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弧菌外膜蛋白OmpK单克隆抗体的制备及其特性 认领 被引量:1
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作者 李杰 丁承超 +8 位作者 翟续昭 王广彬 刘武康 谢曼曼 曾海娟 王淑娟 孙静娟 董庆利 刘箐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第6期111-116,共6页
制备弧菌外膜蛋白K(outermembraneproteinK,OmpK)单克隆抗体并对其特性进行研究。以原核表达系统表达野生株VibrioparahaemolyticusB的OmpK免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与肿瘤细胞SP2/0进行细胞融合,采用有限稀释法和间接酶联... 制备弧菌外膜蛋白K(outermembraneproteinK,OmpK)单克隆抗体并对其特性进行研究。以原核表达系统表达野生株VibrioparahaemolyticusB的OmpK免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与肿瘤细胞SP2/0进行细胞融合,采用有限稀释法和间接酶联免疫吸附测定法筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,小鼠体内诱导制备腹水,用饱和硫酸铵沉淀法和亲和层析柱纯化抗体。最终获得能稳定分泌抗OmpK的两株单克隆抗体杂交瘤细胞株OmpK-Mab-4B7、OmpK-Mab-3C5,2株杂交瘤细胞系所分泌的Mab亚类均为IgG1,效价达1∶128000,抗体3C5、4B7的敏感度IC50分别为2.5、5.0μg/mL。Westernblotting结果显示单克隆抗体可以与本实验室12株副溶血性弧菌(V.parahaemolyticusA、B、C、D、E、F、G、H、I、J、ATCC17802、ATCC33847)的外膜蛋白有不同程度的结合反应,与4株溶藻弧菌中的3株(V.alginolyticusA、B、C)外膜蛋白能够较好的结合,与1株鳗弧菌(V.anguillarumMVM)外膜蛋白也有轻微的结合反应,实验制备的单克隆抗体可用于弧菌OmpK的基础研究和快速检测。 展开更多
关键词 弧菌 弧菌膜蛋白K 单克隆抗体
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