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慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白载体转染大鼠心肌成纤维细胞 被引量:1
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作者 朱占占 侯宾 +3 位作者 孙雯雯 院慧芳 张永春 蔡新华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期43-47,共5页
目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GF... 目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GFP转染心肌成纤维细胞,观察荧光表达,探索最佳转染条件。LV-SDF-1α-GFP目的基因病毒以及阴性对照CON145病毒的转染心肌成纤维细胞,绘制生长曲线,探索转染对心肌成纤维细胞的增殖有无明显影响。利用最佳转染剂量组转染心肌成纤维细胞,斑点印迹法(Dot blotting)检测SDF-1α目的蛋白分泌。计量资料进行统计学分析。结果心肌成纤维细胞具很高活性,传至4代纯度高,折光度好,无自发性搏动。LV-SDF-1α-GFP最佳转染感染复数(MOI)值为10,添加感染增强液,聚凝胺组感染效果最好,效率达80%。LV-SDF-1α-GFP组以及阴性对照CON145组对心肌成纤维细胞毒性作用小,细胞形态无明显变化,与非转染组生长曲线相似,差异无统计学意义(P〉0.05)。转染LV-SDF-1α-GFP的心肌成纤维细胞培养至第4天SDF-1α蛋白分泌量达最高值,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论 LV-SDF-1α-GFP载体对心肌成纤维细胞具很高的转染效率,细胞毒性小,并能够分泌SDF-1α目的蛋白。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 慢病毒-基质细胞衍生因子-1α绿色荧光蛋白载体 转染 斑点印迹法 乳大鼠
斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体的临床研究 预览
2
作者 朱材忠 韩坤元 +1 位作者 林道勇 王好问 《海南医学》 CAS 2010年第21期 3-5,共3页
目的建立简便可靠的检测抗-Jo-1抗体的方法。方法用丙酮沉淀兔胸腺中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,从兔胸腺丙酮粉中提取可提取性核抗原(ENA),ENA经亲和色谱纯化出Jo-1抗原,将纯化的Jo-1抗原制备成斑点印迹(DB)试剂盒,用该试剂盒检测... 目的建立简便可靠的检测抗-Jo-1抗体的方法。方法用丙酮沉淀兔胸腺中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,从兔胸腺丙酮粉中提取可提取性核抗原(ENA),ENA经亲和色谱纯化出Jo-1抗原,将纯化的Jo-1抗原制备成斑点印迹(DB)试剂盒,用该试剂盒检测多种风湿免疫性疾病和正常血清中的抗-Jo-1抗体,探讨各种血清中抗-Jo-1抗体的阳性率。结果 DB试剂盒共检测92份血清中的抗-Jo-1抗体。各种风湿性疾病血清69份,其中多发性肌炎(DM)20份,阳性6份(30%);其他风湿性疾病49份,无阳性。健康对照23份,无阳性。该试剂盒对诊断DM的敏感度为30%,特异度为100%。结论 DB试剂盒检测抗-Jo-1抗体方法简便,结果可靠,具有较大的临床开发应用价值。 展开更多
关键词 斑点印迹法 抗-Jo-1抗体 多发性肌炎 风湿性疾病
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Jo-1抗原的提取和纯化 预览 被引量:1
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作者 朱材忠 陈华 +2 位作者 邓学新 唐福林 姚志建 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2007年第10期 1146-1150,共5页
目的改进从兔胸腺中纯化能用于斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体、Jo-1抗原的方法。方法用PBS提取兔胸腺匀浆中的ENA,经丙酮沉淀上清中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,再经以特异性抗-Jo-1抗血清中的IsG为配体制备的亲和色谱柱对Jo-1抗原纯化,... 目的改进从兔胸腺中纯化能用于斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体、Jo-1抗原的方法。方法用PBS提取兔胸腺匀浆中的ENA,经丙酮沉淀上清中的总蛋白制成兔胸腺丙酮粉,再经以特异性抗-Jo-1抗血清中的IsG为配体制备的亲和色谱柱对Jo-1抗原纯化,得到高比活的制品。结果100g兔胸腺可制得5-7g丙酮粉,其中的蛋白质含量为19%-24%。经亲和色谱分离的洗脱峰组分约可富集Jo-1抗原1900倍,抗原活性回收率为2.5%,并只对抗-Jo-1抗血清有特异性反应。虽然在SDS-PAGE上洗脱峰组分并非单一条带,但免疫印迹只发现50ku处有阳性条带。在含有MgCl2的水溶液中,高纯度的Jo-1抗原能长时间保持高活性。结论亲和色谱法可从兔胸腺中纯化出满足斑点印迹法检测抗-Jo-1抗体要求的抗原,并有可能成为大量获取高纯度Jo-1抗原的方法。 展开更多
关键词 兔胸腺 亲和色谱 Jo-l抗原 抗-Jo-l抗体 斑点印迹法
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卵巢癌患者血清中肿瘤特异标志物的鉴定研究 预览 被引量:2
4
作者 胡利华 庞红艳 +3 位作者 李欣 吴尔若 马旭 于和鸣 《中国计划生育学杂志》 北大核心 2005年第4期 230-233,共4页
目的:通过分析卵巢癌患者血清中的蛋白质组分,寻找可能的肿瘤相关蛋白并对该蛋白鉴定,以期确定其作为卵巢癌血清学诊断的特异标志物.方法:采用双向凝胶电泳方法分离6例卵巢癌患者及2例正常健康妇女血清总蛋白,经考马斯亮蓝染色后对比找... 目的:通过分析卵巢癌患者血清中的蛋白质组分,寻找可能的肿瘤相关蛋白并对该蛋白鉴定,以期确定其作为卵巢癌血清学诊断的特异标志物.方法:采用双向凝胶电泳方法分离6例卵巢癌患者及2例正常健康妇女血清总蛋白,经考马斯亮蓝染色后对比找出差异蛋白斑点,该蛋白斑点经蛋白酶水解后进行液质联用串联质谱(LC-MS/MS)分析,用SEQUEST搜索软件查询Finngan公司提供的FASTA格式蛋白序列数据库.采用Western Blotting、ELISA、斑点印迹及亲和层析等方法对目标蛋白作进一步的分析.结果:经双向电泳分离,卵巢癌患者血清中有3~4个组分显示含量高于正常健康妇女血清,选其中最明显的一个差异斑点进行质谱分析,对库检索确定为结合珠蛋白.进一步的分析证实,卵巢癌患者血清中结合珠蛋白总含量有高于正常健康妇女的趋势.此外,通过凝集素斑点印迹法检测发现,岩藻糖基化结合珠蛋白成分明显增加是该蛋白总量增高的主要特性.结论:检测血清结合珠蛋白总量以及特异的岩藻糖基化组分可能成为卵巢癌的血清诊断指标之一,可与其它检测方法相结合,提高卵巢癌早期诊断的有效性. 展开更多
关键词 卵巢癌患者 标志物 鉴定研究 特异 Blotting Western 血清结合珠蛋白 肿瘤相关蛋白 健康妇女 蛋白质组分 血清学诊断 血清总蛋白 ELISA 斑点印迹法 蛋白鉴定 电泳方 差异蛋白 串联质谱 液质联用 蛋白序列 亲和层析 电泳分离
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气道黏液高分泌诱导因素的研究 预览 被引量:1
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作者 聂晓红 周向东 《中国药物与临床》 CAS 2005年第1期 26-28,共3页
目的比较不同因素对气道黏液高分泌的诱导作用,为动物模型制造和临床防治提供指导.方法Wistar大鼠30只随机分成3组:正常组雾化吸入生理盐水;对照组雾化吸入脂多糖(LPS);试验组雾化吸入中性粒细胞弹性蛋白酶(NE).采用酶联免疫吸附试验(EL... 目的比较不同因素对气道黏液高分泌的诱导作用,为动物模型制造和临床防治提供指导.方法Wistar大鼠30只随机分成3组:正常组雾化吸入生理盐水;对照组雾化吸入脂多糖(LPS);试验组雾化吸入中性粒细胞弹性蛋白酶(NE).采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学和斑点印迹法分别测定支气管肺泡灌洗液中黏蛋白(MUC)的含量、气道上皮MUC5AC以及MUC5ACmRNA表达.结果试验组和对照组比正常组的MUC,MUC 5AC以及MUC5AC mRNA水平均显著增加(P<0.01);试验组MUC,MUC5AC以及MUC5AC mRNA表达较对照组明显增加(P<0.05).结论LPS和NE均为黏液高分泌的有效诱导因素,但NE的黏液促分泌效应较LPS更显著,为强有力的诱导剂,是理想的黏液高分泌造模因子,也是临床防治的重要靶目标. 展开更多
关键词 黏液高分泌 诱导因素 酶联免疫吸附试验(ELISA) MUC5AC 中性粒细胞弹性蛋白酶 Wistar大鼠 脂多糖(LPS) 支气管肺泡灌洗液 mRNA表达 雾化吸入 免疫组织化学 临床防治 斑点印迹法 对照组 诱导作用 动物模型 生理盐水 气道上皮
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黑色普氏菌与血红蛋白结合的特点及其血红蛋白结合蛋白的鉴定 预览
6
作者 关素敏 唐荣银 陈强 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2002年第1期 17-19,共3页
目的:观察黑色普氏菌与血红蛋白结合的特点并鉴定血红蛋白结合蛋白.方法:采用斑点印迹法观察黑色普氏菌的血红蛋白结合特点,利用SDS-PAGE及Western blot法鉴定血红蛋白结合蛋白.结果: 热及胰蛋白酶预处理细菌使血红蛋白结合能力分别降低... 目的:观察黑色普氏菌与血红蛋白结合的特点并鉴定血红蛋白结合蛋白.方法:采用斑点印迹法观察黑色普氏菌的血红蛋白结合特点,利用SDS-PAGE及Western blot法鉴定血红蛋白结合蛋白.结果: 热及胰蛋白酶预处理细菌使血红蛋白结合能力分别降低68%和35%,珠蛋白的抑制率为81%,乳铁蛋白部分抑制血红蛋白结合,转铁蛋白、细胞色素C和过氧化物酶对血红蛋白的结合皆无抑制作用.Western blot结果显示,相对分子量Mr为4.1×104,5.6×104和5.9×104的膜蛋白能与血红蛋白反应.结论:4.1×104,5.6×104和5.9×104的细胞膜蛋白可能参与了黑色普氏菌与血红蛋白的结合. 展开更多
关键词 黑色普氏菌 血红蛋白 斑点印迹法 SDS-PAGE WESTEM BLOT 牙周疾病
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黑色普氏菌对人血红蛋白的利用和结合 预览 被引量:1
7
作者 关素敏 唐荣银 陈强 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2001年第6期 359-361,共3页
目的:观察黑色普氏菌能否利用人血红蛋白作为其铁源并与其结合.方法:将黑色普氏菌接种于含有各种浓度血红蛋白的TSB-联吡啶培养基中,厌氧培养,分光光度计监测细菌生长.采用斑点印迹法观察黑色普氏菌能否与人血红蛋白结合.结果:人血红蛋... 目的:观察黑色普氏菌能否利用人血红蛋白作为其铁源并与其结合.方法:将黑色普氏菌接种于含有各种浓度血红蛋白的TSB-联吡啶培养基中,厌氧培养,分光光度计监测细菌生长.采用斑点印迹法观察黑色普氏菌能否与人血红蛋白结合.结果:人血红蛋白能够浓度依赖性地促进黑色普氏菌的生长,黑色普氏菌能够与人血红蛋白结合,其结合强度受pH影响, pH=5时结合能力最强.结论:黑色普氏菌能够有效地利用人血红蛋白作为其铁源并与其结合. 展开更多
关键词 黑色普氏菌 人血红蛋白 铁摄取 斑点印迹法 牙周病
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不同年龄健康男性热应激蛋白70水平的研究 被引量:1
8
作者 王瑞波 陈胜 +3 位作者 肖成峰 海涛 贺涵贞 邬堂春 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期 218-219,共2页
热应激蛋白(HSPs)是生物体受热或其他应激因素刺激后,诱导合成的一组蛋白质[1].HSP70是热应激蛋白家族中的主要成员之一,是重要的分子伴侣,参与蛋白质的折叠与运输、变性蛋白的复性及降解等.因而,机体HSP70的表达水平可能与接触职业有... 热应激蛋白(HSPs)是生物体受热或其他应激因素刺激后,诱导合成的一组蛋白质[1].HSP70是热应激蛋白家族中的主要成员之一,是重要的分子伴侣,参与蛋白质的折叠与运输、变性蛋白的复性及降解等.因而,机体HSP70的表达水平可能与接触职业有害因素时的易感性及耐受性有关. 展开更多
关键词 热应激蛋白 HSPS 应激因素 健康男性 有害作业 斑点印迹法
完整细胞斑点印迹技术在检测HXO—Rb44细胞基因表达中的应用 预览
9
作者 郑乃刚 邓新国 《眼科研究》 CSCD 1999年第5期 414-415,共2页
细胞的基因表达的检测在医学研究和临床上皆有广泛的应用。有报道应用碱变性DNA,同时也裂解了胞膜,再进行完整细胞DNA原位斑点印迹检测[1]。虽在1986年Yu[2]曾报道过原核细胞胞浆液的RNA原位斑点印迹,但这首先需制备细胞浆液... 细胞的基因表达的检测在医学研究和临床上皆有广泛的应用。有报道应用碱变性DNA,同时也裂解了胞膜,再进行完整细胞DNA原位斑点印迹检测[1]。虽在1986年Yu[2]曾报道过原核细胞胞浆液的RNA原位斑点印迹,但这首先需制备细胞浆液,而我们是直接将完整真核细胞悬液点在NCM上,便于检测斑点印迹信号相对强度,也可同时点在玻片上,进行原位杂交或免疫组化的定位观察。1 材料与方法1.1 DIF装置 自制,在直径为0.8cm×4cm长度的塑料小管底部有一小洞,每管80%的容积充填优质吸水材料,表层覆以两层吸水绵纸以承受直径为0.7cm圆形NCM标本,表面覆以小盖。1.2 操作流程1.2.1 完整细胞RN 展开更多
关键词 HXO-RB44 斑点印迹法 DNA 视网膜母细胞病
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自然信息 预览
10
《自然杂志》 1991年第2期105-152,共7页
美国加州基因公司(CalgeneInc.)的J.M.欧文(J.M.Ir-Vine)等对检测植物中DNA的方法进行了深入的研究,经过几年的努力,终于取得了重大进展。他们所建立的方法称为“灯芯斑点印迹法”
关键词 宇宙学解 羊膜穿刺 斑点印迹法 时间平移 时间机器 巨噬细胞 清道夫受体 氦丰度 微波背景辐射 DNA
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用Y染色体特异性探针作斑点印迹法检测人血痕的性别 预览 被引量:1
11
作者 伍新尧 杨英浩 罗超权 《法医学杂志》 CAS CSCD 1991年第2期 7-8,F003,共3页
血痕的性别检查是法医学检案中一个重要内容。过去常用的方法是检查血痕里残存有核细胞中的x和y小体,也有试图测定血痕中性激素(主要是睾丸酮)含量的办法来达到鉴定性别的目的。但都因方法比较繁琐且结果不大可靠,或男女性别判断的界... 血痕的性别检查是法医学检案中一个重要内容。过去常用的方法是检查血痕里残存有核细胞中的x和y小体,也有试图测定血痕中性激素(主要是睾丸酮)含量的办法来达到鉴定性别的目的。但都因方法比较繁琐且结果不大可靠,或男女性别判断的界线不够清楚,或受澎响的因素太多而不能令人满意。 展开更多
关键词 Y染色体特异性探针 斑点印迹法 检测 人血痕 性别 医物证检验学
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培养纹状体神经细胞TH和AADC基因的共转导研究
12
作者 中野今治 永津俊治 +1 位作者 GaryJ.Kurtzman 小泽敬也 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 1998年第1期23-23,共1页
培养纹状体神经细胞TH和AADC基因的共转导研究樊东康德中野今治永津俊治GaryJ.Kurtzman小泽敬也帕金森病不仅脑内多巴胺明显减少,其合成所需酪氨酸羟化酶(TH)和芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)活性也明... 培养纹状体神经细胞TH和AADC基因的共转导研究樊东康德中野今治永津俊治GaryJ.Kurtzman小泽敬也帕金森病不仅脑内多巴胺明显减少,其合成所需酪氨酸羟化酶(TH)和芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)活性也明显降低[治疗,1994,76:112... 展开更多
关键词 纹状体 多巴胺能神经细胞 帕金森病 基因共转导 培养神经细胞 基因修饰 基因治疗 高效液相 斑点印迹法 导研
聚合酶链式反应(PCR)用于地中海贫血产前诊断 预览
13
作者 朱汉荣 《医学研究杂志》 1989年第6期33-33,共1页
第一军医大学张基增等,首次把聚合酶链式反应法(PCR)用于南方地中海贫血产前诊断并获得成功,为该病的诊断提供了一项新的简易方法。在全国优生优育工作会议上报告后,受到国家有关部门和与会专家的高度重视。地中海贫血是一种严重的遗... 第一军医大学张基增等,首次把聚合酶链式反应法(PCR)用于南方地中海贫血产前诊断并获得成功,为该病的诊断提供了一项新的简易方法。在全国优生优育工作会议上报告后,受到国家有关部门和与会专家的高度重视。地中海贫血是一种严重的遗传病,大部分为基因缺失型,不能发育成正常胎 展开更多
关键词 产前诊断 PCR 地中海贫血 缺失型 聚合酶链式反应 胎儿血红蛋白 羊水细胞 正常胎儿 第一军医大学 斑点印迹法
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慢性心房颤动患者血清及心肌热休克蛋白27/60/70的表达及其意义 预览 被引量:6
14
作者 潘宴青 陈鑫 《现代医学》 2008年第4期,共4页
目的探讨慢性心房颤动患者血清及心肌中热休克蛋白(HSP)的表达及其意义。方法选取瓣膜置换手术患者40例,其中20例为房颤持续时间超过36个月,另20例为窦性心律,以ELISA法检测血清HSP27/60/70含量,以Western斑点印迹法检测右心房心肌组织... 目的探讨慢性心房颤动患者血清及心肌中热休克蛋白(HSP)的表达及其意义。方法选取瓣膜置换手术患者40例,其中20例为房颤持续时间超过36个月,另20例为窦性心律,以ELISA法检测血清HSP27/60/70含量,以Western斑点印迹法检测右心房心肌组织中HSP27/60/70的表达水平。结果(1)两组患者血清中HSP27/60/70含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)两组心肌组织中均见HSP27表达,但表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。(3)慢性房颤组心肌中HSP70表达与窦性心律组比较差异有统计学意义(861.02±246.77vs1 068.51±332.18,P<0.05)。(4)HSP60表达水平两组比较差异也有统计学意义(5 965.03±1 564.92vs3 159.80±1 055.41,P<0.05)。(5)两组患者血清与心肌中HSP27/60/70作相关分析,只有窦性心律组的血清与右心房心肌HSP27表达水平呈低度相关(r=0.54,P<0.05)。结论右心房心肌中HSP60及HSP70的表达在慢性心房颤动的发生和发展中起重要作用。 展开更多
关键词 慢性心房颤动 热休克蛋白 酶联免疫 Western斑点印迹法
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RNA斑点印迹法检测人食管癌DNA聚合酶β的基因表达 预览 被引量:2
15
作者 金戈 张婷 +3 位作者 赵勤 赵继敏 吴景兰 董子明 《河南医学研究》 CAS 2003年第4期 304-306,共3页
目的: 探讨人食管癌组织DNA聚合酶β(pol β)RNA水平的表达.方法: 提取51例食管癌患者的手术标本组织,包括:17例癌灶组织,17例癌旁组织,17例'正常'组织细胞总RNA,以生物素标记的pol β cDNA探针进行RNA斑点印迹.结果: DNA pol ... 目的: 探讨人食管癌组织DNA聚合酶β(pol β)RNA水平的表达.方法: 提取51例食管癌患者的手术标本组织,包括:17例癌灶组织,17例癌旁组织,17例'正常'组织细胞总RNA,以生物素标记的pol β cDNA探针进行RNA斑点印迹.结果: DNA pol β RNA水平的表达癌组织高于癌旁组织(P<0.05),癌旁组织高于'正常'组织(P<0.05),癌组织高于'正常'组织(P<0.01).结论: 人食管癌组织及癌旁组织的DNA pol β基因RNA水平表达显著高于'正常'组织,提示DNA pol β的过表达可能在食管癌的发生、发展中起作用. 展开更多
关键词 RNA斑点印迹法 食管癌 DNA聚合酶Β 基因表达 肿瘤发生
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