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青蒿琥酯对日本血吸虫诱导的早期肝纤维化小鼠热休克蛋白47表达影响的研究
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作者 周永华 徐辰 +6 位作者 杨莹莹 周春刚 梅丛进 赛雪 许永良 杨俊齐 沈丽娟 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期115-120,126共7页
目的研究青蒿琥酯对日本血吸虫诱导的早期肝纤维化小鼠血清和肝组织中热休克蛋白47(HSP47)表达的影响,探讨青蒿琥酯抑制日本血吸虫病肝纤维化作用的可能机制。方法30只ICR小鼠随机分成感染模型组、感染治疗组和健康对照组等3组,每组10... 目的研究青蒿琥酯对日本血吸虫诱导的早期肝纤维化小鼠血清和肝组织中热休克蛋白47(HSP47)表达的影响,探讨青蒿琥酯抑制日本血吸虫病肝纤维化作用的可能机制。方法30只ICR小鼠随机分成感染模型组、感染治疗组和健康对照组等3组,每组10只。感染组每鼠经腹部皮肤贴壁感染日本血吸虫尾蚴(20±1)条,健康对照组不感染。感染后第6周,用吡喹酮300mg/kg2日疗法杀虫,同时感染治疗组小鼠按60mg/kg剂量每天腹腔注射0.3ml青蒿琥酯,连续2周;感染模型组和健康对照组腹腔注射灭菌生理盐水0.3ml。治疗结束次日,各组小鼠用戊巴比妥钠麻醉后采血,应用ELISA检测血清HSP47和转化生长因子β1(TGF-β1)含量,取小鼠肝、脾称重,计算脏器指数。取部分肝组织,应用碱水解法检测肝羟脯氨酸含量。取部分肝组织,用10%多聚甲醛固定,行苏木素-伊红(HE)和Masson染色,观察肝组织病理学变化和胶原增生情况。取部分肝组织,应用实时荧光定量PCR检测肝脏HSP47mRNA、Ⅰ型胶原α1链mRNA表达水平。结果健康对照组小鼠肝脏指数为(4.72±0.52),低于感染模型组(10.50±0.57)和感染治疗组(8.31±0.52)(P<0.01),感染治疗组小鼠肝脏系数与感染模型组差异有统计学意义(P<0.01);健康对照组小鼠脾脏系数为(0.38±0.04),低于感染模型组(2.41±0.44)和感染治疗组(2.26±0.06)(P<0.01),感染治疗组小鼠脾脏系数与感染模型组差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,感染治疗组小鼠肝脏肿大程度和表面虫卵结节较感染模型对照组轻、小。Masson染色结果显示,感染治疗组小鼠肝脏肉芽肿大小和胶原纤维面积均较感染模型组小,感染模型组胶原增生面积为(25.78±2.61)%,高于感染治疗组的(6.87±3.54)%和健康对照组的(1.19±0.18)%(P<0.01)。ELISA检测结果显示,感染治疗组小鼠血清HSP47、TGF-β1含量分别为(169.81±20.94)pg/ml、(20.82±1.90)ng/ml,均低于感染模 展开更多
关键词 热休克蛋白47 青蒿琥酯 肝纤维化 日本血吸虫
筛选和鉴定与东方田鼠抗性基因ILKAP表达蛋白相互结合的日本血吸虫童虫蛋白
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作者 李荣 熊德慧 胡维新 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期121-126,共6页
目的筛选和鉴定与东方田鼠抗性基因整合素连接激酶相关丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(ILKAP)表达蛋白相互结合的日本血吸虫童虫蛋白。方法提取东方田鼠骨髓细胞蛋白和日本血吸虫童虫蛋白,进行免疫共沉淀,实验组为东方田鼠骨髓蛋白+日本血吸虫童... 目的筛选和鉴定与东方田鼠抗性基因整合素连接激酶相关丝氨酸/苏氨酸磷酸酶(ILKAP)表达蛋白相互结合的日本血吸虫童虫蛋白。方法提取东方田鼠骨髓细胞蛋白和日本血吸虫童虫蛋白,进行免疫共沉淀,实验组为东方田鼠骨髓蛋白+日本血吸虫童虫蛋白+ILKAP抗体+磁性珠子,阴性对照组以兔IgG抗体代替ILKAP抗体,阳性对照组为东方田鼠骨髓蛋白或日本血吸虫童虫蛋白。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,切取差异性蛋白条带通过基质辅助激光解吸飞行时间质谱仪(MALDI-TOF-MS)鉴定,获得的混合物肽片段利用Mascot软件进行分析检索。分别以东方田鼠骨髓cDNA和日本血吸虫童虫cDNA为模板,RT-PCR扩增东方田鼠ILKAP(MfILKAP)基因和日本血吸虫表膜抗原(SjTA)基因。将MfILKAP和SjTA基因分别克隆至真核表达载体Flag-pCMV-2b和Myc-pcDNA3.1/(-)b中,构建的重组质粒Flag-ILKAP-pCMV-2b和Myc-TA-pcDNA3.1/(-)b共转染至HEK293T细胞中作为实验组,设阴性对照组Myc-TA-pcDNA3.1/(-)b或Flag-ILKAP-pCMV-2b和空白对照组Myc-pcDNA3.1/(-)b或Flag-pCMV-2b。用抗体Myc、Flag以及ILKAP分别与转染后的HEK293T细胞总蛋白进行免疫共沉淀和蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果东方田鼠骨髓细胞蛋白和日本血吸虫童虫蛋白经过免疫共沉淀实验,结果显示,实验组与阴性对照组、阳性对照组相比,有差异条带。经MAIDI-TOF-MS鉴定,利用Mascot软件中的串级质谱数据搜索功能进行搜索鉴定,鉴定出与东方田鼠ILKAP抗体相互作用的日本血吸虫童虫蛋白8种。RT-PCR结果显示,ILKAP和TA在东方田鼠骨髓和日本血吸虫童虫中均有表达,东方田鼠骨髓ILKAP的扩增产物为1100~1200bp,理论值为1147bp,日本血吸虫童虫TA基因的扩增产物大小为500~600bp,理论值为561bp。质粒pCMV-Tag2b、pcDNA3.1/myc-His(-)b经酶切后,均有单一条带,分别约为4300、5500bp;重组� 展开更多
关键词 东方田鼠 日本血吸虫 整合素连接激酶相关丝氨酸/苏氨酸磷酸酶 免疫共沉淀
日本血吸虫成虫可溶性蛋白和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白抑制小鼠结肠炎的研究
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作者 武艺 李路 +6 位作者 徐永伟 邢瑞欣 胡静 王书书 沈继龙 徐元宏 陈熙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期127-136,共10页
目的探讨日本血吸虫可溶性成虫蛋白(SjSWP)和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白(rSjcystatin)对模拟炎症性肠病的小鼠结肠炎的作用。方法24只BALB/c雌鼠分为健康对照组、磷酸盐缓冲液组(PBS组)、rSjcystatin治疗组(rSjcystatin组)、SjSWP治疗... 目的探讨日本血吸虫可溶性成虫蛋白(SjSWP)和重组半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白(rSjcystatin)对模拟炎症性肠病的小鼠结肠炎的作用。方法24只BALB/c雌鼠分为健康对照组、磷酸盐缓冲液组(PBS组)、rSjcystatin治疗组(rSjcystatin组)、SjSWP治疗组(SjSWP组)。PBS、rSjcystatin、SjSWP组用0.1ml5%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠诱导结肠炎,灌肠后6、24h分别腹腔注射100μlPBS、50μgrSjcystatin、50μgSjSWP;健康对照组在相应时间点用等量的PBS灌肠及腹腔注射。TNBS灌肠72h后无痛处死各组小鼠,检测宏观评分、结肠长度、髓过氧化物酶活性和显微镜下微观评分来评估炎症参数和病理改变。流式细胞仪检测小鼠脾脏中Th1和Th2及T调节细胞(Tregs)的比例。ELISA检测小鼠结肠组织匀浆上清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)、IL-13、IL-10等炎性细胞因子的水平。多组计量资料分析采用单因素方差分析,多组均数间的两两比较用Student-Newman-Keuls检验。结果TNBS诱导的结肠炎小鼠表现出明显的炎症和病理学特征,表现为体质量下降,便血、腹泻、结肠缩短、溃疡,以及炎性细胞因子IFN-γ、炎性细胞浸润和髓过氧化物酶活性的增加。与PBS组相比,rSjcystatin和SjSWP的干预治疗可以显著改善TNBS诱导的结肠炎症,表现为宏观评分(改善结肠糜烂、黏连、溃疡和缩短)和微观评分(减少组织损伤和炎症)的降低。健康对照组、PBS组、rSjcystatin组和SjSWP组小鼠结肠的宏观评分分别为0、9.8±0.8、4.3±1.0和4.5±1.4,微观评分分别为0、6.0±0.4、2.2±0.5和2.8±0.6,rSjcystatin组、SjSWP组与PBS组相比差异均有统计学意义(F=57.8、34.1,P<0.01),rSjcystatin组与SjSWP组间差异均无统计学意义(P>0.05)。健康对照组、PBS组、rSjcystatin组和SjSWP组髓过氧化物酶分别为0.3±0.0、1.4±0.1、0.6±0.1和0.6±0.1(F=32.5,P<0.01);脾脏Tregs比例分别为(4.4±0.7)%、(8.2±3.1)%、(18.4±2.1)%和(13.4±1.9)% 展开更多
关键词 日本血吸虫 可溶性成虫蛋白 半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白 结肠炎 免疫调节
单一性别日本血吸虫尾蚴的获得
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作者 魏梦甜 王阳 +1 位作者 张璧辉 孙军 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期111-114,共4页
阐明人工制备阳性钉螺释放日本血吸虫尾蚴性别类型的规律和特点,为需要获取单一性别尾蚴的研究提供理论依据。通过毛蚴对钉螺'一对一'(1只毛蚴感染1只钉螺)和'多对一'(约10只毛蚴感染1只钉螺)感染方式分别制备阳性钉螺... 阐明人工制备阳性钉螺释放日本血吸虫尾蚴性别类型的规律和特点,为需要获取单一性别尾蚴的研究提供理论依据。通过毛蚴对钉螺'一对一'(1只毛蚴感染1只钉螺)和'多对一'(约10只毛蚴感染1只钉螺)感染方式分别制备阳性钉螺。分别用单只钉螺释放的尾蚴感染单只小鼠, 3周后收集小鼠体内的日本血吸虫童虫,通过显微镜观察鉴定童虫的性别,提取童虫DNA,用RRPS、 M5A、 MPA、 2AAA、 MF1、 J5N等6对微卫星引物进行PCR扩增,扫板分析短串联重复(STR)位点的多态性,比较每一个钉螺所释放全部尾蚴所发育成的童虫基因型差异。镜检结果表明,'一对一'感染的4只小鼠所收集的血吸虫童虫, 1只为全雌虫, 3只为全雄虫;'多对一'感染的43只小鼠所收集的血吸虫童虫, 19只为全雌虫(44.2%), 7只为全雄虫(16.3%), 17只为雌雄虫共存(39.5%)。各虫体DNA样品, PCR产物琼脂糖电泳的结果和STR扫板分析结果基本一致,但是PCR产物直接电泳分析结果不能精确显示扩增对象的多态性。STR扫板分析结果显示,'一对一'感染的虫体,STR的峰型相似,提示基因型相似,但是同一钉螺来源的不同虫体间仍存在细微差异;'多对一'感染的虫体,STR样品峰型有较大差异,提示样品具有不同的基因型,其中单一钉螺释放的所有尾蚴发育成的童虫有如下特点:雌雄共存,但可分为雌多雄少、雌少雄多和雌雄对等3种情况;全雄虫,基因型相同或不同;全雌虫,基因型相同或不同。总之,毛蚴'一对一'感染钉螺,可以获得基因型一致的、单一性别的尾蚴;混合感染的'多对一'感染方式也可得到单一性别尾蚴,但单性尾蚴基因型不一致。 展开更多
关键词 日本血吸虫 单性尾蚴 毛蚴 钉螺
白藜芦醇调控Th17/Treg抑制血吸虫病肝脏肉芽肿 预览
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作者 韩琴 朱继峰 +2 位作者 吕年银 佟书娟 张伟伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期132-138,共7页
目的探讨白藜芦醇对血吸虫病肝脏肉芽肿作用,分析其对Th17、Treg应答的影响。方法45只C57BL/6小鼠感染日本血吸虫3周后,随机分为感染组、灌胃白藜芦醇治疗组、灌胃吡喹酮治疗组,另取15只正常小鼠为健康对照组。感染第9周,取肝脏HE染色... 目的探讨白藜芦醇对血吸虫病肝脏肉芽肿作用,分析其对Th17、Treg应答的影响。方法45只C57BL/6小鼠感染日本血吸虫3周后,随机分为感染组、灌胃白藜芦醇治疗组、灌胃吡喹酮治疗组,另取15只正常小鼠为健康对照组。感染第9周,取肝脏HE染色观察虫卵肉芽肿,计数中性粒细胞;RT-PCR检测肝脏中IL-17A、Foxp3、CXCL1、CXCL2水平;流式细胞术检测脾脏中Th17、Treg应答。用PBS、SEA刺激正常小鼠脾脏细胞,分别加入白藜芦醇和吡喹酮,流式细胞术检测Th17、Treg应答。结果与感染组相比,白藜芦醇治疗组,肝脏肉芽肿减轻,肉芽肿中性粒细胞数量减少(P<0.01),Th17应答减弱(P<0.05),Treg应答增强(P<0.05),肝脏IL-17A、CXCL1、CXCL2表达均降低(P<0.05),Foxp3表达增高(P<0.01)。白藜芦醇促使SEA刺激的T细胞往Th17细胞分化减少(P<0.05),往Treg细胞分化增多(P<0.05)。结论白藜芦醇通过降低Th17应答,增强Treg应答,抑制血吸虫病肝脏肉芽肿。 展开更多
关键词 日本血吸虫 白藜芦醇 肉芽肿 Th17 TREG 吡喹酮
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结合重组酶介导的核酸等温扩增和荧光探针快速检测日本血吸虫基因片段
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作者 赵松 刘燕红 +6 位作者 李婷 李伟 张键锋 郭利川 应清界 羊海涛 杨坤 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期23-27,共5页
目的结合重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification, RAA)和荧光探针方法建立日本血吸虫特异性基因片段的快速检测方法。方法以日本血吸虫G28 (Sj G28)基因片段作为靶序列,应用DNAMAN 7.0软件设计合成引物及荧光探针,... 目的结合重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase aided amplification, RAA)和荧光探针方法建立日本血吸虫特异性基因片段的快速检测方法。方法以日本血吸虫G28 (Sj G28)基因片段作为靶序列,应用DNAMAN 7.0软件设计合成引物及荧光探针,建立荧光RAA反应体系。扩增不同拷贝数的Sj G28重组质粒,评价荧光RAA检测的敏感性;分别以日本血吸虫、曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫、华支睾吸虫基因组为模板进行荧光RAA检测,以评价该方法的特异性。采用荧光RAA分别检测500、 200和50条日本血吸虫尾蚴感染的兔粪中虫卵DNA。分别在50只阴性钉螺中混入1、 2、 3、 4、 5、 10只阳性钉螺,并提取DNA进行荧光RAA检测。结果以不同拷贝数的Sj G28重组质粒为模板进行荧光RAA扩增,在5 min时即可观察到明显的荧光信号,随着拷贝数的不断降低,检测到荧光信号的时间也随之延长,不同拷贝数的扩增均在10 min内完成,最低可检出的质粒浓度为10拷贝/μl。以曼氏血吸虫、细粒棘球绦虫、十二指肠钩口线虫、似蚓蛔线虫及华支睾吸虫基因组DNA为模板的荧光RAA扩增结果均为阴性。不同数量尾蚴感染的兔粪中提取的DNA样品经荧光RAA检测,均能得到有效的扩增,检测可在15 min内完成。含不同数量阳性钉螺的50只阴性钉螺提取的日本血吸虫DNA经荧光RAA检测,均能得到有效的扩增,检测可在10 min内完成。结论本研究建立的可检测日本血吸虫核酸片段的荧光RAA方法,反应快捷,敏感性和特异性均较高。 展开更多
关键词 日本血吸虫 基因检测 核酸等温扩增 荧光探针 重组酶
日本血吸虫感染小鼠的髓源抑制细胞对T细胞的免疫抑制 预览
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作者 高勇强 黎丽 +3 位作者 胡丽 梁瑜 曹劲松 肖建华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期269-273,共5页
目的:研究日本血吸虫感染小鼠模型中的髓源抑制细胞(MDSCs)的免疫抑制功能及对T细胞的作用机制。方法:构建日本血吸虫感染BALB/c小鼠模型,流式细胞术检测MDSCs动态比例变化,免疫磁珠分选小鼠骨髓中单核系MDSCs(CD11b^+Gr1^+Ly6G^-)和粒... 目的:研究日本血吸虫感染小鼠模型中的髓源抑制细胞(MDSCs)的免疫抑制功能及对T细胞的作用机制。方法:构建日本血吸虫感染BALB/c小鼠模型,流式细胞术检测MDSCs动态比例变化,免疫磁珠分选小鼠骨髓中单核系MDSCs(CD11b^+Gr1^+Ly6G^-)和粒系MDSCs(CD11b^+Gr1^+Ly6G^+)亚群细胞,Write-Giemsa染色进行形态学鉴定;CFSE法检测单核系和粒系MDSCs亚群对CD4^+T、CD8^+T细胞增殖的抑制作用,Real-time PCR方法检测细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-13、TGF-β和精氨酸酶(ArgⅠ)、一氧化氮合酶2(NOS2)的表达。结果:血吸虫感染模型小鼠的MDSCs较对照组小鼠明显增多,以粒系MDSCs(CD11b^+Gr1^+Ly6G^+)亚群增多为主。两个亚群细胞均能降低CD4^+T、CD8^+T细胞的增殖活性,粒系亚群MDSCs的抑制作用更显著;Real-time PCR结果显示两个亚群细胞的细胞因子IL-4、IL-10、IL-13、TNF-α、IFN-γ以及ArgⅠ、NOS2的表达水平均不同程度升高。结论:血吸虫感染模型小鼠体内的MDSCs显著增高,单核系MDSCs(CD11b^+Gr1^+Ly6G^-)和粒系MDSCs(CD11b^+Gr1^+Ly6G^+)亚群均能抑制CD4^+T、CD8^+T细胞增殖,其作用机制可能与两亚群细胞均能上调相关细胞因子IL-4、IL-10、IL-13和ArgⅠ、NOS2的表达有关。 展开更多
关键词 日本血吸虫 髓源抑制细胞(MDSCs) 免疫抑制 T细胞
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甲氟喹和卤泛曲林伍用对感染日本血吸虫小鼠疗效评价 预览
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作者 范久波 李保安 刘海菊 《世界最新医学信息文摘(电子版)》 2019年第9期91-92,共2页
目的分析感染日本血吸虫的小鼠临床以甲氟喹、卤泛曲林配合治疗的效果。方法选取健康清洁级Wistar小鼠90只随机分为对照组、单一组、联合组,每组小鼠30只,所有小鼠均感染日本血吸虫尾蚴20条,在感染35 d后,单一组随机选15只小鼠小剂量用... 目的分析感染日本血吸虫的小鼠临床以甲氟喹、卤泛曲林配合治疗的效果。方法选取健康清洁级Wistar小鼠90只随机分为对照组、单一组、联合组,每组小鼠30只,所有小鼠均感染日本血吸虫尾蚴20条,在感染35 d后,单一组随机选15只小鼠小剂量用药甲氟喹200 mg/kg,另外15只大剂量400 mg/kg,联合组小鼠随机选15只小剂量使用甲氟喹、卤泛曲林200 mg/kg、4 mg/kg,另外15只两种药物大剂量使用均为400 mg/kg、8 mg/kg,对照组使用生理盐水,治疗7、14、21、28、35 d后,单一组、联合组取不同剂量治疗的3只小鼠杀死,对照组取6只小鼠杀死,取其肝脏以10%甲醛固定,观察肝脏内含有成熟虫卵的肉芽肿平均直径变化情况。结果对照组肉芽肿直径高于单一组、对照组小鼠,联合组肉芽肿直径低于单一组小剂量,联合组大剂量肉芽肿直径低于单一组,P<0.05。结论临床对日本血吸虫感染小鼠治疗时,以甲氟喹、卤泛曲林配合使用,能有效灭杀血吸虫,抑制虫卵肉芽肿形成。 展开更多
关键词 疗效 日本血吸虫 卤泛曲林 甲氟喹
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吡喹酮合成新工艺
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《中国制药信息》 2018年第1期15-16,共2页
吡喹酮又名环吡异喹酮、8440等,为广谱抗寄生虫病药物。它抗蠕虫谱很广,对日本血吸虫、埃及血吸虫、曼氏血吸虫等均有杀灭作用。此外,它对并殖吸虫(肺吸虫)、华支睾吸虫、包虫、囊虫、孟氏裂头蚴、姜片虫、绦虫等也有杀灭作用。
关键词 吡喹酮 抗寄生虫病药物 工艺 合成 杀灭作用 日本血吸虫 埃及血吸虫 曼氏血吸虫
全国家畜血吸虫病疫情降到历史最低水平 预览
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《新疆畜牧业》 2018年第10期34-35,共2页
血吸虫病是由日本血吸虫寄生于人或哺乳动物引起的一种人畜共患寄生虫病.晚期病人出现肝硬化、腹水等症状,是严重危害人民群众身体健康和生命安全、影响经济社会发展的重大人畜共患病。我国历史上主要流行于长江流域及南方12省(区、... 血吸虫病是由日本血吸虫寄生于人或哺乳动物引起的一种人畜共患寄生虫病.晚期病人出现肝硬化、腹水等症状,是严重危害人民群众身体健康和生命安全、影响经济社会发展的重大人畜共患病。我国历史上主要流行于长江流域及南方12省(区、市)。经过60多年的努力.我国血吸虫病防治工作取得显著成绩。上海、浙江、福建、广东、广西5省(区、市)已消除血吸虫病。湖南、湖北、江西、安徽、江苏、四川、云南等7省于2015年达到传播控制标准。 展开更多
关键词 血吸虫 历史 人畜共患寄生虫病 腹水 疫情 家畜 经济社会发展 日本血吸虫
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工艺创新 国际认可——我国吡喹酮产销向好
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作者 张伦 《中国制药信息》 2018年第2期24-26,共3页
吡喹酮又名环吡异喹酮、8440等,为广谱抗寄生虫病药物。它抗蠕虫谱很广,对日本血吸虫、埃及血吸虫、曼氏血吸虫等均有杀灭作用。此外,它对肺吸虫、华支睾吸虫、包虫、囊虫、孟氏裂头蚴、姜片虫、绦虫等也有杀灭作用。
关键词 吡喹酮 国际认可 抗寄生虫病药物 工艺 产销 杀灭作用 日本血吸虫 埃及血吸虫
日本血吸虫抗体检测间接红细胞凝集试验 预览
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《热带病与寄生虫学》 2018年第4期243-246,共4页
前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。本标准起草单位:安徽省血吸虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、浙江省医学科学院寄生虫病研究所、江苏省... 前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。本标准起草单位:安徽省血吸虫病防治研究所、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、浙江省医学科学院寄生虫病研究所、江苏省血吸虫病防治研究所、江西省寄生虫病防治研究所。本标准主要起草人:张世清、汪天平、许静、闻礼永、章乐生、郑彬、熊彦红、梁幼生、林丹丹。 展开更多
关键词 间接红细胞凝集试验 日本血吸虫 中国疾病预防控制中心 寄生虫病研究所 抗体检测 国家卫生标准 专业委员会 血吸虫
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热休克蛋白47-shRNA调节肝星状细胞膜受体对日本血吸虫鼠肝纤维化的影响
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作者 邓菊红 陶然 +3 位作者 宋启琴 孔红言 焦云桃 黄加权 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期317-324,共8页
目的了解热休克蛋白47-短发夹RNA(HSP47-sh RNA)调节肝星状细胞(HSCs)膜受体对日本血吸虫鼠肝纤维化的影响。方法建立日本血吸虫鼠肝纤维化模型,感染前(健康对照组)和感染后第4、9、14周,分别随机取5只小鼠,提取肝脏组织总RNA,采... 目的了解热休克蛋白47-短发夹RNA(HSP47-sh RNA)调节肝星状细胞(HSCs)膜受体对日本血吸虫鼠肝纤维化的影响。方法建立日本血吸虫鼠肝纤维化模型,感染前(健康对照组)和感染后第4、9、14周,分别随机取5只小鼠,提取肝脏组织总RNA,采用RT-PCR检测HSP47 mRNA相对表达水平,蛋白质印迹(Western blotting)检测HSP47蛋白表达情况,用RM-6240BD型多道生理信号系统动态检测模型鼠门静脉压力,流式细胞术检测HSCs膜内皮素受体(ETAR和ETBR)的平均荧光强度(MFI),免疫组织化学法检测感染前和感染后14周的模型鼠肝组织膜受体表达情况,采用线性相关分析方法分析各时间点的HSP47 mRNA相对表达水平与门静脉压力、ETAR和ETBR相对表达量的关系。用HSP47-sh RNA质粒转染小鼠成纤维细胞NIH/3T3细胞和血吸虫肝纤维化模型鼠,并设阴性对照组(空质粒)和空白对照组(PBS),每组12只血吸虫感染模型鼠。采用RT-PCR检测NIH/3T3细胞转染0、24、48 h及模型鼠干预至第14周的HSP47 mRNA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA相对表达水平,Western blotting检测对应蛋白的表达情况,流式细胞术检测膜受体(ET、TGF-β及PDGF的受体)的MFI。两组间均数的比较采用Student-t检验,多组间采用单因素方差分析。结果模型鼠感染日本血吸虫后第4、9、14周,RT-PCR结果显示,HSP47 mRNA相对表达水平分别为0.592±1.031、1.253±2.101和0.651±1.532,较感染前(0.253±0.120)均升高(P〈0.01);Western blotting结果显示,HSP47蛋白表达情况与mRNA变化一致;门静脉压力分别为(3.010±0.250)、(8.850±0.63)和(12.390±0.830)mm Hg,感染后第14周与感染前的(2.350±0.180)mm Hg比较,差异有统计学意义(P〈0.01)。流式细胞术检测结果显示,ETAR的MFI分别为3 245±186、6 108±213和8 784±257,高于感染前的2 104±232(P〈0.01);ETBR的MFI分别为3 812±158、4 524±197和5 554±156,高于感染前的2 091 展开更多
关键词 HSP47 肝纤维化 日本血吸虫 SHRNA干扰 内皮素受体
IL-18对pVAX1/SjRPS4·CB质粒疫苗免疫小鼠抗日本血吸虫感染的免疫调节作用
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作者 程红兵 周云飞 +7 位作者 张树菊 汪世平 冯其梅 刘益萍 崔国艳 魏红 李芬 刘明社 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期325-330,共6页
目的探讨pVAX1/IL-18联合pVAX1/Sj RPS4·CB质粒疫苗对小鼠抗日本血吸虫感染的免疫调节作用。方法 70只BALB/c雌鼠按随机数字表法均分为生理盐水组(NS组)、pVAX1空质粒组、pVAX1/IL-18组、pVAX1/Sj RPS4·CB组和pVAX1/Sj RPS4... 目的探讨pVAX1/IL-18联合pVAX1/Sj RPS4·CB质粒疫苗对小鼠抗日本血吸虫感染的免疫调节作用。方法 70只BALB/c雌鼠按随机数字表法均分为生理盐水组(NS组)、pVAX1空质粒组、pVAX1/IL-18组、pVAX1/Sj RPS4·CB组和pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组等5组(每组14只),每组小鼠在左后腿股四头肌注射相应质粒100μg或等量生理盐水,每隔2周加强免疫1次,共免疫3次。小鼠感染前(免疫后3周)尾尖部取血,ELISA检测小鼠血清特异性抗体Ig G以及抗体亚类Ig G1、Ig G2a水平。同时,各组小鼠经腹部贴片感染日本血吸虫尾蚴,(20±1)条/鼠。感染后8周,门静脉灌注法收集日本血吸虫成虫,计算减虫率;取肝组织,显微镜下计数虫卵数,计算减卵率。无菌取脾脏,称重,计算小鼠脾脏指数,噻唑蓝(MTT)法测脾淋巴细胞体外增殖水平。分别于小鼠感染前(免疫后3周)以及感染后2、4、6、8周尾尖部取血,ELISA检测小鼠血清中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)水平。结果5组小鼠免疫后3周,ELISA检测结果显示,pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组Ig G、Ig G1、Ig G2的吸光度(A450值)分别为1.03±0.17、0.32±0.08、0.78±0.12,Ig G2a/Ig G1比值为2.44,均高于其他4组。pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组的减虫率、减卵率分别为52.0%、63.2%,均高于其他3组(P〈0.05)。脾脏指数结果显示,pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组小鼠脾脏指数为3.32±0.37,高于其他4组(P〈0.05)。MTT法检测结果显示,pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组淋巴细胞体外增殖水平A570值为4.45±0.34,高于其他4组(P〈0.05)。小鼠感染前以及感染后2、4、6、8周,pVAX1/Sj RPS4·CB+pVAX1/IL-18组IFN-γ含量分别为(569.07±21.15)、(560.66±30.84)、(577.46±36.45)、(605.03±36.91)、(636.33±37.35)pg/ml,均高于其他4组(P〈0.05);各组IL-4含量在感染前后差异无统计学意义(P〉0.05)。结论IL-18可增强pVAX1/Sj RPS4·CB� 展开更多
关键词 日本血吸虫 白细胞介素-18 pVAX/SjRPS4·CB 疫苗
东方田鼠在医学生物学研究与应用进展 预览
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作者 柴淑梅 傅志强 谢建芸 《实验动物与比较医学》 CAS 2018年第1期72-77,共6页
东方田鼠具有天然抗日本血吸虫的特性,是我国特有的血吸虫病抗性模型动物,也可作为糖尿病、卵巢癌、非酒精性脂肪肝等研究的模型动物。本文综述了东方田鼠的分类与分布、形态、生物学特性及其作为抗日本血吸虫病、糖尿病、卵巢癌、非... 东方田鼠具有天然抗日本血吸虫的特性,是我国特有的血吸虫病抗性模型动物,也可作为糖尿病、卵巢癌、非酒精性脂肪肝等研究的模型动物。本文综述了东方田鼠的分类与分布、形态、生物学特性及其作为抗日本血吸虫病、糖尿病、卵巢癌、非酒精性脂肪肝等医学动物模型的研究进展。 展开更多
关键词 东方田鼠 日本血吸虫 实验动物
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日本血吸虫SjELAV-like 1的克隆、表达及功能分析 预览
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作者 许蓉 张媛媛 +7 位作者 李肖纯 程贵凤 何川川 郭露 李浩 刘金明 古少鹏 金亚美 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第13期2600-2613,共14页
【目的】克隆和表达日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1(Sj ELAV-like 1),分析其在日本血吸虫体内的表达情况及定位,探究该基因对日本血吸虫形态和生殖发育的影响。【方法】利用RACE技术扩增5′/3′末端,获得Sj ELAV-like 1基因序列提交... 【目的】克隆和表达日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1(Sj ELAV-like 1),分析其在日本血吸虫体内的表达情况及定位,探究该基因对日本血吸虫形态和生殖发育的影响。【方法】利用RACE技术扩增5′/3′末端,获得Sj ELAV-like 1基因序列提交至NCBI,Gene Bank登录号:MG515727,构建该序列的重组表达质粒p ET28-Sj ELAV-like 1,并在大肠杆菌BL21中利用IPTG诱导表达,收集不同诱导时间的菌体,SDS-PAGE法进行蛋白电泳。利用His镍柱亲和层析法纯化大量表达所得重组蛋白,用纯化重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用于Western blotting分析虫体内该天然蛋白的免疫原性,以及间接免疫荧光检测该蛋白在虫体内的分布情况。小鼠腹部贴片法感染日本血虫尾蚴,收集不同发育阶段混合虫体和合抱分开的雌、雄虫体,以单钉螺逸出的尾蚴感染小鼠获得25 d单性雌、雄虫体,通过荧光定量PCR分析该基因的表达情况。通过尾静脉注射小干扰RNA(si RNA)于感染小鼠体内,使该基因表达沉默,筛选最佳干扰效果的si RNA,用于长期RNA干扰(RNAi)试验,分析其对日本血吸虫雌虫产卵及卵胚孵化的影响。利用扫描电镜和透射电镜观察RNAi对虫体体被结构及雌、雄虫生殖器官的影响。【结果】获得的1 797 bp的Sj ELAV-like 1基因序列含有poly A尾,其中编码序列为1 533 bp,编码510个氨基酸。重组质粒p ET28-Sj ELAV-like 1在诱导4 h时表达量最高,主要以包涵体的形式存在,利用纯化蛋白获得了优质多抗,获得的重组蛋白具有良好的免疫原性,经分析发现Sj ELAV-like 1蛋白主要分布在虫体体被。荧光定量分析发现Sj ELAV-like 1在不同时期雌、雄虫体内均有表达,在雄虫体内表达稳定,但在雌虫体内随着发育成熟其表达水平呈下降趋势;在不同感染状态的雌、雄虫体内,与正常发育雌虫相比,该基因在发育阻遏雌虫体内高表达,而在雄虫体内无� 展开更多
关键词 日本血吸虫 SjELAV-like 1 原核表达 免疫定位 RNA干扰 电镜
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日本血吸虫抗独特型单克隆抗体NP30免疫后小鼠血清IFN-γ、IL-4水平的变化 预览
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作者 杨秀红 刘文琪 《热带病与寄生虫学》 2018年第3期160-162,共3页
目的观察日本血吸虫抗独特型单克隆抗体NP30免疫后机体血清有关细胞因子水平的变化,初步探讨NP30保护性免疫的机制。方法雌性BALB/c小鼠经腹腔注射免疫NP3010μg/次,共免疫3次,每次间隔2w。同时设PBS对照组。末次免疫1w后开始尾静脉采血... 目的观察日本血吸虫抗独特型单克隆抗体NP30免疫后机体血清有关细胞因子水平的变化,初步探讨NP30保护性免疫的机制。方法雌性BALB/c小鼠经腹腔注射免疫NP3010μg/次,共免疫3次,每次间隔2w。同时设PBS对照组。末次免疫1w后开始尾静脉采血,连续采血6次,每次间隔1w。夹心ELISA法测血清中细胞因子IFN-γ、IL-4的水平。结果与PBS对照组相比,10μgNP30免疫组血清IFN-γ水平增高,且以第2w(P=0.035)、第3w(P=0.019)最明显;NP30免疫组血清IL-4水平也增高,且以第3w(P=0.028)最明显。结论从结果可以看出INF-γ水平升高出现较早,但维持时间较短,而IL-4水平升高出现较晚,但维持时间较长。说明NP30的保护性免疫早期以细胞免疫为主要类型,而在后期则转为体液免疫为主要类型。 展开更多
关键词 日本血吸虫 单克隆抗独特型抗体 保护性免疫 IFN-Γ IL-4
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血吸虫毛蚴自动识别系统的检测效果
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作者 杨佩才 何伊莎 +4 位作者 张洪英 高原 周玮 龚云华 张科 《中国血吸虫病防治杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期433-435,439共4页
目的通过模拟现场实验,比较血吸虫毛蚴动态自动识别系统与传统人工肉眼观察法检测血吸虫毛蚴的效果,以评价毛蚴自动识别系统替代人工肉眼观察法检测血吸虫毛蚴的应用价值。方法采集血吸虫病非流行区居民粪便样本260份,按不同实验需要制... 目的通过模拟现场实验,比较血吸虫毛蚴动态自动识别系统与传统人工肉眼观察法检测血吸虫毛蚴的效果,以评价毛蚴自动识别系统替代人工肉眼观察法检测血吸虫毛蚴的应用价值。方法采集血吸虫病非流行区居民粪便样本260份,按不同实验需要制作含有血吸虫毛蚴的检测样本瓶。制作30份阳性样品(每瓶中放入5条毛蚴)用于敏感性实验,由2名检验人员采用传统人工肉眼观察法检测,再采用毛蚴自动识别系统进行检测,比较阳性检出率。制作30份阳性检测样品(每瓶中放入10条毛蚴),由2名操作人员分别采用同一台毛蚴自动识别系统在不同时间检测,比较检测结果。从200份阴性粪便样品中随机抽取90份,加入不同数量毛蚴,制作成阳性样品。将90份阳性样品分为3组,每组30份。第1组每份样品分别加入21条毛蚴、第2组每份样品分别加入6-20条毛蚴、第3组每份样品分别加入1-5条毛蚴,然后与其他110份阴性样本混合。采用盲法的原则,由2名检验人员先采用传统人工肉眼观察法检测该200份样品,再用毛蚴自动识别系统进行检测,比较两者检测时间、正确率、漏检率、误检率等参数。结果 2名检测人员采用人工肉眼观察法对30份阳性样本的检出率分别为43.33%和33.33%,而毛蚴自动识别系统检出率为80.00%,差异均有统计学意义(χ-2=7.05、12.97,P均〈0.01)。2名检测人员采用同一台毛蚴自动识别系统检测30份阳性样本的检出率分别为96.67%和86.67%,差异无统计学意义(χ-2=0.27,P〉0.05)。毛蚴自动识别系统检测血吸虫毛蚴阳性样品的正确率为98.00%,高于人工肉眼观察法的79.75%;检出阳性样本的用时仅为人工肉眼法的50%;毛蚴自动识别系统的阳性漏检率和误检率分别为2.22%和1.82%,明显低于人工检测的35.56%和7.73%。结论与传统人工肉眼观察法相比,毛蚴自动识别系统检测血吸虫毛蚴具有敏� 展开更多
关键词 日本血吸虫 毛蚴 模拟实验 自动识别系统 病原学诊断
ICOS信号与日本血吸虫感染小鼠Th9细胞极化的关系
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作者 战廷正 马会会 +3 位作者 张婷婷 何姗姗 许静 夏超明 《中国血吸虫病防治杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期436-439,共4页
目的检测可诱导共刺激分子(ICOS)在日本血吸虫感染小鼠脾脏Th9细胞中的表达水平,探讨ICOS信号与Th9细胞极化之间的关系。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,分别在感染后0、4、7、9周和12周,应用流式细胞术检测IL-9+细胞在CD4+T细胞中... 目的检测可诱导共刺激分子(ICOS)在日本血吸虫感染小鼠脾脏Th9细胞中的表达水平,探讨ICOS信号与Th9细胞极化之间的关系。方法以日本血吸虫尾蚴感染小鼠,分别在感染后0、4、7、9周和12周,应用流式细胞术检测IL-9+细胞在CD4+T细胞中的比例,以及ICOS+细胞在Th9细胞中的比例。结果与0周比较,感染后4、7、9、12周,小鼠CD4+T细胞中Th9细胞的比例显著增高(P 〈0.05),并且Th9细胞ICOS的表达也明显上调(P 〈0.05)。结论在日本血吸虫感染中,ICOS信号对Th9细胞的极化可能具有调控作用。 展开更多
关键词 日本血吸虫 可诱导共刺激分子 TH9细胞 流式细胞术
日本血吸虫14-3-3蛋白的表达与诊断价值研究
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作者 吴冬丽 胡诗梦 王业富 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第7期2809-2816,共8页
制备可溶性表达的重组日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3(r Sj14-3-3)并优化表达条件,分析其免疫学特性和免疫诊断价值。成功构建了BL21/p ET30a-r Sj14-3-3表达菌株,最佳的表达体系为细菌生长至OD600为0.6~1.0时加入IPTG至最佳终浓度0.1 ... 制备可溶性表达的重组日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3(r Sj14-3-3)并优化表达条件,分析其免疫学特性和免疫诊断价值。成功构建了BL21/p ET30a-r Sj14-3-3表达菌株,最佳的表达体系为细菌生长至OD600为0.6~1.0时加入IPTG至最佳终浓度0.1 mmol/L,28℃诱导16 h。上清液中可溶性的r Sj14-3-3蛋白纯化后的浓度为2.804 mg/m L。以r Sj14-3-3为抗原,间接ELISA检测显示,48份急性与35份慢性血吸虫病患者血清的抗体阳性率分别为95.6%和92.0%;与27份华支睾吸虫和15份钩虫患者血清的交叉反应率分别为7.4%和6.7%;与30份健康人血清假阳性反应率为0%。抗r Sj14-3-3兔血清及所制备的多抗可被纯化出的r Sj14-3-3蛋白及血吸虫成虫抗原(AWA)和排泄分泌物(ESA)中的天然Sj14-3-3分子的反应,且多抗效价达1:1 280 000。本研究成功表达并纯化出r Sj14-3-3蛋白,优化了其诱导表达条件,且此蛋白具有较高的抗原特异性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 14-3-3蛋白 表达条件 诊断
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