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夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒的作用 预览
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作者 张磊 姚江雄 +7 位作者 纪洵敏 余婷婷 蒲俏虹 唐芮 许瑛 赖文辉 彭拓华 张吉凯 《广东医学》 CAS 2019年第9期1250-1254,共5页
目的研究夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒(DENV-1)的作用效果。方法 MTT法测定夏桑菊颗粒和利巴韦林对C6/36细胞的最大无毒剂量以及DENV-1感染细胞病变效应;细胞免疫荧光法,以NS1蛋白为目标蛋白,测定DENV-1经不同稀释度的夏桑菊颗粒预... 目的研究夏桑菊颗粒体外抗Ⅰ型登革热病毒(DENV-1)的作用效果。方法 MTT法测定夏桑菊颗粒和利巴韦林对C6/36细胞的最大无毒剂量以及DENV-1感染细胞病变效应;细胞免疫荧光法,以NS1蛋白为目标蛋白,测定DENV-1经不同稀释度的夏桑菊颗粒预处理后感染能力;荧光定量PCR法检测夏桑菊颗粒和利巴韦林对DENV-1拷贝数的影响,采用方差分析比较不同稀释度药物对病毒的影响。结果MTT结果显示夏桑菊颗粒和利巴韦林的最大无毒剂量分别为7. 81 mg/m L和3. 13 mg/m L;经过夏桑菊颗粒溶液处理后,感染病毒的细胞存活率增加(21. 9±4. 3)%和(15. 7±4. 1)%,同时,经过利巴韦林处理后,细胞存活率分别增加(39. 2±1. 9)%和(24. 2±3. 1)%,两者均能明显减弱病毒引起细胞病变的效应(P <0. 05);荧光实验结果显示夏桑菊颗粒可使病毒相对感染率下降(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林可使病毒相对感染率下降(51. 1±2. 3)%和(49. 3±2. 9)%,两者对病毒的感染具有明显的抑制作用(P <0. 05);q PCR实验结果表明夏桑菊颗粒对病毒拷贝数的抑制率达到(42. 1±7. 4)%和(24. 2±2. 5)%,利巴韦林对病毒拷贝数抑制率达到(51. 1±2. 3)%和(39. 3±2. 9)%,两者对病毒的RNA复制产生了明显的抑制作用(P <0. 05)。结论夏桑菊颗粒通过体外预给药的方式会产生明显的抗DENV-1的作用,其作用效果与利巴韦林相近。 展开更多
关键词 夏桑菊颗粒 登革热病毒 细胞免疫荧光 实时荧光定量PCR 最大无毒剂量
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层出镰刀菌处理对食用百合保护酶相关基因表达的影响
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作者 李润根 曾慧兰 融花珍 《北方园艺》 CAS 北大核心 2019年第11期55-60,共6页
以4种食用百合为试材,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,研究了层出镰刀菌处理对食用百合保护酶相关基因(POD、CAT)相对表达量的影响,以期为研究食用百合抵抗逆境的分子机制提供参考依据。结果表明:POD在“龙牙×兰州”(R6-2、6)... 以4种食用百合为试材,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法,研究了层出镰刀菌处理对食用百合保护酶相关基因(POD、CAT)相对表达量的影响,以期为研究食用百合抵抗逆境的分子机制提供参考依据。结果表明:POD在“龙牙×兰州”(R6-2、6)杂交百合、“铁炮×兰州”杂交百合、“兰州”百合被处理后的第1天相对表达量达到峰值且显著高于处理后的其它时间段,分别约为对照组的18.57、63.81、51.41、37.42倍,然而“铁炮”百合则是被处理后的第3天相对表达量达到峰值且显著高于处理后的其它时间段,约为对照组的113.19倍;CAT在“龙牙×兰州”(6)杂交百合、“铁炮×兰州”杂交百合均是被处理后的第1天相对表达量达到峰值且其显著高于处理后的其它时间段,分别约为对照组的68.02、19.77倍,在“龙牙×兰州”(R6-2)杂交百合、“兰州”百合则是被处理后的第3天相对表达量达到峰值,且显著高于处理后的其它时间段,分别约为对照组的30.69、25.19倍,铁炮百合是被处理后的第5天基因相对表达量达到峰值且显著高于其它时间段,约为对照组的71.83倍。 展开更多
关键词 层出镰刀菌 食用百合 实时荧光定量PCR 保护酶相关基因 相对表达量
不同光周期及不同胁迫对水稻OsHGO基因表达的影响 预览
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作者 陈彦成 赵杨 +2 位作者 刘之熙 黄丽华 任春梅 《湖南农业科学》 2019年第7期1-3,8共4页
以水稻野生型日本晴为研究材料,采用不同光周期及不同胁迫对其进行处理,通过实时荧光定量PCR对三叶期的水稻叶片OsHGO基因的表达量进行检测。结果表明:OsHGO基因在长日照、短日照、全日照时的表达水平与对照相比差别不大,但黑暗处理可... 以水稻野生型日本晴为研究材料,采用不同光周期及不同胁迫对其进行处理,通过实时荧光定量PCR对三叶期的水稻叶片OsHGO基因的表达量进行检测。结果表明:OsHGO基因在长日照、短日照、全日照时的表达水平与对照相比差别不大,但黑暗处理可显著提高该基因的表达量。ABA(脱落酸)可诱导OsHGO基因的表达;SA(水杨酸)、MeJA(茉莉素)、低温胁迫、盐胁迫和稻瘟病菌下调OsHGO基因的表达。 展开更多
关键词 水稻 光周期 胁迫 OsHGO基因 实时荧光定量PCR
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低温对蒙古口蘑菌丝体漆酶活性及其基因家族表达的影响 预览
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作者 刘晓婷 郭九峰 +4 位作者 王淑妍 李亚娇 那日 高海荣 马梦宇 《中国农学通报》 2019年第3期40-46,共7页
蒙古口蘑是内蒙古草原久负盛名的野生食用菌,为实现其人工栽培,本研究以蒙古口蘑次生菌丝体为实验材料,利用实时荧光定量PCR技术,研究了低温对蒙古口蘑漆酶活性及其基因家族转录水平的影响。结果表明:蒙古口蘑次生菌丝体漆酶活性普遍较... 蒙古口蘑是内蒙古草原久负盛名的野生食用菌,为实现其人工栽培,本研究以蒙古口蘑次生菌丝体为实验材料,利用实时荧光定量PCR技术,研究了低温对蒙古口蘑漆酶活性及其基因家族转录水平的影响。结果表明:蒙古口蘑次生菌丝体漆酶活性普遍较高;随着培养时间的延长,漆酶活性普遍降低;低温刺激可不同程度地影响蒙古口蘑漆酶基因家族的转录,10℃处理菌丝体10天,可显著提高蒙古口蘑漆酶基因的表达水平,主要贡献是lacc1、lacc4、lacc8、lacc10、lacc11。结果可为日后实现蒙古口蘑人工栽培积累资料。 展开更多
关键词 蒙古口蘑 低温 实时荧光定量PCR 漆酶活性 基因表达
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miR-4684-3p在自然流产患者母胎界面的表达
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作者 余庆英 杜鑫 +1 位作者 巫海旺 郜洁 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期120-122,共3页
目的探讨微小RNA-4684-3p(miR-4684-3p)在正常妊娠与自然流产患者母胎界面的组织中表达的差异。方法收集2015年10月至2017年3月期间广州中医药大学第一附属医院36例孕妇的绒毛和蜕膜组织,其中20例为自愿行人工流产的妇女(对照组),16例... 目的探讨微小RNA-4684-3p(miR-4684-3p)在正常妊娠与自然流产患者母胎界面的组织中表达的差异。方法收集2015年10月至2017年3月期间广州中医药大学第一附属医院36例孕妇的绒毛和蜕膜组织,其中20例为自愿行人工流产的妇女(对照组),16例为自然流产患者(自然流产组);采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分别检测绒毛组织和蜕膜组织中miR-4684-3p的表达量。结果(1)miR-4684-3p在对照组及自然流产组患者蜕膜组织中的中位表达量分别为1.030、1.640,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);自然流产组的miR-4684-3p表达量较对照组高。(2)miR-4684-3p在对照组及自然流产组患者绒毛组织中的中位表达量分别为0.915、1.860,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);自然流产组的miR-4684-3p表达量较对照组高。结论自然流产患者母胎界面的组织中miR-4684-3p的表达较正常妊娠者高,提示其可能作为自然流产的生物标志物对临床的诊断治疗有指导意义。 展开更多
关键词 自然流产 母胎界面 患者 广州中医药大学第一附属医院 实时荧光定量PCR 蜕膜组织 绒毛组织 正常妊娠
地衣芽孢杆菌中木糖操纵子受葡萄糖胁迫的转录调控特性
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作者 刘翔 李由然 +4 位作者 张梁 丁重阳 徐沙 顾正华 石贵阳 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期695-701,共7页
木糖操纵子是芽孢杆菌中常用的表达元件,但目前对其认识只停留在静态机理层面,关于其在发酵过程中转录调控特性的研究还鲜见报道.利用qPCR技术探究在葡萄糖胁迫下地衣芽孢杆菌木糖诱导的木糖异构酶基因在发酵过程中的转录水平,考察菌体... 木糖操纵子是芽孢杆菌中常用的表达元件,但目前对其认识只停留在静态机理层面,关于其在发酵过程中转录调控特性的研究还鲜见报道.利用qPCR技术探究在葡萄糖胁迫下地衣芽孢杆菌木糖诱导的木糖异构酶基因在发酵过程中的转录水平,考察菌体的生长状态,并通过二硝基水杨酸(DNS)法及高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)法测定发酵过程中糖浓度变化.结果显示:在实验所设置的地衣芽孢杆菌代谢相对稳定的条件下,地衣芽孢杆菌木糖启动子转录强度在稳定期以前均呈增加的趋势,在对数生长末期或稳定前期转录强度最高,约是7 h时的14倍,随后呈下降趋势;进一步研究发现20-180 g/L葡萄糖浓度均对其表现为抑制,且抑制程度一致,当葡萄糖含量极少或者没有而木糖存在的情况下,启动子转录强度极高.本研究表明以地衣芽孢杆菌为宿主的木糖诱导系统在菌体对数生长末期诱导效果最佳;当环境中葡萄糖含量极少或者没有而木糖存在的情况下,更有利于启动子表达;结果对利用木糖诱导型重组地衣芽孢杆菌诱导发酵有一定的启示与指导意义. 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 木糖操纵子 实时荧光定量PCR 葡萄糖胁迫 发酵过程 转录调控
温度和药剂胁迫下茶刺盲蝽内参基因稳定性分析
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作者 王政 朱茜 +3 位作者 孟倩倩 孙世伟 高圣风 刘爱勤 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期530-541,共12页
为筛选特定条件下实时荧光定量PCR检测体系中能稳定表达的茶刺盲蝽Helopeltis theivora内参基因,从其转录组中筛选并克隆11个候选基因Actin、β-tubulin1、RPL13A、EF1α、RPS3A、GAPDH、18S RNA、G6PDH、EIF4A、TBP和UBQ,测定它们在不... 为筛选特定条件下实时荧光定量PCR检测体系中能稳定表达的茶刺盲蝽Helopeltis theivora内参基因,从其转录组中筛选并克隆11个候选基因Actin、β-tubulin1、RPL13A、EF1α、RPS3A、GAPDH、18S RNA、G6PDH、EIF4A、TBP和UBQ,测定它们在不同温度及药剂胁迫下mRNA的表达水平,并通过geNorm、NormFinder、BestKeeper、Delta Ct和RefFinder软件(算法)分析各基因的稳定性。结果表明,11个候选基因引物均具有良好的特异性和扩增效率(90.10%~96.87%)。温度胁迫下,EIF4A有最小的平均变异度(mean variability,M)、稳定值(stability value,SV)和几何平均值,分别为0.200、0.096和2.060;RPS3A的平均标准偏差(average of standard deviation,STDEV)最小,为0.605;二者是表达最稳定的基因。药剂胁迫下,RPL13A的M值和STDEV最小,分别为0.123和0.660;RPS3A的SV、标准偏差(standard deviation,SD)和几何平均值均最小,分别为0.063、0.336和1.189;二者是表达最稳定的基因;Actin为最不稳定基因。全样品评价中,RPL13A(M值为0.282、几何平均值为1.565)和RPS3A(SV为0.099、STDEV为0.614)的评价值同比最小,是表达最稳定的基因;最不稳定的基因为Actin、β-tubulin1和TBP。geNorm分析结果还显示所有处理条件下最适内参基因数目均为2个。表明EIF4A和RPS3A可作为茶刺盲蝽与温度相关的抗性基因表达研究的内参基因,RPS3A和RPL13A可作为该虫抗药基因表达研究的内参基因。 展开更多
关键词 茶刺盲蝽 温度 药剂 内参基因稳定性 实时荧光定量PCR
粪肠球菌活菌数EMA-qPCR快速检测方法的建立
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作者 姜芹 孙冰清 +1 位作者 张文刚 顾欣 《饲料研究》 CAS 北大核心 2019年第7期64-67,共4页
利用叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide,EMA)和实时荧光定量PCR(qPCR)的结合,建立一种快速检测粪肠球菌(Enterococcus faecalis)活菌数的方法。选择粪肠球菌保守基因sodA(超氧化物歧化酶基因)作为目的基因进行qPCR方法建立;对粪肠球菌活菌... 利用叠氮溴乙锭(Ethidium monoazide,EMA)和实时荧光定量PCR(qPCR)的结合,建立一种快速检测粪肠球菌(Enterococcus faecalis)活菌数的方法。选择粪肠球菌保守基因sodA(超氧化物歧化酶基因)作为目的基因进行qPCR方法建立;对粪肠球菌活菌和死菌进行不同浓度的EMA处理,探索最佳EMA处理浓度。结果显示,qPCR检测灵敏度为500 CFU/mL,在106~1010 CFU/mL浓度范围内,qPCR荧光信号值与活菌浓度对数值呈线性相关(R2=0.999 9),重复试验变异系数小于5%;EMA浓度为20μg/mL时,死菌的ΔCt值(加EMA-未加EMA)最大,且对活菌扩增无显著影响。试验结果表明,EMA-qPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可定向检测菌液中粪肠球菌活菌数,为粪肠球菌饲料添加剂等产品的质量控制提供技术支撑。 展开更多
关键词 粪肠球菌 叠氮溴乙锭 实时荧光定量PCR 活菌检测 饲料添加剂
氯虫苯甲酰胺和氟虫腈对黏虫细胞色素P450基因表达的影响
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作者 刘俊杰 苏栩 +3 位作者 李亚设 谢兰芬 张百重 陈锡岭 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期563-573,共11页
为筛选出黏虫Mythimna separata参与杀虫剂解毒代谢的主效细胞色素P450基因,采用叶片浸渍法测定了用于处理黏虫3龄幼虫的亚致死浓度,通过构建转录组测序文库并结合数字基因表达(digital gene expression,DGE)对不同处理的黏虫进行测序,... 为筛选出黏虫Mythimna separata参与杀虫剂解毒代谢的主效细胞色素P450基因,采用叶片浸渍法测定了用于处理黏虫3龄幼虫的亚致死浓度,通过构建转录组测序文库并结合数字基因表达(digital gene expression,DGE)对不同处理的黏虫进行测序,并运用实时荧光定量PCR(realtime quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术验证12个P450基因的表达情况。结果表明,用于处理黏虫的氯虫苯甲酰胺和氟虫腈亚致死浓度LC10分别为0.15、13.66 mg/L;对照样品、氟虫腈处理样品和氯虫苯甲酰胺处理样品分别获得59 521 504、64 838 148和41 722 990个原始序列数据,分别获得57 441 216、62 368 912和40 285 164个过滤后的序列数据;过滤后的序列长度分别为8.62、9.36和6.04 G;碱基错误率均为0.02%;Phred数值大于20、30的碱基占总碱基的百分比均高于90.59%;鸟嘌呤+胞嘧啶(guanine cytosine,GC)含量分别为47.16%、48.94%和47.55%,表明转录组测序质量较高;黏虫受氯虫苯甲酰胺胁迫后,29个P450基因表达量上调,27个P450基因表达量下调;黏虫受氟虫腈胁迫后,23个P450基因表达量上调,26个P450基因表达量下调;12个P450基因表达量的RT-qPCR技术检测结果与DGE测序文库显示的结果基本一致。 展开更多
关键词 黏虫 细胞色素P450基因 杀虫剂 抗药性 转录组 实时荧光定量PCR
两台荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果的一致性分析 预览
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作者 孙嘉峰 王军军 +1 位作者 邱丽萍 王建伟 《临床医药实践》 2019年第2期122-124,共3页
目的:评价ABI ViiA 7 Dx和ABI7300实时荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果的一致性并分析仪器间结果的偏倚。方法:按照美国临床实验室标准化委员会EP9-A2标准的要求,以通过卫生部室间质量评价的ABI7300实时荧光定量PCR仪作为参比仪器,ABI Vii... 目的:评价ABI ViiA 7 Dx和ABI7300实时荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果的一致性并分析仪器间结果的偏倚。方法:按照美国临床实验室标准化委员会EP9-A2标准的要求,以通过卫生部室间质量评价的ABI7300实时荧光定量PCR仪作为参比仪器,ABI ViiA 7 Dx实时荧光定量PCR仪作为实验仪器。分别在两台PCR仪上检测40份血浆标本的HBVDNA,对两台PCR仪的检测结果进行比对并计算判断偏倚。结果:ABI ViiA 7 Dx和ABI7300实时荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果间的相关性较好(r=0.9835),两台PCR仪检测结果的偏倚可以接受。结论:ABI ViiA 7 Dx和ABI7300实时荧光定量PCR仪检测HBVDNA结果一致性较好,可以同时用于临床HBVDNA的检测。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 乙型肝炎病毒 一致性
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高危HPV18分型检测在女性宫颈癌筛查中的应用 预览
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作者 张秋萍 谢一艳 《浙江创伤外科》 2019年第3期537-539,共3页
目的 探讨经人乳头瘤病毒高危18分型检测的阳性病例与宫颈病变TCT分级和病理活检分期的关系。 方法 选取2017年2月至2017年10月在本院妇科门诊及“两癌筛查”妇女1276例,采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测高危HPV18分型以及低危HPV6,11... 目的 探讨经人乳头瘤病毒高危18分型检测的阳性病例与宫颈病变TCT分级和病理活检分期的关系。 方法 选取2017年2月至2017年10月在本院妇科门诊及“两癌筛查”妇女1276例,采用实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测高危HPV18分型以及低危HPV6,11,同时采集宫颈脱落细胞标本,送病理科进行液基脱落细胞(TCT)检测,TCT和HPV18型任一阳性患者行阴道镜取病变部位组织做病理活检。 结果 高危HPV18分型的3组型别中HPV其他型感染率显著高于HPV18型(χ^2=6.112,P=0.013),与HPV16型无统计学差异(χ^2=2.52,P=0.112);不同程度宫颈癌脱落细胞分级中,其HPV18型感染率分别是:NILM为2.88%(32/1112),ASCUS为30.9%(21/68),LSIL为59.3%(32/54),HSIL为77.8%(28/36),SCC为100.0%(6/6);在与阴道组织病理活检结果比较中,高危HPV感染患者发生慢性炎症及宫颈癌不同分级患者均明显高于HPV阴性组,差异有统计学意义(P均<0.05);HPV6,11与HPV18或HPV16分型的混合感染在CINⅡ、Ⅲ和SCC的感染率明显高于HPV6,11合并HPV其他型(P<0.05)。 结论 高危HPV18分型具有无创、快速、准确检测人体是否存在高危HPV型别感染的作用,特别适用于宫颈癌前病变的早期检测,对于妇女HPV高危患者的筛查具有重要的意义。HPV16和18分型与HPV6.11混合感染更易导致宫颈癌的发生发展,联合检测对于宫颈癌前病变的早期诊断与预防治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 高危 人乳头瘤瘤病毒 实时荧光定量PCR 宫颈癌前病变 液基脱落细胞学 阴道镜组织活检 宫颈脱落细胞.
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2017—2018年张家界市手足口病病原学检测结果分析 预览
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作者 田晓辉 刘晶晶 +1 位作者 龚育平 张淳轶 《中国卫生产业》 2019年第15期160-161,164共3页
目的分析张家界市手足口病病原体构成特征的变迁,为手足口病防控提供科学依据。方法收集2017—2018年张家界市手足口病临床诊断患者的咽拭子样本,采用实时荧光定量PCR方法检测手足口病毒核酸。结果321份咽拭子标本中,肠道病毒核酸总阳... 目的分析张家界市手足口病病原体构成特征的变迁,为手足口病防控提供科学依据。方法收集2017—2018年张家界市手足口病临床诊断患者的咽拭子样本,采用实时荧光定量PCR方法检测手足口病毒核酸。结果321份咽拭子标本中,肠道病毒核酸总阳性检出率为34.89%(112/321),其中EV71检出率为3.12%,CoxA16检出率为10.90%,未分型肠道病毒检出率为20.87%。2017年、2018年未分型肠道病毒构成比分别为64.71%、55.73%,所占比例明显提高。病毒核酸阳性标本以<5岁儿童居多,占97.33%,男童阳性检出率高于女童(P<0.05)。结论2017—2018年张家界市<5岁儿童为手足口病高发人群。各型别病毒感染同时存在,但引起流行的主要肠道病原体为未分型肠道病毒,应加强手足口病的病原学检测。 展开更多
关键词 手足口病 病原学 肠道病毒核酸 实时荧光定量PCR
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非洲猪瘟病毒K196 R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立 预览
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作者 崔贝贝 仇松寅 +4 位作者 梅琳 韩雪清 吴绍强 李霆 林祥梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期3-8,共6页
为建立一种准确、特异、高效、快速的非洲猪瘟病毒定量检测方法,本研究根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)早期表达基因K196R的基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,通过优化退火温度、引物及探针浓度,建立了快... 为建立一种准确、特异、高效、快速的非洲猪瘟病毒定量检测方法,本研究根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)早期表达基因K196R的基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,通过优化退火温度、引物及探针浓度,建立了快速检测ASFV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法选择的引物具有高度灵敏性和特异性,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系(R2=0.998),对ASFV核酸最低检测下限为1.3拷贝,且与猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等多种病原不存在交叉反应。本研究建立的K196R基因实时荧光定量PCR检测方法为非洲猪瘟疫情提供了一种新型、灵敏和特异的早期检测方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 实时荧光定量PCR K196R基因 检测
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家蚕感染BmCPV相关未知功能蛋白LOC101742613的基因克隆及表征特征分析
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作者 汪羚 杨娟 +5 位作者 李斌 尚梦珂 高坤 侯成香 唐旭东 郭锡杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期46-53,共8页
在感染家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrovirus,BmCPV)的家蚕中肠组织中发现一个表达量明显下调的未知蛋白LOC101742613,与棉铃虫(Helicoverpa armigera)的未知蛋白LOC110378285的序列一致性为51%。利用PCR技术克... 在感染家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrovirus,BmCPV)的家蚕中肠组织中发现一个表达量明显下调的未知蛋白LOC101742613,与棉铃虫(Helicoverpa armigera)的未知蛋白LOC110378285的序列一致性为51%。利用PCR技术克隆获得了编码该蛋白质的cDNA,其序列全长为1114bp,最大开放阅读框(ORF)为993bp,编码的蛋白质由330个氨基酸残基组成,预测蛋白质分子质量为36.6kD,等电点为4.31。实时荧光定量PCR分析发现目的基因主要在家蚕的脂肪体、精巢、卵巢和头部组织中表达,且家蚕中肠感染BmCPV后48h和72h其mRNA的表达量显著下调,分别为对照组的7.3%和2.1%。通过构建重组表达载体pET28a/BGIBMGA014203对去掉信号肽的目的蛋白进行原核表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析发现重组蛋白主要在包涵体中,分子质量约为37kD。研究结果为进一步阐明目的基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕 质型多角体病毒 实时荧光定量PCR 原核表达
棉花E3泛素连接酶基因GhRING1-like的克隆及功能分析 预览
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作者 夏朝阳 安晓晖 +2 位作者 张中起 葛冬冬 刘康 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期39-50,共12页
[目的] RING(really interesting new gene)finger E3泛素连接酶在植物生长发育和抵御环境胁迫中具有重要作用。克隆棉花RING finger E3泛素连接酶基因 GhRING1 -like 并分析其表达特征和功能,为该基因分子作用机制研究和育种应用奠定... [目的] RING(really interesting new gene)finger E3泛素连接酶在植物生长发育和抵御环境胁迫中具有重要作用。克隆棉花RING finger E3泛素连接酶基因 GhRING1 -like 并分析其表达特征和功能,为该基因分子作用机制研究和育种应用奠定基础。[方法]根据棉花表达谱分析,选取并克隆干旱胁迫处理上调表达基因 GhRING1 -like ,qRT-PCR分析 GhRING1 -like 的组织表达特性及其对不同非生物胁迫和激素处理的响应模式;采用瞬时表达对GhRING1-like-GFP融合蛋白进行亚细胞定位分析;通过获得病毒介导的基因沉默(VIGS)棉花和过表达拟南芥植株,分析沉默或过表达 GhRING1 -like 对植株生长发育及其抗旱性的影响。[结果] GhRING1 -like 基因序列全长996 bp,编码332个氨基酸,其C端含有RING-H2(C3H2C3)结构域。GhRING1-like定位于内质网上。 GhRING1 -like 在叶片中优势表达;200 g · L^-1 PEG6000诱导处理1 h后瞬时显著上调表达12倍; GhRING1 -like 对NaCl、ABA和SA的响应时间都在处理后3 h,上调表达均在5倍左右。干旱胁迫处理后,VIGS沉默 GhRING1 -like 棉花叶片相对含水量和叶绿素荧光参数 Fv/ Fm分别较未沉默对照降低17.1%和30.6%,而电解质渗透率和丙二醛含量分别较对照提高70.8%和100%。过表达 GhRING1 -like 显著提高了拟南芥种子萌发和幼苗期对于甘露醇引起的渗透胁迫的耐受性;可使营养生长中后期阶段的拟南芥在水分亏缺处理下的存活率提高2.4倍;转基因拟南芥叶片气孔开度降低 51.2%,失水率明显降低。干旱胁迫下,过表达 GhRING1 -like 使依赖于ABA诱导表达的 AtAREB 1、AtERD15、AtRD29A 上调表达,而对不依赖ABA的干旱胁迫诱导基因 AtDREB和脯氨酸合成基因AtPLD 没有影响。[结论]棉花 GhRING1 -like 参与了植物非生物胁迫抗性的调控,主要通过依赖于ABA通路正向调控植物的抗旱反应。 展开更多
关键词 E3泛素连接酶 干旱胁迫 实时荧光定量PCR 病毒介导的基因沉默(VIGS) 转基因拟南芥
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天津市津南区2015~2018年儿童流感病原学监测结果分析 预览
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作者 郑梅 孙雅娜 +3 位作者 方燕锟 赵晓萌 黄伟 李胜强 《医学信息》 2019年第13期131-132,共2页
目的对天津市津南区2015~2018年儿童流感病原学监测资料进行分析,为儿童流感的预防提供依据。方法采集2015~2018年津南区流感监测哨点医院流感样病例(ILI)患儿的咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR进行流感病毒检测,对不同流感病毒的流行... 目的对天津市津南区2015~2018年儿童流感病原学监测资料进行分析,为儿童流感的预防提供依据。方法采集2015~2018年津南区流感监测哨点医院流感样病例(ILI)患儿的咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR进行流感病毒检测,对不同流感病毒的流行进行型别和年龄分布的统计学分析。结果共采集1783份0~14岁ILI患儿咽拭子标本,核酸阳性549份,阳性率为30.79%。季节性甲型H1N1、季节性H3型、B(Victoria)系(BV)、B(Yamaga-ta)系(BY)病毒交替流行。不同年龄组病毒阳性率呈显著上升又下降趋势,以6~8岁年龄组阳性率最高数(41.90%),其次为3~5岁年龄组(35.37%)。结论天津市津南区2015~2018年儿童流感流行高峰主要在冬春季节,优势毒株交替流行出现。应重视季节性甲型H1N1流感病毒对儿童健康的影响,加强对学龄儿童的流感防控工作。 展开更多
关键词 儿童 流感病毒 病原学监测 实时荧光定量PCR
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在地钱中构建简便、高效的基因表达检测体系 预览
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作者 苗志奇 周璐 徐美慧 《天津大学学报:自然科学与工程技术版》 CSCD 北大核心 2019年第6期661-668,共8页
实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)广泛应用于基因转录水平的差异分析.选择稳定表达的参比基因,设计理想的参比引物扩增参比基因进而对样本进行标准化处理是得到可靠的qRT-PCR分析结果的前提.地钱具有基因组小、生长周期短、易于培... 实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)广泛应用于基因转录水平的差异分析.选择稳定表达的参比基因,设计理想的参比引物扩增参比基因进而对样本进行标准化处理是得到可靠的qRT-PCR分析结果的前提.地钱具有基因组小、生长周期短、易于培养繁殖、转基因效率高等优势,已成为一种新兴的合成生物学模式植物.植物合成生物学的研究产生了大量的转基因和突变系等地钱材料,同时也提出了在地钱底盘中提升qRT-PCR的效率和可靠性,从而快速准确分析外源以及内源基因表达水平的现实需求.对地钱基因组进行生物信息学分析发现,地钱中参比基因ACT7存在两个高度同源的基因序列,其中任一基因的表达均不太稳定,但两个基因的表达存在一定的互补性.为了在地钱中构建简易、高效的qRT-PCR分析体系,利用数学模型,分析qRT-PCR误差传导机制,建立参比引物的综合评价指标体系.研究发现,能够同时扩增两个ACT7高度同源基因的共退火引物对应的表达水平更为稳定,其中编号为3~6的引物在扩增效率、表达水平及稳定性等多个指标上表现均衡优越,从而开发了一种在地钱中快速准确检测基因表达水平的qRT-PCR平台技术,同时也为在其他物种中如何优化qRT-PCR检测体系指明方向. 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 地钱 ACTIN参比基因 共引物设计
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宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达及其意义 预览
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作者 史跃燕 鞠少卿 +3 位作者 申娴娟 张金业 朱自力 顾益凤 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第12期1421-1425,共5页
目的探讨宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达水平及其对宫颈癌的辅助诊断价值。方法收集55例宫颈癌患者、32例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者、39例子宫肌瘤患者及47例健康对照者血清样本,分别测定hsa-miR-200a-3p的表达水平及糖链抗原125(C... 目的探讨宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达水平及其对宫颈癌的辅助诊断价值。方法收集55例宫颈癌患者、32例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者、39例子宫肌瘤患者及47例健康对照者血清样本,分别测定hsa-miR-200a-3p的表达水平及糖链抗原125(CA125)和人鳞状细胞癌相关抗原(SCCAg)水平。分析血清hsa-miR-200a-3p的表达水平与临床病理特征、CA125和SCCAg之间的关系。用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价3项指标单独及联合检测对宫颈癌的辅助诊断价值。结果宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的相对表达量均高于子宫肌瘤患者和健康对照者,差异有统计学意义(P<0.001)。CIN患者血清hsa-miR-200a-3p的相对表达量均高于子宫肌瘤患者和健康对照者,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫肌瘤患者和健康对照者血清hsa-miR-200a-3p的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p的表达水平在年龄大小、是否绝经、肿瘤最大直径、FIGO分期间差异均无统计学意义(P>0.05),宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p相对表达量与CA125(r2=0.012,P=0.421)、SCCAg(r2=0.004,P=0.647)无相关性。ROC曲线分析血清has-miR-200a-3p检测对宫颈癌患者的辅助诊断价值,宫颈癌区分于子宫肌瘤时,ROC曲线下面积(AUC)为0.753;宫颈癌患者区分于健康对照者时,AUC为0.771。结论宫颈癌患者血清hsa-miR-200a-3p相对表达量高于子宫肌瘤组和健康对照组,有可能成为宫颈癌辅助诊断的重要生物学指标。血清hsa-miR-200a-3p的表达水平或可用于CIN的辅助诊断。 展开更多
关键词 宫颈癌 hsa-miR-200a-3p 实时荧光定量PCR
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MITF在白色北极狐不同组织器官中的差异表达
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作者 李寒妹 葛丛丛 +3 位作者 王国森 王子贤 刘铮铸 巩元芳 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期151-153,157共4页
为了探索小眼畸形相关转录因子(MITF)基因与狐狸毛色形成间的关系,试验采用实时荧光定量PCR技术,对MITF基因在白色北极狐皮肤、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉7个组织器官中的表达量进行了测定。结果表明:MITF基因在皮肤中表达量最... 为了探索小眼畸形相关转录因子(MITF)基因与狐狸毛色形成间的关系,试验采用实时荧光定量PCR技术,对MITF基因在白色北极狐皮肤、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉7个组织器官中的表达量进行了测定。结果表明:MITF基因在皮肤中表达量最高,其表达水平分别是心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和肌肉的19.5倍、3.2倍、1.8倍、5.3倍、9.7倍和31.0倍,差异达极显著水平(P<0.01)。推测MITF基因可能与白色北极狐的白色毛皮形成有密切联系。 展开更多
关键词 白色北极狐 小眼畸形相关转录因子 MRNA 实时荧光定量PCR 表达
流行性感冒暴发疫情实验室检测与分析 预览
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作者 罗亮 《现代医药卫生》 2019年第3期477-479,共3页
人流行性感冒(流感),是由甲(A)、乙(B)、丙(C)3种流感病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒属正粘病毒科,流感病毒属,是具有包膜和分节段的单链负股RNA病毒。流感病毒经呼吸道传播,由于其传播速度极快,且极易发生抗原漂移和转变等变异... 人流行性感冒(流感),是由甲(A)、乙(B)、丙(C)3种流感病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒属正粘病毒科,流感病毒属,是具有包膜和分节段的单链负股RNA病毒。流感病毒经呼吸道传播,由于其传播速度极快,且极易发生抗原漂移和转变等变异,因此,每年流感都会发生不同规模的暴发和流行,给人类造成不同程度的伤害[1-2]。本文通过对深圳市坪山区某学校流感暴发疫情进行实验室检测和结果分析,旨在通过本次疫情了解流感病毒的型别及变异情况,从而了解流感发病规律,对易感人群开展病原学监测。 展开更多
关键词 流感 人/流行病学 暴发 核酸类/分析 聚合酶链反应 标本 实时荧光定量PCR
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