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朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的表达纯化及其酶活测定条件优化 预览
1
作者 彭博 师光禄 +1 位作者 卜春亚 王有年 《北京农学院学报》 2015年第4期9-14,共6页
乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标。现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21(DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正... 乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标。现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21(DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正交试验优化AChE活性的测定条件。结果表明:发酵培养的重组菌株大量表达约为68kD的朱砂叶螨AChE蛋白。底物浓度、温度、pH和酶浓度等各测定因素对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性存在显著影响。确定朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性测定的最佳反应条件为:底物浓度1mmol/L,pH值7,温度35℃,酶浓度0.5mg/mL。通过体外发酵培养纯化获得了大量的朱砂叶螨AChE重组蛋白,确定了螨AChE活性测定的最佳条件,为进一步研究其酶学性质以及AChE抑制剂的体外筛选奠定基础。 展开更多
关键词 乙酰胆碱酯酶 朱砂叶螨 发酵 正交试验 方差分析 最适反应条件
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信阳群体种多酚氧化酶特性研究 被引量:1
2
作者 孙慕芳 陈义 《食品科技》 CAS 北大核心 2014年第4期51-53,共3页
对信阳茶区主栽品种信阳群体种中多酚氧化酶特性进行研究。结果表明,最适温度为35-40℃,在50-55℃出现次高峰,呈ω型变化趋势。适宜缓冲液pH在5.0-6.0,最适pH5.5。在37℃、pH5.6柠檬酸一磷酸缓冲液、邻苯二酚为底物条件下,PPO... 对信阳茶区主栽品种信阳群体种中多酚氧化酶特性进行研究。结果表明,最适温度为35-40℃,在50-55℃出现次高峰,呈ω型变化趋势。适宜缓冲液pH在5.0-6.0,最适pH5.5。在37℃、pH5.6柠檬酸一磷酸缓冲液、邻苯二酚为底物条件下,PPO酶反应动力学方程l/V=0.9405×1/[S]+6.6883,Km=0.1406mol/L,Vmax=0.1495U/min。 展开更多
关键词 信阳群体种 多酚氧化酶 特性 最适反应条件
家蝇幼虫消化器官中纤维素酶的组成及酶活性分析 被引量:5
3
作者 张姝 胡蓉 +2 位作者 吴建伟 国果 付萍 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期55-60,共6页
采用DNSA法研究家蝇3龄幼虫各消化器官中纤维素酶的组成及特性。结果表明,家蝇各消化器官均含有内切β-1,4-葡聚糖酶(endo-β-1,4glucanase,EC3.2.1.4,EG)、外切β-1,4-葡聚糖酶(exo-β-1,4-glucanase,EC3.2.1.91,CB... 采用DNSA法研究家蝇3龄幼虫各消化器官中纤维素酶的组成及特性。结果表明,家蝇各消化器官均含有内切β-1,4-葡聚糖酶(endo-β-1,4glucanase,EC3.2.1.4,EG)、外切β-1,4-葡聚糖酶(exo-β-1,4-glucanase,EC3.2.1.91,CBH)和β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,EC3.2.1.21,BG)。家蝇消化器官中EG、CBH和BG的最适反应时间均为60min,最适反应温度为50%,这些酶在体外的热稳定性较好,在50℃以下处理1h能保持较高的活性。这三种纤维素酶在不同消化器官中的配比关系和活性表现存在一定的差异,其中中肠的酶活性最高,在最适反应条件下,EG、CBH和BG的酶活性分别达到1.02±0.033IU/mg、1.57±0.070IU/mg和1.2±0.048IU/mg。 展开更多
关键词 家蝇 纤维素酶 消化器官 酶活性 最适反应条件
小麦酯酶分离纯化及酶促反应条件优化的研究 被引量:1
4
作者 陈士恩 罗振兴 +3 位作者 霍生东 阿依木古丽 申晓蓉 刘丽霞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期 76-79,共4页
为了建立一种快速检测牛肉中有机磷农药残留的方法,试验从新鲜小麦粉中分离小麦酯酶,通过真空冷冻浓缩、羧甲基纤维素层析、真空冷冻干燥等工艺提取成品。结果表明:小麦酯酶酶促反应最适温度为36.8℃,最适pH值为7.7,最适反应时间为3 m... 为了建立一种快速检测牛肉中有机磷农药残留的方法,试验从新鲜小麦粉中分离小麦酯酶,通过真空冷冻浓缩、羧甲基纤维素层析、真空冷冻干燥等工艺提取成品。结果表明:小麦酯酶酶促反应最适温度为36.8℃,最适pH值为7.7,最适反应时间为3 min,敌敌畏对其抑制时间为8 min,显色剂2,6-二氯靛酚的最大吸收波长为606 nm;在相同条件下,提纯后的小麦酯酶检测模拟有机磷农药残留阳性牛肉样品抑制率为99.5%,市售丁酰胆碱酯酶测得的抑制率为99.8%,二者的检测结果高度一致。 展开更多
关键词 小麦酯酶 分离纯化 酶促反应 最适反应条件
植物酯酶分离纯化及酶促反应条件优化的研究 预览 被引量:3
5
作者 陈士恩 申晓蓉 +3 位作者 罗振兴 霍生东 阿依木古丽 刘丽霞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2012年第1期 41-46,72,共7页
目的:建立一种快速检测牛肉中有机磷农药残留的方法.方法:从新鲜小麦粉、黄豆粉和玉米粉中分离植物酯酶,真空冷冻浓缩,羧甲基纤维素层析,真空冷冻干燥提取植物酯酶,并通过试验测得其酶促反应最适温度36.8℃,最适pH 7.7,酶促反应时间3 ... 目的:建立一种快速检测牛肉中有机磷农药残留的方法.方法:从新鲜小麦粉、黄豆粉和玉米粉中分离植物酯酶,真空冷冻浓缩,羧甲基纤维素层析,真空冷冻干燥提取植物酯酶,并通过试验测得其酶促反应最适温度36.8℃,最适pH 7.7,酶促反应时间3 min,敌敌畏对其抑制时间8 min,显色剂2,6-二氯靛酚的最大吸收波长606 nm.结论:在相同条件下,提纯后的植物酯酶检测模拟有机磷农药残留阳性牛肉样品抑制率为99.5%,市售丁酰胆碱酯酶测得的抑制率为99.8%%,两者检测结果高度一致. 展开更多
关键词 植物酯酶 分离纯化 酶促反应 最适反应条件
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马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的提取及酶学性质的研究 被引量:5
6
作者 刘泽玉 苏柘僮 +1 位作者 杨明 邹文铨 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1461-1464,共4页
目的建立pNPG法测定马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的活性,研究马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质,为进一步阐明青黛炮制原理提供依据。方法采用pNPG法考察马蓝叶中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件。结果最适反应条件为总反应体积1 mL,反应... 目的建立pNPG法测定马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的活性,研究马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质,为进一步阐明青黛炮制原理提供依据。方法采用pNPG法考察马蓝叶中β-葡萄糖苷酶活性测定的最佳条件。结果最适反应条件为总反应体积1 mL,反应时间45 min,底物pNPG体积0.2 mL,浓度25 mmol/L,缓冲液pH值6,反应温度55℃。在此条件下研究马蓝叶的粗酶液中β-葡萄糖苷酶的基本酶学性质,结果表明该酶在30~60℃热稳定性较差。该酶在pH 5.0-7.0比较稳定,而在酸性条件下酶活下降较快,酶的pH值稳定性范围较窄。酶在4℃下的保存稳定性较好。结论确定了测定马蓝叶中β-葡萄糖苷酶活性的最佳条件,探索了马蓝叶中β-葡萄糖苷酶的酶学性质,该酶的热稳定性、pH值稳定性和保存稳定性的研究为青黛炮制原理的研究奠定了理论依据。 展开更多
关键词 马蓝叶 pNPG法 最适反应条件 β-葡萄糖苷酶活性
黑翅土白蚁乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立及药剂敏感度比较 被引量:8
7
作者 汤方 杨海江 +1 位作者 高希武 严敖金 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期 714-719,共6页
用正交试验方法研究了酶浓度、底物浓度、反应体系pH值、反应温度、反应时间5个因素对黑翅土白蚁Odontotermes formosanus(Shiraki)乙酰胆碱酯酶(AChE)活性测定的影响。通过对正交试验结果进行极差和方差分析,明确了测定黑翅土白蚁... 用正交试验方法研究了酶浓度、底物浓度、反应体系pH值、反应温度、反应时间5个因素对黑翅土白蚁Odontotermes formosanus(Shiraki)乙酰胆碱酯酶(AChE)活性测定的影响。通过对正交试验结果进行极差和方差分析,明确了测定黑翅土白蚁AChE活性的最适反应条件是酶浓度为12.5g/L,底物浓度为8mmol/L,pH值8.0,反应温度40℃,反应时间5min。此外,研究了6种药剂对黑翅土白蚁体内AChE活性的影响。结果表明:灭多威、辛硫磷、三唑磷、丙溴磷、马拉硫磷和氧化乐果6种药剂对黑翅土白蚁AChE抑制中浓度(Ic50)分别为3.52×10^-4,1.86×10^-3,5.13×10^-3,9.55×10^-4,8.81×10^-3,和1.39×10^-2mol/L。在3.3×10^-7-5×10^-3mol/L的浓度范围内,上述6种药剂对黑翅土白蚁体内AChE活性的抑制作用都具有明显的剂量一效应关系。 展开更多
关键词 黑翅土白蚁 乙酰胆碱酯酶 最适反应条件 正交试验 抑制中浓度 药剂敏感度
两步酶解法评定豆粕粗蛋白质降解率的研究 预览 被引量:2
8
作者 国春艳 刁其玉 杨威 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2007年第1期 61-62,共2页
虽然尼龙袋法是国际公认的评定饲料蛋白质瘤胃降解率的常规方法,但是尼龙袋法耗时、复杂,受瘘管动物的限制,不能满足大规模评定饲料蛋白质降解率的要求。为了寻求能在一般实验室条件下即可完成的体外评定饲料蛋白质降解率的方法,国... 虽然尼龙袋法是国际公认的评定饲料蛋白质瘤胃降解率的常规方法,但是尼龙袋法耗时、复杂,受瘘管动物的限制,不能满足大规模评定饲料蛋白质降解率的要求。为了寻求能在一般实验室条件下即可完成的体外评定饲料蛋白质降解率的方法,国内外做了大量的研究,提出了体外发酵法、动物模型法、酶解法等典型的体外法。其中以酶解法的操作最为简便,费用最低,结果也与体内法和尼龙袋法具有较强的相关性。试验的目的是研究用胃蛋白酶-胰蛋白酶两步酶解法评定保护处理豆粕中粗蛋白质降解率的最适反应条件,包括最适酶浓度、底物浓度、缓冲液pH值、水浴温度、水浴时间等,为生产提供理论依据。 展开更多
关键词 蛋白质降解率 酶解法 饲料蛋白质 尼龙袋法 最适反应条件 水浴温度 瘤胃降解率
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茉莉花粗酶液酶解β-D-葡萄糖苷活性研究 预览 被引量:2
9
作者 黄新安 宛晓春 夏涛 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期 8-10,共3页
以pNPG为底物,测定茉莉花中具有β-D-葡萄糖苷酶活性的粗酶液活性。最适反应条件为总反应体积1mL,反应时间20min,底物pNPG体积200μL,浓度50mmol·L^-1,最适pH值6.0,最适反应温度50℃;并以此条件,研究茉莉花开放过程中粗... 以pNPG为底物,测定茉莉花中具有β-D-葡萄糖苷酶活性的粗酶液活性。最适反应条件为总反应体积1mL,反应时间20min,底物pNPG体积200μL,浓度50mmol·L^-1,最适pH值6.0,最适反应温度50℃;并以此条件,研究茉莉花开放过程中粗酶液酶解β-D-葡葡糖苷的活性变化,结果表明该酶液随着茉莉花的开放,酶活性逐渐增高,直至萎蔫失水后,活性才降低。 展开更多
关键词 茉莉花 粗酶液 最适反应条件 酶活性变化
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用于有机磷农药残留检测的小麦酯酶的最适反应条件 预览 被引量:1
10
作者 孟玲 翁霞 刘长江 《农药》 CAS 北大核心 2006年第7期 445-447,共3页
对辽春9号面粉提取的小麦酯酶进行了研究,得到该酶的最佳酶促反应条件。即酶液浓度为原酶液的25%、酶促反应pH为6.4、反应时间为21min、反应温度为40℃、底物浓度为1.25mg/ml、显色液浓度为0.25mg/ml。并选用了3种有机磷农药对... 对辽春9号面粉提取的小麦酯酶进行了研究,得到该酶的最佳酶促反应条件。即酶液浓度为原酶液的25%、酶促反应pH为6.4、反应时间为21min、反应温度为40℃、底物浓度为1.25mg/ml、显色液浓度为0.25mg/ml。并选用了3种有机磷农药对该小麦酯酶的抑制作用进行了研究。 展开更多
关键词 有机磷农药残留 小麦酯酶 最适反应条件
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弱碱性大孔树脂固定化氨基酰化酶的性能研究 预览 被引量:4
11
作者 王燕 张凤宝 +3 位作者 朱怀工 宋正孝 王淑兰 曾蓬 《化学反应工程与工艺》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第1期 60-64,共5页
对以弱碱性大孔阴离子树脂二乙胺基乙基羟乙酯(DEAE-E/H)为载体制备得到的固定化氨基酰化酶的性质进行系统研究.结果表明,DEAE-E/H固定化氨基酰化酶具有很好的热稳定性.与自由酶相比,固定化酶的最适反应温度分别由47℃变为57℃,pH值由7.... 对以弱碱性大孔阴离子树脂二乙胺基乙基羟乙酯(DEAE-E/H)为载体制备得到的固定化氨基酰化酶的性质进行系统研究.结果表明,DEAE-E/H固定化氨基酰化酶具有很好的热稳定性.与自由酶相比,固定化酶的最适反应温度分别由47℃变为57℃,pH值由7.0变为6.5,并且最适反应条件范围明显变宽.Co2+对固定化酶活力具有较强的激活作用,其最佳浓度为1×10-3mol/L.分别对其在间歇和连续操作过程中的反应进行研究,结果表明,固定化酶具有较高的操作稳定性. 展开更多
关键词 氨基酰化酶 弱碱性 性能研究 大孔树脂 最适反应条件 固定化酶 阴离子树脂 CO^2+ 操作稳定性 系统研究 二乙胺基 热稳定性 反应温度 激活作用 最佳浓度 操作过程 羟乙酯 pH值 酶活力
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米曲霉LY-128广谱有机磷农药水解酶的纯化和鉴定 预览 被引量:11
12
作者 刘阳 刘玉焕 +4 位作者 陈志仕 廉婕 罗维佳 黄晓 钟英长 《菌物系统》 CSCD 北大核心 2003年第4期 557-564,共8页
米曲霉LY-128的培养物经硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤,DEAE-Sephrose CL-6B和Sephadex G-100层析手段,获得了电泳纯的广谱有机磷农药水解酶.通过SDS-PAGE和IEF电泳测得其分子量为62 kDa,等电点为pH 5.2.该酶的最适反应温度为4... 米曲霉LY-128的培养物经硫酸铵分级沉淀,Sephadex G-100凝胶过滤,DEAE-Sephrose CL-6B和Sephadex G-100层析手段,获得了电泳纯的广谱有机磷农药水解酶.通过SDS-PAGE和IEF电泳测得其分子量为62 kDa,等电点为pH 5.2.该酶的最适反应温度为45℃,最适pH 6.8,在50℃以下及pH6.0~9.5范围内活性稳定.Hg2+、Fe3+、对氯高汞苯甲酸、碘乙酸和N-乙基马来酰亚胺对该酶有强烈的抑制作用,而Cu2+、巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、谷光甘肽和去污剂对酶有不同程度的激活作用.底物的专一性实验表明,该酶不仅可以作用于含P-O键的有机磷农药;而且也能水解含P-S键的有机磷农药.以甲基对硫磷和内吸磷为底物的Km值分别为52μmol、236μmol;Vmax分别为317μmol min-1 mg-1、179 μmol min-1 mg-1;Kcat分别为1152 s-1、650 s-1. 展开更多
关键词 生物降解 基本性质 最适反应条件
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HeLa细胞端粒酶最适反应条件及活性重建 预览 被引量:1
13
作者 郑晓飞 王升启 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期 654-657,共4页
关键词 HELA细胞 端粒酶 最适反应条件 重建 酶活性 肿瘤生长
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PEDV膜蛋白基因RT—PCR最适反应条件的确立 预览 被引量:3
14
作者 乔宪凤 熊忠良 +1 位作者 华文君 郑新民 《湖北畜牧兽医》 2001年第1期 8-10,共3页
以猪流行性腹泻病毒(PEDV)的RNA为模板,探讨了影响猪流行性腹泻病毒(PEDV)的RT-PCR反应的各种因素,确立了RT-PCR的最适反应条件。
关键词 流行性腹泻病毒 RT-PCR 最适反应条件 膜蛋白基因
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血清5—羟色胺的快速荧光测定法 预览
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作者 张秀明 顾仁骏 +1 位作者 张中兴 尹景岗 《云南大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 1993年第S1期27-28,共2页
5—羟色胺(5-HT)又称血清素(serotonin),是重要的神经递质。测定血液中5-HT含量,可为血小板增多(减少)症、类癌等多种疾病的诊断、治疗及精神疾病的机理研究提供依据。我们参考国内外有关文献并结合本室条件,建立了血清5-HT的快速荧... 5—羟色胺(5-HT)又称血清素(serotonin),是重要的神经递质。测定血液中5-HT含量,可为血小板增多(减少)症、类癌等多种疾病的诊断、治疗及精神疾病的机理研究提供依据。我们参考国内外有关文献并结合本室条件,建立了血清5-HT的快速荧光测定法,并对最适反应条件进行了探讨。该法较现行的方法具有简便、快速、准确、灵敏、稳定、经济等优点,现报道如下: 展开更多
关键词 快速荧光测定法 色胺 最适反应条件 精神疾病 正丁醇提取 血小板增多 类癌 SEROTONIN 荧光光谱 测定管
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