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家蚕微孢子虫感染对家蚕海龟蛋白(Bmtutl)基因表达水平的影响 预览
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作者 朱峰 高建华 +4 位作者 张永红 肖圣燕 邵榆岚 唐芬芬 白兴荣 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期930-936,共7页
【目的】本研究旨在阐明家蚕微孢子虫Nosema bombycis感染不同时间对家蚕Bombyxmori幼虫不同组织中家蚕海龟蛋白(Bombyx Turtle,Bmtutl)基因表达水平的影响,为揭示家蚕微孢子虫的侵染机制奠定基础。【方法】利用生物信息学方法对家蚕海... 【目的】本研究旨在阐明家蚕微孢子虫Nosema bombycis感染不同时间对家蚕Bombyxmori幼虫不同组织中家蚕海龟蛋白(Bombyx Turtle,Bmtutl)基因表达水平的影响,为揭示家蚕微孢子虫的侵染机制奠定基础。【方法】利用生物信息学方法对家蚕海龟蛋白3种亚型Bmtutl-464,Bmtutl-519和Bmtutl-810的序列结构特征进行了分析;利用qPCR检测家蚕微孢子虫感染后12,24,48,72,96和120h,家蚕幼虫中肠、血淋巴与脂肪体组织中Bmtutl-464,Bmtutl-519和Bmtutl-810基因表达水平的变化情况。【结果】家蚕海龟蛋白3种亚型的二级结构均主要由无规则卷曲、α螺旋、β转角和延伸链组成,其中无规则卷曲所占比例最高。但是PredictProtein分析发现,Bmtutl-464,Bmtutl-519和Bmtutl-810之间的蛋白/多核苷酸结合位点存在较大差异。qPCR结果表明,感染家蚕微孢子虫后,家蚕幼虫中肠、血淋巴与脂肪体组织中Bmtutl-464,Bmtutl-519和Bmtutl-810基因的整体表达处于被抑制状态,尤其在脂肪体中最为明显:Bmtutl-519和Bmtutl-810基因的表达在家蚕微孢子虫感染家蚕后的72h开始受到显著抑制,特别是Bmtutl-519基因,其相对表达水平均不到对照的5.0%。【结论】家蚕海龟蛋白这3种亚型的序列结构特征存在较大差异,家蚕微孢子虫感染在一定程度抑制了家蚕幼虫中肠、血淋巴与脂肪体组织中Bmtutl-464,Bmtutl-519和Bmtutl-810基因尤其是Bmtutl-519的表达。结果说明,与其他两种家蚕海龟蛋白亚型相比,Bmtutl-519蛋白可能在家蚕微孢子虫侵染宿主的过程中起主要作用。 展开更多
关键词 家蚕 家蚕微孢子虫 家蚕海龟蛋白 序列分析 时相表达
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家蚕ADP/ATP转运酶(BmANT)抑制BmNPV增殖作用机制研究
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作者 董战旗 蒋亚明 +1 位作者 陈鹏 潘敏慧 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1474-1483,共10页
[目的]家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)隶属于杆状病毒,需要借助宿主细胞能量代谢进行自身增殖复制。家蚕ADP/ATP转运酶(Bombyx mori ADP/ATP translocase,BmANT)是线粒体转运蛋白,在BmNPV感染条件下和家... [目的]家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)隶属于杆状病毒,需要借助宿主细胞能量代谢进行自身增殖复制。家蚕ADP/ATP转运酶(Bombyx mori ADP/ATP translocase,BmANT)是线粒体转运蛋白,在BmNPV感染条件下和家蚕热休克蛋白60(heat shock protein 60,BmHSP60)具有直接的相互作用。因此,鉴定Bmant基因在BmNPV感染过程中的功能特征,有助于解析杆状病毒劫持宿主细胞因子促进自身增殖复制机制,完善杆状病毒和宿主相互作用网络。[方法]通过结构域预测BmANT蛋白的结构特征,荧光定量PCR分析Bmant基因在BmNPV感染后的变化特征;并过表达BmANT检测其对病毒DNA复制和病毒蛋白表达变化影响;进一步在转录水平分析Bmant和Bmhsp60基因的调控关系;最后通过流式细胞术等技术鉴定Bmant和Bmhsp60基因共同调控BmNPV增殖复制的机制。[结果] SMART软件预测显示BmANT包含3个线粒体载体结构域,BmNPV感染24 h后Bmant基因持续下调表达。过表达Bmant基因能够显著抑制BmNPV DNA的复制和VP39蛋白表达。荧光定量PCR分析显示Bmant和Bmhsp60基因具有相互拮抗作用,能够相互抑制转录。Bmant和Bmhsp60共同过表达分析显示,BmANT和BmHSP60共同作用BmNPV能够抑制病毒的增殖复制。[结论]结果表明,BmANT是一个线粒体载体蛋白,具有显著的抗病毒作用,能够下调Bmhsp60基因表达,并抑制BmNPV增殖复制。 展开更多
关键词 家蚕 家蚕核型多角体病毒 BmANT BmHSP60 抗病毒
BmDaxx对家蚕细胞和幼虫组织凋亡的调控作用 预览
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作者 矫鹏 肖颖 +4 位作者 刘震 陈瑞婷 陆喦 辛虎虎 缪云根 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期472-483,共12页
采用荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法体外扩增并鉴定家蚕死亡结构域相关蛋白基因(BmDaxx)。结果表明:BmDaxx及其下游基因BmFadd和BmDredd的表达水平在BmDaxx过表达后显著升高,但... 采用荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法体外扩增并鉴定家蚕死亡结构域相关蛋白基因(BmDaxx)。结果表明:BmDaxx及其下游基因BmFadd和BmDredd的表达水平在BmDaxx过表达后显著升高,但在BmDaxx的RNA干扰后,BmDaxx和BmFadd的表达水平显著降低;BmDaxx过表达增加半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3/7(cystein-asparate protease-3/7,caspase-3/7)活性,而RNA干扰则降低caspase-3/7活性。用caspase-3/7抑制剂处理BmN细胞后,与对照组相比,BmDaxx、BmFadd和BmDredd的转录水平降低。在家蚕吐丝期,BmDaxx在丝腺中的表达量显著高于其他组织,这与丝腺的凋亡退化过程相一致。注射caspase抑制剂后,凋亡相关基因BmDaxx、BmFadd和BmDredd的表达水平显著降低。由此可以认为,BmDaxx及其下游基因BmFadd和BmDredd之间存在着相互作用,它们在BmN细胞和丝腺细胞凋亡中起着关键作用。 展开更多
关键词 家蚕 凋亡 丝腺 家蚕死亡结构域相关蛋白基因 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
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家蚕IAP互作蛋白的筛选、鉴定及其对BmNPV增殖的影响 预览
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作者 陈鹏 包希艳 +4 位作者 康涛涛 董战旗 朱艳 潘敏慧 鲁成 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期558-567,共10页
【目的】细胞凋亡作为昆虫免疫应答的重要组成部分,在病毒与宿主相互作用的过程中扮演着重要角色,以细胞凋亡相关基因为研究对象对阐明其在病毒感染过程中的作用具有重要的参考价值。本研究旨在筛选家蚕凋亡抑制蛋白(Bombyx mori inhibi... 【目的】细胞凋亡作为昆虫免疫应答的重要组成部分,在病毒与宿主相互作用的过程中扮演着重要角色,以细胞凋亡相关基因为研究对象对阐明其在病毒感染过程中的作用具有重要的参考价值。本研究旨在筛选家蚕凋亡抑制蛋白(Bombyx mori inhibitor of apoptosis protein,BmIAP)的相互作用蛋白,并验证其在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)侵染过程中与Bmiap的相互调控关系及在BmNPV增殖过程中的作用,为探明宿主与BmNPV相互作用的分子机制提供理论依据。【方法】利用免疫共沉淀技术筛选在BmNPV侵染家蚕细胞过程中与BmIAP相互作用的蛋白,对获得的特异性差异条带进行LC-MS/MS蛋白质谱分析,根据蛋白分子量大小并利用生物信息学方法对获得的蛋白进行鉴定,确定候选基因;通过分子克隆技术对候选基因进行克隆,利用SMART在线工具及BioEdit分别对候选基因的结构域进行预测及多序列比对分析;通过免疫荧光试验验证BmIAP和候选蛋白的细胞共定位情况,并进一步利用免疫共沉淀验证它们的相互作用;分别通过真核表达和基于CRISPR/Cas9的基因编辑系统对候选基因进行过表达和敲除,利用qRT-PCR技术检测相应基因的表达情况,以确定Bmiap和Bmpp5在BmNPV侵染过程中的调控关系;同样,在过表达和敲除Bmpp5后检测杆状病毒Vp39的表达量,以确定Bmpp5对BmNPV增殖的影响。【结果】通过免疫共沉淀获得7个可能与BmIAP相互作用的宿主蛋白和1个BmNPV蛋白,进一步分析确定1个与凋亡相关的候选基因Bmpp5;Bmpp5的开放阅读框为1 473 bp,编码490个氨基酸,预测的蛋白分子量约为56 kD,含3个TRP结构域和1个PP2Ac结构域,在昆虫间具有较高的保守性;免疫荧光检测证明BmIAP和BmPP5共定位于细胞质中,免疫共沉淀结果表明两者可以相互作用;在BmNPV侵染过程中,过表达Bmiap后,Bmpp5的表达量显著上调,而敲除Bmiap后,Bmp 展开更多
关键词 家蚕 凋亡抑制蛋白 互作蛋白 家蚕核型多角体病毒 BmPP5
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家蚕微孢子虫极管蛋白2(NbPTP2)的表达、纯化和定位特征 预览
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作者 易敏 吕青 +4 位作者 刘柯柯 王礼君 吴玉娇 周泽扬 龙梦娴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1830-1838,共9页
[目的]微孢子虫是一种细胞内专性寄生的真核生物,几乎能感染所有生物,包括人类。极管作为微孢子虫特有的侵染器官,主要由极管蛋白组成。极管蛋白在微孢子虫侵染宿主与稳定孢子结构中发挥重要作用。本研究通过克隆、表达家蚕微孢子虫(Nos... [目的]微孢子虫是一种细胞内专性寄生的真核生物,几乎能感染所有生物,包括人类。极管作为微孢子虫特有的侵染器官,主要由极管蛋白组成。极管蛋白在微孢子虫侵染宿主与稳定孢子结构中发挥重要作用。本研究通过克隆、表达家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)极管蛋白 2(NbPTP2),分析其在成熟孢子极管上的定位特征,为深入研究极管蛋白的功能打下基础。[方法]克隆家蚕微孢子虫 NbPTP2。利用 Expasy、SignalP 4.1、TMHMM Server V.2.0 和 NetPhos 3.1 Server 等在线软件对 NbPTP2 的序列特征进行分析,包括氨基酸组成、蛋白质理论分子量、等电点、信号肽、跨膜结构域和磷酸化位点。此外,利用 MEGA 7.0 软件构建不同种属微孢子虫极管蛋白 2 的系统进化树。通过克隆 NbPTP2,将其与原核表达载体 pET32a(+)连接,构建 pET32a(+)-NbPTP2 重组表达质粒。将测序正确的重组质粒转化到大肠杆菌 Rosetta 中,IPTG 诱导异源表达,经镍柱亲和层析纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用免疫印迹检测 NbPTP2 在成熟孢子中的表达情况,并通过间接免疫荧光试验(IFA)分析 NbPTP2 在家蚕微孢子虫成熟孢子中的定位特征。[结果]成功克隆并获得长为 834 bp 的 NbPTP2基因序列,该蛋白编码 278 个氨基酸残基,理论分子质量为 30.9 kD,等电点为 9.39,无跨膜结构域,N 端存在信号肽,具有潜在的磷酸化修饰位点。系统进化树分析结果显示,家蚕微孢子虫 NbPTP2 与西方蜜蜂微孢子虫NaPTP2、东方蜜蜂微孢子虫 NcPTP2 的亲缘关系最近。Western blot 结果表明,NbPTP2编码的蛋白质在成熟孢子的孢子总蛋白中有表达,分子量大小约为 39 kD。IFA 定位特征分析结果显示,NbPTP2 能定位于家蚕微孢子虫的整条极管上,证实其为一种极管蛋白。[结论]明确了 NbPTP2 与其他微孢子虫极管蛋白 2 的亲缘关系,NbPTP2 在成熟家蚕微孢子虫中有表达, 展开更多
关键词 家蚕 家蚕微孢子虫 极管蛋白 2 原核表达 定位分析
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球孢白僵菌毒素对家蚕糖代谢水平的影响
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作者 耿涛 赫荣帆 +4 位作者 潘波 武华周 王娜玉 郭锡杰 王树昌 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期2585-2595,共11页
为明确球孢白僵菌毒素对宿主昆虫糖代谢水平的作用,本研究检测了家蚕幼虫感染球孢白僵菌和注射球孢白僵菌毒素之后组织中海藻糖和糖原含量的变化,以及糖代谢相关基因表达水平的变化;分析了注射毒素和添食海藻糖之后对家蚕幼虫存活率的... 为明确球孢白僵菌毒素对宿主昆虫糖代谢水平的作用,本研究检测了家蚕幼虫感染球孢白僵菌和注射球孢白僵菌毒素之后组织中海藻糖和糖原含量的变化,以及糖代谢相关基因表达水平的变化;分析了注射毒素和添食海藻糖之后对家蚕幼虫存活率的影响、以及添加毒素之后对BmN细胞的损伤作用。结果表明,家蚕幼虫感染球孢白僵菌和注射毒素后海藻糖和糖原含量显著降低;Bombyxin A2和BmIBP2基因显著上调表达,而糖代谢酶系基因则显著下调表达。注射毒素显著降低家蚕5龄幼虫的存活时间,而补充海藻糖能够延长家蚕幼虫的存活时间。添加毒素能够使家蚕BmN细胞发生凝集作用而最终崩解死亡,并诱导Bombyxin A2和BmIBP2基因显著上调表达以及糖代谢酶系基因显著下调表达。以上结果说明,球孢白僵菌可能通过分泌毒素,作用于家蚕类胰岛素信号通路,调节家蚕自身糖类物质的代谢与合成,破坏家蚕能量代谢与储存平衡,引起家蚕组织细胞凋亡并最终导致家蚕死亡。本研究结果对农林害虫的生物防治、家蚕等经济昆虫僵病防治技术的研究以及球孢白僵菌毒素用于新型降糖药物的筛选和中药僵蚕的开发利用均具有重要意义。 展开更多
关键词 家蚕 球孢白僵菌 真菌毒素 家蚕 糖代谢
利用Excel软件实现的家蚕饲育卡片系统 预览
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作者 童晓琪 张彦 +3 位作者 黄浩 石凉 秦凤 黄德辉 《现代农业科技》 2019年第16期251-256,258共7页
本文介绍了利用Excel软件实现的家蚕饲育卡片系统,本系统运用Excel的计算功能对纸质家蚕饲育卡片进行电子化,大大减少了人工计算量,并且可以插入图片,使家蚕数据更加形象化。
关键词 家蚕 饲育 数据调查 成绩计算 计算公式
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用于细胞水平家蚕转录调控元件研究的简单基础启动子的构建 预览
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作者 顾健健 刘红玲 +7 位作者 李凯荣 孟紫旺 王慧娟 沈关望 张宇靖 阮杨 林英 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期391-397,共7页
【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子,从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响,为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的... 【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子,从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响,为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的能在家蚕细胞中稳定表达且基本不含上游转录调控元件的BmVgP78M启动子的基础上,通过PCR技术在其上游添加一定长度的间隔序列和能够应答20-羟基蜕皮激素(20E)且增强启动子活性的BrC-Z2转录因子结合基序(BrC-Z2Element,BrC-Z2E);通过基因克隆技术构建细胞转染载体;通过细胞转染技术和双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性的变化。【结果】通过在BmVgP78M启动子上游添加28bp间隔序列,成功构建了一个简单基础启动子,命名为VgP78ML,并证明其为可用于研究目标转录调控元件的简单基础启动子。经实验验证表明,该简单基础启动子不仅可以在家蚕细胞中稳定表达,且其本身活性不受20E及转录因子BrC-Z2的影响;当该启动子上游连接BrC-Z2E时,可以显著地应答20E及BrC-Z2转录因子,从而调控报告基因的表达。【结论】VgP78ML能够作为简单基础启动子应用于细胞水平对家蚕基因转录调控进行研究。同时,其构建方法也为其他物种构建研究转录调控的简单基础启动子提供了参考。 展开更多
关键词 家蚕 细胞 简单基础启动子 双荧光素酶报告基因系统 转录调控 转录元件
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家蚕AGO1蛋白结合RNA的分离与鉴定
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作者 杨帆 高珍 +4 位作者 马亚飞 蒋彩英 吕正兵 盛清 聂作明 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期346-352,共7页
RNA诱导的基因沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)核心蛋白为Argonaute(AGO)家族蛋白,作为miRNA及RNAi功能途径中的关键蛋白,能够结合miRNA和siRNA,降解靶标基因mRNA或抑制其翻译。因此,利用AGO蛋白抗体通过免疫沉淀分离... RNA诱导的基因沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)核心蛋白为Argonaute(AGO)家族蛋白,作为miRNA及RNAi功能途径中的关键蛋白,能够结合miRNA和siRNA,降解靶标基因mRNA或抑制其翻译。因此,利用AGO蛋白抗体通过免疫沉淀分离其结合RNA是目前规模化分离鉴定miRNA及相关小RNA靶基因的重要方法。首先对家蚕AGO1基因进行克隆表达和抗体制备,用自制的兔多克隆抗体免疫沉淀家蚕组织内源BmAGO1蛋白,成功分离BmAGO1蛋白结合的RNA;同时在BmN细胞中采用6×His标签融合表达BmAGO1蛋白,用His单抗免疫沉淀His-BmAGO1蛋白,同样成功分离获得其结合RNA。qRT-PCR检测发现,BmAGO1蛋白结合的RNA中含有家蚕miRNA靶基因BmEm4的mRNA。研究结果为批量鉴定家蚕miRNA靶基因奠定了基础,同时也为深入研究BmAGO1蛋白在家蚕中的功能提供了依据。 展开更多
关键词 家蚕 BmAGO1蛋白 免疫共沉淀 AGO结合RNA miRNA靶基因
喂食细菌对家蚕血淋巴酚氧化酶活性及其基因表达的影响 预览
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作者 杨伟克 唐芬芬 +2 位作者 刘增虎 钟健 董占鹏 《中国农学通报》 2019年第5期160-164,共5页
为研究细菌刺激后,家蚕血淋巴酚氧化酶活性及其基因表达变化情况,利用实时荧光定量PCR的方法检测了喂食大肠杆菌和金黄色葡萄球菌后不同时间(6、12、24、48 h)酚氧化酶原基因PPO1和PPO2的表达情况,同时测定了酚氧化酶的活性。结果显示:... 为研究细菌刺激后,家蚕血淋巴酚氧化酶活性及其基因表达变化情况,利用实时荧光定量PCR的方法检测了喂食大肠杆菌和金黄色葡萄球菌后不同时间(6、12、24、48 h)酚氧化酶原基因PPO1和PPO2的表达情况,同时测定了酚氧化酶的活性。结果显示:在喂食2种细菌后的6、12和24 h,家蚕血淋巴中PPO1和PPO2基因上调表达,酚氧化酶活性显著高于对照组。其中喂食革兰氏阴性菌大肠杆菌后,PPO1和PPO2基因相对表达量及酚氧化酶活性在12 h达到峰值,而喂食革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌在24 h出现峰值。家蚕感染革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,酚氧化酶活性及其基因表达存在一定差异,暗示感染不同细菌后诱发的家蚕免疫机制并不完全相同。 展开更多
关键词 细菌 家蚕 酚氧化酶 酚氧化酶原基因
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家蚕眠期血淋巴酚氧化酶活性变化及其基因表达分析 预览
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作者 杨伟克 刘增虎 +1 位作者 钟健 董占鹏 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期391-396,共6页
【目的】探究酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)及酚氧化酶在家蚕眠期血淋巴中的变化规律,为深入解析家蚕眠期酚氧化酶的功能及其基因表达特征提供新线索。【方法】以家蚕四龄将眠、四龄眠(头壳刚开裂)0h、四龄眠6h、四龄眠12h、四龄眠24h和... 【目的】探究酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)及酚氧化酶在家蚕眠期血淋巴中的变化规律,为深入解析家蚕眠期酚氧化酶的功能及其基因表达特征提供新线索。【方法】以家蚕四龄将眠、四龄眠(头壳刚开裂)0h、四龄眠6h、四龄眠12h、四龄眠24h和五龄起蚕为试验材料,采用实时荧光定量PCR检测其血淋巴PPO1和PPO2基因的表达情况,并分析血淋巴酚氧化酶活性的变化规律。【结果】家蚕血淋巴PPO1和PPO2基因在四龄将眠至五龄起蚕不同发育时期均有一定程度的表达,且两者的变化规律一致,表现为四龄将眠最高、五龄起蚕最低,总体上呈先减后增再减的变化趋势。在家蚕四龄将眠至五龄起蚕不同发育时期血淋巴酚氧化酶活性整体上也呈先降低后急剧升高再降低的变化趋势,四龄将眠为5.99U/mg,五龄起蚕为6.02U/mg,与酚氧化酶原基因表达模式基本一致。【结论】家蚕四龄将眠至五龄起蚕不同发育时期血淋巴酚氧化酶活性变化规律与酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)的转录表达模式基本一致,说明酚氧化酶在家蚕眠期即发挥免疫防御功能,又参与蚕体新旧表皮的更替过程。 展开更多
关键词 家蚕 酚氧化酶 酚氧化酶原基因 眠期 血淋巴 变化规律
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家蚕新品种苏荣×锡玉在如皋市的试养初报 预览
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作者 周慧勤 章亚蓓 +3 位作者 潘中华 许梦 钟粤桥 司马杨虎 《广西蚕业》 2019年第1期6-10,共5页
家蚕新品种苏荣×锡玉已经获得江苏省蚕品种证书,为进一步检验该品种在如皋地区的农村适应性,对该品种进行试养调查。通过对家蚕新品种苏荣×锡玉试养并与现行品种菁松×皓月进行比较分析,调查该品种蚕期发育表现、主要经... 家蚕新品种苏荣×锡玉已经获得江苏省蚕品种证书,为进一步检验该品种在如皋地区的农村适应性,对该品种进行试养调查。通过对家蚕新品种苏荣×锡玉试养并与现行品种菁松×皓月进行比较分析,调查该品种蚕期发育表现、主要经济性状和抗性,并对数据进行单因素方差分析。结果显示,两者蚕期发育表现、主要经济性状和抗性无明显差异,该品种在如皋地区适应性较强。认为该品种适宜在如皋市农村进一步推广。 展开更多
关键词 家蚕 新品种 苏荣×锡玉 农村饲养
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甲氧虫酰肼对蚕体谷草转氨酶和谷丙转氨酶的影响 预览
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作者 吕艳艳 吴朋飞 +3 位作者 王飞 严会超 徐成 王叶元 《广东蚕业》 2019年第6期1-4,7共5页
甲氧虫酰肼是一种类蜕皮激素的农药,其对鳞翅目害虫有高度选择性杀害作用。实验以9·芙为试验蚕品种,通过测定添食不同浓度甲氧虫酰肼的谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性,来评定甲氧虫酰肼对家蚕生理生化的影响。实验结果为:二、三龄蚕添... 甲氧虫酰肼是一种类蜕皮激素的农药,其对鳞翅目害虫有高度选择性杀害作用。实验以9·芙为试验蚕品种,通过测定添食不同浓度甲氧虫酰肼的谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性,来评定甲氧虫酰肼对家蚕生理生化的影响。实验结果为:二、三龄蚕添食,浓度为2.27×10^-3mg.a.i./L和1.40×10^-2mga.i./L时,谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性试验组与对照组之间无显著差异,而其他浓度甲氧虫酰肼使之有显著增加。五龄蚕添食,浓度为9.53×10^-4mg.a.i./L,3.09×10^-3mg.a.i./L和5.56×10^-3mg.a.i./L时,谷草转氨酶活性与空白对照组有显著差异,所有试验组的谷草转氨酶均与溶剂对照组没有显著差异;当浓度为5.29×10^-4 mg.a.i./L和1.71×10^-3 mg.a.i./L时,谷丙转氨酶试验组活性与对照组有显著差异。 展开更多
关键词 家蚕 甲氧虫酰肼 谷丙转氨酶 谷草转氨酶
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家蚕Prosβ1基因在蛾翅及早期发育中的作用
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作者 秦笙 张静 +3 位作者 印锦 孙霞 王学杨 李木旺 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期181-186,共6页
家蚕是鳞翅目的代表物种,研究其翅发育相关基因有助于理解影响昆虫翅发育的内在因素,为鳞翅目害虫的遗传防治提供理论基础和靶标。家蚕的蛋白酶体β亚基1(Bombyx mori proteasome subunitβtype-1,BmProsβ1)是家蚕蛋白酶体核心颗粒的... 家蚕是鳞翅目的代表物种,研究其翅发育相关基因有助于理解影响昆虫翅发育的内在因素,为鳞翅目害虫的遗传防治提供理论基础和靶标。家蚕的蛋白酶体β亚基1(Bombyx mori proteasome subunitβtype-1,BmProsβ1)是家蚕蛋白酶体核心颗粒的组件之一,负责水解折叠错误或细胞不需要的蛋白质,在细胞发育和器官形成过程中发挥重要作用。利用RNAi干扰技术,在家蚕体腔翅原基附近注射体外合成的针对BmProsβ1基因的小RNA,qRT-PCR检测试验组翅原基中BmProsβ1的表达水平得到有效抑制;对干扰后翅表型的统计结果显示,试验组中小翅个体的比率占52.38%,而对照组中未出现小翅个体。表明在BmProsβ1表达受到抑制的情况下,会严重影响家蚕翅的发育。进一步利用CRISPR/Cas9技术对BmProsβ1进行基因敲除实验,结果显示注射sgRNA与Cas9 mRNA的蚕卵孵化率极低并在幼虫期死亡,而对照组孵化率达到37.92%。这表明BmProsβ1基因在家蚕的早期发育过程中也起到重要作用,其功能缺失会导致家蚕胚胎和幼蚕致死。 展开更多
关键词 家蚕 发育 蛋白酶体 BmProsβ1基因
家蚕血液型脓病多发原因及防治措施 预览
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作者 龚继满 《广东蚕业》 2019年第6期10-11,共2页
分析了家蚕血液型脓病多发的原因,并提出严格消毒、加强饲养管理、加强桑园管理、改善饲养环境等综合防治措施。
关键词 葫芦岛 家蚕 血液型脓病 发生原因 防治措施
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稚蚕期O2含量变化及对家蚕生长发育的影响 预览
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作者 刘文光 刘惠芬 +3 位作者 衣葵花 娄齐年 王照红 李云芝 《北方蚕业》 2019年第1期13-16,20共5页
在实验条件下,饲养框内的O 2含量随家蚕的生长和时间的延长而减少,2龄眠蚕体重与O 2含量有强相关性,全茧量、茧层量等指标无显著差异;添食1.0×10^5 PIB·mL^-1 、1.0×10^6 PIB·mL^-1 、1.0×10 ^7 PIB·mL^... 在实验条件下,饲养框内的O 2含量随家蚕的生长和时间的延长而减少,2龄眠蚕体重与O 2含量有强相关性,全茧量、茧层量等指标无显著差异;添食1.0×10^5 PIB·mL^-1 、1.0×10^6 PIB·mL^-1 、1.0×10 ^7 PIB·mL^-1 的BmCPV,随着O 2含量的降低,家蚕对BmCPV的抵抗力也随之降低,说明保持饲养环境的O 2含量对增强家蚕体质具有重要意义。 展开更多
关键词 家蚕 氧气含量 眠蚕体重 茧质 抗病性
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一个二化性家蚕醛酮还原酶基因的克隆及序列与表达分析
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作者 陈艳荣 朱娟 +4 位作者 蒋涛 谭志承 陈艳花 唐顺明 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期187-194,共8页
醛酮还原酶(aldo-keto reductase,AKR)超级家族成员以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸作为其辅酶,将醛酮类化合物还原成相应的醇类,其作用底物范围广泛,包括糖类、脂肪醛和甾体类激素等,在许多重要生物学反应中发挥关键作用。以二化性... 醛酮还原酶(aldo-keto reductase,AKR)超级家族成员以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸作为其辅酶,将醛酮类化合物还原成相应的醇类,其作用底物范围广泛,包括糖类、脂肪醛和甾体类激素等,在许多重要生物学反应中发挥关键作用。以二化性家蚕品系秋丰为材料,利用RT-PCR分别从滞育命运组和非滞育命运组克隆出AKR蛋白的cDNA序列。AKR蛋白序列由343个氨基酸组成,与黑腹果蝇和人的AKR分别有43%和38%的序列一致性。基于蛋白质序列构建的系统发育树显示,家蚕AKR蛋白属于AKR2E亚家族,其氨基酸序列与该家族成员序列一致性超过30%,故命名为AKR2E-like。将akr2e-like基因的cDNA序列克隆进表达载体pET-28a(+)中进行原核重组表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析显示重组蛋白被成功表达。qRT-PCR分析表明,ark2e-like基因表达受发育环境调节:在滞育诱导条件下,该基因在家蚕化蛹早期的表达量持续增加,在化蛹后第4天mRNA丰度达到最高值;而在非滞育诱导条件下,化蛹后ark2e-like基因表达量并无明显波动。上述结果表明,ark2e-like基因有可能在家蚕二化性品系的滞育准备期起关键作用。 展开更多
关键词 醛酮还原酶 滞育准备 家蚕 表达
重庆地区3株球孢白僵菌的分离鉴定
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作者 吴燕燕 唐运林 +7 位作者 顾偌铖 李恬恬 包佳玲 李田 李春峰 韦俊宏 潘国庆 周泽扬 《西南大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期14-19,共6页
我国是农业和林业大国,农林害虫的危害造成了严重的经济损失,同时化学防治也导致了环境污染等诸多问题.因此,开发基于虫生真菌的生物农药意义重大.为了丰富虫生真菌菌种资源,以野外感染白僵菌的蝽蟓及室内感染的家蚕僵虫样品为实验材料... 我国是农业和林业大国,农林害虫的危害造成了严重的经济损失,同时化学防治也导致了环境污染等诸多问题.因此,开发基于虫生真菌的生物农药意义重大.为了丰富虫生真菌菌种资源,以野外感染白僵菌的蝽蟓及室内感染的家蚕僵虫样品为实验材料,采用多种培养基,分离获得了3株虫生真菌菌株,分别为来自蝽蟓的NB-1,PW-1菌株和来自家蚕的JCY菌株,形态学观察结果表明,各菌株的培养特征与白僵菌属菌株较为一致;分子生物学鉴定表明,各菌株rDNA ITS序列与GenBank中白僵菌属球孢白僵菌多个菌株同源性高达99%,因此将菌株NB-1,PW-1和JCY均鉴定为球孢白僵菌( Beauveria bassiana );生物学特性观察发现不同菌株间分生孢子产生量存在显著差异,分离自蝽蟓僵虫的球孢白僵菌PW-1,NB-1分生孢子产量分别为(7.55±0.15)×10^7个/mL,(6.30±0.40)×10^7个/mL,均高于家蚕分离株JCY,其产孢量仅为(3.02±0.22)×10^7个/mL.结论为后续研发针对包括草地贪夜蛾在内的农林害虫生物杀虫剂奠定了菌种基础. 展开更多
关键词 球孢白僵菌 虫生真菌 鉴定 蝽蟓 家蚕
家蚕整合素β2的表达、纯化及其免疫功能 预览
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作者 张奎 李重阳 +3 位作者 苏晶晶 谈娟 徐曼 崔红娟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期181-190,共10页
【目的】分析家蚕(Bombyx mori)整合素β2的序列和结构特征及其在家蚕感染病原菌后血细胞中的表达变化,检测其重组蛋白对不同病原相关模式分子识别和病原菌的凝聚作用,为进一步探究家蚕整合素β2的蛋白功能打下基础。【方法】利用生物... 【目的】分析家蚕(Bombyx mori)整合素β2的序列和结构特征及其在家蚕感染病原菌后血细胞中的表达变化,检测其重组蛋白对不同病原相关模式分子识别和病原菌的凝聚作用,为进一步探究家蚕整合素β2的蛋白功能打下基础。【方法】利用生物信息学对整合素β2的序列和结构特征进行分析,利用实时荧光定量PCR检测家蚕分别注射大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)后整合素β2在血细胞中的表达变化。通过PCR技术扩增获得整合素β2完整的胞外域片段,构建至pET22b原核表达载体后转化至E.coli Rosetta(DE3)表达菌株。经IPTG诱导获得重组蛋白,利用Ni-NTA亲和层析得到纯化的体外重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western blot对纯化获得的体外重组蛋白的纯度和质量进行检测。利用ELISA检测重组蛋白与两种不同病原相关分子模式LPS和PGN的结合情况,运用Western blot检测重组蛋白与不同病原微生物的结合情况,通过凝集试验检测重组蛋白对金黄色葡萄球菌的凝集能力,最后在个体水平探索重组蛋白在体内细菌清理中的作用。【结果】家蚕整合素β2具有典型的β整合素亚基保守结构特征,即由一个较长的胞外域、一个单次跨膜结构域和一个较短的胞内域构成。家蚕整合素β2具有金属离子结合位点MIDAS、EGF结构域、半胱氨酸重复基序和NPxY等整合素典型的结构特征。实时荧光定量PCR检测结果表明家蚕在受到细菌感染后,整合素β2的表达发生显著变化。通过原核表达和蛋白纯化获得纯度较高的重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明纯化的重组蛋白纯度较高,可以用于后续试验。ELISA试验表明重组蛋白对LPS和PGN等病原相关分子模式具有较强的结合能力。细菌结合试验结果显示重组蛋白能够结合多种细菌,但与革兰氏阳性菌的结合能力要高于革兰氏阴性菌。细菌凝聚试验 展开更多
关键词 家蚕 整合素β2 细菌感染 原核表达 细菌凝聚
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家蚕ML家族基因的鉴定及病原诱导表达特征
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作者 梅雄娥 李致宏 +4 位作者 于滨 仝超群 潘国庆 李春峰 周泽扬 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期32-39,共8页
MD-2相关脂类识别蛋白(MD-2-related lipid-recognition,ML)家族是一类广泛分布于动物、植物和真菌的含有ML单一结构域的蛋白家族,在先天免疫、脂类识别及代谢过程中发挥重要作用。通过同源检索在家蚕基因组数据库中比对获得4个ML家族... MD-2相关脂类识别蛋白(MD-2-related lipid-recognition,ML)家族是一类广泛分布于动物、植物和真菌的含有ML单一结构域的蛋白家族,在先天免疫、脂类识别及代谢过程中发挥重要作用。通过同源检索在家蚕基因组数据库中比对获得4个ML家族成员基因,包括BmNPC2、BmML-1、BmML-2和BmEr-16,克隆其cDNA序列,生物信息学分析表明家蚕ML家族蛋白具有典型的ML结构域和信号肽,并至少含有4个保守的半胱氨酸残基。系统进化分析显示BmNPC2与黑脉金斑蝶的Promoting以及烟草天蛾的MsML-1亲缘关系较近,BmML-2、BmEr-16以及BmML-1与果蝇的NPC2家族蛋白亲缘关系较近。qRT-PCR结果显示ML家族基因在家蚕各组织中均有转录,其中在脂肪体和马氏管中的表达量相对较高。将大肠埃希菌以及球孢白僵菌、黑胸败血芽孢杆菌、核型多角体病毒和家蚕微孢子虫等家蚕病原通过注射或添食家蚕5龄幼虫进行免疫诱导,qRT-PCR结果显示家蚕ML家族成员在不同病原诱导之后均有不同程度的上调表达,推测ML家族成员可能参与到宿主对入侵病原物的免疫过程。 展开更多
关键词 家蚕 ML家族 病原诱导 转录分析
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