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一株促生抗病的樱花内生细菌的分离、筛选和鉴定
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作者 丁森 王焱 +4 位作者 陆蓝翔 张岳峰 江明明 魏奇 叶建仁 《南京林业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期81-88,共8页
【目的】解决樱属植物生产过程中根癌病的发生问题。【方法】采用组织分离法和稀释分离法分别从枝干和叶片中分离内生细菌;采用滤纸片法选拮抗菌,通过形态学、生理学和分子生物学法对筛选菌株进行种类鉴定;通过比色法测定筛选菌株的解... 【目的】解决樱属植物生产过程中根癌病的发生问题。【方法】采用组织分离法和稀释分离法分别从枝干和叶片中分离内生细菌;采用滤纸片法选拮抗菌,通过形态学、生理学和分子生物学法对筛选菌株进行种类鉴定;通过比色法测定筛选菌株的解有机磷的能力;以特定培养基测定菌株产IAA(anxin)的能力,通过测定OD600值判断耐NaCl的能力。【结果】在樱花体内共分离到32株内生细菌,其中从枝条内分离到28株,从叶片内分离到4株。对32株内生细菌进行抑菌活性的筛选,有2株对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)有明显的抑制作用。另对其中的1株细菌YH-20进行鉴定,鉴定结果为瓦雷兹芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。菌株YH-20具有良好的解有机磷和无机磷作用,其在第7天的解无机磷的量为178.43 mg/L,在第7天解有机磷的量为76.50 mg/L;具有较高的分泌IAA的能力,在第7天IAA的生成量为9.174μg/mL;可在含10%NaCl的培养基上正常生长。【结论】筛选获得的瓦雷兹芽孢杆菌YH-20菌株具有抗植物根癌病菌和解磷能力,是一株在林木根癌病的防治上有很好应用前景的菌株。 展开更多
关键词 瓦雷兹芽孢杆菌(YH-20) 根癌杆菌 拮抗作用 解磷作用 樱花
红曲霉LovD基因的克隆及转基因高产洛伐他汀菌株筛选 预览
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作者 沈小瑞 王钰 陈达伟 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期23-25,共3页
通过紫外诱变筛选出的高产洛伐他汀红曲霉菌株M120-1为出发菌株,提取红曲霉菌株总RNA,通过RT-PCR技术克隆LovD基因,构建表达载体,对红曲霉进行遗传转化;通过高效液相色谱法筛选高产洛伐他汀转化菌株。结果表明:提取红曲霉总RNA并建立表... 通过紫外诱变筛选出的高产洛伐他汀红曲霉菌株M120-1为出发菌株,提取红曲霉菌株总RNA,通过RT-PCR技术克隆LovD基因,构建表达载体,对红曲霉进行遗传转化;通过高效液相色谱法筛选高产洛伐他汀转化菌株。结果表明:提取红曲霉总RNA并建立表达载体,随机挑选出12个转化子,经PCR鉴定,有10株成功得到转化。对其进行培养并通过HPLC法测定洛伐他汀产量,其中一株转化菌株的洛伐他汀产量为0.55mg/mL,比出发菌株产量高63%。对该菌株进行传代培养,具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 红曲霉 洛伐他汀 根癌杆菌 遗传转化
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铁棍山药微型块茎遗传转化体系的建立
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作者 李俊华 刘世宇 +5 位作者 李成龙 韩林林 董亚辉 张晓丽 赵喜亭 李明军 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期72-80,共9页
怀山药(Dioscorea opposita)遗传转化是对其进行基因功能分析和遗传改良的基础,但目前国内外尚未见相关报道。以怀山药优良品种铁棍山药(D. opposita cv.‘Tiegun’)的微型块茎为受体材料,对影响遗传转化的因素进行优化,建立了由根癌农... 怀山药(Dioscorea opposita)遗传转化是对其进行基因功能分析和遗传改良的基础,但目前国内外尚未见相关报道。以怀山药优良品种铁棍山药(D. opposita cv.‘Tiegun’)的微型块茎为受体材料,对影响遗传转化的因素进行优化,建立了由根癌农杆菌介导的山药遗传转化体系。过表达质粒载体p CAMBIA1301-DoSERK2含GUS标记基因和潮霉素(Hyg)抗性筛选基因,沉默质粒载体pART27-DoSERK2含卡那霉素(Kan)抗性筛选基因。根癌农杆菌抑制剂特美汀(Tim)的最佳浓度为500mg·L–1;再生芽和生根时, Hyg的最佳浓度分别为15和20 mg·L–1, Kan的最佳浓度分别为120和160 mg·L–1。对转化植株进行PCR和GUS组织化学检测,结果显示外源基因已整合到铁棍山药转基因株系的基因组中并在细胞中表达。该研究建立了一套取材便利的铁棍山药遗传转化方法,对其它品种山药的转化也具有参考价值。 展开更多
关键词 根癌杆菌 遗传转化 微型块茎 铁棍山药
根癌农杆菌介导大岩桐遗传转化体系探究
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作者 郭丽 程征 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期4638-4642,共5页
本研究以大岩桐叶片为外植体,以LEA基因为目的基因,为实施根癌农杆菌介导转化大岩桐,研究了卡那霉素和头孢霉素、预培养时间、共培养时间和延迟筛选时间等因素对大岩桐外植体及转化的影响,结果表明,外植体分化卡那霉素浓度为50mg/L,头... 本研究以大岩桐叶片为外植体,以LEA基因为目的基因,为实施根癌农杆菌介导转化大岩桐,研究了卡那霉素和头孢霉素、预培养时间、共培养时间和延迟筛选时间等因素对大岩桐外植体及转化的影响,结果表明,外植体分化卡那霉素浓度为50mg/L,头孢霉素浓度为250mg/L,生根筛选压浓度为10mg/L,外植体预培养时间为2d,共培养时间为4d,延迟筛选时间为6d;以上述条件下,将农杆菌与大岩桐叶盘共培养,共获得16株抗性植株,GUS染色有3株转LEA基因的阳性植株,初步建立了外源基因LEA导入大岩桐植株遗传转化体系,以遗传改良大岩桐品种的抗旱性。 展开更多
关键词 根癌杆菌 大岩桐 遗传转化体系
根癌农杆菌D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因克隆、结构预测及原核表达 预览
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作者 朱星星 杨培周 +2 位作者 杜明睿 吴芸 姜绍通 《食品科学技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期61-66,共6页
D-阿洛酮糖-3-差向异构酶能够催化D-果糖转化为D-阿洛酮糖。为实现D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的异源表达,设计引物,克隆并分离其序列,通过生物信息学软件分析D-阿洛酮糖-3-差向异构酶DNA和蛋白质的结构特点。结果表明,该基因开放阅读框870... D-阿洛酮糖-3-差向异构酶能够催化D-果糖转化为D-阿洛酮糖。为实现D-阿洛酮糖-3-差向异构酶的异源表达,设计引物,克隆并分离其序列,通过生物信息学软件分析D-阿洛酮糖-3-差向异构酶DNA和蛋白质的结构特点。结果表明,该基因开放阅读框870bp,编码289个氨基酸;蛋白质二级结构中α-螺旋占38.41%,β-折叠占47.06%,无规则卷曲占14.53%;该蛋白为亲水性蛋白,不含信号肽,无跨膜区,定位于细胞膜;构建原核表达载体并导入E.coliBL21宿主中,表达的D-阿洛酮糖-3-差向异构酶分子质量约为33kDa,1mmol/LIPTG诱导E.coliBL21重组菌28h后,目的蛋白表达量和酶活分别为0.32g/L和3.8U/mL。根癌农杆菌D-阿洛酮糖-3-差向异构酶基因能够在大肠杆菌中实现表达。 展开更多
关键词 D-阿洛酮糖-3-差向异构酶 D-阿洛酮糖 根癌杆菌 基因克隆 原核表达
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转Cry1A基因海岛棉的获得和鉴定 预览
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作者 邓莉 芮存 +2 位作者 李娟 陈全家 张霞 《中国农学通报》 2019年第24期122-127,共6页
进行农杆菌介导转抗虫基因试验,以期选育抗虫性优良的海岛棉新品系(品种)。本实验在海岛棉体细胞胚再生体系的基础上,将携带Cry1A基因的表达载体pBI121通过农杆菌介导法转化到‘新海33号’的胚性愈伤组织中。经培养基筛选、PCR检测、RT-... 进行农杆菌介导转抗虫基因试验,以期选育抗虫性优良的海岛棉新品系(品种)。本实验在海岛棉体细胞胚再生体系的基础上,将携带Cry1A基因的表达载体pBI121通过农杆菌介导法转化到‘新海33号’的胚性愈伤组织中。经培养基筛选、PCR检测、RT-PCR检测、抗虫性鉴定等筛选抗虫后代。共获得12棵抗性植株。PCR检测结果显示,这12棵抗性植株均能扩增出了大小相符的片段,检测结果呈阳性;RT-PCR结果显示,12棵转基因植株目的基因已经整合入基因组,且能反转录出mRNA;Bt-Cry1Ab/Ac转基因试纸条检测结果表明这12棵转基因植株含有目的蛋白;抗虫性鉴定结果证实了这些转基因植株对棉铃虫幼虫具有一定的抗性。本研究成功将抗虫基因导入至海岛棉的体内,获得了具有抗虫性的植株,其结果对转基因抗虫海岛棉新品种的培育具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 海岛棉 Cry1A基因 根癌杆菌 遗传转化 棉铃虫幼虫
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根癌农杆菌介导的遗传转化及其在稻瘟病菌中的应用 预览
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作者 何丽云 张树林 +3 位作者 崔百元 朱庆锋 刘圣杰 刘文华 《广东农业科学》 CAS 2019年第3期93-100,共8页
根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)技术是近20年发展起来的真菌研究中最具变革性的技术之一,它作为一种转化工具已被广泛应用于真菌基因功能研究中,使人们对真菌基因组学的理解有了很大的改变。利用ATMT获得随机的T-DNA插入突变体库,结合... 根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)技术是近20年发展起来的真菌研究中最具变革性的技术之一,它作为一种转化工具已被广泛应用于真菌基因功能研究中,使人们对真菌基因组学的理解有了很大的改变。利用ATMT获得随机的T-DNA插入突变体库,结合突变体菌株表型筛选,使许多过程的遗传基础得到阐明。ATMT法具有操作简单,转化受体广泛,转化效率高以及转化子遗传稳定性高等优势。稻瘟病菌是植物十大重要真菌之一,是引发水稻稻瘟病的病原真菌。目前,培育水稻抗病品种是控制稻瘟病最经济和环保的方法。通过克隆稻瘟病菌相关致病基因并研究其功能,在解释致病机理和生理特性,以及培育抗病品种方面具有重要的理论和实践意义。以根癌农杆菌为介导的遗传转化为稻瘟病菌的插入突变、基因敲除和标记克隆等方面研究提供了一个重要工具。针对根癌农杆菌介导的遗传转化原理、特点、步骤、影响因素以及该技术在稻瘟病菌功能基因组学研究中的应用进行综述,以期能够为稻瘟病菌等真菌的遗传转化方面研究提供相关的参考。 展开更多
关键词 根癌杆菌 遗传转化 稻瘟病菌 功能基因 突变体库
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利用GUS基因的瞬时表达优化大豆根癌农杆菌介导的遗传转化
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作者 杨明明 高海京 +5 位作者 马啸燕 孙英楠 邵宇鹏 包格格 李文滨 王志坤 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期353-359,共7页
高转化效率是分子育种的重要前提,根癌农杆菌介导的遗传转化由于其有较高的遗传效率和较低的拷贝数成为目前优选方法。为优化大豆遗传转化体系,以本实验室已有转化体系为基础,利用pCAMBIA3301中35S∶GUS基因瞬时表达体系,从萌发时间、... 高转化效率是分子育种的重要前提,根癌农杆菌介导的遗传转化由于其有较高的遗传效率和较低的拷贝数成为目前优选方法。为优化大豆遗传转化体系,以本实验室已有转化体系为基础,利用pCAMBIA3301中35S∶GUS基因瞬时表达体系,从萌发时间、切豆方法、侵染时间、共培养方式以及共培养时间等方面对东农47、垦农18和B12088大豆栽培品种的遗传转化体系进行优化。结果表明:东农47萌发1d,侵染30 min;垦农18和B12088萌发12h,侵染30min,GUS基因瞬时表达率最高。在其它的处理上,3个品种表现结果一致,即蘸取菌液切豆,共培养中子叶伤口朝下摆放,黑暗条件下共培养3~5 d,GUS基因瞬时表达最高。3个品种在最适条件下,GUS染色效率均达到90%以上,垦农18遗传转化效率较高。本研究为大豆农杆菌介导子叶节转化方法提供了一个改进的方案,并且为拓宽可利用于大豆遗传转化的种质资源奠定基础。 展开更多
关键词 根癌杆菌 大豆遗传转化 转化率 GUS基因瞬时表达
根癌农杆菌介导观赏羽衣甘蓝遗传转化体系优化 预览
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作者 王欢 付小蕾 +1 位作者 毛洪玉 祝朋芳 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期543-549,共7页
为建立稳定的羽衣甘蓝遗传转化体系,以羽衣甘蓝自交系’Mark 10’,’W02-7’和’Curly 6’为试材,通过单因子试验,比较羽衣甘蓝子叶、子叶柄、子叶片、下胚轴4种外植体的再生能力,筛选培养基中的适宜激素浓度,优化了羽衣甘蓝不同外植体... 为建立稳定的羽衣甘蓝遗传转化体系,以羽衣甘蓝自交系’Mark 10’,’W02-7’和’Curly 6’为试材,通过单因子试验,比较羽衣甘蓝子叶、子叶柄、子叶片、下胚轴4种外植体的再生能力,筛选培养基中的适宜激素浓度,优化了羽衣甘蓝不同外植体的再生体系。将播种后6d的子叶于最适再生培养基上进行黑暗预培养,以根瘤农杆菌为介导侵染子叶后,于黑暗条件下进行农杆菌与植物材料的共培养。随后转入含有头孢霉素的抑菌培养基中进行抑菌培养,再将子叶移入含有卡那霉素浓度的筛选培养基中进行抗性芽选择,并提取植物基因组DNA进行目的基因的PCR验证,从而建立高效的羽衣甘蓝遗传转化体系。结果表明:最佳的外植体是羽衣甘蓝的子叶,在培养基MS+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1上,不定芽分化率可达100%;子叶经2~3d预培养,将OD600值为0.3~0.5的携带DFR基因表达载体的农杆菌菌液离心,以50mL MS重悬液重悬,侵染外植体5min,共培养2d;采用头孢霉素300mg·L^-1,抑菌培养3d后,采用10mg·L^-1卡那霉素进行抗性芽选择。在播种后30~40d共获得了24个抗性芽,以抗性芽的基因组DNA为模板进行PCR扩增,9株呈DFR阳性,显示外源基因已经成功整合到羽衣甘蓝基因组中,平均转化率为37.5%。本研究结果可以为羽衣甘蓝重要性状基因的遗传转化提供依据。 展开更多
关键词 根癌杆菌 羽衣甘蓝 遗传转化 外植体
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雪柑、酸柚遗传转化研究初探 预览
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作者 黄镜浩 张凌媛 +2 位作者 林雄杰 王贤达 范国成 《东南园艺》 2019年第1期9-13,共5页
柑橘遗传转化是新品种培育以及基因功能验证等基础研究的重要技术手段。本文以雪柑、酸柚胚轴段为外植体开展农杆菌介导的柑橘遗传转化研究,结果表明:卡那霉素(Kan.)显著抑制雪柑和酸柚外植体分化;2.65%的酸柚和14.76%的雪柑胚轴段在添... 柑橘遗传转化是新品种培育以及基因功能验证等基础研究的重要技术手段。本文以雪柑、酸柚胚轴段为外植体开展农杆菌介导的柑橘遗传转化研究,结果表明:卡那霉素(Kan.)显著抑制雪柑和酸柚外植体分化;2.65%的酸柚和14.76%的雪柑胚轴段在添加3 mg·L^-1 6-BA、200 mg·L^-1头孢噻肟(Cef.)和50 mg Kan.的MT诱导培养基上培养45 d后可诱导产生抗性不定芽;雪柑抗性不定芽在抗性培养基上继续筛选30 d,长势较好,初展叶片为深绿色,酸柚不定芽则逐渐褪绿死亡;雪柑抗性不定芽在添加0.2 mg·L^-1 6-BA、0.2 mg·L^-1 NAA、0.2 mg·L^-1 GA3、500 mg·L^-1 Cef.和50 mg·L^-1 Kan.的MT培养基上继续培养90 d后发生抗性丢失并最终死亡。 展开更多
关键词 柑橘 根癌杆菌 胚轴 遗传转化
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影响根癌农杆菌转化效率的因素综述 预览
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作者 叶文兴 孔令琪 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期142-148,共7页
根癌农杆菌介导转化法是植物基因工程的重要方法,但其转化效率受多种因子的影响,包括化学物质、物理方法、外植体遗传特性等,涉及农杆菌与植物互作的各个阶段。将这些影响因子及其功能进行简要综述,以期为优化农杆菌介导植物遗传转化流... 根癌农杆菌介导转化法是植物基因工程的重要方法,但其转化效率受多种因子的影响,包括化学物质、物理方法、外植体遗传特性等,涉及农杆菌与植物互作的各个阶段。将这些影响因子及其功能进行简要综述,以期为优化农杆菌介导植物遗传转化流程提供帮助。 展开更多
关键词 根癌杆菌 TI质粒 T-DNA整合 染色体 转化效率
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农杆菌介导酸枣叶片遗传转化SPDS基因体系的建立
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作者 崔艳红 王欢 +3 位作者 豆苏含 张亚东 庞晓明 李颖岳 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第20期6710-6717,共8页
为研究根癌农杆菌介导的SPDS基因遗传转化酸枣叶片体系建立的条件,本研究以酸枣叶片为受体,采用根癌农杆菌(A grobacterium tumefaciens,LBA4404)介导法,将SPDS基因导入酸枣基因组,并对其遗传转化体系进行优化,对筛选获得的转基... 为研究根癌农杆菌介导的SPDS基因遗传转化酸枣叶片体系建立的条件,本研究以酸枣叶片为受体,采用根癌农杆菌(A grobacterium tumefaciens,LBA4404)介导法,将SPDS基因导入酸枣基因组,并对其遗传转化体系进行优化,对筛选获得的转基因酸枣植株进行检测。结果表明,根癌农杆菌介导的SPDS基因遗传转化的最佳条件为:将预培养3d的酸枣叶片,用LBA4404菌株菌液(DD600=0.6)浸染15min,共培养3d,然后转入含Kan20mNL和Cef200mg/L的筛选分化培养基上诱导分化,待抗性芽长到2~3cm后,转入含Kan40mg,L和Cef100mg/L的筛选生根培养基上进行筛选,在以上最佳遗传转化条件下,经过3次筛选得到19个抗性植株,经PCR检测,有9株呈阳性,即SPDS基因已被整合到酸枣基因组中,并可以正常转录。本研究成功建立了根癌农杆菌介导的酸枣叶片高效遗传转化体系,为枣树基因工程育种和种质创新提供了帮助。 展开更多
关键词 亚精胺合成酶基因 根癌杆菌 遗传转化 酸枣
农杆菌介导的黄瓜遗传转化的影响因素
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作者 常怀成 倪蕾 +1 位作者 孙涌栋 罗未蓉 《北方园艺》 北大核心 2018年第2期9-14,共6页
以"津优1号"黄瓜子叶节为外植体试材,研究了外植体苗态、乙酰丁香酮(AS)浓度、脱菌次数、头孢霉素(Cef)浓度及生根培养基等因素对遗传转化的影响,以期为开展黄瓜的遗传转化研究提供参考依据。结果表明:使用子叶抱合类外植体诱导... 以"津优1号"黄瓜子叶节为外植体试材,研究了外植体苗态、乙酰丁香酮(AS)浓度、脱菌次数、头孢霉素(Cef)浓度及生根培养基等因素对遗传转化的影响,以期为开展黄瓜的遗传转化研究提供参考依据。结果表明:使用子叶抱合类外植体诱导分化效果最好;在预培养基和共培养基中添加100μmol·L^-1 AS有利于外植体分化;用无菌水冲洗3次可有效控制农杆菌污染;选择培养基中添加300μmol·L^-1 Cef,生根培养基中添加400μmol·L^-1 Cef在抑制农杆菌的同时可有效促进根系生长。 展开更多
关键词 黄瓜 遗传转化 根癌杆菌 CsEXP10
根癌农杆菌Ti质粒简介 预览
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作者 王裕鹏 《生物学教学》 北大核心 2018年第6期65-66,共2页
本文以高中知识为背景,对根癌农杆菌中Ti质粒的分类、结构、转化机理和基因工程中的适用范围进行归纳总结。
关键词 根癌杆菌 TI质粒 T-DNA区 双元载体系统
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以抗除草剂Bar基因稳定转化谷子技术研究 预览 被引量:2
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作者 陈倩楠 王轲 +6 位作者 汤沙 杜丽璞 智慧 贾冠清 赵宝华 叶兴国 刁现民 《作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1423-1432,共10页
农杆菌介导的谷子遗传转化效率一直是制约谷子功能基因研究及转基因育种效率的主要因素。本研究以冀谷11谷子幼穗为外植体,选取0.5~1.0cm的幼穗,切成0.5cm左右的小段,置改良后的MS培养基上诱导15~20d形成胚性愈伤组织3120块。愈伤组织... 农杆菌介导的谷子遗传转化效率一直是制约谷子功能基因研究及转基因育种效率的主要因素。本研究以冀谷11谷子幼穗为外植体,选取0.5~1.0cm的幼穗,切成0.5cm左右的小段,置改良后的MS培养基上诱导15~20d形成胚性愈伤组织3120块。愈伤组织侵染转化前用侵染液悬浮浸泡,并经45°C热激预处理3min,可以有效提高26.1%的瞬时遗传转化效率。将转化后的愈伤组织经草丁膦(PPT)筛选后获得513块抗性愈伤组织,抗性愈伤组织获得率为16.4%。抗性愈伤组织经分化、壮苗培养后获得7株抗性植株,经PCR和Southern杂交检测得到6株T0代转基因阳性株,对T3代转化植株叶片进行PPT抗性分析,并结合Bar蛋白抗体试纸条鉴定,表明Bar基因已稳定整合到谷子基因组中。本研究建立了农杆菌介导转化谷子优良品种的遗传转化体系,对提高谷子转基因育种效率和谷子模式研究系统的建立有重要意义。 展开更多
关键词 谷子 根癌杆菌 遗传转化 热激 抗除草剂
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树莓遗传转化体系的建立与优化 预览
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作者 刘欢 张奋强 +6 位作者 闫希焕 高亭豪 杨明峰 薛飞燕 柳春梅 王有年 马兰青 《北京农学院学报》 2018年第3期6-10,共5页
【目的】树莓遗传转化体系的建立对研究其基因功能、性状形成机制等方面的生物学探索和育种改良方面的研究具有重要意义。【方法】建立2套稳定的遗传转化系统,系统1为叶片直接分化丛生芽遗传转化受体系统;系统2为树莓叶片脱分化形成愈... 【目的】树莓遗传转化体系的建立对研究其基因功能、性状形成机制等方面的生物学探索和育种改良方面的研究具有重要意义。【方法】建立2套稳定的遗传转化系统,系统1为叶片直接分化丛生芽遗传转化受体系统;系统2为树莓叶片脱分化形成愈伤组织再分化成芽遗传转化受体系统。【结果】转化效率分析结果显示,系统1转化率为25%,是系统2的2.1倍,抗性筛选获得阳性植株时间是系统2的50%。【结论】系统1具有更高的遗传转化效率。 展开更多
关键词 树莓 遗传转化 根癌杆菌
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转化转录因子HaNAC1基因提高马铃薯的抗逆性 被引量:2
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作者 张丽 程永芳 +5 位作者 巩檑 甘晓燕 聂峰杰 陈虞超 石磊 宋玉霞 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第14期4623-4631,共9页
为提高马铃薯抗逆性,利用农杆菌介导法,将携带目的基因HaNAC1质粒分别导入马铃薯栽培种‘大西洋’、‘费乌瑞它’和‘青薯168’中。对卡那霉素(Kan)抗性转化株系经PCR扩增检测,共得到63个阳性株系。利用Southern blot对随机选取的7个... 为提高马铃薯抗逆性,利用农杆菌介导法,将携带目的基因HaNAC1质粒分别导入马铃薯栽培种‘大西洋’、‘费乌瑞它’和‘青薯168’中。对卡那霉素(Kan)抗性转化株系经PCR扩增检测,共得到63个阳性株系。利用Southern blot对随机选取的7个转基因阳性株系进行检测,结果表明HaNAC1均已整合到各转基因株系中。对63个阳性株系进行RT-PCR检测,共有55个株系中出现目的基因条带,说明HaNAC1在转录水平有表达。以90 mmol/L NaCl和15%PEG分别添加至培养基中模拟盐和旱胁迫处理,从相对株高、相对根长等形态指标对32个‘大西洋’转基因株系进行筛选获得了4个优系,丙二醛、脯氨酸等生理指标也进一步证实HaNAC1基因转化可有效提高转基因马铃薯的抗逆性。 展开更多
关键词 马铃薯 根癌杆菌 HaNAC1基因 抗逆性
根癌农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化体系 预览 被引量:1
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作者 李金红 付莉 +3 位作者 关晓溪 霍岩 陶承光 史振声 《沈阳农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期266-271,共6页
为建立以潮霉素为选择标记的农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的玉米高效遗传转化体系,本研究利用携带p MDC141-CYP79A1(含GUS基因)质粒的农杆菌浸染玉米A188幼胚,共培养7d后通过GUS基因瞬时表达率,研究农杆菌的菌液浓度、热... 为建立以潮霉素为选择标记的农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的玉米高效遗传转化体系,本研究利用携带p MDC141-CYP79A1(含GUS基因)质粒的农杆菌浸染玉米A188幼胚,共培养7d后通过GUS基因瞬时表达率,研究农杆菌的菌液浓度、热激时间和浸染时间等因素对玉米幼胚遗传转化效率的影响。研究结果表明:随着农杆菌的菌液浓度的增加、热激时间和浸染时间的延长,GUS表达效率均呈现先增后减的趋势;当农杆菌菌液的OD600为0.8、热激预处理时间3min和浸染时间5min时,其GUS瞬时表达率均最高,分别为46.8%、46.4%和51.7%。并在最佳条件下将GUS基因转入到玉米幼胚,以潮霉素为选择标记,进行3次选择培养,将重新分化的抗性愈伤组织进一步分化成苗,获得56株潮霉素抗性植株,经PCR分子鉴定,获得22株阳性植株,初步建立根癌农杆菌介导的高效玉米幼胚遗传转化体系,为以抗潮霉素基因作为筛选标记的玉米遗传转化和基因功能验证提供技术基础,获得的抗潮霉素转化植株为玉米育种提供新材料。 展开更多
关键词 玉米 幼胚 根癌杆菌 遗传转化 GUS
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阿莫西林在农杆菌介导甘蓝型油菜遗传转化中的使用和优化 预览
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作者 石文慧 安然 +5 位作者 郭海霞 张金文 王朋宝 曹智 王志伟 乔岩 《江苏农业科学》 2018年第12期58-62,共5页
旨在寻找一种应用于农杆菌介导的甘蓝型油菜转化体系中能替代羧苄青霉素(Carb)和头孢霉素(Cef)的高效抗生素。以甘蓝型油菜杂交种青杂5号的恢复系"1831R"为试验材料,对苗龄4-5 d的下胚轴进行侵染,培养并观察抑菌效果、芽再生状况... 旨在寻找一种应用于农杆菌介导的甘蓝型油菜转化体系中能替代羧苄青霉素(Carb)和头孢霉素(Cef)的高效抗生素。以甘蓝型油菜杂交种青杂5号的恢复系"1831R"为试验材料,对苗龄4-5 d的下胚轴进行侵染,培养并观察抑菌效果、芽再生状况以及对转化效率的影响。结果表明,较高浓度(500-600 mg/L)处理下,4种抗生素[Carb、Cef、特美汀(Tim)、阿莫西林(Amo)]都可以很好地抑制农杆菌的生长,浓度低于500 mg/L时,抑菌效果由大到小为Carb〉Amo〉Cef〉Tim。随着4种抗生素浓度的增加,芽再生率呈先增加后降低趋势,300 mg/L时达到最大,且在相同浓度下,芽再生率由大到小为Amo〉Carb〉Tim〉Cef。经草甘膦抗性筛选及PCR检测,转化体系中使用Amo的转化效率为1.9%,比Carb、Cef转化效率分别高58.33%、90.00%。因此,阿莫西林在有效脱除农杆菌的同时,对芽再生的抑制作用最小,并具有较高转化效率。本研究对提高农杆菌介导的油菜遗传转化效率、加快油菜种质资源创新将具有重要的作用和意义。 展开更多
关键词 阿莫西林 根癌杆菌 甘蓝型油菜 遗传转化效率 抗生素 芽再生
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过表达FaSAMDC基因提高黑麦草属植物的抗旱性和耐热性 预览 被引量:2
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作者 曾庆飞 韦鑫 +3 位作者 蔡一鸣 舒健虹 吴佳海 王小利 《草业学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期117-127,共11页
主要探讨了在黑麦草属植物中导入高羊茅S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(FaSAMDC)对转基因植株抗旱耐热性的提高效果,为培育黑麦草抗旱耐热新品种提供种质新材料。选择黑麦草成熟种子为外植体,采用贵州省草业研究所分子生物学实验室构建的... 主要探讨了在黑麦草属植物中导入高羊茅S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因(FaSAMDC)对转基因植株抗旱耐热性的提高效果,为培育黑麦草抗旱耐热新品种提供种质新材料。选择黑麦草成熟种子为外植体,采用贵州省草业研究所分子生物学实验室构建的过表达载体以及黑麦草胚性愈伤组织高频植株再生和农杆菌介导的遗传转化体系,将克隆自高羊茅的FaSAMDC基因转入贵州地区主栽品种多花黑麦草特高和多年生黑麦草四季的基因组内,经抗性筛选、PCR检测和Southern杂交分析验证,获得45株特高与44株四季的转基因植株,转化频率分别为2.93%和2.28%。抗旱耐热试验表明,在30℃高温和中度干旱胁迫条件下,特高转基因株系的根冠比比对照组培苗高出7.08%,叶片相对含水量(RWC)比对照高出13.12%,RWC降低幅度比对照少5.49个百分点;四季转基因株系的根冠比比对照组培苗高出6.54%,RWC比对照高出12.54%,RWC降低幅度比对照少6.50个百分点,差异均达到显著水平(P〈0.05),证明转入FaSAMDC基因的黑麦草阳性株系的抗旱耐热能力得到了明显提高。形态与生长特征观测结果显示,与非转基因组培苗相比,转基因株系的叶长、株高、主茎节数减小,叶宽、单株分蘖数增加,叶色变深,植株形状趋向于叶片丛生的紧凑型,推测导入的FaSAMDC基因参与了基因表达、细胞分裂等生理功能的调节。 展开更多
关键词 黑麦草 根癌杆菌 遗传转化 FaSAMDC基因 抗旱耐热性
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