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循环microRNA对原发性肝癌诊断价值的初步研究 预览
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作者 赵西太 聂青和 +2 位作者 龙振昼 高禄化 王媛媛 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2019年第2期129-136,共8页
目的筛选原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)相关的miRNA,并探索其对PLC的诊断价值。方法生物信息学方法发掘PLC异常表达的miRNA,结合miRNA靶基因预测及PLC相关高频突变基因,确定目的miRNA;收集确诊PLC、肝硬化及非肝病对照患者血浆... 目的筛选原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)相关的miRNA,并探索其对PLC的诊断价值。方法生物信息学方法发掘PLC异常表达的miRNA,结合miRNA靶基因预测及PLC相关高频突变基因,确定目的miRNA;收集确诊PLC、肝硬化及非肝病对照患者血浆样本及临床资料,定量PCR检测上述目的miRNA表达水平;以肝硬化为对照,选取有价值的miRNA进行PLC诊断试验,绘制ROC曲线,计算曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度及约登指数(YI)等评价指标。结果筛选得到4种miRNA,分别为miR-10b-5p、miR-21-5p、miR-1258、miR-1269a。纳入确诊PLC39例、肝硬化38例和无肝病对照者8例,检测上述miRNA血浆表达水平,结果显示,与肝硬化患者比较,PLC患者miR-10b-5p、miR-21-5p表达水平升高,差异有统计学意义(P=0.028、0.004);而miR-1258表达水平基本相同(P=0.985),miR-1269a表达升高,但差异无统计学意义(P=0.223)。miR-10b-5p、miR-21-5p和AFP诊断PLC的AUC为0.651、0.730、0.731(P<0.05),YI为0.273、0.458、0.379;以上3个指标两两或三者进行平行诊断试验和系列诊断试验,可显著提高灵敏度或特异度;miR-10b-5p、miR-21-5p、miR-1258和AFP联合诊断PLC的AUC为0.885(P<0.001),YI为0.639。结论生物信息学方法筛选目的miRNA是简便、可靠的方法,但临床验证过程必不可少。单个miRNA诊断PLC准确性一般,多个miRNA联合或联合AFP可显著提高PLC诊断准确性,有望成为miRNA诊断PLC的主要方法。 展开更多
关键词 原发性肝癌 循环MICRORNA 生物信息学 分子诊断 实时定量PCR
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比克氏棉色素腺体形态建成与棉酚代谢特性的研究 预览
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作者 胡佳惠 赵天伦 +3 位作者 李诚 余静文 陈进红 祝水金 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期54-63,共10页
【目的】对比克氏棉(G.bickii Prokh)种子形成过程和种子萌发过程中的色素腺体形态建成特点、色素腺体与棉酚含量的动态关系及其分子机理进行探究。【方法】以比克氏棉为材料,进行组织切片观察、棉酚含量测定并分析对种子萌发期色素腺... 【目的】对比克氏棉(G.bickii Prokh)种子形成过程和种子萌发过程中的色素腺体形态建成特点、色素腺体与棉酚含量的动态关系及其分子机理进行探究。【方法】以比克氏棉为材料,进行组织切片观察、棉酚含量测定并分析对种子萌发期色素腺体形成及棉酚合成基因的表达谱。【结果】比克氏棉在种胚形成过程中,子叶上形成大量色素腺体原,并在种子萌发后12h形成腔体结构,转换成成熟的色素腺体;比克氏棉种胚形成过程及种子萌发过程中均未检测到棉酚,但从种子萌发12h开始可以检测到较低含量的棉酚。种子萌发期色素腺体形成及棉酚合成相关基因表达谱分析结果表明,GoPGF基因在比克氏棉种子萌发12h的子叶上表达量较高,与比克氏棉色素腺体形成有关;法尼基焦磷酸合成酶(FPS)基因在种子萌发24h的子叶上表达量较高,可能与棉酚向子叶色素腺体转运有关;CYP706B1基因在种子萌发0h较高,HMG1基因在种子萌发0h、36h和48h的子叶上表达量均较高,说明这两个基因与种子萌发后色素腺体腔的形成有关,并参与棉酚的贮运;杜松烯合酶基因(CAD1-A)和HMG2基因与比克氏棉色素腺体形成无密切关系。【结论】种子萌发后的12h为比克氏棉子叶色素腺体形态建成的关键时期,且色素腺体的形态建成与棉酚出现的时间具有同步性。GoPGF、FPS、CYP706B1、HMG1参与色素腺体的形成及棉酚的转运。 展开更多
关键词 比克氏棉 色素腺体 棉酚 实时定量PCR
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火龙果miRNA表达分析的qRT-PCR检测体系建立 预览
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作者 李阿利 杨鹍 +2 位作者 文壮 仇志浪 文晓鹏 《种子》 北大核心 2019年第3期6-10,14共6页
基于火龙果小RNA组测序序列设计miR 396 b特异引物,采用茎环法和加尾法分别对火龙果miR 396 b进行表达分析,并对2个常用内参基因5 S和U 6的稳定性进行评价,建立火龙果miRNA表达分析的qRT-PCR检测体系。结果表明,U 6作为内参基因更稳定;... 基于火龙果小RNA组测序序列设计miR 396 b特异引物,采用茎环法和加尾法分别对火龙果miR 396 b进行表达分析,并对2个常用内参基因5 S和U 6的稳定性进行评价,建立火龙果miRNA表达分析的qRT-PCR检测体系。结果表明,U 6作为内参基因更稳定;茎环法灵敏度高、特异性强,以茎环法设计的引物检测miR 396 b在火龙果不同组织均有表达,且在火龙果幼茎受干旱(15%PEG)处理后呈下调趋势。因此,茎环法实时定量更适用于火龙果miRNA的检测。 展开更多
关键词 火龙果miRNA 茎环法 加尾法 实时定量PCR 内参基因
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黄山栾树实时荧光定量PCR内参基因的筛选
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作者 吕运舟 董筱昀 黄利斌 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期553-560,共8页
为了筛选可用于黄山栾树定量PCR的稳定内参基因,本研究选取看家基因EF1α,Actin,GAPDH,TUB6和18S rRNA作为候选内参基因,分析它们在黄山栾树的8个不同组织及一种黄叶品种‘金焰彩栾’的2个组织中的表达稳定性。结果表明,EF1α,Actin,GA... 为了筛选可用于黄山栾树定量PCR的稳定内参基因,本研究选取看家基因EF1α,Actin,GAPDH,TUB6和18S rRNA作为候选内参基因,分析它们在黄山栾树的8个不同组织及一种黄叶品种‘金焰彩栾’的2个组织中的表达稳定性。结果表明,EF1α,Actin,GAPDH的CT值均集中在21~29之间,表明内参基因在不同组织中表达较稳定,它们之间的表达水平差异不明显。18S rRNA在个组织何总的表达丰度最高,CT值集中在15~20。geNorm分析结果表明基因GAPDH最稳定,NormFinder和BestKeeper计算得出最稳定的内参基因分别是18S r RNA和Actin,而TUB6在3个软件分析中均为最不稳定。因此,GAPDH,Actin和18S rRNA可作为研究基因在黄山栾树不同组织器官中表达的稳定内参。 展开更多
关键词 黄山栾树 实时定量PCR 内参基因
miR-21在成人急性B淋巴细胞白血病患者中的表达及临床意义 预览
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作者 王田园 蔡安季 +4 位作者 郝亚军 刘诗诗 李钢 谭文 郑宝 《海南医学》 CAS 2019年第11期1375-1378,共4页
目的探讨miR-21在成人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者中的表达特点,分析其与临床治疗、预后的关系。方法选择2016年1月至2018年12月深圳市南山区人民医院血液科收治的48例B-ALL患者纳入研究组,并选择40例骨髓正常的非造血系统疾病患者... 目的探讨miR-21在成人急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者中的表达特点,分析其与临床治疗、预后的关系。方法选择2016年1月至2018年12月深圳市南山区人民医院血液科收治的48例B-ALL患者纳入研究组,并选择40例骨髓正常的非造血系统疾病患者作为对照组,所有受试者均采集骨髓标本采用实时荧光定量PCR法检测骨髓单核核细胞(BMMCs)中miR-21表达情况并进行比较。研究组患者均接受VDLP方案化疗2个疗程共2个月,比较高危组及标危组患者的miR-21表达的差异,根据化疗结果将患者分为耐药组和敏感组,比较组间miR-21表达差异,分析miR-21表达与B-ALL患者微小残留病(MRD)的相关性。结果研究组患者的miR-21表达量为7.02±0.53,明显高于对照组的2.43±0.27,差异有统计学意义(P<0.05);高危组患者的miR-21表达量为8.72±0.67,明显高于标危组的5.62±0.41,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后研究组患者miR-21表达量为5.03±0.35,较治疗前明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),其中敏感组患者的miR-21表达量为4.24±0.27,明显低于耐药组的6.33±0.38,差异有统计学意义(P<0.05);相关性分析结果显示miR-21相对表达量与MRD呈负相关(r=-0.432,P<0.05)。结论成人B-ALL患者miR-21表达明显升高,miR-21表达与患者的临床治疗疗效、预后有着密切的关系。 展开更多
关键词 MIR-21 急性B淋巴细胞白血病 预后 实时定量PCR 白血病 微小残留病
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RhoH基因在初诊急性白血病患者中的表达差异及其临床意义
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作者 倪军 施青青 +3 位作者 吴蔚 孙幸 方悦之 顾健 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期758-762,共5页
目的:探讨RhoH基因在白血病患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法:收集本院初诊白血病患者31例、非肿瘤患者15例。应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)法检测骨髓细胞中RhoH表达,以RhoH的中位表达水平作为界值,... 目的:探讨RhoH基因在白血病患者骨髓细胞中的表达及其临床意义。方法:收集本院初诊白血病患者31例、非肿瘤患者15例。应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)法检测骨髓细胞中RhoH表达,以RhoH的中位表达水平作为界值,将初诊患者分为RhoH高表达组和低表达组,并分析不同RhoH表达水平与患者初诊时临床特征和预后之间的关系。结果:31例AL患者骨髓细胞标本RhoH mRNA相对表达量显著低于对照组,ALL组显著低于AML组(P<0.05);与RhoH高表达组相比,RhoH低表达组骨髓原始细胞比例、LDH水平显著升高(P<0.05);而年龄、白细胞数、血红蛋白含量、血小板数、PCT、CRP值等临床特征无统计学差异(P>0.05)。在AML中,RhoH低表达组标准化疗后的复发率高于高表达组,而RhoH的表达与AML其他预后基因无相关性;在ALL中,RhoH低表达组标准化疗后的复发率与高表达组无统计学差异。结论:在急性白血病中RhoH可能参与疾病的发生。在AML中RhoH的表达与复发率呈负相关,可独立作为预后指标;在ALL中,RhoH可能通过其他作用机制参与疾病的过程。 展开更多
关键词 急性白血病 RhoH基因 实时定量PCR
岩牡蛎正常和低盐胁迫下定量PCR内参基因的筛选与验证 预览
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作者 宫建文 李琪 于红 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期657-663,共7页
实时荧光定量 PCR 已广泛用于基因表达的分析,合适的内参基因选择是获得准确分析结果的关键。本研究选用正常生理状态下岩牡蛎(Crassostrea nippona)的鳃、外套膜、闭壳肌和内脏团 4 种组织以及盐度 10、20 和 30暂养 1 周后的鳃组织为... 实时荧光定量 PCR 已广泛用于基因表达的分析,合适的内参基因选择是获得准确分析结果的关键。本研究选用正常生理状态下岩牡蛎(Crassostrea nippona)的鳃、外套膜、闭壳肌和内脏团 4 种组织以及盐度 10、20 和 30暂养 1 周后的鳃组织为材料,对已报道的常见内参基因(EF1A、GAPDH、RO21、TUB 和 TUA)的稳定性通过 3 种方法(geNorm、NormFinder 和 BestKeeper)进行分析和筛选,发现针对鳃单一组织在不同盐度胁迫下, GAPDH 和RO21 可以作为合适内参基因,而在不同组织中,需要更多的内参基因联合分析才能获得准确的定量表达结果。本研究是首次利用 q-PCR 对岩牡蛎进行内参基因的筛选和验证,为今后该物种低盐胁迫相关的基因表达和功能基因的研究提供重要依据。 展开更多
关键词 岩牡蛎 实时定量PCR 内参基因 低盐胁迫
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死亡诱骗受体3对乳腺癌预后及乳腺癌细胞的体外功能的影响
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作者 葛智成 屈翔 +4 位作者 余和芬 王子函 张慧明 高银光 张忠涛 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期1081-1085,共5页
目的观察死亡诱骗受体3(DcR3)对乳腺癌预后的影响和在乳腺癌细胞侵袭功能中的作用。方法通过实时定量聚合酶链反应(PCR)(real-time Q-PCR)进行定量检测包含115例乳腺组织样本的DcR3表达,对应患者随访并分析,中位随访时间10年。通过免疫... 目的观察死亡诱骗受体3(DcR3)对乳腺癌预后的影响和在乳腺癌细胞侵袭功能中的作用。方法通过实时定量聚合酶链反应(PCR)(real-time Q-PCR)进行定量检测包含115例乳腺组织样本的DcR3表达,对应患者随访并分析,中位随访时间10年。通过免疫细胞化学法和RNA提取和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测DcR3在乳腺癌MCF7、MDA-MB-231细胞系中的表达,建立DcR3敲除的细胞亚系并验证。通过侵袭和迁移模型观察减少DcR3表达后产生的影响。结果患者分为预后良好组(n=81)和预后不良组(n=26)。预后不良组(133 350±49 646)拷贝/50 ng RNA较预后良好组(5 393±1 428)拷贝/50 ng RNA,P=0.020)DcR3的表达显著增高;病理分级2级的肿瘤较病理分级1级的肿瘤DcR3表达显著升高[(82 844±34 068)拷贝/50 ng RNA(n=39)]与[(5 371±3 500)拷贝/50 ng RNA,n=20,P=0.029]。成功敲除MCF7细胞系和MDA-MB-231细胞系的DcR3基因,DcR3的敲除降低了MCF7细胞的侵袭和迁移能力(P=0.009,P=0.001),但MDA-MB-231细胞系在这两方面的差异无统计学意义(P=0.475,P=0.102)。结论DcR3促进了乳腺癌细胞的侵袭性,在乳腺癌的转移中起到了一定作用,DcR3检测有助于乳腺癌预后判断。 展开更多
关键词 死亡诱骗受体3 乳腺肿瘤 肿瘤转移 实时定量PCR
MicroRNA-210在宫颈鳞癌中的表达及意义
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作者 张广平 廖亚男 《黑龙江中医药》 2019年第1期189-191,共3页
目的:探讨MicroRNA-210(miR-210)在宫颈鳞癌中的表达及意义。方法:选取2015年2月至2018年2月我院保存的原发性宫颈鳞癌组织标本60例(宫颈癌组),同时选取正常宫颈组织标本35例作为对照组,采用实时定量PCR检测两组miR-210水平以及人乳头... 目的:探讨MicroRNA-210(miR-210)在宫颈鳞癌中的表达及意义。方法:选取2015年2月至2018年2月我院保存的原发性宫颈鳞癌组织标本60例(宫颈癌组),同时选取正常宫颈组织标本35例作为对照组,采用实时定量PCR检测两组miR-210水平以及人乳头瘤病毒(HPV)16。结果:宫颈癌组miR-210相对表达量为(5.21±1.36),明显高于对照组,差异比较有统计学意义(p <0.05);FIGO分期Ⅱb~Ⅳ、中低分化患者miR-210相对表达量分别为(5.96±1.30)和(5.36±1.29),明显高于Ⅰ~Ⅱa、高分化患者(p <0.05);HPV16感染阳性者miR-210表达水平为(5.26±1.30),明显高于HPV16感染阴性者,差异比较有统计学意义(p <0.05)。结论:宫颈鳞癌中miR-210表达明显升高,与患者肿瘤分期及分化程度有一定关系,同时可能与HPV16感染有关,值得进一步研究。 展开更多
关键词 MicroRNA-210 宫颈鳞癌 实时定量PCR 人乳头瘤病毒
中国绿水螅抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆、抗体制备及表达分析 预览
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作者 张行 田晓晓 +2 位作者 董文芳 王茹梦 潘红春 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期305-314,共10页
为探讨中国绿水螅(Hydra sinensis)抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)基因的起源及功能,研究采用RACE方法克隆了中国绿水螅APX基因的全长cDNA序列。该cDNA序列总长1357 bp,包括5′非编码区107 bp,3′非编码区146 bp及开放... 为探讨中国绿水螅(Hydra sinensis)抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate peroxidase,APX)基因的起源及功能,研究采用RACE方法克隆了中国绿水螅APX基因的全长cDNA序列。该cDNA序列总长1357 bp,包括5′非编码区107 bp,3′非编码区146 bp及开放阅读框(Open reading frame,ORF)1104 bp,共编码367个氨基酸,预测蛋白质分子量为40.79 kD。BLAST结果表明中国绿水螅APX蛋白同源序列绝大部分来自植物界;通过最大似然法(Maximum-likelihood)和贝叶斯分析(Bayesian inference)进行的系统发生分析显示植物界及动物界物种的APX序列各自形成单系群。把APX基因ORF全长序列克隆到原核表达质粒pET-GST中,重组质粒转化E.coliBL21(DE3)菌株,IPTG诱导后成功表达重组融合蛋白GST-APX,再使用纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体用于APX蛋白的免疫印迹分析(Western blotting assay,WB)。在不同光照时长梯度(光强度2000 lx,每天分别光照0、4h、8h、12h、16h、20h及24h)下培养中国绿水螅30d,实时定量PCR(Quantitative real-timePCR,qPCR)及WB检测结果均表明光照时间较长时(每天光照12h以上)绿水螅APX表达呈现一定程度的上调。在长时间光辐射下水螅体内共生绿藻连续进行光合作用所累积的大量活性氧能够扩散到水螅细胞内,此时水螅体内表达上调的APX可能参与清除其细胞内的活性氧。 展开更多
关键词 中国绿水螅 抗坏血酸过氧化物酶 多克隆抗体 实时定量PCR 免疫印迹分析
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基于临床肿瘤标本的胃癌转移模型建立 预览
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作者 王洁 赵宁宁 +5 位作者 张彩勤 赵勇 谭邓旭 吴朋朋 赵菊梅 师长宏 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期7-12,共6页
目的建立基于临床肿瘤标本的胃癌转移模型,为胃癌的转移研究提供个体化动物模型。方法将胃癌新鲜的手术标本移植到裸鼠皮下,建立胃癌患者异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型。进一步通过手术将皮下瘤组织原位移植到裸鼠胃部肌... 目的建立基于临床肿瘤标本的胃癌转移模型,为胃癌的转移研究提供个体化动物模型。方法将胃癌新鲜的手术标本移植到裸鼠皮下,建立胃癌患者异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型。进一步通过手术将皮下瘤组织原位移植到裸鼠胃部肌层,连续观察裸鼠的体征状态,通过近红外荧光活体成像技术检测肿瘤转移的发生。解剖荷瘤小鼠,将肺部转移灶进一步移植裸鼠皮下获得实体瘤。HE染色观察原发瘤与转移瘤的结构特征,(short tandem repeat)STR分析原发瘤和转移瘤的遗传特性。PCR-Array分析转移瘤和原发瘤中转移相关基因的表达。结果成功建立胃癌PDX模型,移植瘤组织结构与患者保持基本一致;通过胃部原位移植发现编号C19751的小鼠发生肺和肝的转移。其中肺转移灶皮下移植后获得了实体瘤,STR分析显示原发瘤保持了与肺转移瘤一致的遗传特征。PCR-Array结果显示,与原发瘤相比,转移瘤中CXCL12,IGF1和MMP2基因表达均显著上调。结论利用临床肿瘤标本成功建立胃癌转移模型,为胃癌转移研究提供了良好的个体化模型。 展开更多
关键词 胃癌 PDX模型 近红外荧光 活体成像 实时定量PCR 裸鼠
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分子与血清学检测确诊2017年西非塞拉利昂1例猴痘病毒感染病例 预览
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作者 叶飞 宋敬东 +8 位作者 赵莉 张益 夏连续 祝令伟 任娇 王文玲 武桂珍 田厚文 谭文杰 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期535-538,共4页
目的对发生在西非塞拉利昂南部的疑似猴痘病毒感染者进行实验室确诊.方法采集疑似感染病人感染后12d和55d的血清,利用猴痘特异性引物进行实时定量PCR检测,并对病人血清中痘苗病毒IgG、IgM和猴痘病毒IgG抗体进行ELISA检测,并结合其流行... 目的对发生在西非塞拉利昂南部的疑似猴痘病毒感染者进行实验室确诊.方法采集疑似感染病人感染后12d和55d的血清,利用猴痘特异性引物进行实时定量PCR检测,并对病人血清中痘苗病毒IgG、IgM和猴痘病毒IgG抗体进行ELISA检测,并结合其流行病学信息进行诊断.结果实时定量PCR检测该病人感染12d后血清为猴痘病毒核酸阳性;ELISA检测病人感染后12d和55d血清,痘苗病毒IgG、IgM为阳性;猴痘病毒IgG抗体检测均为阳性,且55d较12d抗体滴度有4倍升高(3200/800).结论病人血清的核酸检测和血清学检测结果为阳性,结合病人的临床特征和野生动物接触史,确诊该病人为猴痘病毒感染. 展开更多
关键词 塞拉利昂 猴痘病毒 实时定量PCR 血清学检测
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小鼠胰腺癌肝转移模型及相关分子表达的研究 预览
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作者 刘玉美 李婷 杨秀疆 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期551-556,共6页
目的:经脾注射法建立小鼠胰腺癌肝转移模型,初步研究部分转移相关分子的基因表达水平变化。方法:用脾脏注射法在12只C57/BL6小鼠中建立胰腺癌肝转移模型,6只小鼠注射PBS缓冲液作为对照。术后4周处死并解剖小鼠,观察腹腔内转移情况和肝... 目的:经脾注射法建立小鼠胰腺癌肝转移模型,初步研究部分转移相关分子的基因表达水平变化。方法:用脾脏注射法在12只C57/BL6小鼠中建立胰腺癌肝转移模型,6只小鼠注射PBS缓冲液作为对照。术后4周处死并解剖小鼠,观察腹腔内转移情况和肝脏成瘤的情况。采用实时荧光定量PCR检测小鼠脾脏胰腺癌组织、胰腺癌肝转移组织及肝转移灶旁肝组织中相关转移分子的基因表达情况,比较其差异。结果:实验组12只小鼠的肝脏转移率为83.33%,解剖后观察脾脏表面均见单一瘤结节,其中10只小鼠肝脏表面及切面见多发散在的转移瘤结节,肝脏成瘤率83.33%,肝脏瘤组织细胞形态学符合胰腺癌的特征。在构建成功的10只胰腺癌肝转移小鼠模型中,CCL-17、CCL-22、CD44等分子在脾脏癌灶与肝转移灶的基因表达量高于癌旁肝组织,相对表达率<1(P<0.05);Ang-2、BAK、BAX等分子在脾脏癌灶与肝转移灶的基因表达量低于癌旁肝组织相对表达率>1<1(P<0.05)。结论:经脾注射法成功建立小鼠胰腺癌肝转移模型,能较好模拟胰腺癌体内肝转移过程。小鼠胰腺癌肝转移模型中相关转移分子基因表达水平的变化趋势与人体内胰腺癌肝转移基本一致,可为筛选抗肿瘤药物和研究胰腺癌转移行为提供帮助。 展开更多
关键词 胰腺癌 经脾注射法 转移 实时定量PCR 分子 表达
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大豆GmCBL10基因的克隆与功能分析
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作者 王雪松 李永光 李文滨 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期355-361,共7页
为了剖析大豆GmCBL10在盐胁迫下的表达模式,本研究采用PCR技术从‘东农50’中克隆了GmCBL10基因全长序列,由792个碱基组成,共编码263个氨基酸。生物信息学分析发现Gm CBL10不含信号肽,有一个跨膜结构域和多个磷酸化位点,PSORT预测其定... 为了剖析大豆GmCBL10在盐胁迫下的表达模式,本研究采用PCR技术从‘东农50’中克隆了GmCBL10基因全长序列,由792个碱基组成,共编码263个氨基酸。生物信息学分析发现Gm CBL10不含信号肽,有一个跨膜结构域和多个磷酸化位点,PSORT预测其定位于细胞质中。在The Bio-Analytic Resource for Plant Biology (Bar)数据库中分析了GmCBL10的拟南芥同源基因AtCBL10在不同非生物胁迫下的表达模式。对GmCBL10的启动子序列进行分析,发现Gm CBL10启动子区域含有多种与非生物胁迫应答及生理功能相关的顺式作用元件。对GmCBL10进行系统进化树分析,发现大豆GmCBL10与同为豆科的菜豆、木豆、红豆等的相似性很高。对大豆幼苗进行盐胁迫处理,荧光定量PCR结果显示Gm CBL10在盐诱导条件下上调表达,表明Gm CBL10可能作为正向调控因子参与大豆的盐胁迫响应。本研究分析了大豆GmCBL10在盐胁迫下的表达差异,为揭示大豆的抗盐机制提供了初步理论依据。 展开更多
关键词 大豆 GmCBL10基因 盐胁迫 实时定量PCR
板栗实时定量PCR内参基因的筛选与验证
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作者 陈国松 李靖同 +4 位作者 刘阳 曹庆芹 张卿 秦岭 邢宇 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期378-386,共9页
实时荧光定量PCR技术具有高灵敏性和高特异性,被广泛应用于基因表达分析,选取合适的内参基因是利用该技术准确分析目的基因表达变化的前提。本文以板栗的7种不同组织器官(根、茎、叶、种子、花芽、雌花和雄花)为材料,采用qRT-PCR技术分... 实时荧光定量PCR技术具有高灵敏性和高特异性,被广泛应用于基因表达分析,选取合适的内参基因是利用该技术准确分析目的基因表达变化的前提。本文以板栗的7种不同组织器官(根、茎、叶、种子、花芽、雌花和雄花)为材料,采用qRT-PCR技术分析了板栗中6个候选内参基因(EF1α、TUA、TUB、UBQ、18S rRNA和Actin)的表达趋势,运用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3种软件对候选内参基因的表达稳定性进行了综合分析,并利用目的基因CmSPL9对筛选出的内参基因进行验证。结果表明:Actin和EF1α在板栗不同组织器官中稳定性最佳, Actin、EF1α或Actin+EF1α可作为板栗的内参基因进行后续试验研究。 展开更多
关键词 板栗 内参基因 实时定量PCR CmSPL9基因
MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌病理特征的关系 预览
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作者 田彩平 杨碎胜 +4 位作者 孙敬阳 马佰菁 荆晓 魏政丽 廖世奇 《甘肃医药》 2019年第4期308-310,共3页
目的:探讨MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌病理特征的关系。方法:收集2018年1月至2019年4月在甘肃省肿瘤医院住院的乳腺癌患者的乳腺癌组织,采用实时定量PCR检测乳腺癌组织中MiR-133a-3p的表达水平。结果:MiR-133a-3p在乳... 目的:探讨MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌病理特征的关系。方法:收集2018年1月至2019年4月在甘肃省肿瘤医院住院的乳腺癌患者的乳腺癌组织,采用实时定量PCR检测乳腺癌组织中MiR-133a-3p的表达水平。结果:MiR-133a-3p在乳腺癌组织中的表达水平明显低于非癌组织中的表达水平(P<0.05);MiR-133a-3p表达水平与患者年龄、肿瘤大小无相关性(P>0.05),但与淋巴结是否转移、TNM分级、ER阴阳性以及PR阴阳性具有显著负相关(P<0.05)。结论:MiR-133a-3p可以作为乳腺癌早期预测、转移以及预后评估的潜在标志物,为乳腺癌的治疗提供新的思路和研究依据。 展开更多
关键词 MiR-133a-3p 乳腺癌组织 实时定量PCR 病理特征
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血清miRNA-363联合超声弹性成像在诊断老年甲状腺乳头状癌中的临床意义 预览
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作者 殷晓星 周琨 +1 位作者 徐晗 马保金 《老年医学与保健》 CAS 2019年第3期373-375,380共4页
目的探讨血清miRNA-363联合超声弹性评分(ES)和弹性应变比值(SR)在老年甲状腺乳头状癌中的临床意义。方法选择2017年1月—2018年12月在复旦大学附属华山医院静安分院诊断为甲状腺乳头状癌患者118例,为甲状腺乳头状癌组;选择同期75例诊... 目的探讨血清miRNA-363联合超声弹性评分(ES)和弹性应变比值(SR)在老年甲状腺乳头状癌中的临床意义。方法选择2017年1月—2018年12月在复旦大学附属华山医院静安分院诊断为甲状腺乳头状癌患者118例,为甲状腺乳头状癌组;选择同期75例诊断为老年甲状腺腺瘤者为对照组。采用实时定量PCR测定2组血清miRNA-363,采用超声测定ES和SR。结果甲状腺乳头状癌组的血清miRNA-363较甲状腺腺瘤组降低(P<0.01),而甲状腺乳头状癌组的ES和SR水平高于甲状腺腺瘤组(P<0.01)。甲状腺乳头状癌患者血清miRNA-363与ES(r=-0.762,P<0.01)和SR(r=-0.813,P<0.01)呈负相关,同样甲状腺乳头状癌患者ES与SR呈正相关(r=0.781,P<0.01)。以血清miRNA-363,ES和SR联合检测作为检验变量,以发生甲状腺乳头状癌为状态变量绘制ROC曲线,联合检测的灵敏度为94.1%,特异性为76.0%,其AUC为0.940联合检测的曲线下面积优于miRNA-363(Z=3.780,P<0.01),ES(Z=5.256,P<0.01)和SR(Z=4.976,P<0.01),而血清miRNA-363,ES和SR的曲线下面积之间的比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血清miRNA-363联合声弹性成像检测与甲状腺乳头状癌的恶性程度相关,在诊断老年甲状腺乳头状癌具有较高的灵敏度和特异性,在早期诊断甲状腺乳头状癌具有重要的临床意义。 展开更多
关键词 老年 甲状腺乳头状癌 微小RNA 弹性成像 早期诊断 实时定量PCR
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尖裸鲤实时荧光定量PCR内参基因的筛选 预览
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作者 孙海成 吕晓楠 +4 位作者 佟广香 尹家胜 薛淑群 张丽娜 韩英 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期370-375,共6页
为筛选能够稳定表达的内参基因用于尖裸鲤Oxygymnocypris stewarti实时荧光定量PCR分析,以尖裸鲤血液、心脏、肝、脾、鳃、头肾、中肾、后肾、前肠、中肠、后肠、性腺、眼、垂体、脑、红肌、白肌和皮肤18个组织为材料,应用实时荧光定量... 为筛选能够稳定表达的内参基因用于尖裸鲤Oxygymnocypris stewarti实时荧光定量PCR分析,以尖裸鲤血液、心脏、肝、脾、鳃、头肾、中肾、后肾、前肠、中肠、后肠、性腺、眼、垂体、脑、红肌、白肌和皮肤18个组织为材料,应用实时荧光定量PCR技术比较了GAPDH(3-磷酸甘油醛脱氢酶)、HPRT1(次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶1)、RPL13(核糖体蛋白L13)、RPL19(核糖体蛋白L19)、RPL13a(核糖体蛋白L13a)、SDHA(琥珀酸脱氢酶亚基A)和ACTB(β-肌动蛋白)7个候选内参基因的表达情况,并采用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件对7个候选内参基因的稳定性进行分析。结果表明:GeNorm分析显示,7个候选内参基因的平均表达稳定值(M)依次为RPL13=RPL13a<RPL19<GAPDH<ACTB<SDHA<HPRT1,其中RPL13和RPL13a的M值均最小(0.62);NormFinder分析显示,7个候选内参基因的M值依次为RPL13<RPL13a<RPL19<GAPDH<ACTB<SDHA<HPRT1,其中RPL13的M值最小(0.30);BestKeeper分析显示,7个候选内参基因的标准差(S.D.)依次为RPL13<RPL19<GAPDH<HPRT1<RPL13a<SDHA<ACTB,变异系数(CV)值依次为RPL13<RPL19<HPRT1<GAPDH<SDHA<RPL13a<ACTB,其中RPL13的标准差(0.84)和变异系数(4.54%)均最小;7个候选内参基因在尖裸鲤不同组织中的表达量存在差异。研究表明,7个内参基因中RPL13的表达较为稳定,可作为尖裸鲤实时荧光定量PCR分析的适宜内参基因,本研究结果可为尖裸鲤遗传学及分子生物学等研究提供基础数据。 展开更多
关键词 尖裸鲤 实时定量PCR 内参基因
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食管鳞癌PBMC中lncRNA-SNHG20的表达及临床意义
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作者 温立鸿 马军 岳保红 《河南预防医学杂志》 2019年第7期498-501,共4页
目的探究长链非编码RNASNHG20在食管鳞状细胞癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义。方法择取2018年1月至2018年6月郑州大学第二附属医院收治的食管鳞状细胞癌患者40名作为研究组,另择取同期健康体检者30名作为对照组,采用实时定量... 目的探究长链非编码RNASNHG20在食管鳞状细胞癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义。方法择取2018年1月至2018年6月郑州大学第二附属医院收治的食管鳞状细胞癌患者40名作为研究组,另择取同期健康体检者30名作为对照组,采用实时定量PCR检测两组患者外周血单个核细胞中SNHG20的相对表达量,比较两组结果差异,分析其在食管鳞癌中的临床意义。结果研究组外周血单个核细胞中SNHG20表达量检测结果低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),且与食管癌肿瘤分化程度、淋巴结浸润、是否远端转移和TNM分期密切相关。结论食管鳞状细胞癌患者外周血单个核细胞中SNHG20表达变化与其病情之间存在紧密联系,可作为一个潜在的无创性分子指标。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 外周血单个核细胞 SNHG20 实时定量PCR
牦牛不同组织SREBP-1基因表达差异分析 预览
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作者 袁锦莹 孙万成 +1 位作者 罗毅皓 谢凤莲 《中国牛业科学》 2019年第1期1-6,共6页
在不同季节分别采集青海省祁连县、大通县和湟中县牦牛的肝脏、肾脏和结肠,提取Total RNA,在逆转录聚合酶的作用下生成cDNA,利用Real-time PCR检测牦牛甾醇类调控元件结合蛋白1(SREBP-1)基因mRNA的表达水平。结果显示,牦牛不同组织中SRE... 在不同季节分别采集青海省祁连县、大通县和湟中县牦牛的肝脏、肾脏和结肠,提取Total RNA,在逆转录聚合酶的作用下生成cDNA,利用Real-time PCR检测牦牛甾醇类调控元件结合蛋白1(SREBP-1)基因mRNA的表达水平。结果显示,牦牛不同组织中SREBP-1基因相对表达量由大到小顺序为,肝脏、肾脏、结肠。SREBP-1基因在不同季节中除了2016年春季的牦牛,其他的均以肝脏样品中的SREBP-1 mRNA相对定量拷贝数最高。不同季节间SREBP-1基因在2015年春季和2016年春季中相对表达量差异极显著。3个组织间SREBP-1基因在结肠和肝脏中相对表达量差异呈极显著(P<0.01),在肾脏和肝脏中相对表达量差异显著(P<0.05)。 展开更多
关键词 牦牛 甾醇类调控元件结合蛋白 实时定量PCR
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