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亚致死质量浓度联苯肼酯对截形叶螨解毒酶系的影响
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作者 尚素琴 薛玉丽 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期728-735,共8页
【目的】明确联苯肼酯的亚致死质量浓度对截形叶螨Tetranychus truncatus解毒酶系的影响,从而为进一步揭示截形叶螨的代谢抗性及联苯肼酯的科学使用提供理论依据和指导。【方法】采用叶片浸渍法测定了联苯肼酯对截形叶螨雌成螨的LC50,... 【目的】明确联苯肼酯的亚致死质量浓度对截形叶螨Tetranychus truncatus解毒酶系的影响,从而为进一步揭示截形叶螨的代谢抗性及联苯肼酯的科学使用提供理论依据和指导。【方法】采用叶片浸渍法测定了联苯肼酯对截形叶螨雌成螨的LC50,应用毒力回归方程计算截形叶螨雌成螨死亡率为10%和30%时联苯肼酯的亚致死质量浓度LC10和LC30,并处理截形叶螨雌成螨,以甲醇水溶液作为对照,测定并分析其体内羧酸酯酶(CarE)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)、多功能氧化酶(MFO)的比活力及酶动力学常数(米氏常数Km和最大反应速率Vmax)的变化。【结果】比活力与对照相比,LC10、LC30处理后,截形叶螨雌成螨体内CarE、GSTs和MFO的比活力均显著升高(P<0.05),且LC30处理组CarE、GSTs(除24 h外)比活力显著高于LC10(P<0.05)。酶动力学常数:体内CarE的Km显著减小或无明显变化(P<0.05),Vmax显著增大(P<0.05),即CarE与底物亲和力增大,反应速率加快;而GSTs和MFO的Km显著增大或无明显变化(P<0.05),Vmax均显著减小(P<0.05),说明GSTs和MFO与底物亲和力低,反应速率降低。【结论】联苯肼酯对截形叶螨雌成螨体内的解毒酶系有诱导作用,CarE在截形叶螨对该杀螨剂的代谢中起主导作用。 展开更多
关键词 截形叶螨 联苯肼酯 致死中浓度LC50 解毒酶 活力 酶动力常数
分子模拟对接和定点突变提高10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基转移酶的活力 预览
2
作者 欧阳萍兰 黄佳俊 +5 位作者 林淑玲 魏韬 林俊芳 郭丽琼 刘俊峰 刘绮倩 《华南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期87-92,共6页
【目的】提高10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基转移酶(DBAT)活力,从而更高效地体外酶促合成巴卡亭Ⅲ。【方法】通过DBAT与其天然底物乙酰CoA的计算机分子模拟对接,选定C165W、N300I、F160C 3个氨基酸残基进行单点定点突变。突变基因经大肠... 【目的】提高10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基转移酶(DBAT)活力,从而更高效地体外酶促合成巴卡亭Ⅲ。【方法】通过DBAT与其天然底物乙酰CoA的计算机分子模拟对接,选定C165W、N300I、F160C 3个氨基酸残基进行单点定点突变。突变基因经大肠埃希菌重组表达,突变重组酶特性经体外酶促反应测定。【结果】3种突变重组酶的相对分子质量为67 000;最适反应温度均为32.5℃,与野生酶DBAT一致;DBAT^F160C与DBAT的最适反应pH为7.5,略高于DBAT^C165W和DBAT^N300I的最适反应pH(7.0);DBAT^C165W、DBAT^F160C和DBAT^N300I的比活力与DBAT相比分别提高了61.5%、59.6%和19.2%,催化效率分别提高了55.4%、35.1%和2.9%,3种突变酶的米式常数(Km)和最大反应速率(vmax)均高于DBAT。【结论】疏水突变导致突变酶的比活力相比野生型均有显著提高,研究结果为体外高效酶促合成紫杉醇化学半合成的直接前体物巴卡亭Ⅲ奠定了基础。 展开更多
关键词 10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基转移酶 分子模拟对接 定点突变 活力 酶促反应 巴卡亭Ⅲ
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热带念珠菌β-葡聚糖合成酶KRE9基因原核表达及其比活力测定 预览
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作者 刘政伟 李瑞芳 张瑞玲 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期628-634,共7页
【目的】原核表达热带念珠菌(Candida tropicalis MYA-3404)β-葡聚糖合成酶(KRE9),并进行酶比活力测定,为研究其结构和生物学功能提供参考。【方法】提取热带念珠菌DNA,PCR扩增KRE9基因,构建其原核表达载体pET28a-KRE9后转化大肠杆菌(E... 【目的】原核表达热带念珠菌(Candida tropicalis MYA-3404)β-葡聚糖合成酶(KRE9),并进行酶比活力测定,为研究其结构和生物学功能提供参考。【方法】提取热带念珠菌DNA,PCR扩增KRE9基因,构建其原核表达载体pET28a-KRE9后转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导表达及组氨酸(His)标签纯化树脂亲和柱纯化获得融合蛋白KRE9,并利用3,5-二硝基水杨酸(DNS)显色法测定其比活力。【结果】克隆获得的KRE9基因全长816bp,编码271个氨基酸,与参考基因序列(GenBank登录号XM_002547984)的相似性高达99.75%。将其原核表达载体pET28a-KRE9转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,通过诱导表达及纯化获得重组蛋白KRE9,经SDS-PAGE检测,发现其纯度较高,大小约35kD。Western blotting鉴定结果显示,重组蛋白KRE9能与抗His抗体发生特异性结合。重组蛋白KRE9比活力为9.169×104U/mg。【结论】重组蛋白KRE9具有良好的特异性和较高β-葡聚糖合成酶活性,可用于其结构和生物学功能研究。 展开更多
关键词 β-葡聚糖合成酶(KRE9) 热带念珠菌 原核表达 纯化 活力
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地龙祛痰组份的纯化效率及其溶菌作用
4
作者 朱智强 孙春容 +2 位作者 王秀伟 官臻 牛勃 《时珍国医国药》 CSCD 北大核心 2018年第2期320-322,共3页
目的了解地龙祛痰组份的纯化效率,检测其对不同类型核酸的降解作用、溶菌酶活性以及EDTA对其溶菌活性的影响。方法酸、碱变性沉淀及丙酮沉淀法制备祛痰组份粗提物,Bradford法检测蛋白含量,Yasuda法检测比活力,紫外光吸收法、琼脂糖凝胶... 目的了解地龙祛痰组份的纯化效率,检测其对不同类型核酸的降解作用、溶菌酶活性以及EDTA对其溶菌活性的影响。方法酸、碱变性沉淀及丙酮沉淀法制备祛痰组份粗提物,Bradford法检测蛋白含量,Yasuda法检测比活力,紫外光吸收法、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳检测对不同类型核酸的降解作用,比浊法检测地龙祛痰组份对溶壁微球菌的降解作用,将所得数据用多因素方差分析,比较EDTA对酶比活力的影响。结果 1000g鲜地龙纯化出4.12g粗提物,比活力纯化倍数为69。对环状、线状双链和单链DNA均有降解作用。对RNA无降解作用。含和不含EDTA的反应体系中,溶菌酶样比活力分别为400U/mg和410U/mg;EDTA对溶菌酶样作用没有差异(P〉0.05)。结论地龙祛痰组份纯化后蛋白含量减少,脱氧核糖核酸酶样活性提高,对不同类型的DNA具有降解作用,不能降RNA,具有溶菌酶样活性。EDTA不影响其溶菌酶样活性。 展开更多
关键词 地龙 祛痰 脱氧核糖核酸酶 溶菌酶 活力
原核表达重组牛凝乳酶的纯化 预览
5
作者 普燕 李轶杰 张富春 《食品与发酵工业》 CSCD 北大核心 2017年第4期61-68,共8页
原核表达获得的重组牛凝乳酶与商品重组牛凝乳酶有相似的酶学特性,具商业潜力,故进一步研究其纯化方法。使用离心与饱和硫酸铵沉淀,成功纯化出有活性的重组牛凝乳酶。蛋白最终回收率为1.82%,总活力比纯化前提高了73.3%,比活力... 原核表达获得的重组牛凝乳酶与商品重组牛凝乳酶有相似的酶学特性,具商业潜力,故进一步研究其纯化方法。使用离心与饱和硫酸铵沉淀,成功纯化出有活性的重组牛凝乳酶。蛋白最终回收率为1.82%,总活力比纯化前提高了73.3%,比活力提高了95.3倍。同时,讨论了如何提高包涵体复性率与产物回收率,为今后该酶的工业化生产提供技术参考。 展开更多
关键词 原核表达 重组凝乳酶 纯化 饱和硫酸铵沉淀 回收率 活力
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邻苯二甲酸二甲酯暴露对凡纳滨对虾壳膜几丁质酶的影响 预览
6
作者 高平章 简迪强 +1 位作者 吕凤娇 谢晓兰 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第17期155-158,共4页
以凡纳滨对虾为试验对虾,通过不同浓度0、2、10、20 μg/L邻苯二甲酸二甲酯(DMP)暴露不同时间(120、240 h)后,采用酶促反应动力学法及实时PCR检测分析对虾壳膜几丁质酶比活力及几丁质酶 mRNA表达量差异。结果显示,DMP暴露对对虾... 以凡纳滨对虾为试验对虾,通过不同浓度0、2、10、20 μg/L邻苯二甲酸二甲酯(DMP)暴露不同时间(120、240 h)后,采用酶促反应动力学法及实时PCR检测分析对虾壳膜几丁质酶比活力及几丁质酶 mRNA表达量差异。结果显示,DMP暴露对对虾壳膜几丁质酶比活力具有抑制作用,但不具有显著性。不同浓度DMP暴露不同时间后,对对虾壳膜几丁质酶系列基因的mRNA表达量均受到不同程度的影响,2 μg/L DMP 暴露120 h时,对虾壳膜LvCHT3 mRNA 表达量显著上升; 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 邻苯二甲酸二甲酯 暴露 壳膜几丁质酶 响应机制 活力 MRNA表达量 水体塑化剂监控
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粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶提取方法研究 预览
7
作者 林樟楠 张建安 +1 位作者 王智琴 刘宏娟 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期103-108,共6页
为建立一种高效的粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶粗酶提取方法,对比了酶法、研磨法、超声波法和玻璃珠法对粘红酵母胞内粗酶提取的影响,通过可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定,对粗酶提取方法进行评价,并在此基础上从震荡时间和... 为建立一种高效的粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶粗酶提取方法,对比了酶法、研磨法、超声波法和玻璃珠法对粘红酵母胞内粗酶提取的影响,通过可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定,对粗酶提取方法进行评价,并在此基础上从震荡时间和珠体装量方面对玻璃珠法粘红酵母ATP-柠檬酸裂解酶提取工艺进行了优化.可溶性蛋白浓度分析和ATP-柠檬酸裂解酶活性测定结果表明:玻璃珠法提取粗酶优于其他3种方法.对玻璃珠法进行进一步优化,得到的最优化的提取条件为细胞干重与珠体重量之比为11,冰浴震荡时间为20min,在此条件下,ATP-柠檬酸裂解酶比活可达到0.98U.mg^-1 ,分别是酶法、研磨法、超声波法测得酶活性的1.9,2.2,2.1倍,可溶性蛋白浓度为6.5mg.mL^-1, 分别是酶法、研磨法、超声波法测得酶活性的1.4,4.1,3.3倍.经过优化的玻璃珠法提取粘红酵母胞内粗酶液操作简便,且能够保持较高的ATP-柠檬酸裂解酶活性,是较理想的粘红酵母粗酶提取方法. 展开更多
关键词 粘红酵母 粗酶提取 ATP-柠檬酸裂解酶 活力
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砂地柏精油对枸杞木虱成虫离体Na-K-ATP酶活力的影响 预览 被引量:1
8
作者 苏柳 邵东华 +2 位作者 段立清 刘丽梅 冯淑军 《农业与技术》 2016年第14期250-251,共2页
为探索砂地柏精油杀虫机理,分别测定砂地柏精油对枸杞木虱成虫离体Na-K-ATP酶活力的影响。结果表明,砂地柏精油对枸杞木虱成虫离体Na-K-ATP酶具有明显的抑制作用,随着砂地柏精油浓度的增加,抑制作用增加,最高浓度处对应的酶抑制率达到37... 为探索砂地柏精油杀虫机理,分别测定砂地柏精油对枸杞木虱成虫离体Na-K-ATP酶活力的影响。结果表明,砂地柏精油对枸杞木虱成虫离体Na-K-ATP酶具有明显的抑制作用,随着砂地柏精油浓度的增加,抑制作用增加,最高浓度处对应的酶抑制率达到37.87%。 展开更多
关键词 枸杞木虱 砂地柏精油 ATP酶 活力
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Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51和Asp69定点突变对酶活性的影响 预览
9
作者 孙玉英 严翠 +3 位作者 王淑军 张继泉 赵宏 赵斌元 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第16期167-171,177共6页
为确定Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶特定氨基酸与酶活性间的关系,以含壳聚糖酶基因的p CT7-CHISP6H-m Mschito质粒为模板,利用反向PCR的方法对壳聚糖酶两个可能的酶活性位点Glu51(突变成Gln51)和Asp69(突变成Asn69)进行突变,从... 为确定Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶特定氨基酸与酶活性间的关系,以含壳聚糖酶基因的p CT7-CHISP6H-m Mschito质粒为模板,利用反向PCR的方法对壳聚糖酶两个可能的酶活性位点Glu51(突变成Gln51)和Asp69(突变成Asn69)进行突变,从而构建了两个单位点突变,突变质粒分别转化至Escherichia coli BL21(DE3)并经IPTG诱导表达,测定突变前后酶的比活性,突变酶(Asp69→Asn69)比活力与野生型相比几乎不变,而突变酶(Glu51→Gln51)比活力大约为野生型的10%。通过测定动力学常数发现,突变酶和天然酶Km几乎没有很明显的变化,但是突变酶(Glu51→Gln51)的Vmax与上述两种酶的Vmax相比有很明显的变化。采用DNA Star和Deep view分析软件,预测突变前后壳聚糖酶的二级结构和三级结构,结果表明,Microbacterium sp.OU01壳聚糖酶Glu51极有可能是维持酶的催化活力的必需氨基酸,它的突变可能导致酶蛋白二级结构组件及氢键网络的改变,从而导致酶活力的丧失。 展开更多
关键词 壳聚糖酶 定点突变 活力 必需氨基酸
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利用柚皮高效发酵生产柚苷酶的研究 预览
10
作者 郭小红 刘艳苓 +4 位作者 姜泽东 李利君 朱艳冰 倪辉 蔡慧农 《集美大学学报:自然科学版》 CAS 2015年第5期356-364,共9页
以棘孢曲霉为菌种,以磷酸氢二铵为氮源固态发酵柚皮生产柚苷酶,结果表明,在以柚皮为碳源和磷酸氢二铵为氮源的发酵体系中,添加疏松剂和豆饼粉对柚苷酶发酵没有显著影响,而磷酸氢二铵添加量和水分质量分数对柚苷酶合成具有显著影响.当无... 以棘孢曲霉为菌种,以磷酸氢二铵为氮源固态发酵柚皮生产柚苷酶,结果表明,在以柚皮为碳源和磷酸氢二铵为氮源的发酵体系中,添加疏松剂和豆饼粉对柚苷酶发酵没有显著影响,而磷酸氢二铵添加量和水分质量分数对柚苷酶合成具有显著影响.当无水柚皮粉中磷酸氢二铵和水分质量分数分别为32.4%和170.0%时,有利于提高柚苷酶发酵活力.在接种量为7.1%、发酵温度为30℃的情况下发酵6 d,柚苷酶比合成速率与棘孢曲霉的生长速率符合模型Y柚苷酶=6.2677 X-0.0381,其中Y代表柚苷酶的比合成速率,X代表比生长速率.用Davis法测得柚苷酶活力为94.61 IU/g,酶发酵的培养基成本(5×10-5元/IU)远远低于其他同类研究,酶的纯度远高于用豆饼粉为氮源所获得的酶纯度. 展开更多
关键词 柚皮 柚苷酶 固态发酵 成本估算 活力
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化学修饰提高谷氨酰胺转胺酶活性与热稳定性 预览 被引量:1
11
作者 刘松 堵国成 陈坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1135-1140,共6页
谷氨酰胺转氨酶(EC 2.3.2.13,简称TGase)是一种催化转酰基反应,导致蛋白质分子间发生交联的酶,广泛应用于食品、纺织、皮革、医药等领域。为提高TGase比活力与热稳定性,作者以邻苯二甲酸酐为修饰剂,对重组吸水链霉菌(Streptomyces hy... 谷氨酰胺转氨酶(EC 2.3.2.13,简称TGase)是一种催化转酰基反应,导致蛋白质分子间发生交联的酶,广泛应用于食品、纺织、皮革、医药等领域。为提高TGase比活力与热稳定性,作者以邻苯二甲酸酐为修饰剂,对重组吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)TGase分子赖氨酸残基进行化学修饰。确定最佳修饰条件为:pH 8.0、20℃修饰反应2 h、TGase表面氨基与PA摩尔比为1∶2。无胱胺(TGase的竞争性抑制剂)存在时,PA修饰使TGase比活力提高48.3%;10mmol/L胱胺存在时,PA修饰使TGase热稳定性提高31.3%。晶体模拟结构显示,21个赖氨酸残基位于S.hygroscopicus TGase分子表面,其中5个位于催化活性中心附近区域。表面疏水性分析发现,不同条件的PA修饰使TGase分子表面疏水度降低9.46%-21.13%。因此,PA可能通过改变TGase分子不同区域的疏水性来提高其比活力和热稳定性的。上述结果表明,PA修饰是一种改进TGase酶学性质的有效策略,为其后续的分子改造提供了一定的理论参考。 展开更多
关键词 谷氨酰胺转胺酶 邻苯二甲酸酐 活力 热稳定性 表面疏水度
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嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2分离纯化研究 预览 被引量:2
12
作者 段改丽 赵瑞香 +2 位作者 杨天佑 牛生洋 王莹 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第15期163-165,170共4页
采用氯仿萃取和硫酸铵梯度盐析两种方法对嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2进行粗提,氯仿萃取获得的粗提物抑菌直径为17.40mm;硫酸铵饱和梯度盐析,其中60%-80%饱和梯度粗提物抑菌效果较好,抑菌直径为15.50mm。两种粗提物经离... 采用氯仿萃取和硫酸铵梯度盐析两种方法对嗜酸乳杆菌细菌素Lactobacillin XH2进行粗提,氯仿萃取获得的粗提物抑菌直径为17.40mm;硫酸铵饱和梯度盐析,其中60%-80%饱和梯度粗提物抑菌效果较好,抑菌直径为15.50mm。两种粗提物经离子交换cellufineA-500柱层析纯化后,抑菌效价和比活力显著增强,分别是380.60Au/mL和355.60Au/mL、5.55Au/μg和9.96Au/μg,提纯倍数分别为15.86、28.46。Tricine—SDS—PAGE电泳测得Lactobacillin XH2分子量在14.4~20.1ku之间。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 细菌素 分离纯化 活力
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胁迫温度短期冲击对松毛虫赤眼蜂谷胱甘肽硫转移酶活性的影响 预览 被引量:1
13
作者 孙悦 勾天兵 +2 位作者 韩姣 李娟 王晓丹 《吉林林业科技》 2014年第5期36-38,共3页
以松毛虫赤眼蜂为对象,对其不同温度条件下的谷胱甘肽硫转移酶比活力进行测定,结果表明:在15℃处理条件下,谷胱甘肽硫转移酶的比活力最低,为6.80±4.71;在35℃处理条件下最高,为98.22±1.76;25℃处理介于两者之间,... 以松毛虫赤眼蜂为对象,对其不同温度条件下的谷胱甘肽硫转移酶比活力进行测定,结果表明:在15℃处理条件下,谷胱甘肽硫转移酶的比活力最低,为6.80±4.71;在35℃处理条件下最高,为98.22±1.76;25℃处理介于两者之间,为32.49±2.60;3种温度条件下的谷胱甘肽硫转移酶比活力存在显著差异(P <0.05),且随着温度的升高比活力显著上升。 展开更多
关键词 松毛虫赤眼蜂 温度 谷胱甘肽硫转移酶 活力
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12种中药饮片中纤溶酶成分的分离筛选
14
作者 孙瑶 任晓莉 赵润柱 《国际中医中药杂志》 2014年第8期731-733,共3页
目的:从12种具有活血化瘀功能的中草药饮片中分离筛选出具有纤溶酶活性的成分。方法采用水浸盐析的方法从12种中草药饮片中得到蛋白粗提物,并采用纤维蛋白平板法对其进行活性测定,制作尿激酶标准曲线测定提取物中纤溶酶成分的比活力... 目的:从12种具有活血化瘀功能的中草药饮片中分离筛选出具有纤溶酶活性的成分。方法采用水浸盐析的方法从12种中草药饮片中得到蛋白粗提物,并采用纤维蛋白平板法对其进行活性测定,制作尿激酶标准曲线测定提取物中纤溶酶成分的比活力。结果其中11种中草药蛋白粗提物中含有纤溶酶成分,36 h后瓜蒌产生的溶圈面积最大,泽泻和益母草次之,而黄芪产生的溶圈面积最小。综合蛋白质浓度、纤维蛋白平板上提取物的溶圈面积以及蛋白质比活力,发现当归提取物的纤溶酶比活力最大,为48.46 U/mg。结论12种中草药饮片的蛋白粗提物除桃仁外均具有纤溶酶活性,对纤维蛋白具有不同程度的溶解作用。 展开更多
关键词 中草药 纤溶酶 分离 活力
胁迫温度短期冲击对松毛虫赤眼蜂羧酸酯酶活性的影响 预览 被引量:1
15
作者 韩姣 李娟 +4 位作者 勾天兵 孙悦 陈平 杨帆 张杨 《吉林林业科技》 2014年第4期30-32,共3页
以松毛虫赤眼蜂为对象,在不同温度胁迫短期冲击条件下对其羧酸酯酶比活力进行测定,结果表明:在15℃条件下,羧酸酯酶的比活力最高,为270.00±28.50;35℃条件下最低,为101.50±3.60;25℃条件下介于两者之间,为150.0... 以松毛虫赤眼蜂为对象,在不同温度胁迫短期冲击条件下对其羧酸酯酶比活力进行测定,结果表明:在15℃条件下,羧酸酯酶的比活力最高,为270.00±28.50;35℃条件下最低,为101.50±3.60;25℃条件下介于两者之间,为150.00±3.00;3种温度条件下的羧酸酯酶比活力存在显著差异(P <0.05),且随着温度的升高羧酸酯酶比活力显著下降。 展开更多
关键词 温度 松毛虫赤眼蜂 羧酸酯酶 活力
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乳糖酶突变体库的构建及高活性突变体的快速筛选 预览
16
作者 秦星 孙宁 +4 位作者 张丰华 张宇宏 吴坤 张伟 刘波 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期135-142,共8页
构建了亮白曲霉来源的β-半乳糖苷酶活性中心的第219位丝氨酸的毕赤酵母饱和突变体库以筛选水解活性提高的乳糖酶。另外,通过以毕赤酵母发酵基础盐诱导培养基代替传统的BMMY培养基来诱导表达β-半乳糖苷酶和其突变体。结果表明,诱导... 构建了亮白曲霉来源的β-半乳糖苷酶活性中心的第219位丝氨酸的毕赤酵母饱和突变体库以筛选水解活性提高的乳糖酶。另外,通过以毕赤酵母发酵基础盐诱导培养基代替传统的BMMY培养基来诱导表达β-半乳糖苷酶和其突变体。结果表明,诱导时间在48~60h且粗酶液中总蛋白量在0.2~0.8mg/mL时,各乳糖酶的活力均高于其在BMMY培养基中的活力;各乳糖酶的比活力在此阶段保持相对稳定,且与纯化后的酶比活力呈正相关,即各乳糖酶的比活力高低可以粗酶液中乳糖酶的比活力来相对定量。在此基础上,利用高通量的48孔培养板创建了一种简便、高通量从B一半乳糖苷酶突变体库中筛选高水解活力乳糖酶的方法,并应用该方法快速地从突变体库中筛选到3个水解活力显著提高的突变体S-38、S-35和S-1,比活力分别提高了10.3%,9.2%和6%,高通量的筛选方法是定向进化技术中的重要环节,为其顺利开展奠定了基础。 展开更多
关键词 Β-半乳糖苷酶 饱和突变 发酵基础盐培养基 高通量筛选 活力
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东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs活性的影响 预览
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作者 达爱斯 倪婧 +4 位作者 谢道燕 柴建萍 江秀均 刘增虎 罗雁婕 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期123-126,共4页
[目的]探讨东莨菪内酯对家蚕中肠组织谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)活性的影响,为桑园使用东莨菪内酯防治虫害的安全性及家蚕抗性品系选育提供理论依据.[方法]采用毒叶法对家蚕进行添毒,测定东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs活性的影响,并通过... [目的]探讨东莨菪内酯对家蚕中肠组织谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)活性的影响,为桑园使用东莨菪内酯防治虫害的安全性及家蚕抗性品系选育提供理论依据.[方法]采用毒叶法对家蚕进行添毒,测定东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs活性的影响,并通过离体抑制试验求出东莨菪内酯对GSTs的抑制中浓度(IC50).[结果]摄食不同浓度东莨菪内酯(0.026~0.104 mol/L)处理桑叶的家蚕表现出相似的中毒症状(吐液和拒食),但在添毒36h后中毒症状完全消失.相对于正常的家蚕,摄食东莨菪内酯处理桑叶后家蚕中肠组织的GSTs比活力呈前期降低、中期升高、后期降低的变化趋势.不同浓度(0.001~0.016 mol/L)的东莨菪内酯均显著抑制家蚕中肠组织离体GSTs活性,且抑制率随东莨菪内酯浓度的增加而增加.东莨菪内酯对家蚕中肠组织GSTs的IC50为0.00474 mol/L.[结论]东莨菪内酯可抑制家蚕中肠组织GSTs活性. 展开更多
关键词 家蚕 谷胱甘肽S-转移酶(GSTs) 东莨菪内酯 活力 抑制中浓度(IC50)
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羊血凝血酶制备条件优化 预览
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作者 祝霞 韩舜愈 +5 位作者 杜娜 付文力 牛黎莉 王婧 盛文军 杨学山 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期213-215,220共4页
以羊血为试材,凝血酶比活力为指标,在凝血酶原沉淀pH、激活时间、激活温度、Ca2+浓度等单因素实验基础上,采用正交实验优化羊血凝血酶制备条件。结果表明,参试因子对凝血酶比活力影响大小顺序为pH、激活温度、Ca2+浓度和激活时间... 以羊血为试材,凝血酶比活力为指标,在凝血酶原沉淀pH、激活时间、激活温度、Ca2+浓度等单因素实验基础上,采用正交实验优化羊血凝血酶制备条件。结果表明,参试因子对凝血酶比活力影响大小顺序为pH、激活温度、Ca2+浓度和激活时间,最佳工艺条件为:pH5.2、激活时间2.5h、激活温度30℃、Ca2+浓度0.1mol/L。在此条件下,分离纯化的凝血酶比活力达268.3U/rag。 展开更多
关键词 血浆 凝血酶 激活 活力
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不同鸡龄鸡血清中乙酰胆碱酯酶酶活力的比较研究 预览
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作者 胡晓倩 宋炜 +1 位作者 胡超 黄松 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第20期111-114,共4页
实验从发育的角度出发,探讨了血清中乙酰胆碱酯酶的含量、活力与家禽个体发育之间的关系。选取不同年龄阶段黄羽鸡,将其血清作为乙酰胆碱酯酶的酶源,分别对粗酶以及透析后的酶液进行蛋白质含量、酶活力和比活力的测定。实验结果表明... 实验从发育的角度出发,探讨了血清中乙酰胆碱酯酶的含量、活力与家禽个体发育之间的关系。选取不同年龄阶段黄羽鸡,将其血清作为乙酰胆碱酯酶的酶源,分别对粗酶以及透析后的酶液进行蛋白质含量、酶活力和比活力的测定。实验结果表明,不同发育阶段鸡的鸡血中乙酰胆碱酯酶酶活力是有差异的,5个月大的黄羽鸡的血液中蛋白质含量(纯化后)、乙酰胆碱酯酶酶活力和比活力最高。这也为乙酰胆碱酯酶从低廉易得的鸡血原料中进行提取研究提供了参考。 展开更多
关键词 鸡龄 乙酰胆碱酯酶 蛋白质含量 活力 活力
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消化酶活性与锦鲤个体生长关系的初步研究 预览
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作者 王秋岑 刘玮 《江西科学》 2013年第1期43-47,共5页
饲喂个体标记的锦鲤(Cryprinuscarpiod)2个月,每2周测定一次体重,初步探讨了锦鲤体重的增加与其胰蛋白酶和淀粉酶活性的相关联系。结果发现这2种消化酶的比活力与锦鲤的相对增重率和特定生长率均低度相关,相关性不显著;但胰蛋白... 饲喂个体标记的锦鲤(Cryprinuscarpiod)2个月,每2周测定一次体重,初步探讨了锦鲤体重的增加与其胰蛋白酶和淀粉酶活性的相关联系。结果发现这2种消化酶的比活力与锦鲤的相对增重率和特定生长率均低度相关,相关性不显著;但胰蛋白酶比活力与淀粉酶比活力表现为显著相关。这表明锦鲤体重增加的快慢与其胰蛋白酶和淀粉酶活性大小之间的关联度不如预期的那么明显。 展开更多
关键词 胰蛋白酶 淀粉酶 锦鲤 活力
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