区包虫病防控——管控好犬和患病动物内脏是解决问题的关键 预览 被引量:9
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作者 汪天平 《热带病与寄生虫学》 2016年第4期187-188,194共3页
包虫病是全球性分布的人畜共患寄生虫病,是一种古老的疾病,我国公元前就有该病的表述和记载,1905年在我国青岛确认发现首例囊性包虫病患者[1]。目前全国23个省、市、自治区报道有包虫病病例,流行区主要分布在新疆、青海、甘肃、宁... 包虫病是全球性分布的人畜共患寄生虫病,是一种古老的疾病,我国公元前就有该病的表述和记载,1905年在我国青岛确认发现首例囊性包虫病患者[1]。目前全国23个省、市、自治区报道有包虫病病例,流行区主要分布在新疆、青海、甘肃、宁夏、内蒙古、西藏和四川等省、自治区[2,3,4]。流行于我国的包虫病主要有两种,一为细粒棘球蚴引起的囊性包虫病,另一为多房棘球蚴引起的泡型包虫病。其中泡型包虫病流行局限,但多房棘球蚴可直接浸润扩散,还可经淋巴或血液循环在肝内散播,危害大,病死率高,有“虫癌”之称。 展开更多
关键词 包虫病 细粒棘球 房棘球 防控
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多房棘球蚴感染对长爪沙鼠肝脏药物代谢酶活性的影响
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作者 李焕平 辛奇 +3 位作者 鲁俊 袁苗苗 Nabeel PERVAIZ 景涛 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期18-22,共5页
目的研究多房棘球蚴感染对长爪沙鼠肝脏药物代谢酶活性的影响。方法将10只长爪沙鼠随机均分为2组,实验组每鼠腹腔接种多房棘球蚴囊组织匀浆300μl(约含600个原头节),对照组每鼠给予等量生理盐水。感染后5个月,颈椎脱臼法处死沙鼠,取... 目的研究多房棘球蚴感染对长爪沙鼠肝脏药物代谢酶活性的影响。方法将10只长爪沙鼠随机均分为2组,实验组每鼠腹腔接种多房棘球蚴囊组织匀浆300μl(约含600个原头节),对照组每鼠给予等量生理盐水。感染后5个月,颈椎脱臼法处死沙鼠,取出肝脏,以差速离心法制备肝微粒体悬液和细胞液。采用二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量分析试剂盒测定细胞液和微粒体悬液的蛋白浓度。用差示光谱法测定肝微粒体中细胞色素P450(CYP450)和细胞色素b5(Cyt b5)的含量。荧光分光光度法测定7-乙氧基试卤灵脱乙基酶(EROD)和7-甲氧基试卤灵脱甲基酶(MROD)的活性。紫外-可见光分光光度法测定NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)和黄素单加氧酶(FMO)的活性。结果实验组细胞液和肝微粒体悬液的蛋白浓度为(11.089±1.277)和(3.212±0.924)mg/ml,对照组的分别为(12.459±1.625)和(3.894±0.395)mg/ml。实验组肝微粒体CYP450和Cyt b5的含量为(0.508±0.142)和(0.515±0.077)nmol/mg蛋白,明显低于对照组[(0.647±0.090)和(0.596±0.051)nmol/mg蛋白](P〈0.05)。实验组细胞液GST活性为(1.766±0.339)×10^3 nmol/(mg·min),明显低于对照组[(2.001±0.160)×103 nmol/(mg·min)](P〈0.05);实验组肝微粒体FMO和NCR的活性分别为(1.142±0.327)和(0.602±0.162)×10^3 nmol/(mg·min),明显高于对照组[(0.882±0.150)和(0.442±0.082)×10^3nmol/(mg·min)](P〈0.05);而肝微粒体EROD和MROD的活性与对照组相比,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论长爪沙鼠感染多房棘球蚴后,肝微粒体FMO和NCR活性明显升高,GST活性明显降低。 展开更多
关键词 房棘球 长爪沙鼠 药物代谢酶 比色法
阿拉山口口岸地区多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1基因序列分析
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作者 尹小平 王安东 +3 位作者 田延河 梁臻 巴特 张江国 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2016年第5期481-483,共3页
目的分析阿拉山口口岸多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1(ND1)基因序列。方法使用ND1基因Cest引物对2014年捕获鼠类进行多房棘球蚴初筛,对阳性样品扩增ND1基因全长序列,利用Blast分析序列同源性、Mega6.0软件构建分子遗传进化树,使用DN... 目的分析阿拉山口口岸多房棘球蚴线粒体NADH脱氢酶亚基1(ND1)基因序列。方法使用ND1基因Cest引物对2014年捕获鼠类进行多房棘球蚴初筛,对阳性样品扩增ND1基因全长序列,利用Blast分析序列同源性、Mega6.0软件构建分子遗传进化树,使用DNAStar软件分析其跨膜结构、信号肽、B细胞抗原表位等。结果阿拉山口口岸1.57%的野鼠感染多房棘球蚴,其线粒体ND1基因全长894bp,编码297个氨基酸,与日本的多房棘球蚴AB018440和AB720065同源性最高,为100%。结论阿拉山口口岸地区野鼠存在多房棘球蚴感染,其序列信息为该地区多房棘球蚴的科学监控提供依据。 展开更多
关键词 房棘球 线粒体 NADH脱氢酶亚基1 基因 阿拉山口口岸
多房棘球蚴抗原蛋白TSP3抗原表位的生物信息学预测 预览 被引量:1
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作者 庞明泉 汤锋 +3 位作者 周虎 万陈飞 阳丹才让 樊海宁 《青海医学院学报》 CAS 2016年第1期1-8,共8页
目的预测多房棘球绦虫抗原蛋白TSP3的二级结构和优势抗原表位(T细胞和B细胞表位)。方法Genbank获取TSP3的氨基酸序列后通过生物信息学软件SOPMA预测二级结构特征,进一步通过在线软件IEDB、SYFPEITHI、Bcepred和ABCpred预测TSP3的T细... 目的预测多房棘球绦虫抗原蛋白TSP3的二级结构和优势抗原表位(T细胞和B细胞表位)。方法Genbank获取TSP3的氨基酸序列后通过生物信息学软件SOPMA预测二级结构特征,进一步通过在线软件IEDB、SYFPEITHI、Bcepred和ABCpred预测TSP3的T细胞和B细胞表位。同时对r11sP3的亲抽性、柔韧性、抗原性及蛋白表面暴露区域的特征进行预测。结果无规则卷曲和B转角分别占TSP3蛋白质的二级结构的25.68%和4.05%,说明潜在优势抗原性表位存在。通过多种生物信息学方法分析出TSP3潜在的T细胞表位为T33-42、T45-55、T53-63、T68-77、T80-90、T92-104、T110-122、T134-144;TSP3潜在的B细胞表位为T18-33、T45-55、T53-63、T64-75、T80-90、r1192-104、T110-122。结论TSP3的二级结构特征显示潜在优势抗原性表位存在,预测出8种T细胞抗原表位和7种B细胞抗原表位,为后续表位疫苗的设计奠定了理论基础。 展开更多
关键词 房棘球 TSP3 生物信息学 二级结构 抗原表位
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多房棘球蚴重组蛋白CTB-Emy162的原核表达及分离纯化 预览
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作者 周虎 汤锋 +4 位作者 庞明泉 万陈飞 樊海宁 阳丹才让 邓勇 《青海医学院学报》 CAS 2016年第1期9-15,共7页
目的构建融合基因CTB-Emy162原核表达系统,纯化得到多房棘球蚴重组蛋白CTB-Emy162。方法根据多房棘球蚴抗原Emy162在GenBank中的序列,用生物信息学软件Optimum TM Codon优化密码子适应指数(CAI)、最优密码子频率(FOP)及GC含量从... 目的构建融合基因CTB-Emy162原核表达系统,纯化得到多房棘球蚴重组蛋白CTB-Emy162。方法根据多房棘球蚴抗原Emy162在GenBank中的序列,用生物信息学软件Optimum TM Codon优化密码子适应指数(CAI)、最优密码子频率(FOP)及GC含量从而获得适合大肠杆菌BL-21表达的Emy162基因序列。PCR扩增Emy162基因,定向在pET-28a-CTB的CTB基因5’端插入Emy162基因。构建CTB和Emy162双基因原核表达质粒pET28a-CTB-Emy162,将该质粒转化于E.coli BL-21(DE3)中,经IPTG诱导蛋白表达后,利用Ni-NTA柱亲和层析及离子交换色谱纯化后获得目的蛋白。结果OptimumTMCodon获得优化后的Emy162序列,经生物公司测序及酶切鉴定结果证明重组质粒pET28a-CTB-Emy162构建成功,进一步实验结果表明CTB-Emy162在原核表达系统pET-28a中主要以包涵体形式存在,在可溶部位少量表达。继而经Ni-NTA柱亲和纯化及离子交换色谱纯化获得CTB-Emy162纯蛋白。结论以大肠杆菌E.coli BL-21(DE3)及pET-28a构成的原核表达系统能够成功表达重组蛋白CTB-Emy162,Ni-NTA纯化柱能够纯化目的蛋白CTB-Emy162。 展开更多
关键词 房棘球 Emy162 原核表达系统
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青南高原多房棘球蚴myophilin基因的克隆和序列分析 预览
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作者 何顺伟 张耀刚 +2 位作者 李超群 彭源 魏晓星 《青海医学院学报》 CAS 2016年第4期222-227,共6页
目的 克隆多房棘球绦虫(Em)的myophilin基因并对其序列进行分析与预测。方法提取Em原头节总RNA,采用RT-PCR技术扩增myophilin基因,将PCR产物连接入p GM-T载体,转化入DH 5α感受态细胞,挑选阳性克隆送测序。采用生物信息学软件对测序... 目的 克隆多房棘球绦虫(Em)的myophilin基因并对其序列进行分析与预测。方法提取Em原头节总RNA,采用RT-PCR技术扩增myophilin基因,将PCR产物连接入p GM-T载体,转化入DH 5α感受态细胞,挑选阳性克隆送测序。采用生物信息学软件对测序结果进行序列比对分析,同时预测编码蛋白的理化性质、二级结构、三级结构、翻译后修饰位点、结构域和抗原表位。结果 扩增出长度为576 bp的cDNA片段,包含完整开放阅读框(ORF),编码190个氨基酸,与已知细粒棘球绦虫的序列同源性达99%。预测结果显示,编码蛋白分子式为C_(935)H_(1519)N_(255)O_(285)S_(11),理论分子质量为212 876,PI为8.66。α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲在二级结构中所占的比例分别为51.58%、10.00%和38.42%。含有10个翻译后修饰位点,各1个Calponin结构域和CH结构域,8个B细胞抗原表位和6个T细胞抗原表位。结论 成功克隆出Em的myophilin基因并对其进行了有效分析和预测。 展开更多
关键词 房棘球 亲肌肉抗原 基因 克隆 序列 分析
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抗骨桥蛋白抗体对沙鼠肝多房棘球蚴组织周围血管生成的影响 被引量:1
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作者 吴何兴 吴向未 +6 位作者 连文波 王彦超 张小昭 张龙 张永国 孙红 张示杰 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第10期894-897,共4页
目的观察抗骨桥蛋白(osteopontin,OPN)抗体对长爪沙鼠肝多房棘球蚴(俗称泡球蚴)组织周围血管生成的影响。方法 90只长爪沙鼠随机分为3组,即模型对照组(A组),兔血清对照组(B组)和抗OPN抗体干预组(C组),所有沙鼠均采用开腹肝穿... 目的观察抗骨桥蛋白(osteopontin,OPN)抗体对长爪沙鼠肝多房棘球蚴(俗称泡球蚴)组织周围血管生成的影响。方法 90只长爪沙鼠随机分为3组,即模型对照组(A组),兔血清对照组(B组)和抗OPN抗体干预组(C组),所有沙鼠均采用开腹肝穿刺法接种泡球蚴原头节悬混液0.1ml(约含原头节400个)。B组于接种当天注射兔血清0.15ml/鼠,1次/2d,连续7次,之后改为每周1次,直至处死;C组采用相同的方法注射抗OPN抗体(效价1∶32);A组不作任何处理。分别与感染后第20、60、100、140、180d每组各处死6只沙鼠,留取肝泡球蚴组织,制作组织切片采用苏木素-伊红(H-E)法和免疫组化Envision法观察各组沙鼠肝泡球蚴组织MVD-CD34的表达情况。结果感染泡球蚴沙鼠肝脏中均可见团块状泡球蚴组织,部分播散至腹腔。感染20d时A、B、C组MVD分别为(9.83±3.87)/HP,(9.67±2.94)/HP和(7.50±1.87)/HP,感染60d时分别为(33.67±3.67)/HP,(32.83±6.11)/HP和(24.33±5.61)/HP,感染100d时分别为(44.67±4.92)/HP,(42.20±6.26)/HP和(28.00±8.76)/HP,感染140d时分别为(34.17±3.19)/HP,(31.67±4.97)/HP和(20.50±4.72)/HP;感染180d时分别为(32.33±7.42)/HP,(29.67±3.88)/HP和(13.50±3.21)/HP。其中感染60d及以后各时间点C组与A组和B组相比,微血管数差异有统计学意义(P〈0.05)。结论抗OPN抗体可抑制沙鼠肝泡球蚴组织周围血管生成。 展开更多
关键词 房棘球 骨桥蛋白 血管生成 MVD CD34
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