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受体相互作用蛋白1(RIP1)对BCG诱导小鼠巨噬细胞凋亡的调控作用 预览
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作者 方舒 张嘉美 +4 位作者 杨易 韩璐 马臣杰 吴晓玲 邓光存 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期645-653,共9页
旨在通过构建受体相互作用蛋白1(RIP1)腺病毒干扰载体,研究其对BCG诱导的RAW264.7细胞凋亡相关指标的影响,以探讨其在BCG诱导RAW264.7凋亡过程中的调控作用。笔者构建RIP1腺病毒干扰载体,并转染感染BCG的小鼠RAW264.7细胞系,利用流式细... 旨在通过构建受体相互作用蛋白1(RIP1)腺病毒干扰载体,研究其对BCG诱导的RAW264.7细胞凋亡相关指标的影响,以探讨其在BCG诱导RAW264.7凋亡过程中的调控作用。笔者构建RIP1腺病毒干扰载体,并转染感染BCG的小鼠RAW264.7细胞系,利用流式细胞仪检测各处理细胞凋亡率、细胞线粒体膜电位、细胞活性氧水平及细胞周期等指标,并用Westernblot检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果显示:BCG感染显著上调了RIP1的蛋白表达水平并提高了小鼠巨噬细胞RAW264.7的凋亡率,当RIP1被干扰后,BCG感染后的RAW264.7细胞凋亡率和活性氧水平显著降低,而促凋亡蛋白Bax表达量显著下调,线粒体膜电位和抑凋亡蛋白表达量上调。同时,BCG感染后细胞周期滞留于G1期。BCG感染可有效上调RIP1表达量并诱导RAW264.7细胞凋亡。RIP1通过下调BCG感染后RAW264.7细胞的线粒体膜电位,上调活性氧含量并提高凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值,使细胞周期阻滞于G1期从而参与诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 RIP1 巨噬细胞RAW264.7 BCG 细胞凋亡
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苦瓜挥发油超临界二氧化碳萃取工艺优化及其抗炎活性研究 预览
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作者 王靖 刘东波 张志旭 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第4期153-158,共6页
本文研究了苦瓜挥发油的超临界CO2萃取工艺、分析了挥发油的成分及其对炎症因子一氧化氮(NO)释放的影响。以苦瓜挥发油得率为评价指标,用响应面分析法研究了CO2流体的萃取压力、萃取温度、萃取时间在萃取苦瓜挥发油过程的影响;用气相色... 本文研究了苦瓜挥发油的超临界CO2萃取工艺、分析了挥发油的成分及其对炎症因子一氧化氮(NO)释放的影响。以苦瓜挥发油得率为评价指标,用响应面分析法研究了CO2流体的萃取压力、萃取温度、萃取时间在萃取苦瓜挥发油过程的影响;用气相色谱-质谱(GC-MS)分析挥发油的成分;用格里斯试剂比色法评价了苦瓜挥发油对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7释放NO水平的影响。结果表明:苦瓜挥发油最优得率条件是:萃取压力27 MPa,萃取温度50℃,萃取时间90 min,此条件下苦瓜挥发油得率为2.56%。GC-MS分析结果显示苦瓜挥发油的主要成分为酚类、酯类、烯烃及烷烃类等成分,其中酚类含量最高,相对百分含量达到了67.33%。抗炎分析结果表明苦瓜挥发油能够抑制LPS诱导的小鼠264.7巨噬细胞释放炎症因子NO,并且呈浓度依懒型。综上,超临界CO2萃取技术科高效萃取苦瓜挥发油,挥发油主要成分为酚类,能够抑制LPS诱导的巨噬细胞释放NO。 展开更多
关键词 苦瓜 挥发油 超临界CO2 巨噬细胞RAW264.7
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锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用的影响
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作者 热西代姆·阿卜力孜 李敏 胡君萍 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第21期5694-5698,共5页
目的研究锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。方法以巨噬细胞RAW264.7为研究对象,设置空白对照组、阳性(LPS)对照组、锁阳多糖给药组(25、50、100、200、400μg/mL),用CCK-8法测定细胞增殖活性,中性红法测定其吞噬活性;... 目的研究锁阳多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。方法以巨噬细胞RAW264.7为研究对象,设置空白对照组、阳性(LPS)对照组、锁阳多糖给药组(25、50、100、200、400μg/mL),用CCK-8法测定细胞增殖活性,中性红法测定其吞噬活性; Griess法测定其对NO分泌量的影响; ELISA法测定其IL-6和TNF-α的释放能力。结果与空白组比较,不同浓度(25~400μg/mL)锁阳多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖(P〈0.05或P〈0.01),干预24h和48h的增殖活性明显高于干预6h和12h的增殖活性(P〈0.05);锁阳多糖(25~400μg/mL)能显著促进细胞的吞噬活性(P〈0.05);干预48h后,锁阳多糖(25~400μg/mL)的NO分泌量显著高于空白组和LPS组(P〈0.05);与空白组和LPS组相比,锁阳多糖(25~400μg/mL)能显著促进细胞IL-6和TNF-α的释放(P〈0.01)。结论锁阳多糖在一定浓度范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。 展开更多
关键词 锁阳 多糖 巨噬细胞RAW264.7 免疫调节作用
不同剂量异鼠李素对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响及其机制探讨 预览
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作者 王科 庞辉 +5 位作者 梁春梅 罗创才 黄海珠 周玉权 吴青燕 韦娇 《山东医药》 2018年第39期48-51,共4页
目的观察异鼠李素(ISO)对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并探讨其机制。方法 取对数生长期RAW264.7细胞,将细胞分为5组,低、中、高剂量组分别加入已经配好含10 ng/mL脂多糖(LPS)及低、中、高剂量ISO(50、100、200μg/mL)... 目的观察异鼠李素(ISO)对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并探讨其机制。方法 取对数生长期RAW264.7细胞,将细胞分为5组,低、中、高剂量组分别加入已经配好含10 ng/mL脂多糖(LPS)及低、中、高剂量ISO(50、100、200μg/mL)的溶液,模型组加入含10μg/mL LPS的1640培养基(含10%FBS),对照组加入含10%溶剂对照的1640完全培养基。测算各组细胞增殖指数,检测各组一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)。结果 与对照组比较,模型组细胞12、24、36、48 h细胞增殖指数增加(P均<0.05);与模型组比较,低剂量组24、36 h及中剂量组和高剂量组12、24、36、48 h细胞增殖指数减少(P均<0.05);与低剂量组比较,中剂量组24 h及高剂量组24、48 h细胞增殖指数减少(P均<0.05)。与对照组比较,模型组NO、TNF-α水平升高(P均<0.05);与模型组比较,低剂量组NO水平及中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0.05);与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0.05)。结论 ISO可抑制RAW 264.7细胞增殖能力,且呈剂量依赖性,高剂量作用最大;机制可能与抑制NO、TNF-α有关。 展开更多
关键词 异鼠李素 炎症损伤 巨噬细胞RAW264.7 细胞增殖能力 一氧化氮 肿瘤坏死因子
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转录因子Foxo1对RAW264.7细胞迁移产生的影响
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作者 张庆龙 《中国卫生工程学》 CAS 2018年第4期507-510,共4页
目的观察Foxo1基因过表达对鼠源性单核巨噬细胞RAW264.7中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体CCR2表达的影响,探讨转录因子Foxo1在早期心血管疾病识别及预防中的作用。方法实验分为未转染的对照组、Foxo1基因转染组及空质粒转染组,Fo... 目的观察Foxo1基因过表达对鼠源性单核巨噬细胞RAW264.7中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体CCR2表达的影响,探讨转录因子Foxo1在早期心血管疾病识别及预防中的作用。方法实验分为未转染的对照组、Foxo1基因转染组及空质粒转染组,Foxo1基因转染组的转染方法为:运用脂质体转染方法将pc DNA-Foxo1真核表达载体瞬时转染至RAW264.7细胞中。空质粒转染组的转染方法为:运用脂质体转染方法将pc DNA-3.1质粒瞬时转染至RAW264.7细胞中。通过Western blot检测细胞中Foxo1的过表达情况。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法分别检测各组细胞中MCP-1及CCR2的表达情况。采用transwell小室法检测各组细胞的迁移能力。结果 pc DNA-Foxo1重组质粒转染48 h后,RAW264.7细胞中Foxo1蛋白的表达量为(1.812±0.067),明显高于空质粒转染组的(1.092±0.088)和未转染组的(1.107±0.095),差异均有统计学意义(均P〈0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中MCP-1 mRNA表达量为(3.331±0.587),明显高于空质粒转染组的(1.125±0.114)和未转染组的(1.121±0.065),差异均有统计学意义(均P〈0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中MCP-1蛋白的表达量为(2.670±0.117),明显高于空质粒转染组的(1.128±0.107)和未转染组的(1.037±0.096),差异均有统计学意义(均P〈0.05)。Foxo1基因转染组RAW264.7细胞中CCR2的mRNA的表达量为(2.099±0.331),明显高于空质粒转染组的(1.027±0.095)和未转染组的(1.018±0.177),差异均有统计学意义(均P〈0.05)。计数Transwell小室膜下表面细胞数,结果显示Foxo1基因转染组RAW264.7细胞穿过小室的数量为(39.670±2.333)个,明显高于未转染组的(22.000±2.309)个,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论转录因子Foxo1过表达通过促进MCP-1及CCR2的表达从而增强RAW264.7细胞的迁移,参与巨噬细胞的炎 展开更多
关键词 转录因子Foxo1 巨噬细胞RAW264.7 受体CCR2 细胞迁移 心血管疾病
阿里红多糖对RAW264.7巨噬细胞中NF-κB信号途径及肿瘤坏死因子-α表达的影响 被引量:1
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作者 木尼萨·迪力夏提 米仁沙·牙库甫 +2 位作者 伊明·尕哈甫 丛媛媛 帕丽达·阿不力孜 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第24期6465-6470,共6页
目的研究阿里红粗多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)及阿里红多糖组分(FOPS-α)对巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、核转录因子-κb p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)表达以及肿瘤坏死因子-... 目的研究阿里红粗多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)及阿里红多糖组分(FOPS-α)对巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、核转录因子-κb p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)表达以及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)释放的影响,初步探讨阿里红多糖组分的免疫调节机制。方法采用RT-PCR法检测不同浓度(50、100、200μg/mL)的FOPS及FOPS-α对IL-1β、TNF-α、p65、TLR4 mRNA表达量的影响;用Western Blot法检测FOPS及FOPS-α对磷酸化核因子-κB(p-NF-κBp65)和磷酸化核因子抑制蛋白(p-Iκba)表达水平的影响;用NF-κB抑制剂BAY11-7082预处理细胞后,ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6分泌量的影响。结果与空白对照组相比,不同浓度的阿里红多糖可以显著提高TLR4、p65、TNF-α、IL-1β mRNA表达量和p-NF-κBp65和p-Ixba的磷酸化水平(P<0.05);通过阻断NF-κB途径可以显著抑制FOPS及FOPS-α对TNF-α、IL-1β、IL-6促进分泌的作用(P<0.05)。结论FOPS及FOPS-α发挥免疫调节作用的机制与其激活NF-κB信号途径进而调节TNF-α等因子的基因表达和控制细胞因子释放有关。 展开更多
关键词 阿里红多糖 阿里红多糖组分-α 巨噬细胞RAW264.7 核转录因子-ΚB 肿瘤坏死因子-Α
恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7体外免疫调节作用初探 预览 被引量:2
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作者 热孜亚木·吾甫尔 李月红 海力茜·陶尔大洪 《天然产物研究与开发》 CSCD 北大核心 2018年第1期15-20,共6页
初步探讨恰麻古粗多糖BRP、中性多糖BRNP-1、BRNP-2及酸性多糖BRAP-1、BRAP-2对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。实验方法选用CCK-8法检测不同质量浓度各恰麻古多糖组对巨噬细胞RAW264.7细胞增殖率的影响;以中性红法观察各组恰麻古多... 初步探讨恰麻古粗多糖BRP、中性多糖BRNP-1、BRNP-2及酸性多糖BRAP-1、BRAP-2对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。实验方法选用CCK-8法检测不同质量浓度各恰麻古多糖组对巨噬细胞RAW264.7细胞增殖率的影响;以中性红法观察各组恰麻古多糖对巨噬细胞RAW264.7吞噬活性的影响;Griess法测定恰麻古多糖致巨噬细胞RAW264.7对NO的释放水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒检测细胞因子TNFα(肿瘤坏死因子)与IL-6(白介素6)分泌水平。实验结果显示不同质量浓度各恰麻古多糖组能够显著提高巨噬细胞RAW264.7增殖率与对中性红的吞噬活性,并能够刺激巨噬细胞释放NO,且促进其TNFα及IL-6分泌水平。通过实验,初步验证了各恰麻古多糖具有良好的生物活性,并对巨噬细胞RAW264.7具有免疫调节作用。 展开更多
关键词 恰麻古 多糖 巨噬细胞RAW264.7 免疫调节
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补充生物活性肽QRPR对巨噬细胞RAW264.7抵御脂多糖刺激的作用 被引量:1
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作者 刘效森 王仕凯 +4 位作者 王依楠 张鸣镝 陈艳 王作昭 潘风光 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期613-616,共4页
目的研究补充生物活性肽QRPR(Gln-Arg-Pro-AH)对巨噬细胞RAW264.7抵御脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激的作用。方法用不同浓度的LPS刺激RAW264.7细胞不同时间,ELISA法测定细胞培养上清中细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6... 目的研究补充生物活性肽QRPR(Gln-Arg-Pro-AH)对巨噬细胞RAW264.7抵御脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激的作用。方法用不同浓度的LPS刺激RAW264.7细胞不同时间,ELISA法测定细胞培养上清中细胞因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的浓度,确定LPS刺激RAW264.7细胞的最适浓度和时间,建立RAW264.7细胞抵御LPS刺激模型。采用ELISA法测定QRPR肽对RAW264.7细胞抵御LPS刺激时IL-6和TNF-α表达量的影响。MTS法检测QRPR肽对RAW264.7细胞的毒性作用。结果100 ng/m L LPS诱导16 h为刺激RAW264.7细胞验证QRPR肽调节作用的最佳浓度和时间。QRPR肽可以抑制RAW264.7细胞受LPS刺激后IL-6和TNF-α的产生,QRPR肽浓度为250μmol/L时,其降低LPS刺激产生IL-6和TNF-α的能力最强。QRPR肽本身对RAW264.7细胞的生长既无促进作用,也无毒性和抑制作用。结论补充活性肽QRPR对巨噬细胞RAW264.7抵御LPS刺激具有积极的调节作用。 展开更多
关键词 活性肽QRPR 巨噬细胞RAW264.7 脂多糖
血脂康对OX-LDL诱导巨噬细胞组织因子(TF)表达的影响及相关机制 预览
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作者 杨亚兵 刘梅林 《中西医结合心血管病杂志(电子版)》 2018年第19期76-78,共3页
目的观察血脂康(红曲)对OX-LDL诱导巨噬细胞MDA含量、SOD活性、组织因子表达及P65表达和转位的影响及相关机制。方法体外培养巨噬细胞RAW264.7,分别加入ox-LDL、ox-LDL+洛伐他汀(10μmol/ml)、ox-LDL+血脂康(25μg/ml)、ox-LDL+血脂康(5... 目的观察血脂康(红曲)对OX-LDL诱导巨噬细胞MDA含量、SOD活性、组织因子表达及P65表达和转位的影响及相关机制。方法体外培养巨噬细胞RAW264.7,分别加入ox-LDL、ox-LDL+洛伐他汀(10μmol/ml)、ox-LDL+血脂康(25μg/ml)、ox-LDL+血脂康(50μg/ml)和ox-LDL+血脂康(100μg/ml)孵育48 h。TBA法和黄嘌呤氧化酶法检测细胞培养上清中的MDA含量和SOD活性。Western blot检测巨噬细胞RAW264.7组织因子(TF)表达水平。免疫荧光法检测巨噬细胞AW264.7 P65表达以及转位。结果与对照组相比,ox-LDL组SOD活性降低,MDA水平、TF表达及P65细胞核转位明显增多;与ox-LDL组相比,血脂康组SOD活性显著增加,MDA水平、TF表达及P65细胞核转位明显减少,并呈剂量依赖性。与洛伐他汀组相比,高剂量组血脂康SOD活性改善作用更显著,MDA水平、TF表达及P65细胞核转位的抑制作用更明显。结论血脂康可使RAW264.7的SOD活性增加,MDA水平、TF表达及P65细胞核转位减少;与洛伐他汀相比,血脂康抑制氧化应激、下调组织因子和抑制P65转位的作用更明显;血脂康比洛伐他汀具有更强的抗动脉粥样硬化作用。 展开更多
关键词 血脂康 巨噬细胞RAW264.7 氧化应激 组织因子 P65
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香乳菇多糖对Hela细胞凋亡及对RAW264.7细胞免疫活性的影响 预览
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作者 赵大群 丁祥 +6 位作者 刘露 钱叶 许婷 苟凡铖 宋波 侯万儒 侯怡铃 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2017年第6期1-6,共6页
为研究香乳菇多糖(LC-1)的抗肿瘤和免疫调控活性,将人的宫颈癌Hela细胞和小鼠巨噬细胞RAW264.7体外培养,分别通过CCK-8法、流式细胞术和ELISA技术检测不同浓度LC-1对Hela细胞增殖和凋亡周期的影响,对RAW264.7细胞增殖、吞噬的影响,及... 为研究香乳菇多糖(LC-1)的抗肿瘤和免疫调控活性,将人的宫颈癌Hela细胞和小鼠巨噬细胞RAW264.7体外培养,分别通过CCK-8法、流式细胞术和ELISA技术检测不同浓度LC-1对Hela细胞增殖和凋亡周期的影响,对RAW264.7细胞增殖、吞噬的影响,及对RAW264.7细胞分泌NO、IL-6和TNF-α的影响。结果表明:香乳菇多糖对体外培养的Hela细胞有明显的抑制作用,且影响Hela细胞的形态及凋亡周期,当LC-1浓度为10μg/mL时,Sub峰含量可达19.4%;同时,LC-1能调控巨噬细胞的免疫活性,当LC-1浓度为10μg/mL时,巨噬细胞增值率和吞噬活性分别为67.48%和87.09%,亦能促进巨噬细胞从G0/G1期向G2期和S期转化,同时刺激巨噬细胞产生IL-6和TNF-α,且呈现出明显的剂量依赖性,但对NO生成没有明显的促进作用。综上,在体外试验中,香乳菇多糖LC-1能抑制宫颈癌Hela细胞生长,促进RAW264.7细胞增殖和吞噬活性,刺激巨噬细胞产生免疫因子。 展开更多
关键词 香乳菇多糖 HELA细胞 凋亡 巨噬细胞RAW264.7 增殖作用 作用
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高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性研究 预览 被引量:1
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作者 余雪婷 曹庸 +3 位作者 刘耀慧 贺丽苹 李文治 陈洪璋 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2017年第12期323-327,共5页
研究高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性变化。采用醇沉法、超滤膜分离法得到党参口服液中活性多糖部分,以RAW264.7巨噬细胞为模型,通过对细胞增殖指数、吞噬指数、NO释放量以及细胞因子(IL-6、IL-1β、TNF-α)的分泌量的测定,... 研究高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性变化。采用醇沉法、超滤膜分离法得到党参口服液中活性多糖部分,以RAW264.7巨噬细胞为模型,通过对细胞增殖指数、吞噬指数、NO释放量以及细胞因子(IL-6、IL-1β、TNF-α)的分泌量的测定,评价高压灭菌前后党参口服液中多糖的免疫活性。结果表明:超滤分离得到高压灭菌前以及高压灭菌后党参口服液中分子量小于30 k Da的多糖组分CPP-2和HCPP-2,其得率分别为22.41%和15.91%,纯度分别为69.03%和69.30%,且二者均能较好地促进巨噬细胞增殖(增殖指数=1.13~1.48),因此CPP-2和HCPP-2是党参口服液中主的活性多糖部分。与CPP-2相比,HCPP-2在25~400μg/m L浓度范围内作用于巨噬细胞的吞噬能力、TNF-α和IL-1β生成显著性降低(p〈0.05);在100~400μg/m L浓度范围内,NO和IL-6生成显著性降低(p〈0.05)。说明高压灭菌会导致党参口服液中多糖的免疫活性降低。 展开更多
关键词 党参口服液 高压灭菌 多糖 巨噬细胞RAW264.7 免疫活性
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刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响研究 预览 被引量:3
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作者 韩曾姣 贺家勇 常军民 《新疆医科大学学报》 CAS 2017年第3期361-365,共5页
目的 探讨不同浓度刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响。方法 以正常培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7为正常对照组,小鼠巨噬细胞加入1 mg/mL脂多糖(LPS)为LPS组,采用刺糖精多糖(12.5、25、50、100、200μg/mL)作用巨噬细胞RAW2... 目的 探讨不同浓度刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响。方法 以正常培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7为正常对照组,小鼠巨噬细胞加入1 mg/mL脂多糖(LPS)为LPS组,采用刺糖精多糖(12.5、25、50、100、200μg/mL)作用巨噬细胞RAW264.7 24h和48h为实验组,采用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖。以刺糖精多糖及LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24、48h,收集细胞培养上清液,用Griess试剂盒检测细胞培养上清中一氧化氮(NO)含量。采用中性红吞噬实验检测吞噬活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测刺糖精多糖不同浓度(12.5、25、50、100、200μg/mL)及不同作用时间(24h和48h)培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量。结果 刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7作用24、48h后,与空白对照组比较,质量浓度为12.5、25、50、100、200μg/mL的刺糖精多糖均能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖,差异有统计学意义(P〈0.05)。质量浓度为12.5、25、50、100、200μg/mL的刺糖精多糖和1mg/mL LPS作用于巨噬细胞RAW264.7 24h和48h后,NO生成量明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。当多糖质量浓度为100、200μg/mL时,NO生成量高于LPS组,差异有统计学意义(P〈0.05)。在一定浓度范围,多糖作用巨噬细胞后NO的生成量随刺糖精多糖浓度的增加而增加,线性回归方程为:Y=0.0108 X+0.0777,R2=0.997。刺糖精多糖浓度在12.5、25、50、100、200μg/mL时,能明显地增强RAW264.7细胞的吞噬能力(P〈0.05),且刺糖精多糖促进细胞吞噬的能力明显强于LPS(P〈0.05)。刺糖精多糖各剂量组能刺激小鼠巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子TNF-α,并随着刺糖精多糖剂量的增加,TNF-α的分泌量逐渐升高。除正常对照组外,各组48h时TNF-α的含量高于24h。结论 不同浓度的刺糖精多糖和LPS作用巨噬细胞RAW264.7后,刺糖精多糖能够促进巨噬细胞RAW264.7的增殖和吞噬功能� 展开更多
关键词 刺糖 多糖 巨噬细胞RAW264.7 免疫活性
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小鼠巨噬细胞体外吞噬功能方法比较 被引量:1
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作者 张旺瑞 刘素素 +3 位作者 张芬芬 王丽娅 岳娟 张红敏 《中国卫生检验杂志》 CAS 2017年第12期1703-1705,共3页
目的比较巨噬细胞吞噬功能常用方法(乳胶颗粒)与吞噬真菌病原体、中性粒细胞的异同。方法取小鼠巨噬细胞分别与乳胶颗粒、灭活真菌孢子、中性粒细胞共培养,在2h、4h-,6h.8h时分别计数巨噬细胞总数及吞噬异物的细胞数、每视野被吞噬... 目的比较巨噬细胞吞噬功能常用方法(乳胶颗粒)与吞噬真菌病原体、中性粒细胞的异同。方法取小鼠巨噬细胞分别与乳胶颗粒、灭活真菌孢子、中性粒细胞共培养,在2h、4h-,6h.8h时分别计数巨噬细胞总数及吞噬异物的细胞数、每视野被吞噬异物数。计算巨噬细胞吞噬率和吞噬指数。结果在8h时,巨噬细胞对灭活真菌孢子的吞噬率,为22.73%,中性粒细胞次之,为18.75%,乳胶颗粒最低,为12.50%,各组与2h相比,差异均有统计学意义(P〈0.05);与乳胶颗粒组相比,各时间点差异有统计学意义(P〈0.05)。在8h时,巨噬细胞对灭活真菌孢子的吞噬指数为0.30,中性粒细胞为0.21,乳胶颗粒为0.14,各组较2h相比,差异均有统计学意义(P〈0.05);与乳胶颗粒组相比,2h、6h、8h差异有统计学意义(P〈0.05),4h差异无统计学意义(P〉0.05)。结论小鼠巨噬细胞对乳胶颗粒、灭活真菌孢子、中性粒细胞的吞噬能力不同。因此单纯使用乳胶颗粒作为指标来评价巨噬细胞的吞噬能力是不准确、不全面的。 展开更多
关键词 巨噬细胞RAW264.7 乳胶颗粒 真菌孢子 中性粒细胞 指数
齐墩果酸抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应 预览
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作者 吴青青 王娟 +4 位作者 崔树娜 陈姗姗 雷雨 李士华 钱静 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 北大核心 2017年第3期27-31,共5页
通过CCK-8法检测齐墩果酸对巨噬细胞增殖的影响;采用Griess试剂检测细胞培养液中NO含量,通过Western Blot法分析iNOS蛋白表达和MAPK通路p38,ERK和JNK蛋白表达和磷酸化状态,研究齐墩果酸对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影... 通过CCK-8法检测齐墩果酸对巨噬细胞增殖的影响;采用Griess试剂检测细胞培养液中NO含量,通过Western Blot法分析iNOS蛋白表达和MAPK通路p38,ERK和JNK蛋白表达和磷酸化状态,研究齐墩果酸对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的影响,探讨齐墩果酸抗感染作用及机制。结果表明:齐墩果酸(100.0μmol·L~(-1))明显抑制巨噬细胞增殖(P〈0.05);12.5~100.0μmol·L~(-1)的齐墩果酸能够显著抑制脂多糖诱导巨噬细胞分泌NO(P〈0.01),并能显著抑制LPS诱导iNOS蛋白的表达;LPS作用后能够激活ERK通路,抑制p38和JNK通路磷酸化,齐墩果酸作用后,能显著抑制ERK磷酸化,促进JNK和p38蛋白的磷酸化。证明齐墩果酸能显著降低脂多糖诱导巨噬细胞分泌NO,通过抑制iNOS的表达和双向调控MAPK通路蛋白磷酸化达到抗感染作用。 展开更多
关键词 齐墩果酸 脂多糖 巨噬细胞RAW264.7 一氧化氮 MAPK通路
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TLR4抗体对姬松茸多糖作用巨噬细胞产生细胞因子的影响 被引量:1
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作者 李晨光 冯翠萍 +2 位作者 常明昌 孟俊龙 欧阳玉倩 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期490-494,共5页
目的 研究TLR4抗体对巴氏蘑菇多糖(Agaricus blazei Murrill polysaccharide,ABPS)对体外巨噬细胞RAW264.7产生细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-β(IFN-β)的影响。方法 相同浓度ABPS及脂多糖(L... 目的 研究TLR4抗体对巴氏蘑菇多糖(Agaricus blazei Murrill polysaccharide,ABPS)对体外巨噬细胞RAW264.7产生细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-β(IFN-β)的影响。方法 相同浓度ABPS及脂多糖(LPS,阳性对照)作用巨噬细胞RAW264.7 3 h、6 h、12 h、18 h和36 h;不同浓度ABPS及LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24 h;TLR4抗体作用巨噬细胞RAW264.7 1 h后,更换含有ABPS和LPS的细胞培养液作用24h。收集细胞培养上清,采用ELISA法检测细胞培养上清细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量。结果 ABPS作用巨噬细胞RWA264.7 24 h后,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β含量明显高于阴性对照,差异有统计学意义(P〈0.01),但显著低于LPS组。在一定浓度范围内,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量随ABPS浓度增大而增大,浓度为1000μg/ml时IL-1β、TNF-α、IFN-β含量达到最大。TLR4抗体处理的巨噬细胞RAW264.7经ABPS和LPS作用,IL-1β、TNF-α、IFN-β含量低于未处理组,差异有统计学意义(P〈0.01)。结论 TLR4抗体能够一定程度抑制ABPS作用巨噬细胞RAW264.7产生IL-1β、TNF-α、IFN-β,推测ABPS可能通过TLR4受体信号转导通路影响三种细胞因子的释放。 展开更多
关键词 巴氏蘑菇多糖 巨噬细胞RAW264.7 TLR4抗体 细胞因子
猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A经NF-κB/MAPK通路对巨噬细胞RAW264.7影响的研究 预览 被引量:3
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作者 郎需龙 冉会玲 +7 位作者 王凯 卜昭阳 张瑞 钱晶 陈思 万家余 王兴龙 王秀然 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第7期21-24,共4页
通过猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A(catabolite control proteinA,ccpA)原核表达蛋白对巨噬细胞RAW264.7进行刺激,结果发现,猪链球菌2型ccpA蛋白可以调节巨噬细胞NO产生,另外该蛋白质可通过对iNOS、NF—κB、p38和ERK1/2MAPK等... 通过猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A(catabolite control proteinA,ccpA)原核表达蛋白对巨噬细胞RAW264.7进行刺激,结果发现,猪链球菌2型ccpA蛋白可以调节巨噬细胞NO产生,另外该蛋白质可通过对iNOS、NF—κB、p38和ERK1/2MAPK等的调节,从而影响巨噬细胞RAW264.7对细胞因子IL-6、TNF—a和IFN-7的分泌。该研究为类似蛋白质对免疫细胞NF-κB/MAPK等通路调节影响及细胞因子产生条件探索建立了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 分解代谢控制蛋白A NF-κB/MAPK 巨噬细胞RAW264.7
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脂多糖诱导巨噬细胞自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成 预览 被引量:1
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作者 张梅 黄保军 +5 位作者 胡梅琮 程艳伟 宋蔚 黄大可 李群 胡春松 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期 357-361,共5页
目的构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察脂多糖(LPS)诱导其自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体形成的过程。方法根据编码小鼠微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的开放读码框(ORF)设计引物,RT-PCR扩增小鼠LC3B的ORF,构建... 目的构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒并转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,观察脂多糖(LPS)诱导其自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体形成的过程。方法根据编码小鼠微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的开放读码框(ORF)设计引物,RT-PCR扩增小鼠LC3B的ORF,构建pEGFP-C1/LC3B重组质粒;脂质体法转染并筛选稳定表达RAW264.7细胞株,荧光显微镜观察及Western blot鉴定LC3B-GFP融合蛋白表达;LPS刺激稳定转染的RAW264.7细胞株,激光共聚焦显微镜检测不同时间绿色荧光聚集体的分布。结果成功构建真核表达质粒pEGFP-C1/LC3B,并获得稳定表达LC3B-GFP融合蛋白的RAW264.7细胞株,荧光显微镜下可见细胞内有绿色荧光蛋白分布,Western blot鉴定表达LC3B-GFP融合蛋白,激光共聚焦结果显示LPS刺激前融合蛋白呈弥散性分布在胞浆中,而LPS刺激后细胞内有明显绿色荧光聚集体形成并呈时间依赖性逐渐增加。结论成功构建pEGFP-C1/LC3B,转染RAW264.7细胞可正确表达LC3B-GFP融合蛋白,LPS刺激后显示绿色荧光聚集体形成。 展开更多
关键词 巨噬细胞RAW264.7 微管相关蛋白1轻链3 绿色荧光蛋白
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HPLC法检测细胞培养上清液中前列腺素E2的含量 预览 被引量:1
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作者 高虹 周杨 +2 位作者 孙远明 吴青 杨瑞丽 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 326-328,共3页
建立了检测巨噬细胞培养上清液前列腺素E2(PGE2)含量的高效液相色谱法,为检测体外细胞培养液PGE2提供快速定量的方法。色谱条件为:Ultimate XB-C18反相柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈和0.02mol/L磷酸二氢钾水溶液(60∶40,v/v... 建立了检测巨噬细胞培养上清液前列腺素E2(PGE2)含量的高效液相色谱法,为检测体外细胞培养液PGE2提供快速定量的方法。色谱条件为:Ultimate XB-C18反相柱(250mm×4.6mm,5μm);以乙腈和0.02mol/L磷酸二氢钾水溶液(60∶40,v/v)作为流动相;流量为1mL/min;检测波长为196nm。结果表明:该方法标准曲线良好,线性范围为0.5625~90μg/mL,相关系数为R2=0.999,出峰时间为3.988min,最低检测限为0.1448μg/mL,平均回收率为100.71%。本方法简单快速,适用于样品数目较多的PGE2的快速定量检测。 展开更多
关键词 HPLC 巨噬细胞RAW264.7 前列腺素E2
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insig-1基因siRNA干扰质粒的构建及对炎症状态下细胞胆固醇代谢的影响
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作者 柯大智 陈庆伟 +2 位作者 李桂琼 邓玮 莫显刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期1471-1475,共5页
目的构建针对insig-1基因的siRNA表达载体,观察其对炎症状态下RAW264.7小鼠巨噬细胞胆固醇代谢的影响。方法根据insig-1核苷酸序列,设计并构建针对insig-1基因mRNA的3个特异性siRNA表达载体(si-1、si-2、si-3)和1个无同源性的阴性对... 目的构建针对insig-1基因的siRNA表达载体,观察其对炎症状态下RAW264.7小鼠巨噬细胞胆固醇代谢的影响。方法根据insig-1核苷酸序列,设计并构建针对insig-1基因mRNA的3个特异性siRNA表达载体(si-1、si-2、si-3)和1个无同源性的阴性对照载体(si-nc),经酶切和测序鉴定确认siRNA载体构建成功后,转染RAW264.7小鼠巨噬细胞,RT-PCR、免疫组化法检测insig-1基因的表达,筛选出最佳抑制基因后,应用酶学方法和油红O染色观察炎症处理后RAW264.7细胞内胆固醇含量的变化。结果经酶切证实,siRNA表达载体构建成功,RT-PCR、Western blot、免疫组化法显示与未转染组相比,si-1、si-2、si-3组RAW264.7细胞中insig-1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P〈0.05),其中si-2干扰效果最强。酶学方法和油红O染色结果表明,炎症状态下细胞insig-1沉默后胆固醇的含量和油红O颗粒增多。结论成功构建了insig-1基因siRNA干扰质粒,insig-1缺失对炎症状态下细胞胆固醇摄取有促进作用。 展开更多
关键词 insig-1基因 RNA干扰 siRNA质粒载体 巨噬细胞RAW264.7
利用荧光定量PCR检测B.ovis侵染巨噬细胞RAW264.7的相对数量 预览
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作者 葛阳春 王远志 +1 位作者 陈创夫 杜军伟 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 2010年第6期 703-707,共5页
为了探讨布鲁氏菌胞内寄生的机制,采用荧光定量PCR方法对进入巨噬细胞的布鲁氏菌的数量进行检测,克隆了绵羊种布鲁氏菌019株的16SrRNA基因和小鼠巨噬细胞RAW264.7的GAPDH基因。以16SrRNA基因和巨噬细胞GAPDH做为内参基因,将二者的比值... 为了探讨布鲁氏菌胞内寄生的机制,采用荧光定量PCR方法对进入巨噬细胞的布鲁氏菌的数量进行检测,克隆了绵羊种布鲁氏菌019株的16SrRNA基因和小鼠巨噬细胞RAW264.7的GAPDH基因。以16SrRNA基因和巨噬细胞GAPDH做为内参基因,将二者的比值作为检测布鲁氏菌进入巨噬细胞数量多少的指标,建立绵羊种布鲁氏菌019株侵染巨噬细胞不同阶段的感染模式。结果表明:在绵羊种布鲁氏菌019株侵染巨噬细胞15min~1h,16SrRNA与GAPDH的比值缓慢上升,侵染1~4h中,16SrRNA与GAPDH的比值急剧上升,说明在此阶段,细菌侵入细胞中的数量显著增多。 展开更多
关键词 绵羊种布鲁氏菌019株 巨噬细胞RAW264.7 荧光定量PCR
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