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抑制泛素结合酶改变猪卵母细胞透明带泛素化状态及精-卵结合能力 预览
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作者 徐妲 王洋 +4 位作者 玄彪 汪秋月 徐曼 陈璇 金一 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期544-550,共7页
本研究旨在探究猪卵母细胞体外成熟过程中添加泛素结合酶(E2)抑制剂对卵母细胞透明带蛋白泛素化水平及精-卵结合能力的影响。试验分为6组:对照组、DMSO组、5、10、15和20μmol·L-1NSC697923处理组。采用Westernblot方法分析体外成... 本研究旨在探究猪卵母细胞体外成熟过程中添加泛素结合酶(E2)抑制剂对卵母细胞透明带蛋白泛素化水平及精-卵结合能力的影响。试验分为6组:对照组、DMSO组、5、10、15和20μmol·L-1NSC697923处理组。采用Westernblot方法分析体外成熟培养液中添加不同浓度泛素结合酶抑制剂NSC697923对猪卵母细胞透明带泛素化水平表达的影响。通过Hoechst染色检测不同组别的精卵结合能力。结果表明:1)猪卵母细胞体外成熟培养液中,添加10、15和20μmol·L-1NSC697923显著降低卵母细胞成熟率(P<0.05),透明带硬化时间(P<0.05)以及精卵结合率(P<0.05)。2)对照组和各处理组的透明带蛋白在61、81、106ku处发生不同程度的泛素化标记,而添加15和20μmol·L-1NSC697923显著地降低透明带蛋白泛素化水平(P<0.05)。综上表明,猪卵母细胞体外成熟过程中泛素结合酶(E2)改变成熟卵母细胞透明带泛素化水平以及精卵结合能力。 展开更多
关键词 卵母细胞 泛素结合 透明带泛素 精子-卵子结合
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百脉根泛素结合酶LjE2的表达及活性鉴定 预览
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作者 刘超 冯勇 +2 位作者 董笑笑 张忠明 朱辉 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期22-27,共6页
为了研究泛素化作用在豆科植物共生固氮过程中的调控功能和作用机制,利用拟南芥泛素结合酶E2的序列,在百脉根基因组上鉴定得到14个编码E2(LjE2)的基因,从LjE2中克隆到11个基因并构建了融合表达载体pET-LjE2s:His。通过大肠杆菌表达系统... 为了研究泛素化作用在豆科植物共生固氮过程中的调控功能和作用机制,利用拟南芥泛素结合酶E2的序列,在百脉根基因组上鉴定得到14个编码E2(LjE2)的基因,从LjE2中克隆到11个基因并构建了融合表达载体pET-LjE2s:His。通过大肠杆菌表达系统,表达并纯化到10个LjE2:His融合蛋白。经体外泛素化及Western blot分析,在10个LjE2中有9个具有泛素结合酶活性,1个(LjE2-5)未检测到泛素结合酶活性。 展开更多
关键词 百脉根 泛素结合 体外泛素 原核表达系统
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一种新的植物泛素结合酶体外泛素化检测方法 预览
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作者 刘译阳 韩燕 +1 位作者 李国卫 崔凤 《山东农业科学》 2018年第3期120-124,共5页
泛素结合酶是一类在泛素化修饰过程中起重要生物化学功能的蛋白。对于被预测为泛素结合酶的蛋白进行体外泛素化活性检测,是确定其泛素结合酶功能必不可少的试验步骤,试验结果可以为后续研究提供重要的线索。目前体外泛素化反应存在体外... 泛素结合酶是一类在泛素化修饰过程中起重要生物化学功能的蛋白。对于被预测为泛素结合酶的蛋白进行体外泛素化活性检测,是确定其泛素结合酶功能必不可少的试验步骤,试验结果可以为后续研究提供重要的线索。目前体外泛素化反应存在体外表达纯化蛋白工作量大、反应复杂、假阴性率高等问题。本研究针对以上问题进行了改良,开发出一种新的植物泛素结合酶活性体外检测方法,该方法无需裂解细胞提取、纯化蛋白,也不需要做体外反应,简便易行,结果更稳定可靠。应用该方法对花生泛素结合酶Ah UBC34和盐芥泛素结合酶Ts UBC33进行了检测,结果证明这两个蛋白都具有泛素结合酶活性。 展开更多
关键词 泛素结合 体外泛素化检测 检测方法 花生 盐芥
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小麦TaUBC基因泛素结合酶活性分析 预览
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作者 张祥云 赵思语 +3 位作者 温潇 王宁 郭彦 赵庆臻 《聊城大学学报:自然科学版》 2018年第3期79-85,共7页
已报道的RNA水平研究表明TaUBC可能是小麦产量相关基因,生物信息学分析显示该基因属于泛素结合酶家族.荧光定量PCR显示TaUBC在小麦根茎叶中均有表达.为了验证TaUBC蛋白是否具有泛素结合酶活性,本文利用原核系统表达野生型TaUBC及三种点... 已报道的RNA水平研究表明TaUBC可能是小麦产量相关基因,生物信息学分析显示该基因属于泛素结合酶家族.荧光定量PCR显示TaUBC在小麦根茎叶中均有表达.为了验证TaUBC蛋白是否具有泛素结合酶活性,本文利用原核系统表达野生型TaUBC及三种点突变TaUBC C21S、TaUBC C85S、TaUBC C107S蛋白,并对这些蛋白进行体外泛素化活性分析.结果证实TaUBC是一个有活性的泛素结合酶.另外,点突变C85S使得TaUBC丧失E2活性,C21S和C107S则对活性没有影响,证明其UBC结构域中第85位Cys是结合泛素的关键作用位点. 展开更多
关键词 TaUBC 泛素结合 点突变 体外泛素化反应
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泛素结合酶9及P53在卵巢上皮癌中的表达及意义 预览
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作者 张建芳 于利君 《中国药物与临床》 CAS 2018年第3期371-373,共3页
卵巢上皮癌是常见的妇科肿瘤之一,由于缺乏有效的早期筛查手段,5年生存率较低,是病死率最高的妇科肿瘤。小泛素样修饰物(small ubiquitin-related modifiers,SUMOs)为一组类泛素蛋白,这类蛋白可与多种基因以共价结合的方式形成多种功... 卵巢上皮癌是常见的妇科肿瘤之一,由于缺乏有效的早期筛查手段,5年生存率较低,是病死率最高的妇科肿瘤。小泛素样修饰物(small ubiquitin-related modifiers,SUMOs)为一组类泛素蛋白,这类蛋白可与多种基因以共价结合的方式形成多种功能类型的底物蛋白,泛素结合酶9(ubiquitin-binding enzyme 9,Ubc9)是SUMO过程中的唯一的结合酶. 展开更多
关键词 卵巢上皮癌 P53 妇科肿瘤 浆液性癌 泛素结合
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甘蔗泛素结合酶基因的克隆与表达
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作者 黄宁 李聪娜 +4 位作者 汤翰臣 郑清雷 凌辉 陈如凯 阙友雄 《应用与环境生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期845-852,共8页
为克隆鉴定甘蔗泛素结合酶基因(Sugarcane ubiquitin-conjugating enzyme,ScUBc E2)并探索其在激素信号通路和甘蔗与黑穗病互作过程中的作用,选择黑穗病菌胁迫下甘蔗抑制消减杂交文库(Suppression subtractive hybridization,SSH)... 为克隆鉴定甘蔗泛素结合酶基因(Sugarcane ubiquitin-conjugating enzyme,ScUBc E2)并探索其在激素信号通路和甘蔗与黑穗病互作过程中的作用,选择黑穗病菌胁迫下甘蔗抑制消减杂交文库(Suppression subtractive hybridization,SSH)中注释为泛素结合酶的差异表达EST序列为探针,结合电子克隆技术和RT-PCR技术,以甘蔗cDNA为模板进行泛素结合酶基因克隆.对克隆获得的序列进行生物信息学分析,并利用qRT-PCR技术分析该基因在甘蔗根、蔗髓、叶、芽中的组织特异性表达以及在黑穗病菌、茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,Me JA)、脱落酸(Abscisic acid,ABA)和水杨酸(Salicylic acid,SA)胁迫下的表达情况.最终克隆得到一条长度为699 bp的甘蔗泛素结合酶基因(ScUBc E2;Gen Bank accession number:KJ577594.1),该基因包含长度为447 bp的完整开放读码框,编码148个氨基酸.生物信息学分析结果显示,ScUBc E2编码的蛋白分子量(Mr)为16.507×10^3;无信号肽,为碱性不稳定的亲水蛋白;包含4个α螺旋、4个β折叠和一些无规则卷曲;第15位氨基酸为泛素化位点,74-89位氨基酸为活性位点;在进化过程中与高粱泛素结合酶基因的亲缘关系最近.qRT-PCR分析结果表明,ScUBc E2基因组成型表达,但在芽中的表达量最高;其表达在甘蔗感黑穗病基因型ROC22中受到黑穗病菌胁迫的抑制,在黑穗病抗病基因型YC05-179中则先被抑制,后被诱导;ScUBc E2基因受MeJA及SA诱导表达,对ABA胁迫的响应不明显.本研究表明,甘蔗ScUBc E2基因在抗病基因型和感病基因型甘蔗中存在不同表达模式,可能参与甘蔗与黑穗病菌的互作过程,有望为抗病育种分子标记提供潜在基因资源;同时,该基因受MeJA和SA外源激素胁迫后的表达模式,可为泛素-蛋白酶体途径及激素调控的信号转导在甘蔗与黑穗病菌互作过程中的作用提供一定的理论依据. 展开更多
关键词 泛素结合 甘蔗 生物信息学 实时荧光定量PCR 甘蔗黑穗病菌 水杨酸 茉莉酸甲酯 脱落酸
MTAP和UbcH10在骨肉瘤中的表达及临床意义 预览 被引量:1
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作者 冷华平 段永壮 +1 位作者 钱华兵 李宽宽 《癌症进展》 2017年第7期837-839,845共4页
目的 探讨骨肉瘤组织中甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)和泛素结合酶10(UbcH10)的表达与患者临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法检测40例骨肉瘤组织和20例正常骨组织中MTAP和UbcH10的表达情况,并分析其与骨肉瘤患者临床病理特征及... 目的 探讨骨肉瘤组织中甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)和泛素结合酶10(UbcH10)的表达与患者临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法检测40例骨肉瘤组织和20例正常骨组织中MTAP和UbcH10的表达情况,并分析其与骨肉瘤患者临床病理特征及预后的关系.结果 骨肉瘤组织中的MTAP阳性表达率明显低于正常骨组织,而UbcH10阳性表达率明显高于正常骨组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01),且两者在骨肉瘤组织中的表达呈负相关(r=-0.551,P=0.013).MTAP和UbcH10的表达与患者年龄、性别、肿瘤部位及组织分型无关(P﹥0.05),而与软组织浸润、远处转移及Enneking分期有关(P﹤0.05).随访6~72个月,生存组患者骨肉瘤组织中的MTAP和UbcH10阳性表达率均低于死亡组患者,差异有统计学意义(P﹤0.05).结论 MTAP和UbcH10与骨肉瘤的浸润、转移及预后密切相关,可作为临床诊治及预后判断的参考指标. 展开更多
关键词 骨肉瘤 甲硫腺苷磷酸化 泛素结合 免疫组化
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水稻泛素结合酶基因家族的生物信息学与表达分析 预览 被引量:2
8
作者 刘鑫 张恒 +6 位作者 阚虎飞 周立帅 黄昊 宋林林 翟焕趁 张君 鲁国东 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期223-231,共9页
泛素/蛋白酶体系统在植物的生长发育、形态建成和抗病反应等过程中起着重要的作用.近年的研究表明,某些病原菌能够模拟寄主植物泛素/蛋白酶体系统组分,从而达到利用该系统为病原菌服务的目的.泛素结合酶是泛素化反应过程中的第二个酶,... 泛素/蛋白酶体系统在植物的生长发育、形态建成和抗病反应等过程中起着重要的作用.近年的研究表明,某些病原菌能够模拟寄主植物泛素/蛋白酶体系统组分,从而达到利用该系统为病原菌服务的目的.泛素结合酶是泛素化反应过程中的第二个酶,对植物泛素/蛋白酶体系统的正常运行不可或缺.已有的研究表明,水稻基因组数据库中存在48个预测的泛素结合酶基因.为了初步揭示这些泛素结合酶基因在植物抗病防御反应中的功能,研究其与植物抗病性的关系.本研究通过生物信息学、RNA-seq和qRT-PCR的方法,分析了水稻泛素结合酶基因家族的特征及其表达模式.系统进化树分析表明,48个水稻泛素结合酶基因可分为3个大组,总共7个亚组.蛋白结构域分析表明,水稻泛素结合酶基因主要由一个泛素结合酶催化结构域组成.电子表达谱分析表明,大多数水稻泛素结合酶基因能被稻瘟病菌诱导表达.启动子区顺式作用元件分析表明,4个抗病相关顺式作用元件和1个过敏性反应相关顺式作用元件在48个水稻泛素结合酶基因的启动子区有很高的分布.稻瘟病菌接种亲和性和非亲和性水稻单基因系的RNA-seq结果表明,处理36h读取到的水稻泛素结合酶基因为44个,其中高表达基因数量超过读取到的泛素结合酶基因总数的50%.qRT-PCR分析结果表明稻瘟病菌的侵染在亲和和非亲和组合中都能诱导部分水稻泛素结合酶基因的表达.在非亲和组合中水稻泛素结合酶基因的表达倾向于受到抑制. 展开更多
关键词 水稻 泛素结合 泛素/蛋白体系统 生物信息学 稻瘟病菌 RNA-SEQ QRT-PCR
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铁皮石斛泛素结合酶基因DoUBC24的克隆及表达分析 预览 被引量:2
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作者 安红强 范静 +2 位作者 梁易 裴薇 王万军 《生物技术通讯》 CAS 2016年第5期643-648,共6页
目的:克隆铁皮石斛泛素结合酶基因DoUBC24,预测其蛋白结构特征和进化关系,分析其时空差异表达情况,并推测其在植物生长发育中的功能。方法:提取铁皮石斛全苗总RNA,采用cDNA末端快速扩增(RACE)和巢式PCR技术克隆Do UBC24基因;用生物... 目的:克隆铁皮石斛泛素结合酶基因DoUBC24,预测其蛋白结构特征和进化关系,分析其时空差异表达情况,并推测其在植物生长发育中的功能。方法:提取铁皮石斛全苗总RNA,采用cDNA末端快速扩增(RACE)和巢式PCR技术克隆Do UBC24基因;用生物信息手段分析基因序列结构特征,并预测其编码蛋白及其理化性质和亚细胞定位;用MEGA6.0构建系统发育树,分析物种进化关系;用qRT-PCR检测DoUBC24在原球茎不同发育时期及不同组织中的相对表达量。结果:克隆得到基因全长为3811 bp,包含2880 bp的CDS,编码959个氨基酸残基,编码产物含有一个保守的UBCc结构域;分子进化分析显示,DoUBC24同海枣、油棕、小果野芭蕉、玉米、短花药野生稻、二穗短柄草和大麦等单子叶植物的亲缘关系较近;qRT-PCR分析显示,DoUBC24在铁皮石斛叶原基维管系统形成、原球茎退化时期表达显著下降,而在椭球形原球茎、根端分生组织和类原球茎中表达量较高,在组织中的表达量水平依次为花〉茎〉种子〉根〉叶。结论:铁皮石斛泛素结合酶DoUBC24基因在铁皮石斛原球茎不同发育时期及不同组织中均有显著的差异表达,可能对原球茎发育及植物组织的形态建成具有重要调控作用。 展开更多
关键词 铁皮石斛 泛素结合 CDNA末端快速扩增 QRT-PCR
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松江鲈(Trachidermus fasciatus)泛素结合酶E2-D2基因的分子克隆及组织表达分析 预览 被引量:5
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作者 陈学昭 张雷 +3 位作者 于珊珊 毕彩红 刘春影 祝茜 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期133-140,共8页
泛素结合酶(UbcE2)是蛋白泛素化过程中所必需的酶,在泛素转移和底物的特异性识别方面发挥着重要的作用。本实验利用RACE技术克隆获得了全长为993bp的松江鲈泛素结合酶E2-D2基因cDNA序列(命名为TfUbcE2-D2),其开放阅读框为444bp,编码... 泛素结合酶(UbcE2)是蛋白泛素化过程中所必需的酶,在泛素转移和底物的特异性识别方面发挥着重要的作用。本实验利用RACE技术克隆获得了全长为993bp的松江鲈泛素结合酶E2-D2基因cDNA序列(命名为TfUbcE2-D2),其开放阅读框为444bp,编码147个氨基酸。通过SMART预测得知,TfUbcE2-D2含有一个UBCc结构域。同源比对结果表明该基因与其他物种的同源性为92.31%。实时荧光定量PCR显示,TfUbcE2-D2广泛表达于松江鲈各组织,在肾脏中的相对表达量最高,其次为鳃。鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激后,TfUbcE2-D2在血液、脾脏、肝脏和鳃中表达均上调,其中,脾脏和鳃中的表达量上调约40倍。由以上实验结果推测,TfUbcE2-D2可能参与松江鲈的先天免疫防御。 展开更多
关键词 泛素结合 松江鲈 基因克隆 非特异性免疫
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人泛素结合酶10在乳腺癌中的研究进展 预览 被引量:2
11
作者 闫欢欢 金慧 +2 位作者 李想 周晓倩 刘俊 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2015年第21期122-126,共5页
人泛素结合酶10(UbcH10)别名泛素偶联酶E2C(UBE2C)是-种调节细胞周期的蛋白,其高表达与细胞生长和肿瘤恶性转化密切相关.UbcH10 在乳腺癌组织中高表达,尤其在浸润性乳腺癌中高表达,其高表达机制可能与HER-2 表达相关.研究发现UbcH10... 人泛素结合酶10(UbcH10)别名泛素偶联酶E2C(UBE2C)是-种调节细胞周期的蛋白,其高表达与细胞生长和肿瘤恶性转化密切相关.UbcH10 在乳腺癌组织中高表达,尤其在浸润性乳腺癌中高表达,其高表达机制可能与HER-2 表达相关.研究发现UbcH10 高表达的乳腺癌患者预后较差,可能与Ki-67、HER-2 等预后指标高表达和其高表达加快细胞增殖以及对化疗药物耐药有关.UbcH10 高表达可以引起乳腺癌细胞bcl2、MDR1 表达增加,造成乳腺癌多重耐药.UbcH10基因过表达可以引起乳腺癌细胞多种指标的改变,抑制其表达可能逆转乳腺癌耐药,并且可能降低乳腺癌细胞的恶性程度. 展开更多
关键词 抗肿瘤联合化疗方案 乳腺癌 预后 泛素结合
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斑节对虾泛素结合酶PmUbc基因的克隆及表达分析 预览 被引量:3
12
作者 傅明骏 赵超 +2 位作者 周发林 邱丽华 江世贵 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期41-48,共8页
以从斑节对虾(Penaeusmonodon)肝胰腺转录组数据中筛选的泛素结合酶(Ubiquitin—conjugating enzyme,PmUbc)基因片段为基础,利用SMART—RACE技术获得PmUbc的cDNA全长,并利用生物信息学对其进行了分析。PmUbc基因cDNA全长598bp,... 以从斑节对虾(Penaeusmonodon)肝胰腺转录组数据中筛选的泛素结合酶(Ubiquitin—conjugating enzyme,PmUbc)基因片段为基础,利用SMART—RACE技术获得PmUbc的cDNA全长,并利用生物信息学对其进行了分析。PmUbc基因cDNA全长598bp,包括编码154个氨基酸的465bp的开放阅读框(ORF)、17bp的5’非编码区(UTR)和116bp的3’UTR。Blast分析显示,PmUbc与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)等物种的Ubc具有较高的同源性。利用实时荧光定量PCR技术研究了PmUbcmRNA在不同组织和卵巢发育各时期的相对表达量和变化模式。结果表明,PmUbcmRNA在斑节对虾的脑、胸神经、心脏、肝胰腺、卵巢、肌肉、血淋巴中均有表达;PmUbc基因在卵巢发育Ⅲ期表达量最高,其次是I和Ⅳ期。结果显示,PmUbc基因在斑节对虾卵巢发育过程中可能具有重要的作用,该实验结果为斑节对虾卵巢发育调控的分子机制研究提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 斑节对虾 泛素结合 实时荧光定量PCR 卵巢发育
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泛素结合酶E2C与肿瘤的关系研究进展 预览 被引量:3
13
作者 王少冰(综述) 王芳(审校) 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第5期543-548,共6页
越来越多的证据提示肿瘤细胞内紊乱的泛素化过程调控了肿瘤的发生发展。泛素结合酶E2C( ubiquitin-conjugating enzymeE2C, UBE2C)是泛素结合酶家族的重要成员,是细胞有丝分裂中期向后期转变的关键调节分子。近年来, UBE2 C与肿瘤... 越来越多的证据提示肿瘤细胞内紊乱的泛素化过程调控了肿瘤的发生发展。泛素结合酶E2C( ubiquitin-conjugating enzymeE2C, UBE2C)是泛素结合酶家族的重要成员,是细胞有丝分裂中期向后期转变的关键调节分子。近年来, UBE2 C与肿瘤的关系研究较多,文中就该分子在肿瘤中的表达情况、对肿瘤发生发展的影响及内在机制的研究现状作一综述。 展开更多
关键词 泛素结合 UBE2C 有丝分裂 肿瘤
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家蝇泛素结合酶基因的生物信息学分析 预览 被引量:6
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作者 国果 吴沁怡 +3 位作者 吴建伟 赵学军 付萍 张勇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期107-111,共5页
利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇泛素结合酶基因(MD-E2)cDNA序列,采用NCBI、ExPASY中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析,MEGA软件构建了进化... 利用EST测序技术从家蝇幼虫cDNA文库中获得家蝇泛素结合酶基因(MD-E2)cDNA序列,采用NCBI、ExPASY中的相关工具,对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构和亚细胞定位等方面进行预测和分析,MEGA软件构建了进化树。结果表明,家蝇泛素结合酶基因的cDNA序列具有完整的ORF框,全长480 bp,一共编码159个氨基酸。其编码的蛋白质理论分子量为18.117 9 kD,等电点8.64,无信号肽及跨膜区,属于亲水性蛋白,具有泛素结合酶家族的活性位点(FHPNVYPSGTVCLSLL),主要分布于细胞核;二级结构以无规则卷曲为主,β折叠较少。 展开更多
关键词 家蝇 泛素结合 生物信息学
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不同品种小麦泛素结合酶TaUBC4基因的克隆及进化分析 预览
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作者 袁建龙 郝英存 +1 位作者 张祥云 赵庆臻 《农业科学与技术:英文版》 CAS 2014年第7期1100-1104,共5页
[目的]分析不同品种小麦泛素结合酶TaUBC4基因序列及进化特点.[方法]通过反转录PCR (Reverse transcription PCR,RTPCR)方法克隆了21个小麦品种的TaUBC4编码序列(Coding Sequence,CDS),测序后以中国春的UBC4(GenBank登录号:M2805... [目的]分析不同品种小麦泛素结合酶TaUBC4基因序列及进化特点.[方法]通过反转录PCR (Reverse transcription PCR,RTPCR)方法克隆了21个小麦品种的TaUBC4编码序列(Coding Sequence,CDS),测序后以中国春的UBC4(GenBank登录号:M28059)序列为参照,对各品种小麦基因的CDS及其编码的氨基酸序列进行了不同位点的突变频率及品种间的进化距离的分析;同时参考其他8种单子叶植物中与小麦UBC4同源的氨基酸序列构建了系统进化发育树.[结果]TaUBC4序列高度保守(DNA序列的相似度>94%,氨基酸序列相似度>96%),部分品种仅存在两个氨基酸的差异.系统发育树的构建揭示了各小麦品种间的进化关系.[结论]该研究揭示了不同品种间小麦TaUBC4基因序列及其氨基酸位点的多态性和进化特点,为深入研究小麦TaUBC4基因的进化及生物学功能奠定良好的基础,同时系统进化发育树的构建为复杂来源小麦品种的分类提供依据. 展开更多
关键词 小麦 泛素结合 TaUBC4 进化分析
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ANKIB1相关泛素结合酶的筛选
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作者 马振玲 解博红 +2 位作者 刘世饶 杨子善 谢云飞 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期617-622,共6页
含锚蛋白重复和IBR结构域蛋白1(ankyrin repeat and IBR domaincontaining protein 1,ANKIB1)属于RING-IBR-RING (RBR)蛋白家族,也是该家族中唯一含有泛素结合模体的成员,能促进某些蛋白的泛素化.几乎所有的RBR蛋白都具有泛... 含锚蛋白重复和IBR结构域蛋白1(ankyrin repeat and IBR domaincontaining protein 1,ANKIB1)属于RING-IBR-RING (RBR)蛋白家族,也是该家族中唯一含有泛素结合模体的成员,能促进某些蛋白的泛素化.几乎所有的RBR蛋白都具有泛素连接酶(E3)活性. ANKIB1也被推测为一种E3,但迄今尚未证实.RBR型E3能够与多种泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme,Ubc,统称E2)互作并发挥催化作用,其中最常见的是UbcH7,UbcH8和UbcH5B次之.为了筛选ANKIB1相关的E2,本研究在大肠杆菌BL21 (DE3)中分别表达了UbcH5B、UbcH7和UbcH8蛋白,并采用GST沉降(GST pull-down)实验验证3种E2与ANKIB1的相互作用. 实验结果表明,内源性及过表达的ANKIB1均能与UbcH5B、UbcH7或UbcH8相互作用,同时ANKIB1也是唯一能与这3种E2互作的RBR蛋白.本研究为ANKIB1可能是1种E3的假说提供了支持,并为后续研究ANKIB1的E3活性和催化机制提供了线索. 展开更多
关键词 含锚蛋白重复和IBR结构域蛋白1 泛素结合 GST沉降 蛋白质相互作用
巴西橡胶树泛素结合酶基因HbUBC5的克隆和表达分析 预览 被引量:1
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作者 朱家红 徐靖 +1 位作者 畅文军 张治礼 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第9期1710-1714,共5页
根据先前获得的EST序列,从橡胶树中克隆了1个编码泛素结合酶的基因Hb UBC5.HbUBC5 cDNA长度为567 bp,编码185个氨基酸;HbUBC5在基因组中序列长度为2441 bp,包含6个外显子和5个内含子.Hb UBC5编码蛋白具有典型的植物泛素结合酶E2的结构特... 根据先前获得的EST序列,从橡胶树中克隆了1个编码泛素结合酶的基因Hb UBC5.HbUBC5 cDNA长度为567 bp,编码185个氨基酸;HbUBC5在基因组中序列长度为2441 bp,包含6个外显子和5个内含子.Hb UBC5编码蛋白具有典型的植物泛素结合酶E2的结构特征,包含1个保守的UBC结构域和1个高度保守的半胱氨酸活性位点,和其他植物中的E2蛋白具有很高的同源性.对HbUBC5启动子区域进行分析,发现含有众多应答激素和胁迫信号元件.实时荧光定量分析结果表明,HbUBC5在树皮的表达量最高,在花中的表达量次之,在胶乳和叶片中的表达量相对较低;乙烯诱导能显著上调基因的表达.研究结果表明,Hb UBC5能对乙烯做出响应,推测其可能参与了乙烯利刺激橡胶树产生副作用的过程. 展开更多
关键词 巴西橡胶树 泛素结合 基因表达 乙烯利
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巴西橡胶树HbUBC22基因克隆与表达分析 预览 被引量:4
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作者 覃碧 《中国农学通报》 CSCD 2013年第19期1-8,共8页
泛素蛋白酶体途径(UPP)广泛参与植物生长发育相关过程的调控,巴西橡胶树UPP关键酶-泛素结合酶UBC/E2基因的克隆及其表达分析,将为进一步研究UPP在橡胶树中的功能奠定基础。本研究通过同源克隆法,根据巴西橡胶树UBC22同源EST序列进行... 泛素蛋白酶体途径(UPP)广泛参与植物生长发育相关过程的调控,巴西橡胶树UPP关键酶-泛素结合酶UBC/E2基因的克隆及其表达分析,将为进一步研究UPP在橡胶树中的功能奠定基础。本研究通过同源克隆法,根据巴西橡胶树UBC22同源EST序列进行拼接设计特异引物,利用RT-PCR扩增从橡胶树中克隆UBC22基因,利用生物信息学的方法对基因的结构进行分析,进一步采用Q-PCR技术分析基因表达模式,并在大肠杆菌中表达目标蛋白。将克隆的基因命名为HbUBC22,该基因的开放阅读框(ORF)共807bp,编码268个氨基酸,编码蛋白含有1个保守的UBC结构域和半胱氨酸催化位点。HbUBC22蛋白与蓖麻、杨树、油茶和葡萄的UBC蛋白同源性最高,分别为89%、85%、85%和81%。HbUBC22受乙烯利和茉莉酸甲酯诱导显著上调表达。经IPTG诱导后,HbUBC22能够在大肠杆菌中表达出目标蛋白。通过对HbUBC22的克隆及其序列分析可知,该基因属于泛素结合酶UBC/E2家族成员,以上研究结果为进一步研究HbUBC22的生物学功能奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 泛素结合 HbUBC22 基因克隆 表达分析
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香蕉泛素结合酶基因MaUCE2在非生物胁迫下的表达分析 预览 被引量:11
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作者 王安邦 金志强 +4 位作者 刘菊华 贾彩红 张建斌 苗红霞 徐碧玉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期77-80,共4页
为了研究泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme)E2和植物抗逆性的关系,对香蕉苗进行了非生物胁迫(干旱、低温、盐胁迫)处理,利用荧光定量PCR技术分析了香蕉泛素结合酶基因MaUCE2在不同胁迫条件下的表达特性。结果表明,MaUCE2表... 为了研究泛素结合酶(ubiquitin-conjugating enzyme)E2和植物抗逆性的关系,对香蕉苗进行了非生物胁迫(干旱、低温、盐胁迫)处理,利用荧光定量PCR技术分析了香蕉泛素结合酶基因MaUCE2在不同胁迫条件下的表达特性。结果表明,MaUCE2表达量随着干旱程度的加重而逐步上升,在高度干旱胁迫下MaUCE2的表达量最高;低温胁迫可以诱导MaUCE2的表达,其表达量随着温度的降低而逐步升高,当温度降低到5℃时,MaUCE2的表达量最高;而在盐胁迫下,MaUCE2的表达量与对照相比略有上升,上述结果表明MaUCE2基因表达受非生物胁迫的诱导。 展开更多
关键词 香蕉 泛素结合 非生物胁迫 干旱 盐胁迫 低温
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普通油茶泛素结合酶UBE2-J2的cDNA序列及蛋白质结构分析 预览 被引量:2
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作者 林萍 姚小华 +3 位作者 曹永庆 龙伟 王开良 滕建华 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第6期744-751,共8页
泛素结合酶(E2)是泛素/26S蛋白酶体途径中3个关键酶之一,在靶蛋白识别、与泛素连接酶(E3)互作等蛋白的泛素依赖性水解和N-末端规则依赖性水解途径的关键环节中起重要作用。采用Sdexa测序技术获得了1条普通油茶E2的全长cDNA序列,... 泛素结合酶(E2)是泛素/26S蛋白酶体途径中3个关键酶之一,在靶蛋白识别、与泛素连接酶(E3)互作等蛋白的泛素依赖性水解和N-末端规则依赖性水解途径的关键环节中起重要作用。采用Sdexa测序技术获得了1条普通油茶E2的全长cDNA序列,命名为UBE2一J2,该基因编码239AA,与其它物种的E2具有较高的一致性和相似性;同源建模的结果表明:普通油茶UBE2-J2蛋白具有泛素结合酶催化位点(UBCc),第8~122位氨基酸碱基为其泛素结合酶基因家族的保守区域,第75~122位氨基酸残基区域中有17个可与泛素形成硫酯键中间产物的残基,其中,87位的半胱氨酸残基是该酶活性中心位点,另有5个残基是与E3酶相互作用的位点。UBE2.J2具有C端延伸结构,故普通油茶UBE2-J2蛋白属于II类E2基因家族成员。 展开更多
关键词 普通油茶 泛素结合 Solexa测序 生物信息学
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