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配对盒基因6/小鼠胚胎干细胞细胞系的建立及干细胞生物学特性分析
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作者 丁玲 高杰 +2 位作者 李红 胡蓉 苏敏 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期451-458,共8页
目的建立配对盒基因6(Pax6)/小鼠胚胎干细胞(m ESCs)细胞系并鉴定其干细胞生物学特性。方法体外培养m ESCs,将重组载体p EF1α-Pax6-IRES-AcGFP和空载体p EF1α-IRES-AcGFP分别用脂质体法转染m ESCs,经G418梯度及荧光蛋白双筛选后,使用... 目的建立配对盒基因6(Pax6)/小鼠胚胎干细胞(m ESCs)细胞系并鉴定其干细胞生物学特性。方法体外培养m ESCs,将重组载体p EF1α-Pax6-IRES-AcGFP和空载体p EF1α-IRES-AcGFP分别用脂质体法转染m ESCs,经G418梯度及荧光蛋白双筛选后,使用细胞免疫荧光染色、免疫印迹法及RT-PCR技术检测Pax6的表达情况,流式细胞术检测Pax6/m ESCs阳性细胞的比例。将获得正确的细胞系分别采用细胞免疫荧光染色对其干细胞标志物阶段特异性胚胎抗原1(SSEA1)、八聚体结合转录因子4(OCT4)进行检测,碱性磷酸酶(AP)染色法对其多能性进行检测,流式细胞术检测增殖指数Ki67。将Pax6/m ESCs进行肾背囊下移植,移植物行HE染色观察其分化能力。结果 Pax6成功在m ESCs内表达,经G418筛选后,获得Pax6/m ESCs细胞系,流式结果显示,Pax6阳性率为90%,免疫荧光显示,干细胞标志物SSEA1、OCT4表达阳性且AP染色阳性,并且在体内移植后能向3个胚层分化。结论 Pax6成功在m ESCs内表达,经G418筛选后,获得细胞系Pax6/m ESCs并维持良好的干细胞特性。 展开更多
关键词 配对盒基因6 小鼠胚胎干细胞 基因转染 G418筛选 流式细胞 小鼠
异补骨脂甲素调控miR-124对小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的影响
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作者 王贝 袁晨燕 姚瑞芹 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1110-1116,共7页
目的探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcriptio... 目的探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcription factor-4,OCT4)和神经微丝H(neurofilament-H, NFH)的表达。使用Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-124和锌指蛋白18(zinc finger and BTB domain containing 18, ZBTB18)的靶向关系。在J1细胞中转染pcDNA-ZBTB18或miR-124 mimics、ZBTB18 shRNA,免疫荧光染色检测细胞中OCT4和NFH的表达。结果 IBA可显著抑制J1细胞中OCT4蛋白表达,并上调miR-124和NFH表达;而抑制miR-124表达后所得结果相反。miR-124可靶向调控ZBTB18蛋白表达。在J1细胞中过表达ZBTB18,OCT4阳性表达率升高而NFH阳性表达率降低;敲减ZBTB18可在一定程度上减弱miR-124对IBA干预J1细胞OCT4和NFH表达的促进或抑制作用。结论 IBA能够促进J1细胞中miR-124表达,而miR-124可靶向调控ZBTB18,从而调节OCT4和NFH蛋白表达,这可能是IBA促进小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞的作用机制。 展开更多
关键词 异补骨脂甲素 微小RNA-124 锌指蛋白18 小鼠胚胎干细胞 神经细胞 细胞分化
PHC1基因敲降对小鼠胚胎干细胞多能干性的影响 预览
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作者 文欢 曾建平 《中南医学科学杂志》 CAS 2019年第2期125-129,共5页
探讨多梳家族蛋白PHC1敲降后对小鼠胚胎干细胞(mESCs)多能干性的影响,并探索其与多能干性基因nanog的转录调控机制。对mESCs细胞系进行PHC1蛋白沉默处理并设置阴性对照组(control组)和空白对照组(Empty vector组),采用qRT-PCR、Western ... 探讨多梳家族蛋白PHC1敲降后对小鼠胚胎干细胞(mESCs)多能干性的影响,并探索其与多能干性基因nanog的转录调控机制。对mESCs细胞系进行PHC1蛋白沉默处理并设置阴性对照组(control组)和空白对照组(Empty vector组),采用qRT-PCR、Western blot、免疫荧光染色检测PHC1的表达量;荧光素酶报告基因技术(Luciferase Reporter)检测PHC1与nanog reporter之间的转录活性。结果提示:实验组mESCs呈现分化状态,多能干性基因nanog、oct4、sox2的表达下调,且nanog下调最显著;荧光素酶报告基因结果提示PHC1和nanog可能会形成复合物参与nanog的转录调控( P <0.05)。实验表明,敲降PHC1基因后可能通过影响nanog转录调控,从而参与核心转录调控“铁三角”(nanog、oct4、sox2)之间的相互转录调控机制,导致mESCs出现分化,进而参与mESCs多能干性的维持。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 PHC1基因 转录调控 多能
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利用单细胞融合技术高效获得融合细胞的方法
4
作者 郭佳 厉雪纯 +4 位作者 方园 赵剑超 李妍 郭诗萌 刘忠华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期782-786,799共6页
试验以小鼠胚胎干细胞(mESC)作为细胞融合对象,用0.25%胰酶将mESC消化成单细胞,利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对,在含有50%聚乙二醇的ES培养液中培养1 min,随后将细胞继续培养7 d,获得既表达红色荧光也表达绿色荧光的克隆即为融合... 试验以小鼠胚胎干细胞(mESC)作为细胞融合对象,用0.25%胰酶将mESC消化成单细胞,利用细胞凝集素构建一对一的单细胞对,在含有50%聚乙二醇的ES培养液中培养1 min,随后将细胞继续培养7 d,获得既表达红色荧光也表达绿色荧光的克隆即为融合成功。结果显示,单细胞融合法的克隆效率(46.25%)显著高于传统融合的效率(0.001 7%)。进一步检测融合细胞的生物学特性发现,虽然细胞形态与mESC具有很大的差异,但依然呈AP阳性,RNA水平上表达Oct4、Sox2和Nanog,具有向三胚层分化的能力等。结果表明,单细胞融合法是一种高效构建融合细胞的新途径。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 细胞融合法 细胞融合效率
CRISPR系统介导的小鼠细胞染色体标记
5
作者 宋展 张淑贤 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第2期243-251,共9页
细胞基因组生物学功能的发挥依赖于其染色质空间组成方式和动态活动,而对染色体的动态变化进行研究的首要任务,就是通过一种简单而有效的方法实现基因组中特定序列的标记。近年来,随着CRISPR技术的发展,应用其对特定基因进行标记将成为... 细胞基因组生物学功能的发挥依赖于其染色质空间组成方式和动态活动,而对染色体的动态变化进行研究的首要任务,就是通过一种简单而有效的方法实现基因组中特定序列的标记。近年来,随着CRISPR技术的发展,应用其对特定基因进行标记将成为研究染色体动态变化的有力手段。该研究中,对CRISPR系统的sgRNA支架序列进行F+E修饰,增强了dCas9蛋白复合体对DNA的结合能力,获得支架序列增强型CRISPR(enhance sgRNA scaffold-CRISPR,Esgs-CRISPR)系统。接着,进一步将Esgs-CRISPR标记系统与PB转座系统以及Tet-on系统相结合,构建了适用于稳定标记细胞的质粒系统,即PB-Tet-on-Esgs-CRISPR(PTE-CRISPR)系统。在PTE-CRISPR质粒中插入特定的sgRNA序列,通过脂质体转染成功标记了小鼠神经瘤母细胞(mouse neuroblastoma cell line-2A,N2A)的端粒和卫星序列。通过与表达转座酶(PB transposase,PBase)的质粒共转染小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC),该研究成功标记了mESC的端粒及卫星序列,并通过流式细胞术筛选获得了标记端粒和卫星序列的稳转细胞系。该研究实现了CRISPR系统介导的mESC染色体特定基因序列的标记,为进一步研究活细胞内染色体结构和动态变化提供了基础。 展开更多
关键词 染色体标记 CRISPR技术 小鼠神经瘤母细胞 小鼠胚胎干细胞
小鼠胚胎干细胞表面糖分子被凝集素特异性识别的研究
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作者 胡继良 王浩 +2 位作者 陈佳 吕文 陈东 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期51-55,共5页
目的探讨小鼠胚胎干细胞表面糖蛋白能够被特异性识别的凝集素。方法通过磁珠筛选出小鼠胚胎干细胞系ES-D3和ESC57BL/6中周期特异性胚胎抗原1(stage specific embryonic antigen-1,SSEA-1)阳性的胚胎干细胞,进行凝集素的特异性结合,流... 目的探讨小鼠胚胎干细胞表面糖蛋白能够被特异性识别的凝集素。方法通过磁珠筛选出小鼠胚胎干细胞系ES-D3和ESC57BL/6中周期特异性胚胎抗原1(stage specific embryonic antigen-1,SSEA-1)阳性的胚胎干细胞,进行凝集素的特异性结合,流式细胞仪筛选和免疫荧光染色,观察凝集素特异性结合情况。结果磁珠法可以筛选出99%的SSEA-1阳性细胞,它们代表着未分化的胚胎干细胞。在SSEA-1阳性细胞中,凝集素的结合实验的流式筛选提示,凝集素DSL结合率达99%,多花紫藤凝集素(Wisteria Floribunda Lectin,WFL)的结合呈双相性,部分不结合,部分高度结合;而荆豆凝集素I(Ulex europaeus Agglutinin UEAI)几乎不结合。结论曼陀罗植物凝集素(Datura stramonium Lectin,DSL)可以象SSEA-1一样,作为小鼠胚胎干细胞的特异性标志物,而UEAI可以作为阴性标志物。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 周期特异性胚胎抗原1 凝集素
逆转录病毒载体介导的蜘蛛拖丝蛋白转基因小鼠的制备
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作者 杜文敬 梁洋 +2 位作者 朴善花 王春生 安铁洙 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第17期10-12,230共4页
为了建立通过转基因动物获得蜘蛛拖丝蛋白的方法,试验利用前期构建的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)逆转录病毒载体侵染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),通过嵌合体法制备转基因小鼠,并用PCR技术进行鉴定。结果表明:成功获得嵌合体... 为了建立通过转基因动物获得蜘蛛拖丝蛋白的方法,试验利用前期构建的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)逆转录病毒载体侵染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES),通过嵌合体法制备转基因小鼠,并用PCR技术进行鉴定。结果表明:成功获得嵌合体小鼠;目的基因2S-IRES-EGFP已整合入F0代及F1代嵌合体小鼠的鼠尾基因组中。说明利用逆转录病毒可成功获得表达蜘蛛拖丝蛋白基因(2S)的转基因小鼠。 展开更多
关键词 蜘蛛拖丝蛋白基因 逆转录病毒载体 小鼠胚胎干细胞 嵌合体 转基因 显微注射
Wdr82调控小鼠胚胎干细胞体外的增殖和分化
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作者 张薇 刘露露 +4 位作者 惠心慧 万晓玲 周培培 张岩 陈红霞 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第8期1312-1318,共7页
Setd1a复合物和Setd1b复合物(Setd1a/b)是进化上功能高度保守的表观遗传调控因子,主要包括Setd1a/b、Wdr82、Wdr5、Rbbp5、Ash2L、Dpy-30、Hcf-1等,催化组蛋白H3第4位赖氨酸(H3K4)的甲基化,进而激活基因转录。Wdr82是Setd1a/b复合... Setd1a复合物和Setd1b复合物(Setd1a/b)是进化上功能高度保守的表观遗传调控因子,主要包括Setd1a/b、Wdr82、Wdr5、Rbbp5、Ash2L、Dpy-30、Hcf-1等,催化组蛋白H3第4位赖氨酸(H3K4)的甲基化,进而激活基因转录。Wdr82是Setd1a/b复合物中特有的非催化亚基,其在胚胎发育过程中的作用尚不清楚。该研究利用小鼠胚胎干细胞(moue embryonic stem cells,m ESCs)的体外培养和分化系统发现,在m ESCs分化过程中,Wdr82的表达水平显著降低。在m ESCs中敲低Wdr82后,m ESCs的增殖速度显著减缓,而其多能性不受影响。利用拟胚体分化体系发现,Wdr82敲低后,拟胚体的形成速度变慢,自主搏动的时间明显滞后。综上所述,该结果揭示了Wdr82在m ESCs体外增殖和分化过程中的重要作用。 展开更多
关键词 Wdr82 小鼠胚胎干细胞 细胞增殖 细胞分化 多能性
利用CRISPR/Cas9系统在小鼠胚胎干细胞中进行miR-22的功能研究 预览
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作者 张雪 陈亮亮 +2 位作者 戴红霞 张文胜 任文燕 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2018年第5期71-79,共9页
旨在构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并利用CRISPR/Cas9技术构建miR-22缺失的小鼠胚胎干细胞,探究miR-22在小鼠胚胎干细胞中的调控作用。首先通过点突变、搭桥PCR等手段,构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并获得靶向敲除miR-2... 旨在构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并利用CRISPR/Cas9技术构建miR-22缺失的小鼠胚胎干细胞,探究miR-22在小鼠胚胎干细胞中的调控作用。首先通过点突变、搭桥PCR等手段,构造neomycin筛选标记的sgRNA表达载体,并获得靶向敲除miR-22的sgRNA表达载体,电转至稳转Cas9的小鼠胚胎干细胞中;其次经药物筛选、基因型鉴定等步骤筛选miR-22纯合缺失的小鼠胚胎干细胞。RT-qPCR手段证实miR-22在小鼠胚胎干细胞中被成功敲除,纯合突变体的比例约为6.67%。此外,miR-22缺失并未影响胚胎干细胞的细胞形态以及Oct4、Sox2和Nanog等干性基因的表达。因此,miR-22对小鼠胚胎干细胞的干性维持并非必需,而对胚胎干细胞谱系分化和命运决定的影响还有待进一步研究。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 CRISPR/Cas9 miR-22
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3-羟基丁酸-3-羟基己酸共聚酯材料促进小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究 预览
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作者 李海洋 许士俊 张宏家 《心肺血管病杂志》 2018年第8期796-799,802共5页
目的:观察3-羟基丁酸-3-羟基己酸共聚酯(PHBHHx)能否促进多能干细胞(m ESC)的存活、增殖以及分化,为心肌梗死的治疗提供新的治疗策略。方法:培养m ESC,传代培养至3代后与PHBHHx材料制成的生物薄膜共同培养72h,CCK-8试剂盒测定m ES... 目的:观察3-羟基丁酸-3-羟基己酸共聚酯(PHBHHx)能否促进多能干细胞(m ESC)的存活、增殖以及分化,为心肌梗死的治疗提供新的治疗策略。方法:培养m ESC,传代培养至3代后与PHBHHx材料制成的生物薄膜共同培养72h,CCK-8试剂盒测定m ESC的活性及增殖,DAPI染色观察细胞,电镜观察m ESC生长。将小鼠m ESC向心肌细胞定向分化,15d后免疫荧光和流式细胞术定量测定心肌肌钙蛋白(c Tn T)。结果:CCK-8活性检测显示PHBHHx膜培养m ESC可以促进细胞更好的增殖;电镜扫描显示,m ESC在PHBHHx膜上能够粘附生长,细胞形态正常。加入干细胞分化培养基使干细胞向心肌细胞定向分化15d后,通过免疫荧光显示心肌细胞特异性标志蛋白c Tn T表达阳性;流式细胞术测得PHBHHx膜培养比传统的细胞培养方式能够促进细胞更好的分化,测得的c Tn T表达量明显增加。结论:PHBHHx膜与m ESC有较好的组织相容性,并且能够促进m ESC的增殖和分化。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 维生素C 心肌细胞 PHBHHx膜 诱导分化
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邻苯二甲酸单乙基己基酯对小鼠胚胎干细胞多能性相关转录因子表达的影响
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作者 李玉秋 马林 +3 位作者 王天昱 李鑫 张康 马明月 《环境与职业医学》 CSCD 北大核心 2018年第3期228-233,共6页
[目的] 研究邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对小鼠胚胎干细胞多能性维持能力的影响。[方法] 不同浓度的MEHP(0、0.1、1、10、100、1 000 μmol/L)处理小鼠胚胎干细胞(mESCs)4 d,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡指标;... [目的] 研究邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对小鼠胚胎干细胞多能性维持能力的影响。[方法] 不同浓度的MEHP(0、0.1、1、10、100、1 000 μmol/L)处理小鼠胚胎干细胞(mESCs)4 d,观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞凋亡指标;应用碱性磷酸酶染色法、real-time PCR及Western blot分别检测其分化情况、胚胎干细胞多能性相关转录因子SOX2、OCT4基因及其蛋白表达水平。[结果] 随着MEHP染毒浓度的增加,mESCs克隆的细胞团逐渐缩小,且数量也出现减少,以1 000 μmol/L组尤为明显;细胞凋亡检测结果发现,随着染毒浓度增加,凋亡率呈增加趋势,与对照组相比,仅1 000 μmol/L组mESCs总细胞凋亡率[(9.58±2.02)%]的升高有统计学意义(P 〈 0.05)。碱性磷酸酶染色结果显示,1 000 μmol/L组mESCs着色较浅,甚至未着色,即出现分化倾向,而其他组mESCs均被染成深蓝色或蓝紫色。与对照组相比,100、1 000 μmol/L组中SOX2、OCT4基因表达降低(均P 〈 0.05);1 000μmol/L组SOX2、OCT4蛋白表达降低(均P 〈 0.05)。[结论] 一定浓度MEHP对mESCs存在细胞毒性,抑制mESCs正常生长,降低mESCs中多能性相关转录因子SOX2、OCT4的表达,进而影响胚胎早期发育。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 邻苯二甲酸单乙基己基酯 细胞毒性 转录因子 SOX2 OCT4
Ash2l-1/Ash2l-2在小鼠胚胎干细胞中的表达特异性及互补效应 预览
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作者 谢晶 范辰 +2 位作者 张景龙 张仕强 谷峰 《遗传》 CSCD 北大核心 2018年第3期237-249,共13页
H3K4me3是一种重要的表观遗传修饰,主要由MLL(mixed lineage leukemia)甲基转移酶复合体催化,对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)自我更新能力的维持具有重要作用。ASH2L是MLL复合体中一个重要的核心亚单位,参与调控mE... H3K4me3是一种重要的表观遗传修饰,主要由MLL(mixed lineage leukemia)甲基转移酶复合体催化,对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)自我更新能力的维持具有重要作用。ASH2L是MLL复合体中一个重要的核心亚单位,参与调控mESCs中染色质的开放状态。ASH2L在mESCs中有2个异构体:ASH2L-1(80kDa)和ASH2L-2(65kDa),且以ASH2L-2的表达为主;而在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)中,只有ASH2L-1表达。目前,Ash2l-1和Ash2l-2在mESCs中的作用尚不清楚。本文利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,建立了Ash2l-1–/–和Ash2l-2–/–mESCs。通过碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色和qRT-PCR发现,Ash2l-1–/–和Ash2l-2–/–mESCs在碱性磷酸酶、多能性调控转录因子(Oct4、Nanog、Sox2和Klf4)的表达与野生型对照无显著差异。通过拟胚体分化实验,发现Ash2l-1–/–mESCs诱导的拟胚体在Snai2(外胚层标记基因)和Gata4(内胚层标记基因)的表达上显著低于野生型mESCs诱导的拟胚体(P<0.01)。通过Westernblotting,发现Ash2l-1–/–mESCs中ASH2L-2的表达显著上调(P<0.01),Ash2l-2–/–mESCs中ASH2L-1的表达显著上调(P<0.01),而Ash2l-1–/–和Ash2l-2–/–mESCs中,基因组H3K4me3的表达与野生型对照并无显著差异。这表明Ash2l-1和Ash2l-2之间存在补偿效应。利用JASPAR和KEGG预测分析发现,Ash2l-1和Ash2l-2启动子区分别具有3个和16个潜在的多能性转录因子结合位点,这些转录因子可能介导实现Ash2l-1和Ash2l-2之间的补偿效应。以上结果表明,Ash2l-1和Ash2l-2之间的补偿效应可能参与mESCs多能性的维持和基因组H3K4me3的调控。 展开更多
关键词 H3K4me3 ASH2L异构体 CRISPR/Cas9 小鼠胚胎干细胞 补偿效应
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右归丸能启动小鼠胚胎干细胞1B10和D3的生殖分化 预览
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作者 向俊蓓 刘绵学 +1 位作者 谢林峰 万谦 《中国老年学杂志》 北大核心 2018年第16期4007-4010,共4页
目的分析补肾中药复方右归丸对干细胞生殖分化的影响。方法以两种小鼠胚胎干细胞1B10和D3为模型,以右归丸大鼠含药血清(YGW-RS)为实验药物干预1B10和D3,同时设生殖分化诱导物维甲酸(RA)为阳性对照,干预72 h,进行显微照像分析;72 h后... 目的分析补肾中药复方右归丸对干细胞生殖分化的影响。方法以两种小鼠胚胎干细胞1B10和D3为模型,以右归丸大鼠含药血清(YGW-RS)为实验药物干预1B10和D3,同时设生殖分化诱导物维甲酸(RA)为阳性对照,干预72 h,进行显微照像分析;72 h后,提取RNA,立即合成cDNA;采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测1B10和D3 11种与生殖分化相关基因Oct-4、Stra8、GDF-9、SCP3、Mvh、ZP1、ZP2、ZP3、Itga6、Itgb1、TP2的表达模式,GAPDH为内参基因。结果对于1B10,RA显著上调Stra8、Mvh、ZP1、ZP2表达,显著下调SCP3、ZP3、Oct-4表达(P〈0.05);对于D3,RA显著上调Stra8表达,显著下调Oct-4、GDF-9、SCP3、Mvh、ZP3、Itgab表达(P〈0.05)。对于1B10,YGW-RS显著上调Oct-4、SCP3、Mvh、ZP1、ZP2、ZP3、Itga6表达,显著下调Stra8表达(P〈0.05);对于D3,YGW-RS显著上调Oct-4、GDF-9、Stra8、ZP2、TP2表达(P〈0.05)。结论右归丸具有启动干细胞生殖分化的作用。 展开更多
关键词 右归丸 维甲酸 含药血清 小鼠胚胎干细胞 生殖分化
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BMP—Smad信号通路在小鼠胚胎干细胞诱导分化成骨细胞方案优化中的应用 预览
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作者 夏荃 鲍倩 +1 位作者 蒋德菊 高巍 《广东医学》 2018年第6期822-827,共6页
目的利用BMP—Smad信号通路在成骨分化中的作用,筛选出较稳定且成骨率较高的小鼠胚胎干细胞体外定向诱导分化成骨细胞的方案。方法小鼠胚胎干细胞经悬浮培养形成拟胚体(embryoidbodies,EBs),用胰酶消化成单个细胞接种至6孔板中,在... 目的利用BMP—Smad信号通路在成骨分化中的作用,筛选出较稳定且成骨率较高的小鼠胚胎干细胞体外定向诱导分化成骨细胞的方案。方法小鼠胚胎干细胞经悬浮培养形成拟胚体(embryoidbodies,EBs),用胰酶消化成单个细胞接种至6孔板中,在EBs单细胞贴壁生长的第14~21天,A组(方案1)添加50μg/mL维生素c+50mmol/Lβ-磷酸甘油+10μmol/L地塞米松;B组(方案2)添加50μg/mL维生素C4-10mmol/Lβ-磷酸甘油+1μmol/L地塞米松;C组(方案3)添加50μg/mL维生素C+50mmol/Lβ-磷酸甘油+1μmol/L地塞米松;D组为正常对照组,不添加诱导剂。各组均在在贴壁第7、14、21、28天检测碱性磷酸酶(ALP)活性,第22天用1%茜素红染色鉴定成骨细胞。采用荧光定量PCR(q—PCR)和Westernb lot检测BMP—Smad信号通路中的BMP2、BMPR2、Smad1和Smad5等关键mRNA和蛋白的表达水平。结果与正常对照组相比,各组均在EBs贴壁第7天后ALP活力逐渐增强,且均在第21天增至最强。茜素红染色结果显示,阳性细胞被染成橘红色、呈大小不等的结节状。计算成骨细胞诱导形成率,A组、B组、C组和D组成骨细胞形成率分别为15.34%、23.71%、29.12%和0.66%。Q—PCR和Western blot检测结果显示,与正常对照组相比,各组BMP2、BMPR2、Smad1和Smad5的mRNA和蛋白表达水平有不同程度的升高和降低,其中c组(方案3)的BMP2、BMPR2、Smad1和Smad5的相对表达量均升高,且差异有统计学意义(P〈0.05)。结论添加50μg/mL维生素C+50mmol/Lβ-磷酸甘油+1μmoL/L地塞米松的方案成骨细胞诱导形成率最多,可最大量诱导骨结节的形成。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 BMP—Smad信号通路 诱导分化 成骨细胞
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miR-290 contributes to the low abundance of cyclin D1 protein in mouse embryonic stem cells
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作者 Zizhen Gong Detao Wang +4 位作者 Shaoliang Zhu Yuqing Xia Chunsun Fan Botao Zhao Youxin Jin 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第7期635-642,共8页
老鼠 miR-290 簇 miRNAs 在早胚胎和胚胎的细菌房间明确地被表示。这些 miRNAs 戏在 pluripotency 和自强的维护的关键角色。这里,我们证明 Cyclin D1 是 miR-290 簇 miRNAs 的直接目标基因。在在 pluripotent 和 non-pluripotent 房... 老鼠 miR-290 簇 miRNAs 在早胚胎和胚胎的细菌房间明确地被表示。这些 miRNAs 戏在 pluripotency 和自强的维护的关键角色。这里,我们证明 Cyclin D1 是 miR-290 簇 miRNAs 的直接目标基因。在在 pluripotent 和 non-pluripotent 房间,以及在区分 CGR8 房间的 Cyclin D1 蛋白质和 miR-290 簇 miRNAs 的表示之间的否定关系被观察。miR-290 簇 miRNAs 的抑制能在 G1 阶段逮捕房间并且在 CGR8 老鼠干细胞减慢房间增长。因为 miR-290 簇 miRNAs 是最主导的 stem-cell-specific miRNAs,我们的结果在老鼠为 Cyclin D1 的缺席揭示了一个重要原因胚胎的干细胞。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 细胞周期素 D1蛋白 细胞周期蛋白D1 miRNAs 低丰度 胚胎生殖细胞 多能干细胞
Interplay of transcription factors and microRNAs during embryonic hematopoiesis
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作者 Xueping Gong Ruihua Chao +9 位作者 Pengxiang Wang Xiaoli Huang Jingjing Zhang Xiaozhou Zhu Yanyang Zhang Xue Yang Chao Hou Xiangjun Ji Tieliu Shi Yuan Wang 《中国科学:生命科学英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第2期168-177,共10页
Hematopoietic stem cells (HSCs), which are localized in the bone marrow of adult mammals, come from hematopoietic endothelium during embryonic stages. Although the basic processes of HSC generation and differentiation... Hematopoietic stem cells (HSCs), which are localized in the bone marrow of adult mammals, come from hematopoietic endothelium during embryonic stages. Although the basic processes of HSC generation and differentiation have been described in the past, the epigenetic regulation of embryonic hematopoiesis remains to be fully described. Here, by utilizing an in vitro differentiation system of mouse embryonic stem cells (ESCs), we identified more than 20 microRNAs that were highly enriched in embryonic hematopoietic cells, including some (e.g. miR-10b, miR-15b, and miR-27a) with previously unknown functions in blood formation. Luciferase and gene expression assays further revealed combinational binding and regulation of these microRNAs by key transcription factors in blood cells. Finally, bioinformatics and functional analyses supported an interactive regulatory control between transcription factors and microRNAs in hematopoiesis. 展开更多
关键词 microRNA 造血干细胞 转录因子 胚胎 相互作用 小鼠胚胎干细胞 遗传调控 成年哺乳动物
Elevated 5-hydroxymethycytosine and cell apoptosis induced by tetrachloro-1,4-benzoquinone in mouse embryonic stem cells
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作者 Albert Zuehlke Hongquan Zhang 《环境科学学报:英文版》 SCIE EI CAS CSCD 2017年第1期1-4,共4页
<正>Pentachlorophenol(PCP)has been extensively used as a fungicide,bactericide,herbicide,molluscicide。algaecide and insecticide worldwide(Ahlborg and Thunberg,1980:Choudhury et al.,1986).Although PCP is primari... <正>Pentachlorophenol(PCP)has been extensively used as a fungicide,bactericide,herbicide,molluscicide。algaecide and insecticide worldwide(Ahlborg and Thunberg,1980:Choudhury et al.,1986).Although PCP is primarily used as a preservative for wood and wood products,it has been also used in a variety of other products,including adhesives,construction materials,leather and paper.PCP is environmentally persistent with a half-life of up to 6-7 months in soil and water systems(Law 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 细胞凋亡 诱导 苯醌 木材产品 建筑材料 杀菌剂 PCP
Tetrachloro-1,4-benzoquinone induces apoptosis of mouse embryonic stem cells
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作者 Cuiping Li Fengbang Wang Hailin Wang 《环境科学学报:英文版》 SCIE EI CAS CSCD 2017年第1期5-12,共8页
五氯苯酚(PCP ) 是普遍、坚持的环境沾染物,并且形成反应代谢物酶地被激活, tetrachloro-1,4-benzoquinone (TCBQ ) 。到我们的知识,胚胎的干细胞上的 TCBQ 毒性没有信息。这里,我们证明 TCBQ 显著地导致了老鼠的 apoptosis 以一种... 五氯苯酚(PCP ) 是普遍、坚持的环境沾染物,并且形成反应代谢物酶地被激活, tetrachloro-1,4-benzoquinone (TCBQ ) 。到我们的知识,胚胎的干细胞上的 TCBQ 毒性没有信息。这里,我们证明 TCBQ 显著地导致了老鼠的 apoptosis 以一种集中依赖者方式的胚胎的干细胞。我们也证明 TCBQ 由影响十提高了 genomic 5-hydroxymethylcytosine (5hmC )-- 在老鼠的十一 translocation (Tet ) dioxygenases 胚胎的干细胞。我们进一步调查了 Tet dioxygenases 是否在导致 TCBQ 的 apoptosis 被含有。由弄空所有三 dioxygenases (Tet1-3 ) ,我们发现 Tet dioxygenases 稍微禁止了 TCBQ 在低集中导致的早、迟了的 apoptosis (30 &#xA0; mol/L ) 。同时,在更高的集中由 TCBQ 对待(40 和 50 &#xA0; mol/L ) , apoptotic 房间的全部的百分比没被 Tet dioxygenases 影响。然而, Tet dioxygenases 趋于逮捕老鼠 ES 房间在早 apoptotic 舞台并且减少房间进入以后的 apoptotic 舞台。这些结果显示 Tet dioxygenases 在在老鼠塑造导致 TCBQ 的 apoptosis 起一个作用胚胎的干细胞。我们的学习提供新卓见进 PCP 和它的反应代谢物 TCBQ 的毒物学。 展开更多
关键词 小鼠胚胎干细胞 细胞凋亡 诱导凋亡 苯醌 双加氧酶 活性代谢物 早期阶段 环境污染物
Science:科学家重编程胚胎干细胞成功扩展其潜在的细胞命运
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《现代生物医学进展》 CAS 2017年第5期I0001-I0002,共2页
近日,一项刊登在国际杂志Science上的研究报告中,来自加利福尼亚大学等机构的研究人员通过联合研究开发出了一种新方法,该方法能够对小鼠胚胎干细胞进行重编程使其能够表现出颇似受精卵一样的发育特性。
关键词 小鼠胚胎干细胞 重编程 科学家 加利福尼亚大学 研究开发 研究人员 发育特性 受精卵
抑制LIF/Stat3信号通路促进小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化 预览 被引量:1
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作者 杨谋广 徐岩 +1 位作者 邹传德 王爱玲 《安徽医科大学学报》 北大核心 2017年第5期645-650,共6页
目的研究LIF/Stat3信号通路对小鼠胚胎干细胞(m ESCs)分化成心肌细胞的影响。方法利用m ESCs形成拟胚体(EBs)进行心肌分化。在野生型m ESCs形成EBs的过程中加入Janus激酶(JAK)抑制剂以抑制LIF/Stat3信号通路(JAKi组)。而在融合... 目的研究LIF/Stat3信号通路对小鼠胚胎干细胞(m ESCs)分化成心肌细胞的影响。方法利用m ESCs形成拟胚体(EBs)进行心肌分化。在野生型m ESCs形成EBs的过程中加入Janus激酶(JAK)抑制剂以抑制LIF/Stat3信号通路(JAKi组)。而在融合表达雌激素受体(ER)和Stat3的Stat3ER细胞株进行分化过程中添加4-羟基他莫西酚(4HT)以激活LIF/Stat3信号通路(4HT组)。用qRT-PCR检测心脏特异转录因子NKX2.5、α-肌球蛋白重链(α-MHC)和连接蛋白43(Cx43)以及m ESCs自我更新基因oct4、nanog和Stat3下游基因socs3的表达水平。用Western blot检测和免疫荧光染色法验证α-MHC和Cx43的相对表达。结果免疫荧光结果显示在自发搏动的EBs中出现α-MHC和Cx43的荧光,表明心肌细胞分化成功。随着分化时间的延长,NKX2.5、α-MHC和Cx43的mRNA表达量逐渐增加,至第15天时最为明显,且JAKi组高于对照组(P〈0.01);对照组高于4HT组(P〈0.01)。而nanog、oct4随着分化时间的延长逐渐降低,且JAKi组低于对照组(P〈0.05),而4HT组高于其对照组(P〈0.05)。Socs3的表达量在JAKi组一直较低且低于对照组,在4HT组表达较高且高于对照组(P〈0.01)。Western blot检测结果显示第15天的Cx43和α-MHC蛋白表达量JAKi组明显高于对照组(P〈0.05),4HT组低于其对照组(P〈0.05)。结论抑制LIF/Stat3信号通路促进小鼠胚胎干细胞分化成心肌细胞;激活LIF/Stat3信号通路抑制小鼠胚胎干细胞的心肌细胞分化。 展开更多
关键词 LIF STAT3 小鼠胚胎干细胞 心肌细胞
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