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养殖场中动物源大肠杆菌blaCTX-M-27基因的传播特征探究
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作者 张岩 龙薇 +3 位作者 林晓玲 孙银焕 蔡润茂 蒋红霞 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2019年第10期1934-1941,共8页
从2014年和2016年保存的来自河南、广东、山东和湖北4个省1 100株食品动物肠道大肠杆菌中筛选出58株blaCTX-M-27阳性菌株,采用药敏试验测定产blaCTX-M-27的大肠杆菌对20种抗生素的敏感性,并用PCR的方法检测其所携带的其他耐药基因;通过... 从2014年和2016年保存的来自河南、广东、山东和湖北4个省1 100株食品动物肠道大肠杆菌中筛选出58株blaCTX-M-27阳性菌株,采用药敏试验测定产blaCTX-M-27的大肠杆菌对20种抗生素的敏感性,并用PCR的方法检测其所携带的其他耐药基因;通过脉冲场凝胶电泳分析各菌株之间的亲缘关系,通过接合或转化试验、复制子分型和Southern blot对携带blaCTX-M-27的质粒特征进行分析。结果显示,58株blaCTX-M-27阳性大肠杆菌对除了β-内酰胺类外的其他抗生素,尤其氟喹诺酮类呈现高水平耐药;大多数菌株还同时携带2~3种编码其他抗生素的耐药基因。PFGE分型结果表明,来源于同一采样地及不同省的菌株存在克隆现象,但不同省或来自于同一省份的不同采样地之间的菌株亲缘关系较远;菌株携带的blaCTX-M-27基因全部定位在质粒上,其中38株位于可接合的IncFIB质粒,另外20株位于不可分型的质粒。 展开更多
关键词 大肠杆菌 食品动物 blaCTX-M-27基因 接合转移
龟裂链霉菌M527接合转移体系的建立和优化以及启动子的活性分析
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作者 Zhang-qing SONG Zhi-jun LIAO +3 位作者 Ye-feng HU Zheng MA Andreas BECHTHOLD Xiao-ping YU 《浙江大学学报:B卷英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第11期891-900,共10页
目的:建立并优化适用于龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)M527的属间接合转移体系,并在此基础上分析四个启动子的表达活性。创新点:有效的遗传转化系统和合适的启动子是链霉菌基因表达和基因工程的必要前提。由于链霉菌的遗传背景复杂,... 目的:建立并优化适用于龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)M527的属间接合转移体系,并在此基础上分析四个启动子的表达活性。创新点:有效的遗传转化系统和合适的启动子是链霉菌基因表达和基因工程的必要前提。由于链霉菌的遗传背景复杂,接合转移实验参数对菌种具有高度特异性。因此,本研究建立并优化了一套适用于S.rimosus M527的属间接合转移体系,并在此基础上分析比较了四个启动子的表达活性。这将为进一步遗传修饰S.rimosus M527奠定基础。方法:以S.rimosus M527为研究对象,通过对接合转移体系中的一些重要的实验参数(如接合转移培养基、供受体比例、热激温度和混合培养时长等)进行了优化。在此基础上,构建以为报告基因的质粒,通过直观显色反应以及GUS酶活的定量检测,分析比较了四个启动子的表达活性。结论:建立了一种有效的适用于S.rimosus M527接合转移体系,优化后的接合效率最高达3.05x10^-5。分析测试的四个启动子中,合成启动子SPL-21表现出最高表达活性,比常用强组成型启动子permE^*活性高出2.2倍,合成启动子SPL-57与permE^*的活性无显著差异,内源启动子permB的活性比permE^*降低了50%。 展开更多
关键词 龟裂链霉菌M527 接合转移 启动子 GUS
强启动子A4促进黄色链霉菌高产放线菌素D 预览
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作者 杨帅 刘琴 万传星 《塔里木大学学报》 2019年第2期7-12,共6页
【背景】放线菌素D是神经母细胞瘤、绒毛膜上皮癌和横纹肌肉瘤等恶性肿瘤的特效药,黄色链霉菌TRM45540是一株产放线菌素D的高产菌株。【目的】通过导入强启动子A4,以期提高黄色链霉菌合成放线菌素D的产量。【方法】将强启动子A4整合到质... 【背景】放线菌素D是神经母细胞瘤、绒毛膜上皮癌和横纹肌肉瘤等恶性肿瘤的特效药,黄色链霉菌TRM45540是一株产放线菌素D的高产菌株。【目的】通过导入强启动子A4,以期提高黄色链霉菌合成放线菌素D的产量。【方法】将强启动子A4整合到质粒pSET152中,转化到大肠杆菌,通过大肠杆菌与黄色链霉菌TRM45540的接合转移,将启动子A4片段插入黄色链霉菌中,采用高效液相色谱法对接合子TRM45540::pYS001和野生菌株TRM45540进行发酵产物中放线菌素D的比较分析。【结果】启动子A4片段成功插入到黄色链霉菌TRM45540::pYS001,与原始菌株相比,在相同发酵条件下放线菌素D的产量提高了26.85%,产量达821.8mg/L。【结论】强启动子A4能够促进黄色链霉菌高产放线菌素D。 展开更多
关键词 黄色链霉菌 放线菌素D 启动子A4 接合转移
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过表达调控基因rapG提高雷帕霉素的产量
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作者 徐冬梅 郭会灿 +2 位作者 武晓莉 苟丽霞 于海军 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第9期3829-3835,共7页
雷帕霉素是具有很好的抗真菌、免疫抑制、抗肿瘤等活性的微生物次级代谢产物,可由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)发酵产生。由于传统诱变育种的菌株产量较低,不能满足工业生产的需求。为了找到突破传统育种瓶颈的技术方法。... 雷帕霉素是具有很好的抗真菌、免疫抑制、抗肿瘤等活性的微生物次级代谢产物,可由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)发酵产生。由于传统诱变育种的菌株产量较低,不能满足工业生产的需求。为了找到突破传统育种瓶颈的技术方法。本研究通过建立该菌株的遗传操作体系、构建表达载体、建立发酵、提取和检测等的研究方法,对传统诱变菌株(S.hygroscopicus17-1)进行遗传改造。首先,以整合型载体pSET152为出发载体,构建了含有自身启动子的rapG调控基因表达载体,建立并优化了该菌株的遗传操作系统,通过大肠杆菌与链霉菌属间接合转移的方法成功将rapG整合至原菌株基因组上,获得了该基因的多拷贝菌株S.hygroscopicus17-Gp。采用高压液相色谱和质谱等方法,检测分析了S.hygroscopicus17-1与S.hygroscopicus17-Gp发酵液中雷帕霉素的产量。结果表明S.hygroscopicus17-Gp发酵液中雷帕霉素的产量比原菌株提高了约40%,这为后期进行相关机制和产量提高的理论与实践研究奠定了基础。 展开更多
关键词 雷帕霉素 产量 接合转移 调控
密旋链霉菌Act12遗传转化系统的建立与优化 预览
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作者 李晓霞 马怡茗 +4 位作者 文冰洁 舒伟学 薛泉宏 贾良辉 颜华 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期418-425,共8页
密旋链霉菌(Streptomyces pactum)Act12是分离自黄土高原的1株多效放线菌,具有良好的生防应用价值,为了深入研究与利用,需建立该菌株的高效遗传转化系统。本试验以整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌S17-1为供体,Act12的孢子为受体... 密旋链霉菌(Streptomyces pactum)Act12是分离自黄土高原的1株多效放线菌,具有良好的生防应用价值,为了深入研究与利用,需建立该菌株的高效遗传转化系统。本试验以整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌S17-1为供体,Act12的孢子为受体时,在改良2CMY培养基上进行接合转移,孢子预萌发条件为50℃热激10min,阿普霉素质量浓度为10.0mg/L,覆盖时间为18h,转化效率达到2.079×10~(-5)。以抗阿普霉素基因为目的基因,通过PCR验证,成功地将质粒pSET152转入到Act12中。同时,利用该转化系统,成功敲出Act12基因组中一可能的负调控转录因子spa0520,并获得了次级代谢图谱明显变化的缺失突变株Δspa0520。所构建的Act12遗传转化系统,为后续对其生防活性机理的研究以及深入开发利用奠定了基础。另外,通过培养基的改良发现,Act12在氮源含有NO-3时产孢丰富,为后续研究提供了思路。 展开更多
关键词 密旋链霉菌 遗传转化系统 接合转移
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磺胺氯哒嗪对大肠杆菌的生长、突变及接合转移效应的影响
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作者 史珺怡 马清萍 +4 位作者 于洋 宋春磊 潘永正 林志芬 印春生 《环境化学》 CSCD 北大核心 2018年第6期1209-1216,共8页
抗生素的大量使用导致细菌的耐药性,直接威胁了人类的生命健康,加剧了抗生素的环境生态风险.为了研究抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes,ARGs)的扩散与抗生素浓度之间的关系,本文以磺胺氯哒嗪(sulfachloropyridazine,SCP... 抗生素的大量使用导致细菌的耐药性,直接威胁了人类的生命健康,加剧了抗生素的环境生态风险.为了研究抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes,ARGs)的扩散与抗生素浓度之间的关系,本文以磺胺氯哒嗪(sulfachloropyridazine,SCP)为研究对象,测定了SCP对只有磺胺敏感大肠杆菌的单一菌液的生长和突变效应的影响,SCP对含有耐磺胺大肠杆菌和磺胺敏感大肠杆菌的混合菌液的生长、突变及RP4质粒和R388质粒的接合转移效应的影响.研究结果显示,单一菌液的突变促进效应浓度区间(RCS)和突变促进无效应浓度RC0-1皆小于混合菌液;4.0×10^-5—8.7×10^-5mol·L^-1浓度范围内SCP作用下,单一菌液的突变效应受抑制而混合菌液的突变效应相较于空白组显著促进(P〈0.05);1.9×10^-5—6.3×10^-5mol·L^-1浓度范围的SCP能够促进混合菌液的突变,对ARGs的筛选风险较大,且SCP在6.3×10^-5—1.5×10^-4mol·L^-1范围对RP4和R388质粒的接合转移效应有明显的抑制作用,说明在本实验浓度范围内SCP对接合子的促进风险较小.综上,单一菌液的效应不足以说明环境中磺胺类抗生素的突变风险,研究磺胺类抗生素对耐药基因传播的影响时应混合耐磺胺大肠杆菌和磺胺敏感大肠杆菌作为受试菌,实验证明环境中低浓度的SCP对抗性基因的产生的促进风险较大. 展开更多
关键词 耐磺胺大肠杆菌 磺胺敏感大肠杆菌 磺胺氯哒嗪(SCP) 突变 接合转移
海洋来源链霉菌OUCMDZ-3434中wblA基因的功能
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作者 林筱钰 刘增智 +4 位作者 侯路宽 刘晶 李花月 朱伟明 李文利 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第9期1889-1896,共8页
【背景】Streptomyces sp. OUCMDZ-3434分离自山东青岛栈桥浒苔样品,其次级代谢产物Wailupemycin类化合物具有良好的α-糖苷酶抑制活性,但产量很低,影响了其进一步研发。【目的】建立海洋来源链霉菌Streptomyces sp. OUCMDZ-3434菌株的... 【背景】Streptomyces sp. OUCMDZ-3434分离自山东青岛栈桥浒苔样品,其次级代谢产物Wailupemycin类化合物具有良好的α-糖苷酶抑制活性,但产量很低,影响了其进一步研发。【目的】建立海洋来源链霉菌Streptomyces sp. OUCMDZ-3434菌株的遗传转化系统,通过阻断全局性调控基因wblA探究Wailupemycin类化合物产量变化。【方法】以p SET152为载体,采用大肠杆菌-链霉菌属间接合转移策略建立了Streptomycessp.OUCMDZ-3434的遗传转化方法。采用PCR-Targeting策略构建了wblA基因阻断突变株,通过HPLC分析野生型和突变株发酵产物的差异并对表型差异进行显微形态观察。【结果】建立了Streptomyces sp. OUCMDZ-3434遗传转化系统,构建了wblA基因阻断突变株,与野生株相比,突变株发酵产物中Wailupemycin G产量提高了3倍,同时丧失了产生孢子的能力。【结论】在Streptomycessp.OUCMDZ-3434中wblA对Wailupemycin类化合物生物合成起到了负调控作用,同时参与调控孢子形成,本研究为采用遗传改造策略提高Wailupemycin G产量提供了参考。 展开更多
关键词 STREPTOMYCES sp. OUCMDZ-3434 接合转移 PCR-Targeting 基因失活
海洋放线菌(Salinispora arenicola)基因转移系统的建立 预览
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作者 马艳玲 李海贤 +3 位作者 翁萍 刘泽璇 许小庆 曾荣 《中国酿造》 北大核心 2018年第3期131-134,共4页
该实验旨在建立海洋放线菌Salinispora arenicola基因转移系统,以便基因敲除和外源基因表达等遗传操作。以整合型质粒pSET152和pIB139为出发质粒,通过接合转移构建了海洋放线菌Salinispora arenicola的基因转移系统。结果表明,25 pg... 该实验旨在建立海洋放线菌Salinispora arenicola基因转移系统,以便基因敲除和外源基因表达等遗传操作。以整合型质粒pSET152和pIB139为出发质粒,通过接合转移构建了海洋放线菌Salinispora arenicola的基因转移系统。结果表明,25 pg/mL阿泊拉霉素可有效筛选接合子,大肠杆菌与孢子的比例为8:1时可获得较多的转化子。经聚合酶链式反应(PCR)验证,质粒成功整合到菌株海洋放线菌S.arenicola基因组中,接合子经多次传代后,导入的质粒pSET152和pIB139仍稳定整合于接合子基因组上。成功构建了海洋放线菌S.arenicola接合转移系统。 展开更多
关键词 海洋放线菌 Salinispora arenicola 接合转移 遗传稳定性
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羽毛降解杆状链霉菌S-28遗传转化系统的建立与优化 预览
9
作者 张晋龙 马怡茗 +4 位作者 舒伟学 李晓霞 柯欣 颜华 贾良辉 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第5期94-100,共7页
【目的】建立羽毛降解杆状链霉菌(Streptomyces bacillaris)S-28的遗传转化系统,并对其进行优化,为该菌株的遗传改造奠定基础。【方法】以大肠杆菌-链霉菌穿梭整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌(Escherichia coli)S17-1/pSET15... 【目的】建立羽毛降解杆状链霉菌(Streptomyces bacillaris)S-28的遗传转化系统,并对其进行优化,为该菌株的遗传改造奠定基础。【方法】以大肠杆菌-链霉菌穿梭整合型质粒pSET152为出发质粒,大肠杆菌(Escherichia coli)S17-1/pSET152为供体,羽毛降解杆状链霉菌S-28孢子为受体进行接合转移试验,并对影响接合效率的培养基种类、MgCl2浓度、热激温度、预萌发时间、供受体比例和接合转移时间等要素进行优化。【结果】确定筛选羽毛降解杆状链霉菌S-28菌株接合转化子的抗生素为安普霉素≥10μg/mL或卡那霉素≥20μg/mL;成功将pSET152转入到杆状链霉菌S-28中。优化的S-28菌株接合转移条件为:以MS为接合转移最适培养基,MgCl2浓度为10mmol/L,孢子萌发条件为40℃热激10min且不进行预萌发处理,供受体比例为10∶1,接合转移时间18~20h,此条件下接合转化效率最高达到10-4。【结论】建立并优化了羽毛降解杆状链霉菌S-28的遗传转化系统,接合转化效率最高可达到10~(-4)。 展开更多
关键词 杆状链霉菌S-28 羽毛降解 遗传转化系统 接合转移
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群体感应信号分子存在下磺胺对大肠杆菌生长、突变及R388质粒接合转移的影响 预览
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作者 王雅娟 马清萍 +4 位作者 于洋 宋春磊 程逸飞 史珺怡 林志芬 《生态毒理学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期119-125,共7页
抗生素的滥用使细菌耐药性问题日益突出,给许多疾病的预防与控制增加了难度。基因突变和质粒接合转移是细菌获得抗生素抗性基因的主要方式,许多研究围绕抗性基因来展开,但是关于群体感应对于抗性基因产生和传播的影响鲜有报道。本文以... 抗生素的滥用使细菌耐药性问题日益突出,给许多疾病的预防与控制增加了难度。基因突变和质粒接合转移是细菌获得抗生素抗性基因的主要方式,许多研究围绕抗性基因来展开,但是关于群体感应对于抗性基因产生和传播的影响鲜有报道。本文以大肠杆菌(Escherichia coli)为模式生物,群体感应信号分子N-(β-酮己酰)-L-高丝氨酸内酯(3-oxo-C6-HSL,C6)和3种磺胺类抗生素(磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺氯哒嗪)为研究对象,测定了其对大肠杆菌生长效应、突变效应及接合转移效应的影响。结果表明:C6不影响磺胺对大肠杆菌的生长抑制率,但能够削弱磺胺对大肠杆菌突变的促进作用,并且能增强磺胺对大肠杆菌R388质粒接合转移的抑制作用。本文为从群体感应角度研究大肠杆菌耐药性的产生与传播提供新思路。 展开更多
关键词 群体感应信号分子 磺胺 大肠杆菌 突变 接合转移
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加纳链霉菌接合转移体系的建立与优化 预览
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作者 王露 朱世扬 +1 位作者 赵春田 裘娟萍 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期1965-1971,共7页
加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis)是动物饲料添加剂黄霉素的主要生产菌。建立高效稳定的遗传操作系统是对该菌进行分子生物学研究和构建高产黄霉素基因工程菌的基础。以含有基因整合型重组质粒pIJ8630-nsdA的Escherichia coli ET125... 加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis)是动物饲料添加剂黄霉素的主要生产菌。建立高效稳定的遗传操作系统是对该菌进行分子生物学研究和构建高产黄霉素基因工程菌的基础。以含有基因整合型重组质粒pIJ8630-nsdA的Escherichia coli ET12567/pUZ8002为供体、加纳链霉菌ATCC 14672为受体进行接合转移,通过单因素试验与正交试验对接合转移过程中的关键影响因素进行优化。结果表明,WL50培养基为接合转移最适培养基,当受体加纳链霉菌ATCC 14672孢子在50℃条件下热激10 min、37℃预培养3 h后,与供体按细胞数比例1∶15混合后涂布于接合转移平板上,30℃培养14 h后覆盖50μg·mL^-1安普霉素和500μg·mL^-1萘啶酸时,接合频率最高,比优化前提高20.3倍。 展开更多
关键词 黄霉素 遗传操作 接合转移
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抗生素单一及联合暴露对RP4质粒介导的抗性基因水平转移的hormesis效应研究 预览 被引量:1
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作者 宋春磊 方淑霞 +2 位作者 周虹 林志芬 刘颖 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期148-154,共7页
抗生素滥用导致的抗性基因(ARGs)泛滥问题引起人们的日益关注。目前关于抗性基因的研究主要集中在环境监测方面,但是关于抗生素对ARGs传播的影响研究还相对缺乏。质粒是ARGs传播的重要载体,因此以基于RP4质粒的大肠杆菌(E.coli)接... 抗生素滥用导致的抗性基因(ARGs)泛滥问题引起人们的日益关注。目前关于抗性基因的研究主要集中在环境监测方面,但是关于抗生素对ARGs传播的影响研究还相对缺乏。质粒是ARGs传播的重要载体,因此以基于RP4质粒的大肠杆菌(E.coli)接合转移体系为研究对象,探讨了盐酸四环素、甲氧苄啶、磺胺氯哒嗪、磺胺异唑在单一暴露条件下对RP4质粒接合转移的影响。根据单一暴露的结果设计混合抗生素的浓度比,探究抗生素联合暴露实验对质粒接合转移的影响。结果表明:在单一暴露条件下,只有盐酸四环素对含有四环素抗性的RP4质粒的接合转移频率有低促高抑的hormesis效应;在联合暴露条件下,对RP4质粒接合转移无促进作用的抗生素会抑制四环素的hormesis效应,这一定程度上降低了抗生素的环境风险。并且用受体理论解释了抗生素对质粒接合转移的hormesis效应产生机制,为目前尚无定论的hormesis受体理论机制提供了证据支持。 展开更多
关键词 四环素 磺胺 磺胺增效剂 抗性基因 大肠杆菌 基因水平转移 接合转移 RP4质粒
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基于功能宏基因组学技术的金黄色葡萄球菌生物被膜抑制物的发现与活性分析
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作者 朱莹 柴树茂 +2 位作者 曹明明 王绍琛 冯治洋 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1525-1532,共8页
宏基因组学方法直接提取环境中的全部微生物基因组DNA,并使其得到功能性表达,为微生物天然产物的开发利用提供了新的方法。利用功能宏基因组学技术,使用大肠杆菌.链霉菌穿梭载体构建四川峨眉山土壤宏基因组文库,并将文库菌中所携... 宏基因组学方法直接提取环境中的全部微生物基因组DNA,并使其得到功能性表达,为微生物天然产物的开发利用提供了新的方法。利用功能宏基因组学技术,使用大肠杆菌.链霉菌穿梭载体构建四川峨眉山土壤宏基因组文库,并将文库菌中所携带的环境DNA接合转移到链霉菌宿主中。通过活性筛选获得两个具有抗菌活性的阳性链霉菌克隆,其发酵粗提物对金黄色葡萄球菌生物被膜的形成均有很好的抑制作用,当浓度达到2MIC(Minimum inhibitory concentration)时,抑制作用超过90%;同时,两种粗提物样品对金黄色葡萄球菌生物被膜也存在显著的清除作用,其中EMll0样品对金黄色葡萄球菌生物被膜的清除率高于EMl23样品。本文通过功能宏基因纽学技术,直接从土壤中筛选获得了对金黄色葡萄球菌生物被膜有较强抑制及清除作用的活性物质。 展开更多
关键词 宏基因组学 接合转移 表型筛选 金黄色葡萄球菌 生物被膜抑制剂
固氮链霉菌Streptomyces chartreusi WZS021接合转移系统的建立及优化 预览
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作者 王震 庞妃 +4 位作者 顾彩彩 王露蓉 邢永秀 杨丽涛 李杨瑞 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期581-586,共6页
【目的】建立和优化固氮链霉菌Streptomyces chartreusi WZS021(简称菌株WZS021,下同)的接合转移体系,以丰富固氮链霉菌基因片段转移技术。【方法】以大肠杆菌Escherichia coli ET12567(pUZ8002)为供体菌,携带整合型质粒pSET152的菌... 【目的】建立和优化固氮链霉菌Streptomyces chartreusi WZS021(简称菌株WZS021,下同)的接合转移体系,以丰富固氮链霉菌基因片段转移技术。【方法】以大肠杆菌Escherichia coli ET12567(pUZ8002)为供体菌,携带整合型质粒pSET152的菌株WZS021为受体菌,进行菌株WZS021接合转移。【结果】选择高氏一号培养基为菌株WZS021接合转移培养基,50℃热激10 min,供受比为1∶10,涂布20.0 mg/L安普霉素、接合转移12 h后覆盖抗生素,添加MgCl2终浓度为5.0 mmol/L时接合转移效率最高,达3.24×10-6。【结论】通过确定适用于菌株WZS021接合转移条件建立的菌株WZS021遗传转化体系,有助于今后插入标记基因确定该菌的固氮定殖位点及导入外源基因的操作。 展开更多
关键词 固氮链霉菌WZS021 接合转移 优化 pSET152
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一株红球菌(Rhodococcussp.)二噁英降解质粒的稳定性与接合转移特性
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作者 孙娇 杨海燕 李力 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1613-1621,共9页
【目的】考察一株红球菌Rhodococcus sp.strainp52中的二噁英降解质粒pDF01(170kb)和pDF02(242kb)的稳定性和接合转移特性。【方法】在无选择压力的条件下对菌株p52进行连续传代培养,考察质粒pDF01、pDF02的丢失;以菌株p52为供... 【目的】考察一株红球菌Rhodococcus sp.strainp52中的二噁英降解质粒pDF01(170kb)和pDF02(242kb)的稳定性和接合转移特性。【方法】在无选择压力的条件下对菌株p52进行连续传代培养,考察质粒pDF01、pDF02的丢失;以菌株p52为供体菌,以不同种属的菌株作受体菌,通过平板接合实验探讨质粒pDF01、pDF02接合转移的受体菌范围以及接合转移频率,利用菌落杂交、Southern杂交对质粒转移结果进行确认,利用降解实验测试转移质粒降解基因的表达。【结果】质粒pDF01和pDF02在红球菌p52中均具有较高的稳定性,在LB培养基上连续传代少于47次时pDF02可保持,连续传代少于65次时pDF01可保持。质粒pDF01和pDF02具备在同属和属间接合转移的能力,可向受体菌——紫红红球菌(Rhodococcus rhodochrous)、红串红球菌(Rhodococcus erythropolis)、大地两面神菌(Terrabacter tumescens)和节杆菌(Arthrobacter sp.)转移,其中以节杆菌作受体菌时质粒pDF01和pDF02接合转移频率最高,达到3.5×10^-6(接合子/受体菌);对节杆菌接合子质粒进行Southern杂交进一步确认了质粒pDF01、pDF02的存在。另外获得质粒pDF01、pDF02后的节杆菌接合子可以对二苯并呋喃高效利用,且降解能力与红球菌供体菌株p52相当。【结论】红球菌菌株p52可通过降解质粒转移强化生物修复过程,在去除环境中二噁英污染中具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 生物修复 降解质粒 接合转移 二噁英降解 红球菌
离子液体[BMIm][PF6]增强抗性质粒RP4介导的接合转移基因mRNA的表达水平 预览 被引量:1
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作者 汪庆 罗义 +3 位作者 崔玉晓 齐丽英 周烁磊 杨光 《生态毒理学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期273-281,共9页
环境中广泛存在的抗生素和抗生素抗性基因会导致很严重的人类健康风险。在我们前期研究中发现,离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([BMIm][PF6])作为环境选择性压力可以促进抗生素抗性基因的水平转移。本研究以E.coli DH5α(RP4)... 环境中广泛存在的抗生素和抗生素抗性基因会导致很严重的人类健康风险。在我们前期研究中发现,离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([BMIm][PF6])作为环境选择性压力可以促进抗生素抗性基因的水平转移。本研究以E.coli DH5α(RP4)和同属的E.coli HB101,以及E.coli DH5α(RP4)和跨属的Salmonella enterica之间的纯菌接合转移体系为考察对象,从mRNA基因表达调控水平角度阐明离子液体[BMIm][PF6](0.001~2.5 g·L^-1)影响质粒RP4接合转移的机理。结果表明,离子液体[BMIm][PF6]通过抑制基因kor A,kor B和trb A的mRNA表达水平来提高接合和跨膜转运基因trb Bp和trf Ap的表达;增强水平转移基因tra F的mRNA表达水平,并通过增强负调控基因kil A和kil B的mRNA表达水平抑制质粒的垂直传递过程;通过抑制基因trb K的mRNA表达水平降低接合转移体系的排斥效果,从而促进质粒RP4的接合转移。该结果有助于为抗生素抗性基因在环境中水平转移扩散的机理研究提供理论依据。 展开更多
关键词 离子液体 抗生素抗性基因 质粒RP4 接合转移 MRNA表达
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假交替单胞菌遗传操作系统的研究进展 预览
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作者 羊燕燕 裘娟萍 余志良 《发酵科技通讯》 CAS 2017年第2期100-106,共7页
假交替单胞菌能产生多种胞外活性物质,赋予其重要的基础研究和应用研究价值.目前已有多株假交替单胞菌完成基因组测序.基因组序列分析揭示不同的假交替单胞菌具有产生不同活性代谢产物的能力.假交替单胞菌遗传操作体系欠成熟,这极大地... 假交替单胞菌能产生多种胞外活性物质,赋予其重要的基础研究和应用研究价值.目前已有多株假交替单胞菌完成基因组测序.基因组序列分析揭示不同的假交替单胞菌具有产生不同活性代谢产物的能力.假交替单胞菌遗传操作体系欠成熟,这极大地限制了假交替单胞菌的研究与应用.主要对近十多年来假交替单胞菌遗传操作系统研究进展进行综述,包括感受态制备,穿梭载体、自杀敲除载体及筛选标记的成功应用,以期为假交替单胞菌遗传操作系统的发展提供参考. 展开更多
关键词 假交替单胞菌 遗传操作 接合转移
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亮氨酰氨肽酶基因的阻断对刺糖多孢菌生长及次级代谢产物合成的影响
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作者 杨燕 罗林根 +1 位作者 徐妙 夏立秋 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期629-642,共14页
【目的】构建亮氨酰氨肽酶基因(pep A)被阻断的刺糖多孢菌工程菌株,并鉴定该基因对刺糖多孢菌菌丝形态、生物量、菌体全蛋白表达水平及产多杀菌素能力的影响,探究该基因调控多杀菌素合成的可能机制。【方法】利用PCR扩增刺糖多孢菌中... 【目的】构建亮氨酰氨肽酶基因(pep A)被阻断的刺糖多孢菌工程菌株,并鉴定该基因对刺糖多孢菌菌丝形态、生物量、菌体全蛋白表达水平及产多杀菌素能力的影响,探究该基因调控多杀菌素合成的可能机制。【方法】利用PCR扩增刺糖多孢菌中的pep A基因同源片段,经酶切连接技术构建敲除载体p OJ260-pep A;通过接合转移和单交换同源重组将该载体整合至刺糖多孢菌染色体中,获得工程菌株S.sp-△pep A;利用培养特征、形态学、高效液相色谱、SDS-PAGE等方法对菌株进行研究分析。【结果】工程菌株S.sp-△pep A菌丝片段化程度加剧,生长态势被延缓且生物量降低,但有效促进了多杀菌素的生物合成。阻断亮氨酰胺肽酶基因的表达使刺糖多孢菌菌体全蛋白表达情况发生明显改变,找到表达水平显著上调的差异蛋白核糖体蛋白亚基和醛基脱氢酶,核糖体蛋白亚基通过影响蛋白质代谢对菌体生长产生影响;醛基脱氢酶则可与乙醇脱氢酶、乙酰辅酶A的合成酶相互作用影响辅酶A合成,而辅酶A是合成多杀菌素的重要底物。【结论】在刺糖多孢菌合成多杀菌素的次级代谢过程中,pep A基因作为负调控因子发挥作用。 展开更多
关键词 刺糖多孢菌 亮氨酰氨肽酶基因 阻断 多杀菌素 接合转移
山梨糖脱氢酶基因在酮古龙酸菌中的过表达
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作者 王威勋 李燕 +2 位作者 李野 张天园 张怡轩 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期821-825,共5页
目的在酮古龙酸菌中克隆并过表达山梨糖脱氢酶基因,以便提高单菌发酵产2-酮基-L-古龙酸的能力。方法从酮古龙酸菌DSM4025基因组中克隆获得山梨糖脱氢酶基因(sorbose dehydrogenase,sdh),酶切连接到含有双亲本接合转移关键基因即可移... 目的在酮古龙酸菌中克隆并过表达山梨糖脱氢酶基因,以便提高单菌发酵产2-酮基-L-古龙酸的能力。方法从酮古龙酸菌DSM4025基因组中克隆获得山梨糖脱氢酶基因(sorbose dehydrogenase,sdh),酶切连接到含有双亲本接合转移关键基因即可移动基因(mobilization,mob)的p BBR1MCS-2质粒上,构建p BBR1MCS-2-sdh重组质粒;再将p BBR1MCS-2、p BBR1MCS-2-sdh分别转入供体菌大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)S17-1中,以酮古龙酸菌(Ketogulonigenium sp.)Rif-B-003为受体菌进行双亲本接合转移。挑取利福霉素(Rifamycin,Rif)和卡那霉素双抗平板上的接合子进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、双酶切和测序验证。取重组菌进行摇瓶发酵,用菌体蛋白的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)电泳结果来验证阳性克隆的过表达成功,并检测发酵终点2-酮基-L-古龙酸的产量。结果构建的重组质粒p BBR1MCS-2-sdh成功转入酮古龙酸菌(Ketogulonigenium sp.)Rif-B-003中,SDS-PAGE检测到,发酵终点菌体蛋白在58 ku(目标蛋白)处条带有加深,重组菌株发酵终点2-酮基-L-古龙酸产量相比于对照菌株酮古龙酸菌(Ketogulonigenium sp.)Rif-B-003提高了20.86%。结论山梨糖脱氢酶基因在酮古龙酸菌Rif-B-003里过表达成功,可以提高发酵终点2-酮基-L-古龙酸的产量。 展开更多
关键词 酮古龙酸菌 山梨糖脱氢酶 接合转移 2-酮基-L-古龙酸
阿扎霉素F产生菌链霉菌211726基因转移系统的建立 预览 被引量:2
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作者 马艳玲 刘富来 +2 位作者 张敏 孙宇辉 洪葵 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期198-202,共5页
旨在建立阿扎霉素F产生菌链霉菌211726的基因转移系统,以便基因敲除和外源基因表达等遗传操作。以整合型质粒pSET152和pIB139为出发质粒,通过接合转移构建了阿扎霉素F产生菌链霉菌211726的基因转移系统。结果显示25μg/mL阿泊拉霉素可... 旨在建立阿扎霉素F产生菌链霉菌211726的基因转移系统,以便基因敲除和外源基因表达等遗传操作。以整合型质粒pSET152和pIB139为出发质粒,通过接合转移构建了阿扎霉素F产生菌链霉菌211726的基因转移系统。结果显示25μg/mL阿泊拉霉素可有效筛选接合子。经PCR验证,质粒成功整合到菌株链霉菌211726基因组中,接合子经多次传代后,导入的质粒pSET152和pIB139仍稳定整合于接合子基因组上。 展开更多
关键词 阿扎霉素F 链霉菌211726 接合转移 遗传稳定性
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