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转基因诱导永生化鸡细胞系的建立
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作者 朱姿英 卢克焕 +1 位作者 SteveLStice 陆阳清 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期3498-3505,共8页
传统上从鸡胚中分离病毒用于疫苗的生产常常不能满足需求,研究从体外培养的细胞中分离病毒的途径成为当前疫苗生产领域的迫切需要。本研究利用体细胞诱导重编程技术建立永生化细胞系,为应用于疫苗制备等研究和生产奠定基础。通过慢病毒... 传统上从鸡胚中分离病毒用于疫苗的生产常常不能满足需求,研究从体外培养的细胞中分离病毒的途径成为当前疫苗生产领域的迫切需要。本研究利用体细胞诱导重编程技术建立永生化细胞系,为应用于疫苗制备等研究和生产奠定基础。通过慢病毒载体转染转录调控因子(NANOG, LIN28和C-MYC)重编程鸡成纤维细胞,并稳定培养至100代,获得永生化的细胞,而后逐步去除细胞因子、血清等添加物,优化细胞系培养体系,并对细胞驯化实现悬浮生长,以获得单位体积最大密度的细胞。研究结果表明:通过转基因将NANOG,LIN28和C-MYC 3个因子整合入细胞中表达,细胞系对碱性磷酸酶染色呈阳性反应,端粒逆转录酶(cTERT)基因在细胞系中显著上调,并稳定培养至100代,使得这些细胞具有自我更新特性和永生化的潜能。确定了培养基中的血清替代物KSR浓度为20%,并撤除了培养基中bFGF等生长因子,为细胞大规模培养应用提供了可能。永生细胞实现悬浮生长,细胞生长倍增时间为21.71 h,最大密度为1.3×106 cells/m L。因此,我们通过重编程技术建立了一株稳定的永生化细胞系,并且使它能在低浓度KSR中悬浮培养,这为疫苗制备等研究和生产提供科学依据。 展开更多
关键词 诱导型重编程 鸡永生化细胞系 血清培养 慢病毒转染 悬浮培养
大鼠骨髓胚胎样干细胞的培养和鉴定 预览
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作者 徐锋 张喜 张传森 《解剖学杂志》 CAS 2019年第3期240-243,F0002共5页
目的:探索骨髓胚胎样干细胞(ELSCs)的分离纯化和鉴定方法,并探讨该细胞分离培养方法的可行性。方法:采用全骨髓培养、明胶包被和无血清培养的方法,培养SD大鼠骨髓细胞,5d后进行第1次传代,以后每2d传代1次。观察其形态结构;免疫荧光检测... 目的:探索骨髓胚胎样干细胞(ELSCs)的分离纯化和鉴定方法,并探讨该细胞分离培养方法的可行性。方法:采用全骨髓培养、明胶包被和无血清培养的方法,培养SD大鼠骨髓细胞,5d后进行第1次传代,以后每2d传代1次。观察其形态结构;免疫荧光检测其表面标志物CD73、CD90、CD105、SSEA-4、Sox-2、Nanog;流式细胞术检测干性标志物SSEA-4、OCT-4、Sox-2、Nanog的表达,并与骨髓间充质干细胞(MSCs)相比较;检测其向成骨细胞和成脂细胞的诱导分化能力。结果:获得的ELSC呈现长梭形,体积小且形态均一。免疫荧光示其表达CD73、CD90、CD105、SSEA-4、Sox-2、Nanog;流式细胞术检测示ELSCs表达CD73、CD90、CD105,且纯度高于95%,与MSCs相比,ELSCs的SSEA-4、OCT-4、Sox-2、Nanog等干性基因表达较高。结论:该方法获得的ELSCs干性较强、强度较高,可分离、培养出ELSCs。 展开更多
关键词 骨髓胚胎样干细胞 血清培养 干性基因 大鼠
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食管癌干细胞的分离、培养及鉴定 预览
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作者 杨婷 马磊 +1 位作者 蔡少青 梁宏开 《新疆医科大学学报》 CAS 2019年第4期467-471,共5页
目的以食管癌细胞株Eca109为实验材料,采用无血清法培养出球样细胞,在体外大量繁殖,运用多种方法鉴定其干细胞特性,为研究食管癌创造条件。方法在含10%小牛血清的细胞培养液中培养食管癌细胞株Eca109,传2~3代,后逐步降低细胞培养液中小... 目的以食管癌细胞株Eca109为实验材料,采用无血清法培养出球样细胞,在体外大量繁殖,运用多种方法鉴定其干细胞特性,为研究食管癌创造条件。方法在含10%小牛血清的细胞培养液中培养食管癌细胞株Eca109,传2~3代,后逐步降低细胞培养液中小牛血清的浓度,直至无血清,1周后收集悬浮生长的球样细胞,采用流式细胞仪分析细胞周期;免疫荧光法检测干细胞标记物亮氨酸丰富重复G蛋白偶联受体5重组蛋白(Lgr5)的表达;裸鼠致瘤实验检验球样细胞体内成瘤情况。结果Eca109细胞在无血清培养液中培养1周,在上清液中收集少量悬浮生长的球样细胞,进行消化、传代,得到大量悬浮生长的球样细胞。比较Eca109细胞和球样细胞的细胞周期,Eca109细胞有(28.89±6.34)%处于分裂期,(52.12±4.53)%处于分裂前期;球样细胞有(6.48±2.35)%处于分裂期,(77.19±4.52)%处于分裂前期,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。Eca109细胞Lgr5表达率为(22.67±3.62),而球样细胞中Lgr5的表达率均为100%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。裸小鼠成瘤实验发现,Eca109细胞无法在裸小鼠皮下成瘤,球样细胞只需2×10^4个即能成瘤,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),且随着接种数目增多,瘤体体积也增大。结论逐步降低细胞培养液中小牛血清的浓度直至无血清条件,可驯化人食管癌细胞株Eca109繁殖出球样细胞,表现出肿瘤干细胞特性。 展开更多
关键词 食管癌 血清培养 肿瘤干细胞
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冻存人脐带间充质干细胞的分离培养 预览
4
作者 刘亭 姜翙 +3 位作者 刘志华 孙宁 李晓媚 翁锦生 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第29期4637-4642,共6页
背景:目前大多数报道是从新鲜脐带中分离培养脐带间充质干细胞,而从冻存脐带组织中分离培养间充质干细胞鲜有报道。目的:从冻存人脐带中分离培养间充质干细胞,并比较多种培养方法获得的脐带间充质干细胞的生物学特性。方法:采用组织块... 背景:目前大多数报道是从新鲜脐带中分离培养脐带间充质干细胞,而从冻存脐带组织中分离培养间充质干细胞鲜有报道。目的:从冻存人脐带中分离培养间充质干细胞,并比较多种培养方法获得的脐带间充质干细胞的生物学特性。方法:采用组织块贴壁法从冻存脐带组织中分离培养脐带间充质干细胞,分别用有血清和无血清培养基培养,观察其形态特征,绘制其生长曲线;流式细胞仪检测第3代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)和第14代脐带间充质干细胞(含血清培养基培养)表面抗原表达;第3代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)分别用成脂、成骨、成软骨诱导培养液诱导其分化,qPCR鉴定分化标记基因表达;检测第7代脐带间充质干细胞(无血清培养基培养)及其培养上清中的细胞因子水平。结果与结论:①从冻存人脐带组织原代培养的脐带间充质干细胞,呈梭形纤维样细胞形态,生长力旺盛,脐带间充质干细胞可用无血清培养基传代培养,但增殖速率还远低于有血清培养基;②流式细胞术分析结果显示为脐带间充质干细胞CD90、CD73、CD105呈强阳性表达,CD45、CD34、CD14/CD11b、CD79a/CD19、HLA-DR呈阴性表达;③经成脂、成骨和成软骨诱导培养14-28 d后,脂肪细胞标记基因PPARγ、骨细胞标记基因Osteonectin、软骨细胞标记基因CollagenⅡ的表达量显著升高;④第7代脐带间充质干细胞及其培养上清可检测出粒细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、干扰素α2、趋化因子IP-10、白细胞介素4、白细胞介素6等细胞因子;⑤结果提示可从冻存人脐带中培养扩增脐带间充质干细胞。 展开更多
关键词 冻存人脐带 组织块贴壁培养 细胞鉴定 血清培养 间充质干细胞 细胞因子 流式细胞术 干细胞 国家自然科学基金 低温保存 脐带 间质干细胞 培养 血清 组织工程
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卵巢癌细胞系ID8中肿瘤干细胞的分离及生物学特性鉴定 预览
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作者 俞晓毓 吴迪 +4 位作者 王净 李菲 白绪乐 赵枫姝 窦骏 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第29期4687-4691,共5页
背景:肿瘤干细胞在肿瘤发生和发展中起着至关重要的作用,但鼠卵巢癌细胞系ID8中是否存在肿瘤干细胞仍未见报道。目的:分选小鼠源性卵巢癌细胞系ID8的肿瘤干样细胞,鉴定其生物学特性。方法:应用无血清培养基培养ID8细胞,将获得悬浮球细... 背景:肿瘤干细胞在肿瘤发生和发展中起着至关重要的作用,但鼠卵巢癌细胞系ID8中是否存在肿瘤干细胞仍未见报道。目的:分选小鼠源性卵巢癌细胞系ID8的肿瘤干样细胞,鉴定其生物学特性。方法:应用无血清培养基培养ID8细胞,将获得悬浮球细胞传代扩增。体外采用CCK8法、平板克隆、Transwell小室侵袭及体外药敏实验观察悬浮球细胞与常规培养的ID8细胞在生物学功能上的差异。应用定量PCR以及Western blot检测悬浮球细胞和非悬浮球细胞的肿瘤干细胞标志ALDH1的表达水平,并通过小鼠致瘤实验观察其成瘤能力。结果与结论:小鼠卵巢癌ID8细胞能在无血清培养基中形成可稳定传代的悬浮球细胞,与非悬浮球细胞相比,具有较强的增殖、自我更新、侵袭、耐药及致瘤的能力,并高表达肿瘤干细胞标志ALDH1。说明无血清培养法可以有效的富集具有卵巢癌干样细胞特征的ID8悬浮球细胞。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 肿瘤干细胞 ID8细胞 血清培养 悬浮球细胞 干性 分离 鉴定 ALDH1 肿瘤细胞 培养 血清 组织工程
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促细胞生长因子的研究进展 预览
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作者 李倩 马祺 +2 位作者 王娟 冯若飞 乔自林 《甘肃畜牧兽医》 2018年第10期19-21,24共4页
促细胞生长因子是由造血系统、免疫系统或炎症反应中的活化细胞产生,能调节细胞分化增殖和诱导细胞发挥功能,是高活性多功能的多肽、蛋白质或糖蛋白。近年来,促细胞生长因子在动物细胞体外无血清培养方面得到了广泛应用,促进了生物... 促细胞生长因子是由造血系统、免疫系统或炎症反应中的活化细胞产生,能调节细胞分化增殖和诱导细胞发挥功能,是高活性多功能的多肽、蛋白质或糖蛋白。近年来,促细胞生长因子在动物细胞体外无血清培养方面得到了广泛应用,促进了生物技术产业的发展。本文阐述了促细胞生长因子的分类及作用,为促细胞生长因子在细胞培养中的应用研究提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 生长因子 细胞培养 血清培养
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人前列腺癌DU-145细胞中肿瘤干细胞的富集及鉴定 预览
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作者 吕殷婷 焦举 +3 位作者 杨婷 邹琼 江淑琴 张勇 《新医学》 2018年第6期405-410,共6页
目的 从人前列腺癌DU-145细胞中富集具有干细胞特性的肿瘤细胞,并鉴定其肿瘤干细胞特性。 方法 利用流式细胞仪比较人前列腺癌LNCaP细胞、DU-145细胞中CD44^+细胞所占比例;通过无血清连续传代培养,富集干性肿瘤细胞,计算不同时... 目的 从人前列腺癌DU-145细胞中富集具有干细胞特性的肿瘤细胞,并鉴定其肿瘤干细胞特性。 方法 利用流式细胞仪比较人前列腺癌LNCaP细胞、DU-145细胞中CD44^+细胞所占比例;通过无血清连续传代培养,富集干性肿瘤细胞,计算不同时间点成球率;将无血清悬浮培养的肿瘤微球细胞,再次在含血清培养基中培养,验证肿瘤干细胞的分化特性;利用CCK-8增殖试验分别检测DU-145细胞和DU-145肿瘤微球细胞,比较两者增殖能力的差异;分别以DU-145肿瘤微球细胞、DU-145细胞为实验组和对照组制备荷瘤裸鼠模型,比较两者体内成瘤能力。 结果 流式细胞仪检测显示CD44^+LNCaP、CD44^+ DU-145比例分别为0.4%、97.6%。无血清悬浮培养DU-145细胞第2日的成球率为 (14.4±7.8) %,第7日的成球率为 (34.2±8.7) %,第14日的成球率高达 (61.4±7.6) %。悬浮成球DU-145细胞在加入含10%胎牛血清培养基24 h后,表现出和常规贴壁培养DU-145细胞相同形态。DU-145肿瘤微球细胞在铺板后24 h其增殖能力就可达到DU-145细胞的2倍左右,在第6日之后,DU-145肿瘤微球细胞存活率仍高于DU-145细胞,组间450 nm处吸光度比较差异均有统计学意义 ( P 均〈0.05)。与DU-145细胞荷瘤裸鼠相比,DU-145肿瘤微球细胞荷瘤裸鼠的移植瘤体积较大、生长速度较快 ( P 均〈0.05)。 结论 无血清连续传代培养的DU-145细胞经富集分离可得到具有干细胞特征的前列腺肿瘤细胞,该方法简便易行,具有较理想的应用前景。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤干细胞 分化群44 血清培养 富集 鉴定
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人胎盘胎儿侧间充质干细胞无血清培养上清的抗氧化活性分析 预览 被引量:4
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作者 付雪 张玉洁 +3 位作者 严秀蕊 马晓娜 刘晓明 魏军 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2017年第5期773-779,共7页
背景:目前关于间充质干细胞的研究大多集中于其免疫调节功能,而关于细胞和培养上清的其抗氧化能力的研究较为少见。目的:观察人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下,其上清的抗氧化能力。方法:采用无血清培养基培养胎儿侧胎盘... 背景:目前关于间充质干细胞的研究大多集中于其免疫调节功能,而关于细胞和培养上清的其抗氧化能力的研究较为少见。目的:观察人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下,其上清的抗氧化能力。方法:采用无血清培养基培养胎儿侧胎盘间充质干细胞,分别于48 h收集P2-P6代细胞培养上清。在空白培养基中添加维生素C 100μmol/L作为阳性对照。检测P2-P6代人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清的总抗氧化能力、清除活性氧自由基的能力和抗氧化酶活性。结果与结论:(1)抗氧化能力:各代次人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的抗氧化能力,且不同代次间的上清具有一定的差异,其中总抗氧化能力与40-80μmol/L的维生素C相当,各代次上清均具有一定的清除二苯基苦基苯肼自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基等自由基清除能力;(2)抗氧化酶活性分析:各代次间的人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清中均可以检测到一定水平的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性;(3)结果提示,在无血清条件下培养胎儿侧胎盘间充质干细胞的上清具有一定的抗氧化能力和抗氧化酶的活性。人胎盘胎儿侧间充质干细胞的抗氧化能力与其旁分泌机制有关,但其中的抗氧化成分及分子机制有待进一步的研究。 展开更多
关键词 干细胞 组织工程 胎盘 分化 胎儿侧 间充质干细胞 血清培养 培养上清 抗氧化 自由基清除 抗氧化酶 旁分泌 细胞治疗 国家自然科学基金
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无血清培养技术的发展
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作者 邹文焘 刘广鹏 《中医耳鼻喉科学研究》 2017年第4期83-88,共6页
随着细胞培养的种类、规模和应用范围的不断扩大以及安全性要求的进一步提高,无血清培养技术的研究已经成为细胞工程领域的重要课题。细胞无血清培养技术适应了当今生命科学研究和生物医药产业发展的新要求,许多类型的细胞无血清培养基... 随着细胞培养的种类、规模和应用范围的不断扩大以及安全性要求的进一步提高,无血清培养技术的研究已经成为细胞工程领域的重要课题。细胞无血清培养技术适应了当今生命科学研究和生物医药产业发展的新要求,许多类型的细胞无血清培养基配方得到了研究开发和优化。本文主要对血清在细胞培养中的作用、无血清培养基的成分改进及优缺点、应用研究进展方面进行了综述。 展开更多
关键词 血清培养 细胞工程 培养
OE19肿瘤干细胞的无血清分离培养以及肿瘤干细胞特性的鉴定 预览 被引量:1
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作者 尹晓然 冯诚 +5 位作者 马一楠 高晓燕 刘欣 贾丽君 张寅斌 张军 《山西医科大学学报》 CAS 2017年第8期800-807,共8页
目的从人Ⅱ型食管胃交界处腺癌OE19细胞中分离富集肿瘤干细胞的悬浮肿瘤细胞球,鉴定该悬浮肿瘤球细胞的肿瘤干细胞生物学特性。方法使用无血清培养法从OE19细胞株中富集得到悬浮肿瘤细胞球,并将其传代扩增;同时常规培养OE19亲本细胞。采... 目的从人Ⅱ型食管胃交界处腺癌OE19细胞中分离富集肿瘤干细胞的悬浮肿瘤细胞球,鉴定该悬浮肿瘤球细胞的肿瘤干细胞生物学特性。方法使用无血清培养法从OE19细胞株中富集得到悬浮肿瘤细胞球,并将其传代扩增;同时常规培养OE19亲本细胞。采用MTT实验、单细胞克隆形成实验、血清分化实验以及Transwell实验,研究OE19悬浮肿瘤球细胞与OE19亲本细胞的增殖、更新、分化和侵袭能力的差异;使用real-time PCR以及Western blot法检测两者肿瘤干细胞标志ABCG2和CD133的表达情况;使用裸鼠成瘤实验研究OE19悬浮肿瘤球细胞以及OE19亲本细胞的体内成瘤能力。由此鉴定悬浮肿瘤球细胞的肿瘤干细胞特性。结果在无血清培养条件下,OE19细胞能够形成悬浮肿瘤细胞球。悬浮肿瘤球细胞具有稳定传代的特性以及多向分化的潜能。OE19悬浮肿瘤球细胞与OE19亲本细胞相比较高表达肿瘤干细胞标志ABCG2和CD133(P〈0.05),其体外增殖、自我更新、克隆形成、侵袭转移以及裸鼠体内成瘤能力均高于OE19亲本细胞(P〈0.05)。结论通过无血清非黏附培养法可以有效富集OE19悬浮肿瘤细胞球。该悬浮肿瘤球细胞高表达肿瘤干细胞标志分子ABCG2和CD133,具有肿瘤干细胞特性。 展开更多
关键词 食管胃交界处腺癌 OE19细胞 血清培养 肿瘤干细胞 肿瘤细胞球
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乳腺癌干细胞 BLM、RecQ4蛋白表达变化及意义 预览 被引量:2
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作者 鲁媛 葛章文 刘杰麟 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第4期17-20,共4页
目的:探讨乳腺癌干细胞BLM、RecQ4蛋白表达变化及其临床意义。方法采用无血清培养法从乳腺癌MDA-MB-435细胞中分离乳腺癌干细胞(以下称干细胞),并鉴定。观察MDA-MB-435细胞裸鼠及干细胞成瘤能力,RT-PCR法检测二者ATP结合盒膜转运蛋... 目的:探讨乳腺癌干细胞BLM、RecQ4蛋白表达变化及其临床意义。方法采用无血清培养法从乳腺癌MDA-MB-435细胞中分离乳腺癌干细胞(以下称干细胞),并鉴定。观察MDA-MB-435细胞裸鼠及干细胞成瘤能力,RT-PCR法检测二者ATP结合盒膜转运蛋白G2(ABCG2)mRNA相对表达量,Western blotting 法和免疫组化法检测二者BLM、RecQ4蛋白表达。结果干细胞膜表面CD44+CD24-/low比例明显高于、CD44+CD24+比例明显低于MDA-MA-435细胞(P均<0.05);两种细胞膜表面CD44-CD24+、CD44-CD24-比例比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。裸鼠成瘤实验结果显示,与接种相同密度MDA-MB-435细胞比较,接种干细胞的裸鼠成瘤时间早、肿瘤体积大;干细胞ABCG2 mRNA相对表达量为0.753±±±0.025,MDA-MB-435细胞为0.563±0.112;两者比较P<0.05。干细胞BLM蛋白表达低、RecQ4蛋白表达高于MDA-MB-435细胞(P均<0.05)。结论乳腺癌干细胞成瘤能力强;细胞BLM蛋白表达降低、RecQ4蛋白表达升高可能为其机制。 展开更多
关键词 乳腺癌 血清培养 乳腺癌干细胞 RecQ家族解旋酶
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二次贴壁法高效制备人脐带间充质干细胞 被引量:4
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作者 芦慧颖 杜文敬 +5 位作者 刘春香 孟庆雪 付寅生 石佳宁 张婷婷 张怡 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第6期649-654,共6页
目的采用二次贴壁法高效制备人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)。方法将传统组织块贴壁法弃掉的脐带组织块转移至新的培养瓶中进行二次贴壁,分离hUC-MSCs,并用无血清培养体系连续传... 目的采用二次贴壁法高效制备人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)。方法将传统组织块贴壁法弃掉的脐带组织块转移至新的培养瓶中进行二次贴壁,分离hUC-MSCs,并用无血清培养体系连续传代,镜下观察细胞形态;分别检测不同代次细胞的增殖能力、细胞周期、免疫表型、多向分化能力。结果二次贴壁法分离的hUC-MSCs在第4天即出现细胞克隆,第8天汇合度可达70%,经过二次贴壁法,1根20 cm的脐带组织共获得P3间充质干细胞(MSCs)总数为1×10~9个。二次贴壁分离的细胞增殖能力旺盛,与一次贴壁获得的干细胞同代次平均倍增时间差异无统计学意义(P〉0.05)。传统贴壁法与二次贴壁分离的细胞均表达超过98%的CD73、CD90、CD105和低于2%的CD34、CD45、CD14、CD79a、HLA-DR,且该细胞具有分化为成骨、成软骨和成脂能力。结论经无动物源培养体系体外扩增的二次贴壁分离方法可以获得大量具有MSCs生物学特性的hUC-MSCs,为其规模化临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 二次贴壁法 血清培养
养精胶囊提取液对精原干细胞增殖的影响 预览 被引量:1
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作者 李俊涛 张培海 +2 位作者 曲晓伟 李郑生 李松伟 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第14期2104-2109,共6页
背景:临床研究显示补肾填精中药能够促进精原干细胞的增殖和分化。目的:验证养精胶囊提取液对精原干细胞增殖的影响。方法:取雄性小鼠睾丸,分离精原干细胞,用无血清培养液同步化24 h后,加入10,50,100 mg/L养精胶囊提取液24 h,观察对... 背景:临床研究显示补肾填精中药能够促进精原干细胞的增殖和分化。目的:验证养精胶囊提取液对精原干细胞增殖的影响。方法:取雄性小鼠睾丸,分离精原干细胞,用无血清培养液同步化24 h后,加入10,50,100 mg/L养精胶囊提取液24 h,观察对精原干细胞活性、增殖及细胞周期变化。结果与结论:(1)与对照组相比,养精胶囊提取液干预的细胞数量增加、活力增强、S期细胞比例增加,BrdU标记的精原干细胞的数量增加,其中以50 mg/L养精胶囊提取液的效果最为显著;(2)提示养精胶养精胶囊提取液能促进精原干细胞的增殖和促进精原干细胞活力的增加。 展开更多
关键词 精子 细胞增殖 组织工程 干细胞 培养 养精胶囊提取液 精原干细胞 小鼠 细胞培养 血清培养 MTT法 细胞周期 国家自然科学基金
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无血清微载体培养Vero细胞增殖传染性法氏囊病毒 预览
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作者 吴培培 冯磊 +3 位作者 唐应华 褚轩 王伟峰 侯继波 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第2期244-246,共3页
为了获得用生物反应器无血清培养基微载体悬浮培养Vero细胞增殖传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的工艺参数,通过驯化Vero细胞适应无血清微载体悬浮培养后,再优化传染性法氏囊病毒在此细胞上的增殖工艺参数,包... 为了获得用生物反应器无血清培养基微载体悬浮培养Vero细胞增殖传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的工艺参数,通过驯化Vero细胞适应无血清微载体悬浮培养后,再优化传染性法氏囊病毒在此细胞上的增殖工艺参数,包括初始细胞密度、微载体浓度、IBDV的感染复数(MOI)、接种时间和病毒收获时间。结果表明:获得适应无血清培养的细胞株——V0株,建立细胞库。获得3 L反应器中培养V0细胞增殖IBDV工艺参数,其初始接种密度为3×105cell/m L、微载体浓度为3 g/L、细胞培养1 d后按MOI为0.2接种IBDV,接毒后120 h收获病毒,可达最高病毒效价109.307TCID50/m L。本研究获得的Vero细胞、IBDV以及各项工艺参数为后续大规模悬浮培养制备法氏囊疫苗提供了生物材料和技术支持。 展开更多
关键词 血清培养 Vero细胞 传染性法氏囊病毒(IBDV) 微载体 生物反应器 增殖工艺
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胃癌MKN-45细胞系的无血清培养技术及干细胞的制备 预览 被引量:2
15
作者 姜贻乾 管晓翔 +5 位作者 郭庆敏 徐小平 何一扬 梁军才 安素红 韩丽娟 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第4期380-383,共4页
目的胃癌干细胞的制备困难一直是阻碍胃癌研究进展的主要因素。文中研究无血清培养基悬浮培养胃癌MKN-45细胞系技术,并根据胃癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)的生物学标记筛选出该细胞系中的干细胞。方法 MKN-45细胞系在无血清培养... 目的胃癌干细胞的制备困难一直是阻碍胃癌研究进展的主要因素。文中研究无血清培养基悬浮培养胃癌MKN-45细胞系技术,并根据胃癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)的生物学标记筛选出该细胞系中的干细胞。方法 MKN-45细胞系在无血清培养基中培养8周后,取对数生长期的MKN-45细胞以Hoechst33342孵育后流式细胞仪(FACS)检测侧群细胞。当侧群细胞达约25%时,收集全部细胞微球体,加荧光标记的CD133和CD44单抗孵育后FACS筛选,选CDl33^+CD44^+细胞即为胃癌干细胞。结果胃癌MKN-45细胞系中约40%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖并形成自由飘浮的细胞球。双苯酰胺33342染色检测提示MKN-45细胞中侧群细胞含量为3.4%,而细胞球中侧群细胞细胞含量则明显增高,可达到26.9%;收集的侧群细胞通过FACS检测表面标记,MKN-45细胞CDl33^+CD44^+细胞含量为11.2%,而细胞球中CD133^+CD44^+细胞含量为90.3%。结论应用无血清培养基悬浮培养法能成功获得CSCs富集的肿瘤球,Hoechst33342及表面标记双重检测提取法可筛选出其中的CSCs,并可作为今后胃癌干细胞研究的实验基础。 展开更多
关键词 胃癌干细胞 血清培养 侧群细胞 CDl33+ CD44+
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无血清培养对人绒毛膜来源间充质干细胞免疫活性的影响
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作者 薛一峰 黄建荣 +1 位作者 苗宗宁 孙鸿丽 《国际免疫学杂志》 CAS 2016年第6期551-555,共5页
目的 评价人绒毛膜来源间充质干细胞(MSCs)在无血清培养体系中的免疫活性,探索干细胞安全的应用于临床的条件.方法 应用无血清与含10%胎牛血清培养基培养人绒毛膜来源MSCs,比较两种培养条件下培养细胞的形态、免疫表型、分化潜能及... 目的 评价人绒毛膜来源间充质干细胞(MSCs)在无血清培养体系中的免疫活性,探索干细胞安全的应用于临床的条件.方法 应用无血清与含10%胎牛血清培养基培养人绒毛膜来源MSCs,比较两种培养条件下培养细胞的形态、免疫表型、分化潜能及对混合淋巴细胞反应的抑制作用等生物学特性.结果 两种方法培养的细胞形态相似,表达CD73、CD90、CD105,不表达CD34、人类白细胞抗原(HLA)-DR;具有多向分化潜能,同样能明显抑制混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖,抑制率与加入的干细胞数量成正比,可以减少混合淋巴细胞反应中白细胞介素2、γ-干扰素的分泌.结论 人绒毛膜来源间充质干细胞经无血清培养后仍保持原有的细胞形态、免疫表型、多向分化等生物学特性,没有改变免疫学活性.无血清培养可取代有血清培养用于细胞培养,避免经有血清培养的干细胞移植等临床应用研究引起的免疫原性反应及人畜共患病. 展开更多
关键词 血清培养 人绒毛膜来源间充质干细胞 免疫活性
啮齿类海马神经元的原代培养及方法改进 预览 被引量:1
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作者 陈学周 毕意辉 +2 位作者 张可可 张明凯 尤涛 《安徽农学通报》 2016年第2期6-7,13共3页
目的:通过对新生啮齿类海马神经元的分离和培养,尝试建立一个简单、稳定、高效的啮齿类海马神经元原代培养方法,为脊髓损伤的相关分子机制研究提供目的细胞。方法:取新生SD乳鼠的海马组织,通过低浓度胰酶消化制成细胞悬液、4h差速贴... 目的:通过对新生啮齿类海马神经元的分离和培养,尝试建立一个简单、稳定、高效的啮齿类海马神经元原代培养方法,为脊髓损伤的相关分子机制研究提供目的细胞。方法:取新生SD乳鼠的海马组织,通过低浓度胰酶消化制成细胞悬液、4h差速贴壁后使用无血清Neurobasal培养基培养,倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫荧光对海马神经元相关微管蛋白-2(MAP2)行特异性染色,结合DAPI核染色鉴定神经元。结果:该方法培养的海马神经元生长状态良好,纯度较高。结论:采用低浓度胰酶消化,差速贴壁及无血清培养啮齿类海马神经元符合体外细胞实验要求,为进一步研究提供良好的目的细胞。 展开更多
关键词 海马神经元 低浓度胰酶 差速贴壁 血清培养
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无血清培养人牙龈间充质干细胞对免疫细胞的作用
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作者 竺王玉 朱蓓 +2 位作者 齐晓艳 陈冬冬 郑颂国 《中国卫生检验杂志》 CAS 2016年第23期3382-3384,3388共4页
目的建立人牙龈间充质干细胞(GMSCs)的无血清培养方法,探讨其对免疫细胞的调节作用。方法将原代GMSC后分别用无血清培养基与10%胎牛血清培养基培养,至P3代观察2组细胞的生物学性状及对免疫细胞的调节作用。结果 P3代无血清与10%FBS培... 目的建立人牙龈间充质干细胞(GMSCs)的无血清培养方法,探讨其对免疫细胞的调节作用。方法将原代GMSC后分别用无血清培养基与10%胎牛血清培养基培养,至P3代观察2组细胞的生物学性状及对免疫细胞的调节作用。结果 P3代无血清与10%FBS培养GMSCs均为纺锤状,呈集落、鱼群状生长,两者成脂成骨能力差异无统计学意义(P〉0.05),且CD29、CD73、CD90、CD105阳性率均〉95%,CD33、CD34、CD86、HLA-DR阳性率均〈5%。无血清与10%FBS培养GMSCs 24 h和48 h后增殖率差异无统计学意义(P〉0.05);但72 h后10%FBS增殖率高于无血清培养,差异有统计学意义(P〈0.05)。无血清与10%FBS培养GMSCs抑制单个核细胞增殖的抑制率差异无统计学意义(P〉0.05)。结论无血清培养GMSCs生物学性状及免疫调节能力与10%FBS培养GMSCs无明显区别,可用于对GMSCs培养,以避免有血清培养对后续细胞免疫治疗的潜在危害。 展开更多
关键词 间充质干细胞 牙龈 血清培养 免疫调节
人肺腺癌细胞系中肿瘤干细胞的分离培养及鉴定 预览 被引量:1
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作者 杨佳 方志红 +4 位作者 吴建春 徐静 殷晓聆 赵凡尘 李雁 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期89-94,共6页
目的:从人肺腺癌细胞系A549及H1299中分离富集含肿瘤干细胞的细胞王拉并鉴定其生物学特性。方法:用无血清悬浮培养的方法从人肺腺癌A549及H1299细胞株中富集得到肿瘤细胞珠。将肿瘤细胞球传代扩增,体外利用CCK-8法、平皿克隆以及Tran... 目的:从人肺腺癌细胞系A549及H1299中分离富集含肿瘤干细胞的细胞王拉并鉴定其生物学特性。方法:用无血清悬浮培养的方法从人肺腺癌A549及H1299细胞株中富集得到肿瘤细胞珠。将肿瘤细胞球传代扩增,体外利用CCK-8法、平皿克隆以及Transwell小室实验,研究细胞球的增殖情况、自我更新和侵袭转移能力;通过RT-PCR检测干细胞特异性转录因子Oct4、Nanog基因表达情况;体内利用裸鼠移植瘤形成实验研究肺癌细胞球的成瘤能力。鉴定细胞球的肿瘤干细胞特性。结果:在无血清悬浮培养下,A549及H1299细胞株3-6天后能形成稳定传代的肿瘤悬浮球,悬浮球的体外自我更新、克隆形成和侵袭转移等能力均高于其亲本细胞(P〈0.05);干细胞核心基因Oct4和Nanog的mRNA表达水平明显升高(P〈0.05);A549悬浮球可以明显提高裸鼠体内成瘤能力。结论:通过无血清悬浮培养法可有效富集A549及H1299细胞系中的干细胞成分,该法可成为快速易行构建肺腺癌干细胞模型的方法。 展开更多
关键词 肺腺癌 肿瘤干细胞 血清培养 分离 鉴定
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无血清培养人胚胎干细胞的体系研究与进展 预览
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作者 张哲 曾宪卓 +2 位作者 鲁菲 郭明辉 董慧君 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第41期6711-6717,共7页
背景:人胚胎干细胞有永久自我更新和向外、中和内胚层分化的能力,具有重要的基础研究价值和临床应用前景,可应用于再生医学、药物毒性筛选、早期胚胎发育、细胞移植治疗和基因治疗等领域,但是在限定条件下的大规模细胞培养、控制和定... 背景:人胚胎干细胞有永久自我更新和向外、中和内胚层分化的能力,具有重要的基础研究价值和临床应用前景,可应用于再生医学、药物毒性筛选、早期胚胎发育、细胞移植治疗和基因治疗等领域,但是在限定条件下的大规模细胞培养、控制和定向分化技术的发展仍然具有实质性的挑战。在治疗应用方面,许多研究者试图建立可在无异源限定性和规模化培养体系中维持细胞多能性的培养方法。目的:综述近几年报道的人胚胎干细胞的无血清培养体系研究进展,重点是在发展适于治疗用途的无血清和无异源培养体系进程中,面临的挑战和进步。方法:应用计算机检索CNKI和Pub Med学术数据库中2008至2015年关于人胚胎干细胞无血清培养的文章,排除观点重复和陈旧的文章,最后对58篇文章进行归纳汇总。结果与结论:研究者已经在使用人源性饲养层细胞、无饲养层基质及限定性成分培养基上做了许多尝试,旨在选择合适的基质和培养基,使异源性成分达到最小化或者不使用,以求获得临床级别的细胞株。但是目前的细胞制品距离临床应用还有很大的距离,仍有很多问题需要解决,比如细胞制品的规范化、标准化、个性化定制等。相信随着干细胞研究和行业的规范,胚胎干细胞产品将会在临床得到广泛应用。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 培养 血清 培养 条件性 组织工程 干细胞 培养 血清培养 人胚胎干细胞 多能性 饲养层 基质 限定性培养 科技型中小企业技术创新基金 深圳市战略新兴产业发展专项资金
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