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猪ASC及Ub基因的克隆及真核表达重组质粒的构建 预览
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作者 樊钰莹 华思红 +2 位作者 王志鹏 孙永科 杨玉艾 《动物医学进展》 北大核心 2019年第1期7-11,共5页
炎症小体不仅参与机体的天然免疫反应,同时还参与机体抗病毒等多种宿主防御反应。在多种疾病相关信号通路反应中都伴随着蛋白质的泛素化修饰。NOD样受体(NLRs)介导的炎症小体信号通路中,凋亡相关点状样蛋白(ASC)是关键的接头蛋白。为了... 炎症小体不仅参与机体的天然免疫反应,同时还参与机体抗病毒等多种宿主防御反应。在多种疾病相关信号通路反应中都伴随着蛋白质的泛素化修饰。NOD样受体(NLRs)介导的炎症小体信号通路中,凋亡相关点状样蛋白(ASC)是关键的接头蛋白。为了解猪瘟病毒(CSFV)感染对ASC泛素化水平的影响,通过RT-PCR从猪血管内皮细胞(ECs)中扩增获得ASC和泛素(Ub)的全长cDNA双链片段,连接至克隆载体pMD-18T,获得重组克隆质粒pMD-ASC和pMD-Ub。双酶切pMD-ASC获得ASC目的序列,连接至pcDNA3.1-Flag,双酶切pMD-Ub获得Ub目的序列,连接至pcDNA3.0-HA,获得重组表达质粒pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub。将pcDNA3.1-Flag-ASC和pcDNA3.0-HA-Ub转染ECs,Westernblot在蛋白水平检测ASC和Ub的表达。结果表明,成功构建了带有Flag标签的ASC真核表达质粒和带有HA标签的Ub真核表达质粒,且在ECs中获得高效表达,为进一步体外研究CSFV调控猪血管内皮细胞ASC泛素化的机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 凋亡相关点状样蛋白 泛素 真核表达 泛素
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USP9X与前列腺癌的研究新进展 预览
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作者 熊波波 张劲松 +2 位作者 王海峰 左毅刚 王剑松 《世界最新医学信息文摘(电子版)》 2019年第12期52-53,共2页
泛素特异性肽酶9X(USP9X)作为去泛素化酶家族的亚家族泛素特异性蛋白酶(USPs)的成员之一,是一种去泛素化蛋白酶,泛素-蛋白酶体途径参与人体内许多细胞生命活动。最近多项研究表明其已成为肿瘤细胞生长和自我更新的潜在驱动因素,类似于... 泛素特异性肽酶9X(USP9X)作为去泛素化酶家族的亚家族泛素特异性蛋白酶(USPs)的成员之一,是一种去泛素化蛋白酶,泛素-蛋白酶体途径参与人体内许多细胞生命活动。最近多项研究表明其已成为肿瘤细胞生长和自我更新的潜在驱动因素,类似于激酶信号传导途径中的磷酸酶,甚至一些报道将USP9X描述为致癌基因。USP9X在多种类型的恶性肿瘤中表达异常,在前列腺癌中USP9X可以去泛素化及稳定前列腺癌细胞中ERG蛋白水平,防止其蛋白酶体降解,从而控制前列腺癌的发展。 展开更多
关键词 泛素 泛素特异性蛋白酶 前列腺癌
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泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 邓盈盈 谢晶莹 +5 位作者 韩玉梅 张海霞 李向茸 李琼毅 魏锁成 冯若飞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期355-362,共8页
为建立一种泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为泛素基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中公布的泛素基因序列设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测泛素基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法... 为建立一种泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为泛素基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中公布的泛素基因序列设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测泛素基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法进行条件优化与评价。结果显示,建立的实时荧光定量PCR方法的线性关系好,以质粒标准品构建的标准曲线的相关系数r~2为0.999;灵敏性、特异性及重复性均较高;应用建立的方法对多种种属来源细胞进行检测,能检测出不同类型细胞中泛素的含量。结果表明,成功建立了一种快速、准确检测泛素TaqMan实时荧光定量PCR方法。 展开更多
关键词 泛素 实时荧光定量PCR TAQMAN探针
重组表达泛素化HBcAg融合基因和Tapasin基因的慢病毒的包装及鉴定 预览
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作者 戴胜兰 邱彩玉 +1 位作者 姚俊 许亚平 《中国医药导报》 CAS 2019年第4期9-12,17共5页
目的构建和包装稳定表达泛素化HBcAg融合基因和Tapasin基因的重组慢病毒,为慢性乙型肝炎免疫治疗的实验研究奠定基础。方法设计引物通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因Ub-HBcAg,Ub-HBcAg基因与经酶切线性化的慢病毒表达载体质粒pL... 目的构建和包装稳定表达泛素化HBcAg融合基因和Tapasin基因的重组慢病毒,为慢性乙型肝炎免疫治疗的实验研究奠定基础。方法设计引物通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因Ub-HBcAg,Ub-HBcAg基因与经酶切线性化的慢病毒表达载体质粒pLenti-CMV-HA-3Flag-P2A-EGFP定向连接,其产物pLenti-CMV-Ub-HBcAg-HA-3Flag-P2A-EGFP转化大肠杆菌菌株DH5α感受态细胞,挑选阳性克隆进行PCR鉴定和直接测序序列分析。将化学合成的T2A-Tapasin基因插入至pLenti-CMV-Ub-HBcAg-HA-3Flag-P2A-EGFP,其产物pLenti-CMV-Ub-HBcAg-HA-T2A-Tapasin-3Flag-P2A-EGFP经直接基因测序分析后与包装质粒pLP1、pLP2以及包膜质粒pLP/VSVG共转染人胚肾293T细胞,得到携带有Ub-HBcAg基因和Tapasin基因的重组慢病毒颗粒LV-Ub-HBcAg/Tapasin,重组慢病毒颗粒转染293T细胞,实时荧光定量PCR检测慢病毒浓缩液的滴度,Westernblot法检测目的基因的表达。结果成功构建和包装了表达泛素化HBcAg融合基因和Tapasin基因的重组慢病毒,实时荧光定量PCR证实重组慢病毒的滴度达3.25×108TU/mL。结论成功构建稳定表达泛素化HBcAg融合基因和Tapasin基因的重组慢病毒,为慢性乙肝的免疫治疗提供了实验基础。 展开更多
关键词 慢病毒 乙型肝炎核心抗原 泛素 分子伴侣Tapasin
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泛素基因沉默对TLR4/NF-κB信号通路中关键分子表达的影响 预览
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作者 刘超英 董骎 +3 位作者 高洪 严玉霖 富国文 单春兰 《江苏农业科学》 2019年第8期37-40,共4页
为了探讨泛素(ubiquitin,简称Ub)对TLR4/NF-κB信号通路中关键分子表达的影响,通过脂质体将短发夹RNA(shRNA)质粒转染猪小肠上皮细胞,使其泛素基因沉默,于转染后6、12、24、48h收集细胞及其上清。应用荧光定量PCR检测细胞内TLR4/NF-κB... 为了探讨泛素(ubiquitin,简称Ub)对TLR4/NF-κB信号通路中关键分子表达的影响,通过脂质体将短发夹RNA(shRNA)质粒转染猪小肠上皮细胞,使其泛素基因沉默,于转染后6、12、24、48h收集细胞及其上清。应用荧光定量PCR检测细胞内TLR4/NF-κB信号通路中关键分子TLR4、NF-κB、MyD88、IκB-α的mRNA表达水平,应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NF-κB、IκB-α及炎性因子TNF-α、IL-1含量的变化。结果显示,shRNA质粒有效地抑制了泛素基因的表达,转染shRNA质粒后,TLR4/NF-κB信号通路中TLR4、NF-κB、MyD88和IκB-α的mRNA表达量及NF-κB、IκB-α、TNF-α和IL-1含量均普遍呈下降的趋势,说明泛素在炎性因子的释放中起着至关重要的作用,泛素基因的沉默能够抑制该通路的活化。 展开更多
关键词 泛素 基因沉默 信号通路 炎性因子
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细胞自噬在个体发育和肿瘤发生中的作用
6
作者 李国辉 李东 +2 位作者 祁馨宇 邱立鹏 唐琦 《生命科学研究》 CAS CSCD 2019年第1期46-53,共8页
细胞自噬是一种广泛存在于真核生物细胞中的代谢过程,参与调控胞内物质合成、降解和重新利用之间的代谢平衡。自噬体与溶酶体的有效融合能有效地保障胞内多余物质的降解及其再利用,是真核细胞所特有的一种自我保护机制。细胞自噬近年来... 细胞自噬是一种广泛存在于真核生物细胞中的代谢过程,参与调控胞内物质合成、降解和重新利用之间的代谢平衡。自噬体与溶酶体的有效融合能有效地保障胞内多余物质的降解及其再利用,是真核细胞所特有的一种自我保护机制。细胞自噬近年来受到广泛的关注,其不仅能充当胞内一个合格的质检员,有效地降解胞内受损的蛋白质成分和细胞器,进而阻止细胞损伤和凋亡,也与肿瘤发生、衰老、神经退行性疾病、人体自身免疫性疾病、肥胖症和糖尿病等多种疾病的发生及发展密切相关。本文旨在对细胞自噬过程和其调控机制进行介绍,并侧重对自噬在生长发育和肿瘤发生中的作用进行综述,为预防与治疗多种人类重大疾病提供理论依据。 展开更多
关键词 细胞自噬 溶酶体 泛素 蛋白质聚集体 肿瘤
基于S-核酸酶的自交不亲和Cullin1基因的研究进展
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作者 曾斌 余镇藩 +3 位作者 马鑫鑫 王建友 阿布都卡尤木·阿依麦提 王波 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期466-470,共5页
自交不亲和性是一种普遍存在于显花植物中的生殖隔离现象,可以抑制近亲繁殖而促成异交。由S-核酸酶介导的植物配子体自交不亲和机制类型的花柱S决定子基因编码的S-核酸酶进入花粉管,异花授粉下则会被花粉SCF复合体所标记泛素后被26S蛋... 自交不亲和性是一种普遍存在于显花植物中的生殖隔离现象,可以抑制近亲繁殖而促成异交。由S-核酸酶介导的植物配子体自交不亲和机制类型的花柱S决定子基因编码的S-核酸酶进入花粉管,异花授粉下则会被花粉SCF复合体所标记泛素后被26S蛋白酶体分解,从而发生异交亲和;然而自花授粉过程中,自我的花粉SCF复合体不会泛素标记花柱S基因编码的S-RNase,从而拥有活力,分解花粉管中的RNA导致花粉管生长发生障碍,进而蛋白质合成受阻,引起自交不亲和。Cullin1是SCF复合体中的一个基因,在SCF复合体SKPl-Cullin1-Rbx1-F-box的晶体结构当中充当重要角色,该综述将主要介绍并讨论基于S-核酸酶的自交不亲和Cullin1基因的研究进展。 展开更多
关键词 自交不亲和性 SCF复合体 Cullin1基因 泛素
p62/SQSTM1在动脉粥样硬化中的研究进展
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作者 梁晓飞 王超 关秀茹 《国际免疫学杂志》 CAS 2019年第2期203-207,共5页
动脉粥样硬化是一种以脂代谢异常和炎症反应为特征的渐进性疾病,自噬在疾病的演变中发挥重要作用.p62/SQSTM1是连接泛素化蛋白到自噬机制的重要调控分子,可以经多条信号通路参与疾病的调控.因此,基于自噬理论研究p62在动脉粥样硬化中的... 动脉粥样硬化是一种以脂代谢异常和炎症反应为特征的渐进性疾病,自噬在疾病的演变中发挥重要作用.p62/SQSTM1是连接泛素化蛋白到自噬机制的重要调控分子,可以经多条信号通路参与疾病的调控.因此,基于自噬理论研究p62在动脉粥样硬化中的作用具有重要意义.大量研究表明p62参与泡沫细胞形成、炎症因子释放及斑块的不稳定.在动脉粥样硬化早期,p62可以延缓疾病的发展,而病变晚期,p62可以导致斑块不稳定.以下从p62的结构和功能及其在自噬和动脉粥样硬化中的作用进行了综述,以期为阐明动脉粥样硬化的发病机制提供依据. 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 自噬 泛素 p62/SQSTM1
胃癌患者肌肉组织中泛素表达与营养状况和预后的关系
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作者 章国良 罗钧刚 +3 位作者 孙元水 方孙阳 陈福森 唐智亮 《中华临床营养杂志》 CAS CSCD 2018年第2期78-82,共5页
目的 研究胃癌患者肌肉组织中泛素(Ub)表达与患者营养状况和预后的关系.方法 采用逆转录PCR、Western blot检测102例胃癌和53例腹腔良性疾病患者腹直肌中Ub mRNA和蛋白的表达.结果 胃癌患者腹直肌中Ub mRNA表达较腹腔良性疾病患者明... 目的 研究胃癌患者肌肉组织中泛素(Ub)表达与患者营养状况和预后的关系.方法 采用逆转录PCR、Western blot检测102例胃癌和53例腹腔良性疾病患者腹直肌中Ub mRNA和蛋白的表达.结果 胃癌患者腹直肌中Ub mRNA表达较腹腔良性疾病患者明显升高(4.10±1.04比3.17±0.32,t=7.386,P=0.000);胃癌患者腹直肌中Ub蛋白表达较腹腔良性疾病患者明显升高(0.151±0.058比0.084±0.046,t=7.275,P=0.000);胃癌患者腹直肌中Ub mRNA表达升高与患者体质量丢失、体质量指数、营养预后指数、血清白蛋白及血红蛋白水平的下降有关(x2分别为11.780、6.557、11.849、15.742、8.360,P分别为0.001、0.010、0.001、0.000、0.004);胃癌患者腹直肌中UbmRNA表达升高与患者的性别、年龄、肿瘤大小和Borrmann分型无关(x2分别为0.038、1.978、0.486、1.483,P分别为0.774、0.160、0.486、0.223),而与胃癌病理类型、淋巴结转移及TNM分期有关(x2分别为11.260、9.362、20.517,P分别为0.004、0.002、0.000).胃癌患者腹直肌中UbmRNA的表达水平与患者的生存率有关(x2=5.775,P=0.016).结论 胃癌患者腹直肌中Ub mRNA和蛋白表达较非肿瘤患者明显升高,且Ub mRNA表达升高与患者的营养状况和预后有关,Ub可能在癌性恶液质的发展过程中起重要作用. 展开更多
关键词 胃癌 泛素 营养 预后 恶液质
督脉灸对衰老模型大鼠骨骼肌泛素蛋白酶体途径的影响 预览
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作者 林建平 王喜 +3 位作者 刘午龙 陈艺敏 陈少清 王诗忠 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2018年第9期1018-1021,共4页
目的探讨督脉灸改善骨骼肌衰老的泛素蛋白酶体途径机制。方法Sprague-Dawley大鼠30只随机分为空白组、模型组和督脉灸组各10只。模型组和督脉灸组每天颈背部皮下注射D-半乳糖125 mg/kg,共6周,空白组皮下注射等量生理盐水。随后督脉灸组... 目的探讨督脉灸改善骨骼肌衰老的泛素蛋白酶体途径机制。方法Sprague-Dawley大鼠30只随机分为空白组、模型组和督脉灸组各10只。模型组和督脉灸组每天颈背部皮下注射D-半乳糖125 mg/kg,共6周,空白组皮下注射等量生理盐水。随后督脉灸组艾灸大椎穴至腰俞穴之间督脉,每天20 min,共20 d。剥离双侧竖脊肌,Western blotting检测泛素、肌环指蛋白1(MuRF1)、肌萎缩F-box蛋白(MAFbx)蛋白水平。结果与空白组相比,模型组泛素、MuRF1、MAFbxD-半乳糖蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,督脉灸组泛素、MuRF1和MAFbx蛋白表达下降(P<0.05)。结论督脉灸可通过对泛素蛋白酶体途径的调控,减少蛋白降解,延缓骨骼肌萎缩。 展开更多
关键词 督脉灸 骨骼肌 衰老 泛素 大鼠
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单环刺螠泛素基因的克隆及表达 预览
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作者 张立涛 崔巍 +1 位作者 陈茜 毕愿坤 《济宁医学院学报》 2018年第6期396-399,共4页
目的以单环刺螠为研究对象,克隆其泛素基因并分析其器官表达规律,为其功能的进一步研究提供理论依据。方法采用BLAST方法在单环刺螠转录组中获得泛素基因序列,设计引物扩增其开放阅读框(open reading frame,ORF)并经测序对其进行验证,... 目的以单环刺螠为研究对象,克隆其泛素基因并分析其器官表达规律,为其功能的进一步研究提供理论依据。方法采用BLAST方法在单环刺螠转录组中获得泛素基因序列,设计引物扩增其开放阅读框(open reading frame,ORF)并经测序对其进行验证,随后对序列进行多序列比对和进化分析,进一步确定序列的准确性,最后采用qRT-PCR方法对泛素基因在单环刺螠各器官的表达规律进行分析。结果克隆获得单环刺螠泛素基因,其ORF为234 bp,编码76个氨基酸,氨基酸序列与其他物种的泛素极其相似。单环刺螠泛素基因在体腔液中表达量最低,在后肠和中肠的表达量是体腔液表达量的2.39倍和2.78倍,体壁的表达量是体腔液表达量的3.46倍,而肛门囊表达量达到体腔液表达量的4.55倍。结论本研究成功克隆获得单环刺螠泛素基因,其在单环刺螠各器官的表达规律:体腔液<肠道<体壁<肛门囊。 展开更多
关键词 单环刺螠 泛素 表达规律
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Degron——细胞蛋白的快速降解及可逆调控技术 预览
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作者 马文建 陈洪冉 +2 位作者 刘菲 邢思捷 刘兰梅 《天津科技大学学报》 2018年第6期1-8,共8页
蛋白质的正常表达及降解对维持细胞功能平衡至关重要,当蛋白质功能异常或生物合成等发生错误时,会被识别、标记并被迅速降解,从而保证细胞生存环境的稳定.细胞内的蛋白降解,依赖于蛋白酶体系统对特定氨基酸序列或构象变化的识别.利用这... 蛋白质的正常表达及降解对维持细胞功能平衡至关重要,当蛋白质功能异常或生物合成等发生错误时,会被识别、标记并被迅速降解,从而保证细胞生存环境的稳定.细胞内的蛋白降解,依赖于蛋白酶体系统对特定氨基酸序列或构象变化的识别.利用这一特性,近年来建立了一种快速并可逆诱导体内蛋白降解的技术——蛋白降解子(Degron).通过与目的基因进行融合,Degron可以靶向调控几乎任何蛋白的表达,成为研究蛋白功能及信号传导等细胞分子机制的利器.本文综述了这一技术的原理和发展概况,并介绍了几种成熟的Degron系统. 展开更多
关键词 蛋白降解子 泛素 蛋白酶体 蛋白调控
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类泛素蛋白及其中文命名
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作者 魏文毅 孙毅 +42 位作者 曹诚 常智杰 陈策实 陈佺 程金科 冯仁田 高大明 胡荣贵 贾立军 姜天霞 金建平 李汇华 李卫 刘翠华 刘萱 马蕾娜 缪时英 饶枫 商瑜 宋质银 万勇 王恒彬 王平 王占新 吴缅 吴乔 谢旗 谢松波 谢志平 徐平 许执恒 杨波 阳成伟 应美丹 张宏冰 张令强 赵永超 周军 朱军 王琳芳 张宏 王琛 邱小波 《科学通报》 CSCD 北大核心 2018年第25期2564-2569,共6页
泛素家族包括泛素及类泛素蛋白,约20种成员蛋白.近年来,泛素家族领域取得了迅猛发展,并已与生物学及医学研究的各个领域相互交叉.泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬机制的发现分别于2004和2016年获得诺贝尔奖.但是,类泛素蛋白并没有... 泛素家族包括泛素及类泛素蛋白,约20种成员蛋白.近年来,泛素家族领域取得了迅猛发展,并已与生物学及医学研究的各个领域相互交叉.泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬机制的发现分别于2004和2016年获得诺贝尔奖.但是,类泛素蛋白并没有统一规范的中文译名. 2018年4月9日在苏州召开的《泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬》专著的编委会上,部分作者讨论了类泛素蛋白的中文命名问题,并在随后的"泛素家族、自噬与疾病"(Ubiquitinfamily,autophagy anddiseases)苏州会议上提出了类泛素蛋白中文翻译草案,此草案在参加该会议的国内学者及海外华人学者间取得了高度共识.冷泉港亚洲"泛素家族、自噬与疾病"苏州会议是由美国冷泉港实验室主办、两年一度、面向全球的英文会议. 展开更多
关键词 蛋白质降解 中文命名 泛素 冷泉港实验室 白及 诺贝尔奖 中文译名 命名问题
基于Loxp-Cre系统的去泛素化酶Otud4基因敲除小鼠模型的构建
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作者 秦书霞 刘雯 张令强 《军事医学》 CSCD 北大核心 2018年第10期721-726,共6页
目的应用Loxp-Cre系统构建去泛素化酶Otud4基因敲除小鼠.方法利用Loxp-Cre系统原理,将Otud4基因中的4号外显子选为打靶序列,将两个LoxP位点分别设在E4的两端,经打靶载体转入ES细胞、阳性克隆筛选、囊胚注射等过程,得到嵌合体小鼠,再将... 目的应用Loxp-Cre系统构建去泛素化酶Otud4基因敲除小鼠.方法利用Loxp-Cre系统原理,将Otud4基因中的4号外显子选为打靶序列,将两个LoxP位点分别设在E4的两端,经打靶载体转入ES细胞、阳性克隆筛选、囊胚注射等过程,得到嵌合体小鼠,再将嵌合体小鼠与C57BL/6小鼠交配繁育,最终得到杂合子小鼠并进行自交得到新生F1代小鼠.然后利用PCR进行基因型鉴定,使用免疫印迹(WB)技术从蛋白水平检测OTUD4在各组织器官中的表达,以明确基因敲除小鼠是否构建成功.对各基因型小鼠进行数量统计分析明确其是否符合孟德尔遗传定律,是否具有胚胎致死表型.解剖小鼠观察主要组织器官有无明显发育异常,利用HE染色观察是否具有自发的病理改变.通过葡萄糖耐受实验分析基因敲除小鼠是否具有代谢异常等.结果基因型鉴定和WB检测结果显示Otud4基因敲除小鼠模型成功建立.杂合子小鼠自交后各基因型比例符合孟德尔定律,提示Otud4基因敲除小鼠非胚胎致死.各组织器官大小无显著性差异,HE染色并无异常,且Otud4基因敲除后不影响小鼠的血糖稳态.结论应用Loxp-Cre系统成功构建了Otud4基因敲除小鼠,且小鼠正常出生,无任何胚胎发育缺陷,各器官无显著病理性变化,血糖代谢无异常. 展开更多
关键词 泛素 Loxp-Cre OTUD4 小鼠 基因敲除 聚合酶链反应 基因型
针刺调控泛素-蛋白酶体途径对干预海洛因脑损伤的影响 被引量:2
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作者 张利达 曹江鹏 +5 位作者 蔡兴慧 吴生兵 侯晓蓉 高永龙 张荣军 宋小鸽 《针灸推拿医学:英文版》 CSCD 2018年第2期80-88,共9页
目的:观察针刺对泛素-蛋白酶体途径(UPP)的调控作用,探讨针刺干预海洛因脑损伤的作用.方法:将30只雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和针刺组.模型组和针刺组大鼠采用连续8d递增量肌肉注射海洛因,染... 目的:观察针刺对泛素-蛋白酶体途径(UPP)的调控作用,探讨针刺干预海洛因脑损伤的作用.方法:将30只雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和针刺组.模型组和针刺组大鼠采用连续8d递增量肌肉注射海洛因,染毒后停止肌肉注射海洛因5d,自然戒断.按染毒(成瘾)-脱毒的方法,反复3个阶段,建立海洛因复吸大鼠模型.对照组按照建立海洛因复吸大鼠模型的周期,在染毒期给予大鼠肌肉注射生理盐水,在脱毒期不给予任何治疗;模型组在染毒期给予大鼠连续递增量肌肉注射海洛因,在脱毒期不给予任何治疗;针刺组在染毒期处理与模型组相同,在脱毒期给予针刺百会和大椎治疗,每次留针30 min,每天1次,连续5d.于实验第39d取3组大鼠的海马、中脑腹侧被盖区(VTA)脑组织.运用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测脑神经细胞的凋亡情况.运用免疫组化法、定量实时PCR (RT-qPCR)法检测泛素(Ub)、泛素蛋白连接酶(E3)、26S mRNA和蛋白的表达.结果:与模型组相比,针刺组大鼠海马、VTA中TUNEL染色阳性细胞数显著减少(P<0.01),Ub、E3、26S mRNA和蛋白表达表达明显减少(P<0.01).结论:减少神经细胞凋亡,调节大鼠海马、VTA区的Ub、E3、26S mRNA和蛋白的表达,可能是针刺干预海洛因脑损伤的作用机制之一. 展开更多
关键词 针刺疗法 泛素 蛋白酶体 物质禁断综合征 海洛因依赖 脑损伤 大鼠
TfR-Ubi融合蛋白稳定表达株的构建及功能初测
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作者 沈婷婷 刘宁生 《南京医科大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第7期909-914,共6页
目的:通过构建转铁蛋白受体-泛素(transferrin receptor-ubiquitin,Tf R-Ubi)融合蛋白,研究胞内体蛋白分选机制。方法:首先扩增小鼠泛素和人源转铁蛋白受体基因,构建HA-Tf R-Ubi表达质粒,转染A431细胞后,采用Western blot验证融合... 目的:通过构建转铁蛋白受体-泛素(transferrin receptor-ubiquitin,Tf R-Ubi)融合蛋白,研究胞内体蛋白分选机制。方法:首先扩增小鼠泛素和人源转铁蛋白受体基因,构建HA-Tf R-Ubi表达质粒,转染A431细胞后,采用Western blot验证融合蛋白的表达。在稳定表达Tf R-Ubi的A431和Hrs-KO MEF细胞株中,转铁蛋白刺激,免疫荧光法观察Tf R-Ubi融合蛋白在细胞内的位置。结果:成功构建HA-Tf R-Ubi表达质粒,免疫荧光结果提示Tf R-Ubi融合蛋白被分选到晚期内体(late endosome)/溶酶体,Hrs-KO MEF细胞中Tf R-Ubi融合蛋白分选受到影响。结论:Tf R-Ubi融合蛋白在胞内体被分选,证明了泛素修饰改变了转铁蛋白受体的降解方式,为胞内体分选转运装置(endosomal sorting complex required for transport,ESCRT)分选机制研究提供了实验工具。 展开更多
关键词 胞内体分选 泛素 转铁蛋白受体 降解
斑点型锌指结构蛋白在恶性肿瘤发生发展中的作用
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作者 何燕 张双 彭星辰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1060-1063,共4页
恶性肿瘤居中国各类疾病死因之首,发病率与病死率呈逐年上升趋势。近几年来靶向治疗已广泛应用于临床,显示出良好的抗肿瘤效果,新靶点的探索和鉴定在靶向药物研发过程中起着重要作用。E3 泛素连接酶斑点型锌指结构蛋白(speckletype ... 恶性肿瘤居中国各类疾病死因之首,发病率与病死率呈逐年上升趋势。近几年来靶向治疗已广泛应用于临床,显示出良好的抗肿瘤效果,新靶点的探索和鉴定在靶向药物研发过程中起着重要作用。E3 泛素连接酶斑点型锌指结构蛋白(speckletype POZ protein,SPOP)作为治疗选择的潜在靶点,能特异性识别底物,使底物发生泛素化降解,广泛参与机体内多种生理、病理过程。研究发现SPOP基因突变或表达水平改变,通过调控AR/ERG、Akt-mTORC1、Hedgehog/Gli2 等多种信号通路影响恶性肿瘤的发生发展,并与前列腺癌、肾癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤细胞增殖及远处转移密切相关。目前,SPOP影响恶性肿瘤发生发展的相关研究为靶向治疗恶性肿瘤奠定了基础,综述SPOP在恶性肿瘤的最新进展对抗肿瘤研究具有重要的意义。 展开更多
关键词 斑点型锌指结构蛋白(SPOP) 肿瘤 泛素 靶向治疗
泛素蛋白酶体系统与肝细胞肝癌治疗的研究进展 预览
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作者 陆谦 陈钟 《南通大学学报:医学版》 2018年第2期115-119,共5页
泛素蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system, UPS)是细胞内蛋白质选择性降解的重要途径,是协调细胞功能和保持蛋白质稳态的核心.近些年来,针对UPS 的组成成分开发肿瘤的靶向治疗药物引起了广泛关注.靶向UPS药物在治疗肝细胞肝癌(... 泛素蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system, UPS)是细胞内蛋白质选择性降解的重要途径,是协调细胞功能和保持蛋白质稳态的核心.近些年来,针对UPS 的组成成分开发肿瘤的靶向治疗药物引起了广泛关注.靶向UPS药物在治疗肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)方面的研究也取得了较大的进步.本文通过回顾文献探讨靶向UPS 治疗HCC 的研究进展. 展开更多
关键词 肝细胞肝癌 泛素 蛋白酶体 靶向治疗
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泛素-蛋白酶体途径与肝脏疾病的研究进展
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作者 吕莹 胡勇 《医学分子生物学杂志》 CAS 2018年第2期120-124,共5页
泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)是存在于真核细胞中精确调控细胞质和细胞核内蛋白质有序降解的途径,由泛素(Ub)、泛素激活酶(E1)、泛素结合酶(E2)、泛素连接酶(E3)、26S蛋白酶体和去泛素化酶(DUBs... 泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)是存在于真核细胞中精确调控细胞质和细胞核内蛋白质有序降解的途径,由泛素(Ub)、泛素激活酶(E1)、泛素结合酶(E2)、泛素连接酶(E3)、26S蛋白酶体和去泛素化酶(DUBs)组成。UPP存在于真核细胞整个生命过程中,参与并调节该细胞的各种生命活动,包括细胞周期调控、细胞信号转导、蛋白质降解、DNA修复及基因表达等,其异常表达与多种疾病的发生密切相关。文章在介绍了泛素.蛋白酶体系统的组成、功能的基础上,阐述了其对肝脏疾病影响的研究进展。 展开更多
关键词 泛素 蛋白酶体 肝脏疾病
猪布鲁菌感染对巨噬细胞泛素蛋白酶体功能的影响 被引量:1
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作者 董炳梅 张春玲 +4 位作者 孙培娇 于智慧 王金良 苗立中 沈志强 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期332-335,363共5页
巨噬细胞(macrophage,Mφ)是布鲁菌的主要宿主细胞,为了探明布鲁菌感染与Mφ泛素-蛋白酶体功能之间的关系,本试验在应用蛋白酶体抑制剂Lactacystin与促进剂IFN-γ的基础上,对Mφ感染猪种布鲁菌S2株(Brucella suis,B.suis)后... 巨噬细胞(macrophage,Mφ)是布鲁菌的主要宿主细胞,为了探明布鲁菌感染与Mφ泛素-蛋白酶体功能之间的关系,本试验在应用蛋白酶体抑制剂Lactacystin与促进剂IFN-γ的基础上,对Mφ感染猪种布鲁菌S2株(Brucella suis,B.suis)后细胞上清中泛素、蛋白酶体及胞内B.suis数量进行了检测。结果显示,IFN-γ与Lactacystin对Mφ泛素的表达均有明显的促进作用,且IFN-γ效果显著优于Lactacystin;其次IFN-γ有效促进了M,p蛋白酶体的表达,而Lactacystin显著抑制了Mφ蛋白酶体的表达。在此基础上,将B.suis感染不同状态的MQ,在0.5~24h分别进行胞内B.suis计数,研究表明,一方面B.suis的感染促进了Mφ泛素及蛋白酶体的表达;另一方面,泛素蛋白酶体系统功能的增强,显著降低了B.suis的早期感染,但对于B.suis感染中后期作用不明显,而感染后期抑制Mφ蛋白酶体功能,却可显著降低B.suis的胞内增殖能力。 展开更多
关键词 布鲁菌 巨噬细胞 泛素 蛋白酶体
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