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急性腹泻患儿致泻性大肠埃希菌流行病学研究和耐药性分析
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作者 朱旭慧 周俞 +3 位作者 侯红艳 田磊 陈中举 孙自镛 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期214-218,共5页
目的了解致泻性大肠埃希菌(DEC)在急性腹泻患儿(<5岁)中的分布、流行状况以及耐药性。方法2015年8月1日至2016年9月30日,共收集华中科技大学同济医学院附属同济医院684例急性腹泻患儿的大便标本,培养后分离鉴定常见病原菌,鉴定为大... 目的了解致泻性大肠埃希菌(DEC)在急性腹泻患儿(<5岁)中的分布、流行状况以及耐药性。方法2015年8月1日至2016年9月30日,共收集华中科技大学同济医学院附属同济医院684例急性腹泻患儿的大便标本,培养后分离鉴定常见病原菌,鉴定为大肠埃希菌的菌落用PCR法扩增毒力基因,检测DEC感染情况;所有的致病性大肠埃希菌(EPEC)均同时采用血清凝集法进行血清学鉴定。琼脂稀释法进行药物敏感性试验。结果共分离到149株致病菌,分离率为21.7%;其中DEC 54株,居第2位,发病高峰在夏秋季。最常见的毒力基因型别是EPEC,占50%(27/54),其中非典型EPEC占77.8%(21/27),典型EPEC占22.2%(6/27);其次是肠聚集性大肠埃希菌20.4%(11/54)和肠产毒性大肠埃希菌14.8%(8/54),肠侵袭性大肠埃希菌和产志贺样毒素大肠埃希菌均为3.7%(2/54),混合型占7.4%(4/54)。多重PCR与单重PCR一致性为17/18;27株EPEC菌株,仅有11株(40.7%)血清凝集试验阳性。DEC对一线药物(氨苄西林、复方磺胺甲噁唑)以及头孢唑啉、头孢呋辛、头孢噻肟的耐药率均超过50%(27/54);耐药率较低的药物有头孢西丁、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦以及亚胺培南和美罗培南。5株(9.2%)DEC对碳青霉烯类耐药。结论DEC耐药现象严重,一线药物氨苄西林、复方磺胺甲噁唑可能不再适合DEC感染的经验性治疗。此外,相对高效的碳青霉烯类也出现了耐药。需加强对DEC的流行病学调查和耐药性分析。 展开更多
关键词 腹泻 大肠杆菌 毒力 大肠杆菌感染 抗药性 细菌 流行病学研究
不同水生植物对大肠杆菌去除作用的比较研究 预览
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作者 翟龙波 陈靖 +4 位作者 章熙锋 唐家良 高美荣 杨红薇 李舒涵 《人民长江》 北大核心 2019年第4期42-47,共6页
目前国内外水体污染防治针对病原菌的去除技术研究甚少,基于研究区域内已有的人工湿地和生态沟渠基本配置形式,通过室内常温盆栽试验筛选可高效去除病原菌(总大肠菌群和埃希氏大肠杆菌)的水生植物,并在自然生态沟渠(200 m)进行实地筛选... 目前国内外水体污染防治针对病原菌的去除技术研究甚少,基于研究区域内已有的人工湿地和生态沟渠基本配置形式,通过室内常温盆栽试验筛选可高效去除病原菌(总大肠菌群和埃希氏大肠杆菌)的水生植物,并在自然生态沟渠(200 m)进行实地筛选。结果表明:水生植物能通过根系分泌物(降低水体pH)抑制大肠杆菌生存繁殖,并增加湿地拦截吸附能力;大部分水生植物组能有效吸附并去除埃希氏大肠杆菌,其中以水芹去除效果最佳;除香菇草、野茭白外,其他水生植物均能有效去除总大肠菌群;自然生态沟渠中再力花、美人蕉、岩菖蒲对总大肠菌群去除效率较高。总体而言,岩菖蒲、狐尾藻、再力花、水葫芦、美人蕉、水芹对大肠杆菌的去除率较高,可作为适宜的生态沟渠水生植物用于生态防治实践中。 展开更多
关键词 水生植物 盆栽实验 生态沟渠 大肠杆菌 去除率
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孜然精油抑菌机制 预览
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作者 甘芝霖 倪元颖 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第2期154-159,164共7页
为了探究孜然精油的抑菌作用,本文以大肠杆菌等常见致病菌为研究对象,通过牛津杯实验、最小抑制浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定、微生物生长曲线和杀菌曲线的绘制等对其抑菌活性进行定性分析,然后采用电子显微镜法和相对电导率测... 为了探究孜然精油的抑菌作用,本文以大肠杆菌等常见致病菌为研究对象,通过牛津杯实验、最小抑制浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)的测定、微生物生长曲线和杀菌曲线的绘制等对其抑菌活性进行定性分析,然后采用电子显微镜法和相对电导率测定法对其抑菌机理进行探讨。结果表明:孜然精油对大肠杆菌和福氏志贺氏菌作用最为明显(MIC均为25μg/m L,MBC均为50μg/m L),推测其作用机理是改变了微生物细胞膜的渗透性,从而使细胞形态发生收缩、局部变形、细胞壁和细胞膜的破坏、细胞质的损耗等异常改变,进而导致细胞死亡。以上研究结果表明,孜然精油对细菌生长具有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 孜然精油 大肠杆菌 福氏志贺氏菌 抑菌活性
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聚焦科学思维,打造基因工程专题复习新模式
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作者 侯勤堂 《教学考试》 2019年第15期45-49,共5页
《普通高中生物学课程标准(2017年版)》通过凸显生物学核心概念的教学以培养学生的生物学核心素养,在教学中教师要围绕核心概念的教学培养学生的科学思维、科学探究方法,在此基础上形成生命观念和社会责任,因此,核心素养也是高考考查的... 《普通高中生物学课程标准(2017年版)》通过凸显生物学核心概念的教学以培养学生的生物学核心素养,在教学中教师要围绕核心概念的教学培养学生的科学思维、科学探究方法,在此基础上形成生命观念和社会责任,因此,核心素养也是高考考查的核心目标。 展开更多
关键词 基因工程 科学思维 目的基因 大肠杆菌 高中生物学 全国卷 核心素养 限制酶 原创题 DNA 受体细胞 胰岛素 基因表达载体
中华蜜蜂Apidaecin的重组表达及其抗菌活性 预览
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作者 陈文凤 王红芳 +3 位作者 刘振国 张卫星 郗学鹏 胥保华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期767-776,共10页
【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana)抗菌肽Apidaecin在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的重组表达,并验证纯化后的重组抗菌肽Apidaecin在体内和体外是否具有抗菌活性,为开发新型、安全具有抗菌和免疫调节功能的抗菌肽制剂提... 【目的】研究中华蜜蜂(Apis cerana cerana)抗菌肽Apidaecin在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中的重组表达,并验证纯化后的重组抗菌肽Apidaecin在体内和体外是否具有抗菌活性,为开发新型、安全具有抗菌和免疫调节功能的抗菌肽制剂提供理论依据。【方法】以意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)Apidaecin为模板,克隆出中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,成功构建his-pHT43/Apidaecin表达载体,并参照MoBiTec所提供的制备方法成功制得枯草芽孢杆菌感受态细胞,现配现用,以保证其活性并得以在枯草芽孢杆菌表达系统中重组表达。使用His标签蛋白纯化试剂盒(可溶性蛋白)进行表达蛋白的分离纯化,使用Easy II Protein QuantitativeKit(BCA)试剂盒测定浓度。纯化得到的重组抗菌肽Apidaecin作用于大肠杆菌K88,在体外进行抑菌圈试验和最小浓度抑菌法测定;在体内,以小鼠为试验动物模型,试验组小鼠腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin,阴性对照组注射相同体积的生理盐水,阳性对照组注射相同体积的头孢霉素,然后人为感染大肠杆菌K88,感染24 h后对小鼠进行解剖,取得肠道样品和血液样品,并从肠道屏障和免疫功能两个方面探讨重组抗菌肽Apidaecin对感染大肠杆菌K88小鼠的保护作用。使用ELISA试剂盒对染菌小鼠血清免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)与肠道sIgA水平进行测定,采用qRT-PCR法对小鼠肠道紧密连接蛋白基因(claudin-1、ZO-2)以及小鼠肠道细胞因子(促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL6和抑炎因子IL10)的转录水平进行测定。【结果】克隆得到的中华蜜蜂Apidaecin含有183bp的碱基,编码60个氨基酸,包含Apidaecin的信号肽序列、一个基础的RR二肽以及抗菌肽Apidaecin的氨基酸序列(内含高度保守的8个氨基酸序列),编码的蛋白质命名为AccApidaecin,其分子量为15.6 kD,等电点为5.33。在IPTG终浓度为3 mmol·L-1,诱导温度为30℃,诱导表达12 h后,可从1 L表达上清中� 展开更多
关键词 中华蜜蜂 抗菌肽 重组表达 大肠杆菌 抗菌活性
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猪大肠杆菌与嗜水气单胞杆菌混合感染病例的诊断及其体外抑菌试验 预览
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作者 戚伟 区海蕴 +7 位作者 周亚兰 高蕊 刘星雨 王笑焓 张丰薇 林敏 李雅婷 朱芝秀 《江西畜牧兽医杂志》 2019年第2期10-14,共5页
南昌某猪场仔猪大量死亡,为了查明病因,找到防控的有效办法,对死亡仔猪病变部位进行细菌分离培养,得到分离菌Z-d-1、Q-d-1、Q-d-2,用常规法对3株分离菌进行生化鉴定、药敏试验、致病性试验、体外抑菌试验。结果:Z-d-1与大肠杆菌的生化... 南昌某猪场仔猪大量死亡,为了查明病因,找到防控的有效办法,对死亡仔猪病变部位进行细菌分离培养,得到分离菌Z-d-1、Q-d-1、Q-d-2,用常规法对3株分离菌进行生化鉴定、药敏试验、致病性试验、体外抑菌试验。结果:Z-d-1与大肠杆菌的生化特性一致;Q-d-1、Q-d-2与气单胞杆菌生化特性一致;3株分离菌对大部分抗生素耐药,对丁胺卡那、呋喃唑酮均高敏;攻毒小白鼠24 h均死亡;乳酸菌对其均有较好的抑制作用。结论:分离菌Z-d-1为大肠杆菌,Q-d-1、Q-d-2为嗜水气单胞杆菌;该病为大肠杆菌与嗜水气单胞杆菌混合感染所致;乳酸菌可取代或部分取代抗生素对该病的防治。 展开更多
关键词 大肠杆菌 嗜水气单胞杆菌 分离鉴定 抑菌试验
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晋东南猪源大肠杆菌血清型调查与药敏试验
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作者 申子平 孔庆娟 郭丹丹 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期96-99,共4页
本研究对晋东南10个县区的养猪场进行取样,通过细菌分离、培养和鉴定后,发现大肠杆菌有12种血清型,其中主要血清型为O138(8/42)、O2(6/42)、O107(5/42)和O152(5/42)。药敏试验结果显示,大肠杆菌高敏感性的药物有头孢吡肟(高敏率89.47%)... 本研究对晋东南10个县区的养猪场进行取样,通过细菌分离、培养和鉴定后,发现大肠杆菌有12种血清型,其中主要血清型为O138(8/42)、O2(6/42)、O107(5/42)和O152(5/42)。药敏试验结果显示,大肠杆菌高敏感性的药物有头孢吡肟(高敏率89.47%)、阿米卡星(高敏率81.58%)、呋喃唑酮和氧氟沙星;中度敏感药物有庆大霉素和氟苯尼考;低敏感药物有利福平(耐药率81.58%)、阿莫西林(耐药率71.05%)和大观霉素等。本研究结果为晋东南地区猪大肠杆菌病的有效防控提供了理论基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 血清型 药敏试验
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一株鸡大肠杆菌的分离鉴定与耐药性研究
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作者 江林宜 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第1期100-103,共4页
无菌采集病死鸡的肝脏、肾脏、脾脏、肺脏等组织,接种于麦康凯平板和普通琼脂,进行细菌分离与培养,并对分离菌进行生化试验和16s rDNA基因序列分析,同时用14种抗菌药物对分离菌株进行药敏试验。结果显示,分离菌在麦康凯平板上呈红色圆... 无菌采集病死鸡的肝脏、肾脏、脾脏、肺脏等组织,接种于麦康凯平板和普通琼脂,进行细菌分离与培养,并对分离菌进行生化试验和16s rDNA基因序列分析,同时用14种抗菌药物对分离菌株进行药敏试验。结果显示,分离菌在麦康凯平板上呈红色圆形菌落;镜检结果为革兰氏阴性杆菌;分离菌株能够发酵葡萄糖、棉籽糖、乳糖、木糖等糖类并产酸产气,鸟氨酸及赖氨酸试验阳性,苯丙氨酸脱氨酶及硫化氢阴性,符合大肠杆菌的生化特性;16s rDNA基因序列测定结果显示分离菌株为大肠杆菌;分离菌株对菌必治、美洛西林、恩诺沙星、诺氟沙星的敏感率较高,而对萘啶酸、青霉素等耐药。本研究为鸡大肠杆菌的诊断和防治提供了依据。 展开更多
关键词 大肠杆菌 耐药性 分离 鉴定
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交叉引物扩增法检测食品中大肠杆菌不耐热肠毒素的研究 预览
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作者 刘文鑫 袁超文 +1 位作者 张力国 冯瑜菲 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第9期143-148,共6页
肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichiacoli,ETEC)可引起严重食源性疾病,建立快速、准确的检测方法对保障食品安全和人类健康具有重要意义。对ETEC不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)基因保守序列设计交叉引物等温扩增(c... 肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichiacoli,ETEC)可引起严重食源性疾病,建立快速、准确的检测方法对保障食品安全和人类健康具有重要意义。对ETEC不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)基因保守序列设计交叉引物等温扩增(cross priming amplification,CPA)特异性引物,同时对反应温度、脱氧核糖核苷三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate,dNTPs)浓度、Bst-DNA聚合酶大片段浓度、Mg^2+浓度、甜菜碱浓度和反应时间进行优化;选取6株大肠杆菌和其他8株近源菌对CPA法进行特异性和敏感性分析;将纯培养后的产肠毒素大肠杆菌菌液稀释后随机污染46份不含LT肠毒素的生猪肉样品以评价该方法的应用效果。结果表明,CPA的最优反应温度为62℃、dNTPs浓度为0.3mol/L、Bst聚合酶浓度为8U/管、Mg2+浓度为2.0mmol/L、甜菜碱浓度为0.8mol/L、反应时间为45min;CPA方法检测产肠毒素大肠杆菌菌液的最低检出量为40cfu/mL,为环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法的2倍,且特异性较高;46份人工污染生猪肉样品中共检测出阳性样品7份,CPA扩增结果与LAMP和荧光定量聚合酶链反应结果一致,检出率均为15.2%。 展开更多
关键词 大肠杆菌 不耐热肠毒素 交叉引物等温扩增 快速检测
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新生犊牛产气荚膜梭菌与大肠杆菌混合感染实验室诊断 预览
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作者 李岩 刘欢欢 +3 位作者 李树东 孙晓莹 杨雨晴 侯喜林 《现代畜牧兽医》 2019年第2期28-33,共6页
对黑龙江某牛场临床表现为腹泻、高热、猝死的新生犊牛进行诊断,通过涂片、革兰氏染色、镜检、细菌分离培养等技术,分离得到1株革兰氏阳性细菌和1株革兰氏阴性细菌,对分离菌进行纯化培养、生化鉴定、PCR毒力因子测定以及动物感染等试验... 对黑龙江某牛场临床表现为腹泻、高热、猝死的新生犊牛进行诊断,通过涂片、革兰氏染色、镜检、细菌分离培养等技术,分离得到1株革兰氏阳性细菌和1株革兰氏阴性细菌,对分离菌进行纯化培养、生化鉴定、PCR毒力因子测定以及动物感染等试验,确定两分离菌株分别为A型产气荚膜梭菌和含有irp2、fyua病因子的大肠杆菌。结果表明,该疫情为牛产气荚膜梭菌与大肠杆菌混合感染。根据药敏试验结果,利用红霉素和壮观霉素进行了针对性地防治,迅速控制了疫情。 展开更多
关键词 犊牛猝死 产气荚膜梭菌 大肠杆菌 混合感染
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大肠杆菌一步水热法制备氮掺杂碳量子点及其在铁离子检测中应用 预览
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作者 林烨 李跃海 +3 位作者 杨辉 黄虹浦 李琳 李顺兴 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2019年第5期748-755,共8页
以大肠杆菌沉淀物为前驱体,采用水热法(180℃)一步合成水溶性好、pH稳定性和抗盐性突出的氮掺杂碳量子点(N-CQDs)。通过透射电子显微镜、动态光散射和傅立叶红外光谱对N-CQDs进行了表征,N-CQDs呈圆球状,粒径均一,大小4.1nm,分散良好,表... 以大肠杆菌沉淀物为前驱体,采用水热法(180℃)一步合成水溶性好、pH稳定性和抗盐性突出的氮掺杂碳量子点(N-CQDs)。通过透射电子显微镜、动态光散射和傅立叶红外光谱对N-CQDs进行了表征,N-CQDs呈圆球状,粒径均一,大小4.1nm,分散良好,表面含大量亲水基团;采用紫外-可见吸收光谱和荧光光谱考察其光学性能,结果表明,Fe^3+离子可对N-CQDs选择性荧光猝灭,在0.58nmol/L~100μmol/L浓度范围内,荧光猝灭程度与Fe^3+浓度呈良好的线性关系,检出限为0.58nmol/L,回收率为93.9%~108.7%;同时考察了pH值、含盐量、金属离子共存对Fe^3+测定的干扰,结果表明,本方法适用于含盐量较高、pH值变化范围较大、共存金属离子多样的近海海水中Fe^3+的选择性荧光检测。 展开更多
关键词 大肠杆菌 氮掺杂碳量子点 铁离子 荧光探针
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水中微世界
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《少先队员:知识路》 2019年第5期35-37,共3页
你一定认识那只长得像草鞋的微生物——大草履虫。在微生物群体中,它可算得上是大块头了,体长300微米左右,是微生物群体中原生动物类的代表。你听说过大肠杆菌吗?作为典型的细菌,一个大肠杆菌从头到尾的长度只有2微采。还有体型更小的... 你一定认识那只长得像草鞋的微生物——大草履虫。在微生物群体中,它可算得上是大块头了,体长300微米左右,是微生物群体中原生动物类的代表。你听说过大肠杆菌吗?作为典型的细菌,一个大肠杆菌从头到尾的长度只有2微采。还有体型更小的类群呢——病毒,一般病毒的直径只有0.3微米左右,用那个刚才你用来看草履虫的光学显微镜想看到病毒是不可館的。要想看清病毒的模样,必须使用放大倍数更高的电子显微镜。 展开更多
关键词 世界 大肠杆菌 光学显微镜 电子显微镜 微生物 放大倍数 草履虫 病毒
钴铯锶3种核素对大肠杆菌的毒性研究 预览
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作者 黄志 颜未 蒯琳萍 《江苏农业科学》 2019年第6期288-288,289-293共2页
为了研究核电站建设运营、矿源开采等行为对周边环境的影响,以大肠杆菌为对象,通过绘制生长曲线以及MTT(噻唑蓝)法定量测量钴(Co)、铯(Cs)、锶(Sr)3种核素对大肠杆菌的毒性作用,得到了钴、铯、锶3种核素与大肠杆菌的剂量-抑菌率关系,同... 为了研究核电站建设运营、矿源开采等行为对周边环境的影响,以大肠杆菌为对象,通过绘制生长曲线以及MTT(噻唑蓝)法定量测量钴(Co)、铯(Cs)、锶(Sr)3种核素对大肠杆菌的毒性作用,得到了钴、铯、锶3种核素与大肠杆菌的剂量-抑菌率关系,同时通过测定细胞壁通透性以及胞内活性氧含量,发现这3种离子对大肠杆菌的抑菌作用与细胞壁通透性以及胞内活性氧的积累可能存在正相关关系。结果表明,Co^2+、Sr^2+、Cs^+对大肠杆菌的半致死浓度分别为3.38、251、1600mg/L,其金属毒性由强到弱顺序为Co^2+>Sr^2+>Cs^+,并且Sr^2+对大肠杆菌生长具有双向性影响,低浓度(<10mg/L)时表现为促进生长作用,而浓度增高则表现为抑制作用。Co2+的抑菌作用与大肠杆菌细胞壁通透性增大有关,而Sr^2+、Cs^+的抑菌作用通过金属离子诱导细胞体内活性氧含量增大,从而抑制细菌生长。从宏观层面反应了3种核素的金属毒性,并从微观层面进行了机理的探讨,为后续研究钴、铯、锶等核素对生物体的致毒效应以及环境中核素的生物监测方法提供参考依据。 展开更多
关键词 Co Sr Cs 金属毒性 大肠杆菌 活性氧含量 细胞壁通透性
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株T1样噬菌体vB_EcoS_IME18的分离鉴定及其受体分析 预览
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作者 李萍 林洪 +1 位作者 童贻刚 王静雪 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期79-86,共8页
以大肠杆菌BL21为指示菌分离得到1株噬菌体vB_EcoS_IME18(IME18),通过电镜观察噬菌体形态,并测定其最佳感染复数、一步生长曲线、裂解谱和体外杀菌效果;使用IlluminaMiSeq测序仪完成噬菌体全基因组测序,利用比较基因组学分析噬菌体基因... 以大肠杆菌BL21为指示菌分离得到1株噬菌体vB_EcoS_IME18(IME18),通过电镜观察噬菌体形态,并测定其最佳感染复数、一步生长曲线、裂解谱和体外杀菌效果;使用IlluminaMiSeq测序仪完成噬菌体全基因组测序,利用比较基因组学分析噬菌体基因组特征;通过筛选噬菌体抗性株分析其耐受原因,利用受体基因沉默突变实验、噬菌体斑点实验和噬菌体吸附实验验证噬菌体受体。结果表明,噬菌体IME18具有二十面体头部和非收缩性尾部,属于长尾噬菌体科,Tunavirinae亚科,T1类噬菌体;噬菌体IME18的最佳感染复数为0.01,潜伏期为5min,裂解期50min,爆发量高达223PFU/cell;在体外,噬菌体IME18能在90min内有效杀死处于对数期的BL21;噬菌体IME18基因组全长50354bp,G+C含量为45.6%;蛋白FhuA、TonB在噬菌体IME18的吸附和侵染过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 大肠杆菌 噬菌体 鉴定 噬菌体受体
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虎源大肠杆菌ESBLs基因型的检测 预览
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作者 牛鑫鑫 冯涛 +2 位作者 何纪元 薛原 曾祥伟 《野生动物学报》 北大核心 2019年第1期70-74,共5页
为检测虎源大肠杆菌的耐药性,根据超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型的流行情况指导临床合理使用抗菌药物,有效控制产ESBLs菌株的流行和感染。实验采用K-B法检测了30株虎源大肠杆菌对20种药物的耐药性,同时用PCR方法对确证的产ESBLs大肠... 为检测虎源大肠杆菌的耐药性,根据超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型的流行情况指导临床合理使用抗菌药物,有效控制产ESBLs菌株的流行和感染。实验采用K-B法检测了30株虎源大肠杆菌对20种药物的耐药性,同时用PCR方法对确证的产ESBLs大肠杆菌进行TEM、CTX-M、OXA和SHV基因型检测。结果显示:21株虎源大肠杆菌为产ESBLs株,阳性率为70%。PCR扩增出了片段大小与预期相符的CTX-M型、OXA型、SHV型和TEM型基因。4个基因型的阳性率分别为50%、20%、6.67%、80%。可见,东北虎林园中产ESBLs的虎源大肠杆菌的检出率较高,TEM型为主要流行基因型。另外,发现产酶大肠杆菌比非产酶大肠杆菌的耐药性更高。 展开更多
关键词 ESBLS 大肠杆菌
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基因重组大肠杆菌表达血红素加氧酶-1及培养条件优化
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作者 梅建凤 赵文渊 +3 位作者 易喻 陈建澍 张彦璐 应国清 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期541-547,共7页
【背景】血红素加氧酶-1 (HO-1)具有抗氧化应激、抗凋亡和抗纤维化等多种生理效应,有望成为一种新型药物应用于临床疾病的治疗。【目的】构建表达HO-1的基因重组大肠杆菌(Escherichiacoli),并优化其表达培养条件,实现HO-1高产率的表达... 【背景】血红素加氧酶-1 (HO-1)具有抗氧化应激、抗凋亡和抗纤维化等多种生理效应,有望成为一种新型药物应用于临床疾病的治疗。【目的】构建表达HO-1的基因重组大肠杆菌(Escherichiacoli),并优化其表达培养条件,实现HO-1高产率的表达。【方法】PCR法克隆集胞藻(Synechocystissp.)PCC6803的HO-1基因(ho1),构建重组质粒pET-28a-ho1,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,单因素实验优化表达培养基的种类、诱导剂添加时间、诱导培养时间、诱导剂浓度和诱导培养温度。【结果】构建了表达HO-1的基因重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a-ho1菌株,用甘油(GY)培养基培养至菌体浓度OD600约为0.8时,加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导,30°C诱导培养6 h,HO-1的表达量最高,Ni-NTA柱分离纯化得到的HO-1收率占细胞总蛋白的10.9%。【结论】获得了可溶性表达HO-1的基因重组大肠杆菌及其较佳的培养条件,为进一步研究集胞藻来源的HO-1的酶学性质和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 血红素加氧酶 原核表达 大肠杆菌 表达条件优化
大肠杆菌-类中性粒细胞-金属片共培养模型的构建 预览
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作者 杨闯 朱崇尊 +3 位作者 何人可 郭阁永 汤瑾 沈灏 《中华关节外科杂志(电子版)》 CAS CSCD 2019年第1期64-72,共9页
目的建立稳定发光的类中性粒细胞-大肠杆菌-金属片双荧光三相共培养动态模型,并研究其可行性和应用价值。方法抽提pUC57-mCherry质粒,电转入大肠杆菌临床株ST131,构建稳定发光的ST131-mCherry大肠杆菌。通过活体成像(IVIS)系统对构建的S... 目的建立稳定发光的类中性粒细胞-大肠杆菌-金属片双荧光三相共培养动态模型,并研究其可行性和应用价值。方法抽提pUC57-mCherry质粒,电转入大肠杆菌临床株ST131,构建稳定发光的ST131-mCherry大肠杆菌。通过活体成像(IVIS)系统对构建的ST131-mCherry大肠杆菌进行筛选。通过稀释涂板法比较ST131-mCherry与ST131的生长曲线,通过结晶紫染色比较ST131-mCherry与ST131的生物膜形成能力。将ST131-mCherry与钛片共培养,荧光显像观察不同时间点成膜情况,并通过超声震荡稀释涂板法对钛片表面生物膜计量。采用全反式维甲酸(ARTA)诱导HL60-eGFP细胞分化为类中性粒细胞。使用诱导分化的HL60-eGFP细胞、ST131-mCherry与金属片共培养,构建双荧光三相共培养模型,通过荧光显微镜观察以及稀释涂板计数评价不同金属表面的类中性白细胞抗菌能力。使用独立样本t检验对OD值和活菌数等定量数据进行统计。结果经临床株筛选,质粒电转获得红色荧光菌株'ST131-mCherry',在体外连续培养48 h,ST131-mCherry可稳定发光。ST131-mCherry与野生株ST131相比,两者的生长曲线没有统计学差异。在胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSB)中,ST131与ST131-mCherry生物膜结晶紫染色490nm的OD值分别为(1. 04±0. 06)和(1. 04±0. 05)(t=0. 890,P> 0. 05);在0. 5%葡萄糖胰蛋白胨大豆肉汤培养基(TSBG)中,分别为(1. 55±0. 06)和(1. 49±0. 17)(t=0. 822,P> 0. 05);在10%滑液(SF)中,分别为(2. 13±0. 16)和(2. 124±0. 13)(t=0. 833,P>0. 05)。ST131-mCherry可以在钛片表面成膜,其荧光强度随着成膜量的增加而变强。诱导分化的HL60-eGFP细胞、ST131-mCherry与钛片或钽片共培养结果显示,经过60 min的共培养,钽金属体系内的HL60-eGFP细胞能够吞噬更多的ST131-mCherry大肠杆菌,钛片体系和钽片体系内细菌存活率分别为(33±2. 5)%和(15. 7±1. 2)%(t=10. 47,P <0. 01)。结论本研究成功构建了大肠杆菌-类中性粒细胞-金� 展开更多
关键词 假体相关感染 大肠杆菌 荧光 中性粒细胞
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大肠杆菌产脂肪酶代谢通量分析
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作者 左正三 张柯 +3 位作者 宋萍 黄宝琪 方心草 黄和 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期14-21,共8页
考察了5L发酵罐中大肠杆菌表达枯草芽孢杆菌脂肪酶LipA的发酵特性,诱导2h后,脂肪酶比活达到最高值18.11U/mg。建立了E.coli代谢合成脂肪酶的反应网络,并通过代谢通量分析发现,经诱导产酶后,乳酸代谢通量增加,碳流通过糖酵解途径(embden-... 考察了5L发酵罐中大肠杆菌表达枯草芽孢杆菌脂肪酶LipA的发酵特性,诱导2h后,脂肪酶比活达到最高值18.11U/mg。建立了E.coli代谢合成脂肪酶的反应网络,并通过代谢通量分析发现,经诱导产酶后,乳酸代谢通量增加,碳流通过糖酵解途径(embden-meyerhof-parnaspathway,EMP)生成乳酸,分流了部分合成生物量的碳流,降低了生物量合成的速率;缬氨酸通量的增加满足了脂肪酶合成的需求;ATP通量的减少,限制了脂肪酶的高效合成。该研究为进一步指导提高生产脂肪酶菌种的发酵条件优化和代谢途径改造提供了理论依据。 展开更多
关键词 大肠杆菌 代谢通量分析 脂肪酶 LipA
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微生物学技术在食品专业综合实验教学中的应用与实践——以“猪源大肠杆菌耐药性调查研究”为例 预览
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作者 蒋晗 李佳瑶 +2 位作者 方结红 黄光荣 朱诚 《农产品加工》 2019年第2期99-101,共3页
针对食品质量与安全专业综合实验既要有基础性试验、设计性实验和综合性试验相结合,又要有效涵盖学科方向的典型实验操作与实验设计分析这一目标,设计了课题'猪源大肠杆菌耐药性调查研究',将食品微生物学检验国标方法、分子生... 针对食品质量与安全专业综合实验既要有基础性试验、设计性实验和综合性试验相结合,又要有效涵盖学科方向的典型实验操作与实验设计分析这一目标,设计了课题'猪源大肠杆菌耐药性调查研究',将食品微生物学检验国标方法、分子生物学方法和美国临床和实验标准协会(CLSI,2012)推荐的药敏试验法应用到食品质量与安全专业综合实验教学项目中,调研了浙江省某地区农贸市场和超市生鲜猪肉样本中大肠杆菌耐药情况。食品质量与安全专业本科生通过此项专业综合实验训练,熟练掌握了微生物学相关技术,有利于培养学生试验设计能力、数据分析能力和写作能力,可为食品专业相关实验教学改革提供参考与借鉴。 展开更多
关键词 微生物学技术 食品质量与安全专业综合实验教学 大肠杆菌 耐药性
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鸽源大肠杆菌分离鉴定、毒力基因检测及药敏试验 预览
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作者 王洪彬 朱利霞 +1 位作者 高桂生 史秋梅 《河北科技师范学院学报》 CAS 2019年第1期48-53,共6页
为了确定疑似细菌感染鸽的病原菌,以病死鸽为研究对象,进行病原菌的分离培养、生化鉴定、16SrDNA序列分析、血清型检测、动物致病性试验、毒力基因检测以及药敏试验。结果表明:此次分离的1株优势菌株,命名为QH-1,是短杆状、中等大小的... 为了确定疑似细菌感染鸽的病原菌,以病死鸽为研究对象,进行病原菌的分离培养、生化鉴定、16SrDNA序列分析、血清型检测、动物致病性试验、毒力基因检测以及药敏试验。结果表明:此次分离的1株优势菌株,命名为QH-1,是短杆状、中等大小的革兰氏染色阴性菌,且其形态特征和生化鉴定特性与大肠杆菌相符;经16SrDNA序列分析进一步证实菌株QH-1为大肠杆菌;血清型检测结果显示,分离菌株QH-1为O26血清型分离株;动物致病性试验结果显示,分离菌株QH-1能引起鸽和小白鼠感染发病,且试验鸽发生与自然感染病例相似症状;毒力基因检测结果显示,大肠杆菌QH-1携带irp2,FyuA毒力基因;药敏试验结果显示,大肠杆菌QH-1对头孢曲松敏感;对阿莫西林、环丙沙星等耐药。疑似细菌感染的鸽病例为大肠杆菌的感染,可以选择头孢曲松进行防控。 展开更多
关键词 大肠杆菌 分离与鉴定 毒力基因 药敏试验
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