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泛素蛋白连接酶E3A在乳腺癌细胞中作用的蛋白质组学与生物信息学分析
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作者 谢少利 刘家有 +5 位作者 王碧娟 黄红梅 李静佳 赵小波 邓世山 侯令密 《中国普通外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期590-596,共7页
目的:通过蛋白质组学与生物信息学方法探讨泛素蛋白连接酶E3A(UBE3A)在乳腺癌细胞中的生物学功能。方法:将三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231分别转染shRNA-UBE3A片段(UBE3A敲低组)与阴性对照shRNA片段(对照组)后,采用双向电泳(2-DE)法及基质... 目的:通过蛋白质组学与生物信息学方法探讨泛素蛋白连接酶E3A(UBE3A)在乳腺癌细胞中的生物学功能。方法:将三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231分别转染shRNA-UBE3A片段(UBE3A敲低组)与阴性对照shRNA片段(对照组)后,采用双向电泳(2-DE)法及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF-MS/MS)对两组细胞的差异蛋白质分离和鉴定;采用DAVID Functional Annotation及String在线工具对差异表达蛋白质进行生物信息学分析。结果:2-DE及MALDI-TOF-TOF-MS/MS分离和鉴定出28个差异蛋白,其中UBE3A敲低组相对于对照组有4个表达上调,24个表达下调。与DAVID数据库有23个相匹配,其中能够进行生物学途径、细胞成分、分子功能注释分类的蛋白质分别为23个(100%)、20个(87.7%)和23个(100%),而在泛素-蛋白酶体系统及糖代谢方面分类比较明确;String分析显示这些差异蛋白中有23个存在直接或间接的联系。结论:UBE3A可能通过泛素-蛋白酶体系统功能与糖代谢途径参与乳腺癌细胞生物学行为的调控。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 三阴性乳腺癌 泛素蛋白连接酶 蛋白质组学 计算生物学
自噬在Parkin过表达减轻糖尿病大鼠心肌肥厚中的作用
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作者 熊永红 李维 +2 位作者 冷燕 李文远 夏中元 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期613-616,共4页
目的评价自噬在Parkin过表达减轻糖尿病大鼠心肌肥厚中的作用。方法SPF级健康雄性SD大鼠32只,2月龄,体重200~230 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):非糖尿病组(Non-DM组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+AAV9-CMV-Parkin组(DM+P组)和糖尿病+AAV... 目的评价自噬在Parkin过表达减轻糖尿病大鼠心肌肥厚中的作用。方法SPF级健康雄性SD大鼠32只,2月龄,体重200~230 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):非糖尿病组(Non-DM组)、糖尿病组(DM组)、糖尿病+AAV9-CMV-Parkin组(DM+P组)和糖尿病+AAV9-CMV-Parkin+自噬抑制剂3-甲基腺苷组(DM+P+MA组)。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg制备大鼠糖尿病模型,以腺相关病毒9为载体实现Parkin过表达。DM+P组腹腔注射STZ后3周时尾静脉注射AAV9-CMV-Parkin 1×10^12 mg/kg;DM+P+MA组腹腔注射STZ后3周时尾静脉注射AAV9-CMV-Parkin 1×10^12 mg/kg,3周后经尾静脉注射3-甲基腺苷15 mg/kg,每周1次,共6周。随后采用B超检测大鼠心脏舒缩功能,光镜下观察心肌细胞横截面积,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅱ)、P62和Parkin的表达。结果与Non-DM组比较,DM组大鼠心肌细胞横截面积增加,心脏舒张和收缩功能下降(P<0.05);与DM组比较,DM+P组心肌细胞横截面积减少,心脏舒张和收缩功能改善,心肌LC3Ⅱ和Parkin表达上调,P62表达下调(P<0.05);与DM+P组比较,DM+P+MA组心肌横截面积增加,心脏舒张和收缩功能降低,心肌LC3Ⅱ表达下调,P62表达上调(P>0.05)。结论自噬参与了Parkin过表达减轻对糖尿病大鼠心肌肥厚的过程。 展开更多
关键词 自噬 泛素蛋白连接酶 糖尿病 心脏扩大
结肠癌组织中WWP1、C-myc的表达及临床意义 预览
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作者 孙光源 武亮 +3 位作者 张月 薛军 史玉洁 李文贤 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第10期21-26,共6页
目的检测WWP1、C-myc在结肠癌组织中的表达,探究其与结肠癌患者病情进展、预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测河北北方学院附属第一医院收治的135例结肠癌患者的癌组织、癌旁正常组织中WWP1、C-myc蛋白表达情况,分析癌组织中WWP1、... 目的检测WWP1、C-myc在结肠癌组织中的表达,探究其与结肠癌患者病情进展、预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测河北北方学院附属第一医院收治的135例结肠癌患者的癌组织、癌旁正常组织中WWP1、C-myc蛋白表达情况,分析癌组织中WWP1、C-myc表达与患者临床病理参数、无进展生存期(PFS)及总生存期(OS)的关系,用Cox回归分析结肠癌预后的危险因素。结果结肠癌组织WWP1、C-myc蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织(P<0.05);结肠癌组织WWP1、C-myc蛋白表达受Dukes分期、肿瘤浸润深度及淋巴结转移的影响较大(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析表明,结肠癌组织WWP1、C-myc阳性表达患者术后PFS、OS较短(P<0.05);Cox回归分析结果显示,分化程度[R^R=29.203(95%CI:4.759,179.192)]、肿瘤Dukes分期[R^R=16.817(95%CI:2.765,102.271)]、浸润深度[R^R=3.285(95%CI:1.450,7.442)]、淋巴结转移[R^R=18.723(95%CI:4.131,84.861)]、WWP1表达[R^R=11.344(95%CI:3.472,37.060)]及C-myc表达[R^R=12.873(95%CI:3.092,53.592)]为影响结肠癌患者预后的独立危险因素。结论结肠癌组织中WWP1、C-myc异常高表达,且与患者病情恶性进展、预后不良关系密切,WWP1、C-myc可作为预测结肠癌患者预后的参考指标。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 泛素蛋白连接酶 基因 myc Kaplan-Meiers评估
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紫外线及全反式维A酸对人皮肤及成纤维细胞中Hrd1表达的影响
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作者 成仙叶 钱雯 +3 位作者 金轶 李谢伦 苏东明 陈斌 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期253-258,共6页
目的探讨紫外线照射及全反式维A酸(ATRA)对人皮肤及成纤维细胞中Hrd1表达的影响及机制。方法2017年12月至2018年6月于南京医科大学附属第一医院皮肤科收集12份人皮肤组织标本,30~40岁、60~70岁曝光及非曝光部位标本各3份,免疫组化检测各... 目的探讨紫外线照射及全反式维A酸(ATRA)对人皮肤及成纤维细胞中Hrd1表达的影响及机制。方法2017年12月至2018年6月于南京医科大学附属第一医院皮肤科收集12份人皮肤组织标本,30~40岁、60~70岁曝光及非曝光部位标本各3份,免疫组化检测各组Hrd1表达。将40只BALB/c小鼠分为对照组、紫外线组、ATRA组及紫外线+ATRA组,其中紫外线组、紫外线+ATRA组每日照射UVA10J/cm^2和UVB30mJ/cm^2,紫外线+ATRA组(照光前给药)、ATRA组小鼠背部剃毛区域每日均匀涂抹1次0.1ml0.1%ATRA药膏,对照组既不涂药也不照射紫外线。14周后处死小鼠并取背部皮肤免疫组化观察Hrd1的表达。体外培养的人皮肤成纤维细胞分为对照组、紫外线组、ATRA组及紫外线+ATRA组,紫外线组和ATRA+紫外线组照光前用磷酸盐缓冲液覆盖细胞上层,照射10J/cm^2UVA或30mJ/cm^2UVB,ATRA+紫外线组(照光后给药)和ATRA组用含ATRA1μmol/L的培养基继续培养24h。Western印迹法检测各组成纤维细胞Hrd1表达,荧光显微镜观察各组细胞内活性氧水平。组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验,P<0.05认为差异有统计学意义。结果30~40岁、60~70组曝光部位皮肤组织中Hrd1表达水平分别为0.307±0.256、0.486±0.579,均明显高于避光部位(0.196±0.330、0.199±0.375),t值分别为5.486、10.579,P<0.05。BALB/c小鼠体内实验中,对照组、紫外线组、ATRA组及紫外线+ATRA组小鼠皮肤中Hrd1表达水平分别为0.189±0.015、0.288±0.017、0.187±0.020、0.226±0.021,差异有统计学意义(F=19.553,P<0.001),紫外线组高于对照组(t=5.337,P=0.033)和ATRA+紫外线组(t=4.891,P=0.039)。体外实验中,人皮肤成纤维细胞分别经UVA、UVB照射后,4组细胞Hrd1水平差异均有统计学意义(F值分别为120.704、102.119,均P<0.001),UVA或UVB照射对Hrd1表达水平的影响基本一致,紫外线组Hrd1水平均明显高于对照组和ATRA+紫外线组(均P<0.05)。紫外线照射� 展开更多
关键词 紫外线 维甲酸 成纤维细胞 皮肤衰老 泛素蛋白连接酶 活性氧 Hrd1
蛋白泛素化修饰调控炎性肠疾病发生和发展的研究进展 预览
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作者 凌静 李红蕊 陈玮琳 《浙江大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第1期82-88,共7页
炎性肠疾病是一种慢性胃肠道功能紊乱的炎症性疾病。泛素化是一类重要的蛋白质翻译后修饰方式。近年来关于泛素化-去泛素化系统在炎性肠疾病发生和发展中的作用已成为研究热点。目前蛋白泛素化修饰调控炎性肠疾病过程所需的E3泛素连接酶... 炎性肠疾病是一种慢性胃肠道功能紊乱的炎症性疾病。泛素化是一类重要的蛋白质翻译后修饰方式。近年来关于泛素化-去泛素化系统在炎性肠疾病发生和发展中的作用已成为研究热点。目前蛋白泛素化修饰调控炎性肠疾病过程所需的E3泛素连接酶中,分子生物学研究较为清楚的有环指蛋白183(RNF183)、环指蛋白20(RNF20)、Itch和锌指蛋白A20。其中RNF183可靶向核因子κB抑制蛋白α(IκBα)泛素化降解促进NF-κB活化;RNF20促进组蛋白H2B单泛素化从而下调相关炎症因子的转录;Itch促进维甲酸核孤儿受体γt泛素化降解抑制IL-17介导的肠炎;A20以其特有的泛素化和去泛素化双重活性影响炎性肠疾病的发展。本文综述了以上分子在炎性肠疾病发生、发展和转归中的作用及调控机制。 展开更多
关键词 泛素 泛素蛋白连接酶 炎性肠疾病 综述
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shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl—b基因沉默前后蛋白质组学分析
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作者 王小坡 倪娜娜 +5 位作者 熊竞舒 宋昊 姜祎群 陈浩 曾学思 孙建方 《中华皮肤科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期569-574,共6页
目的分析shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl—b基因沉默前后差异表达蛋白。方法使用非标记定量蛋白质组学技术鉴定分别用Cbl—bshRNA慢病毒载体(Cbl—bshRNA组)和对照慢病毒载体(对照组)转染的A375细胞的差异表达蛋白。采用生物信息学方... 目的分析shRNA介导黑素瘤A375细胞Cbl—b基因沉默前后差异表达蛋白。方法使用非标记定量蛋白质组学技术鉴定分别用Cbl—bshRNA慢病毒载体(Cbl—bshRNA组)和对照慢病毒载体(对照组)转染的A375细胞的差异表达蛋白。采用生物信息学方法对筛选的差异蛋白进行基因本体富集及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。Western印迹验证差异蛋白(EphA2、GSK313)表达和Cbl—bshRNA沉默后两组p-AKT表达。采用SPSS23.0软件进行统计分析,两组间蛋白丰度比较采用两样本£检验。基因本体及KEGG富集分析结果采用Fisher精确概率法检验。结果共鉴定3449种蛋白,筛选出Cbl—bshRNA组和对照组差异表达蛋白74个。与对照组相比,Cbl.bshRNA组52个蛋白表达上调,22个下调。差异蛋白基因本体富集分析发现前5位显著富集生物学过程为整合素介导细胞黏附、单一生物代谢过程、整合素介导细胞黏附调节、蛋白质靶向线粒体调节、核酸代谢过程;前5位显著富集分子功能为DNA结合、2,2铁硫簇合物结合、信号受体活性、钙黏蛋白结合、细胞黏附分子结合;前5位显著富集的细胞组分为核小体、DNA包装复合体、光感器连接纤维、DNA一蛋白质复合体、胞外区部分。京都基因与基因组百科全书通路富集分析发现,前5位与黑素瘤相关的显著富集通路包括叶酸生物合成、轴突导向、细胞外基质受体相互作用、黏合连接、Writ信号通路。Western印迹检测显示,Cbl—bshRNA组EphA2相对表达水平降低(O.369,以对照组表达水平为1计算),GSK3t3表达增加(3.524),该结果与蛋白质组学检测结果一致;p-AKT相对表达水平降低(0.453)。结论Cbl—b可能通过多种生物学通路参与黑素瘤发病;EphA2/P13K/AKT信号通路可能是Cbl.b参与黑素瘤形成的重要机制之一。 展开更多
关键词 黑素瘤 泛素蛋白连接酶 原癌基因蛋白质cbl—b RNA 小分子沉默 蛋白质组学
泛素化酶DNA损伤特异性结合蛋白2与肿瘤关系的研究进展
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作者 凌欢 周倩 +1 位作者 熊宇迪 周云峰 《肿瘤研究与临床》 CAS 2018年第1期66-69,共4页
泛素化酶DNA损伤特异性结合蛋白2(DDB2)是一种DDB1-CUL4相关因子(DCAF),属于泛素连接酶E3的亚家族.DDB2通过与DCAF相结合,形成泛素连接酶复合体,从而特异性识别靶蛋白底物,使底物泛素化并降解.其通过多种途径影响肿瘤的发生、发展,... 泛素化酶DNA损伤特异性结合蛋白2(DDB2)是一种DDB1-CUL4相关因子(DCAF),属于泛素连接酶E3的亚家族.DDB2通过与DCAF相结合,形成泛素连接酶复合体,从而特异性识别靶蛋白底物,使底物泛素化并降解.其通过多种途径影响肿瘤的发生、发展,如DNA损伤修复、细胞周期调控及细胞凋亡、细胞侵袭与转移、细胞早衰、细胞增殖生长、肿瘤干细胞的群体化等.文章就DDB2影响肿瘤发生、发展的机制和对肿瘤治疗及预后判断的关系作一综述. 展开更多
关键词 肿瘤 泛素蛋白连接酶 DNA损伤特异性结合蛋白2 DDB1-CUIA相关因子
F-BOX蛋白家族在生殖领域的研究进展 预览
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作者 金一枚 孙斯曼 +1 位作者 闫菽灵 李默 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2018年第5期393-396,共4页
由于卵母细胞中转录水平的改变不显著,因此翻译后修饰如泛素-蛋白酶系统(UPS)可能起到重要的调控作用。其核心成员F-BOX在UPS中负责特异性识别底物,以帮助泛素系统泛素化并降解目的蛋白。F-BOX蛋白广泛存在于生殖细胞及胚胎中,但对其... 由于卵母细胞中转录水平的改变不显著,因此翻译后修饰如泛素-蛋白酶系统(UPS)可能起到重要的调控作用。其核心成员F-BOX在UPS中负责特异性识别底物,以帮助泛素系统泛素化并降解目的蛋白。F-BOX蛋白广泛存在于生殖细胞及胚胎中,但对其底物功能的研究却十分缺乏。有研究报道,F-BOX蛋白通过对上皮细胞间质转化(EMT)、细胞信号转导及细胞增殖与凋亡中的关键蛋白进行泛素化,参与到卵母细胞的发育和成熟、卵母细胞-胚胎转化(OET)及早期胚胎发育的进程中,其还可以调控体内雌孕激素的水平。本文通过介绍F-BOX在UPS中的作用,综述其在卵母细胞、OET和胚胎发生发展中的生物学作用,及其对雌孕激素水平的调控,以期F-BOX可以作为潜在的干预靶点,为人类生殖健康和计划生育的研究提供新的思路。 展开更多
关键词 泛素蛋白连接酶 卵母细胞 胚胎发育 F-BOX蛋白
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Iduna蛋白过表达对氧糖剥夺新生大鼠海马神经元损伤时PARP-1/AIF通路的影响
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作者 高宇博 杨晓霞 +1 位作者 吴彦铎 倪新莉 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期367-370,共4页
目的评价Iduna蛋白过表达对氧糖剥夺新生大鼠海马神经元损伤时多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)/凋亡诱导因子(AIF)通路的影响。方法出生24 h健康SD大鼠,处死分离和培养海马神经元。采用随机数字表法分为4组(n=40):对照组(... 目的评价Iduna蛋白过表达对氧糖剥夺新生大鼠海马神经元损伤时多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)/凋亡诱导因子(AIF)通路的影响。方法出生24 h健康SD大鼠,处死分离和培养海马神经元。采用随机数字表法分为4组(n=40):对照组(C组)、氧糖剥夺组(O组)、阴性对照慢病毒组(NL组)和Iduna蛋白过表达组(IO组)。采用无糖培养基+低氧环境的培养方法制备海马神经元氧糖剥夺模型,NL组模型制备前48 h时加入阴性对照的慢病毒,IO组模型制备前48 h时加入成功构建的Iduna过表达慢病毒,C组神经元正常培养,不处理,培养24 h。采用MTT法检测神经元存活率,比色法检测神经元LDH漏出率,彗星实验法检测神经元彗尾DNA含量,Western blot法检测神经元总蛋白PARP-1、细胞色素c(Cyt c)和细胞核蛋白凋亡诱导因子(AIF)的表达。结果与C组比较,余3组神经元存活率降低,LDH漏出率和彗尾DNA含量升高,PARP-1、AIF和Cyt c表达上调(P〈0.05);与O组比较,IO组神经元存活率升高,LDH漏出率和彗尾DNA含量降低,PARP-1、AIF和Cyt c表达下调(P〈0.05),NL组差异无统计学意义(P〉0.05);与NL组比较,IO组神经元存活率升高,LDH漏出率和彗尾DNA含量降低,PARP-1、AIF和Cyt c表达下调(P〈0.05)。结论Iduna蛋白过表达通过抑制PARP-1/AIF通路减轻氧糖剥夺新生大鼠海马神经元损伤。 展开更多
关键词 聚ADP核糖聚合 凋亡诱导因子 泛素蛋白连接酶 缺氧缺血 婴儿 新生 海马 神经元
泛素连接酶FBW7在影响胶质瘤对替莫唑胺敏感性中的作用及其机制
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作者 张炜 林靖 +2 位作者 宋朝理 郑小强 程宏伟 《肿瘤研究与临床》 CAS 2018年第10期655-659,共5页
目的 研究泛素连接酶FBW7在影响胶质瘤对替莫唑胺敏感性中的作用,并初步探讨其机制.方法 构建FBW7过表达慢病毒,设对照组、替莫唑胺组、FBW7过表达组、FBW7过表达+替莫唑胺组,不同干预方法处理细胞株U251后,分别于36、72 h用相差显微... 目的 研究泛素连接酶FBW7在影响胶质瘤对替莫唑胺敏感性中的作用,并初步探讨其机制.方法 构建FBW7过表达慢病毒,设对照组、替莫唑胺组、FBW7过表达组、FBW7过表达+替莫唑胺组,不同干预方法处理细胞株U251后,分别于36、72 h用相差显微镜及四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分析各组细胞抑制率的差异;流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡率.结果 两个时间点各组U251细胞存活数量均较对照组增加,与对照组相比,36 h替莫唑胺组、FBW7过表达组、FBW7过表达+替莫唑胺组细胞抑制率分别为(17.6±0.8)%、(10.4±0.6)%、(18.6±0.6)%(F=67.02,P〈0.01),72 h的抑制率分别为(25.1±0.4)%、(16.7±0.7)%、(29.0±0.9)%(F=74.61,P〈0.01),72 h FBW7过表达联合替莫唑胺组较替莫唑胺组抑制率更高(P〈0.01);72 h后3个治疗组的细胞周期G2/M阻滞比例和细胞凋亡率较对照组均增高(F=41.63,P〈0.001;F=42.30,P〈0.01),并且FBW7过表达+替莫唑胺组中两者的增高程度较替莫唑胺组更显著(P〈0.05,P〈0.01).结论 FBW7增加胶质瘤细胞对替莫唑胺治疗的敏感性,该增敏作用与FBW7诱导的细胞G2/M期阻滞和凋亡率增加有关. 展开更多
关键词 泛素蛋白连接酶 替莫唑胺 胶质瘤 化疗敏感性
晚期老年非小细胞肺癌患者外周血中泛素连接酶和髓样细胞白血病基因-1的表达与使用埃克替尼预后初探
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作者 杨毅 官俏兵 +1 位作者 郭丽 韩晨阳 《中华老年医学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期888-891,共4页
目的 研究晚期非小细胞肺癌(NSCLC)老年患者外周血中泛素连接酶(FBW7)和髓样细胞白血病基因-1(MCL-1)的表达水平与使用埃克替尼预后的相关性. 方法 选择76例60岁以上的表皮生长因子受体(EGFR)突变敏感并且接受埃克替尼靶向治疗... 目的 研究晚期非小细胞肺癌(NSCLC)老年患者外周血中泛素连接酶(FBW7)和髓样细胞白血病基因-1(MCL-1)的表达水平与使用埃克替尼预后的相关性. 方法 选择76例60岁以上的表皮生长因子受体(EGFR)突变敏感并且接受埃克替尼靶向治疗的晚期NSCLC老年患者,采用实时荧光定量PCR(RT-QPCR)检测每位患者外周血中FBW7和MCL-1基因表达水平,对两者的表达与临床病理因素、患者的总生存期(OS)、无进展生存期(PFS)相关性进行统计分析. 结果 FBW7和MCL-1的表达呈负相关(r=-0.37,P<0.001).外周血中FBW7高表达、MCL-1低表达的患者可以获得更高的有效率(P<0.001),更长的总生存期和无进展生存期.Cox回归分析发现外周血中FBW7和MCL-1的表达水平是影响OS和PFS的独立因素. 结论 FBW7高表达、MCl-1低表达的NSCLC患者更能从埃克替尼靶向治疗中获益,两者可作为埃克替尼疗效预判的指标,为临床埃克替尼应用提供支持和参考. 展开更多
关键词 非小细胞肺 泛素蛋白连接酶 髓样细胞白血病基因-1 埃克替尼
泛素连接酶FBW7在胶质瘤的表达和作用分析 预览
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作者 林靖 宋朝理 +3 位作者 张炜 程宏伟 郑小强 高瑞庭 《中国微侵袭神经外科杂志》 CAS 2018年第11期512-515,共4页
目的,研究泛素连接酶FBW7在胶质瘤的表达情况,及其对胶质瘤细胞恶性生物行为的影响。方法应用免疫组织化学染色检测并定量分析FBW7在30例高级别、低级别胶质瘤的蛋白表达情况与表达差异。构建FBW7过表达慢病毒,并转染胶质瘤细胞株U251和... 目的,研究泛素连接酶FBW7在胶质瘤的表达情况,及其对胶质瘤细胞恶性生物行为的影响。方法应用免疫组织化学染色检测并定量分析FBW7在30例高级别、低级别胶质瘤的蛋白表达情况与表达差异。构建FBW7过表达慢病毒,并转染胶质瘤细胞株U251和U373,MTT法、细胞侵袭实验、划痕实验观察细胞增殖、侵袭和迁移。结果FBW7在胶质瘤标本中的染色分数低于瘤旁脑组织,在Ⅳ级胶质瘤中的染色分数低于Ⅱ级(P<0.01);与肿瘤增殖标志Ki-67染色水平呈负相关(r=-0.4677)。过表达FBW7的U251和U373细胞增殖、侵袭和迁移能力显著抑制(P<0.01)。结论FBW7表达随胶质瘤病理级别增加而下调,与增殖程度呈负相关,增加FBW7表达水平可抑制细胞恶性生物行为。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 泛素蛋白连接酶 检测 免疫组织化学
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下调泛素蛋白连接酶E3A表达对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响 被引量:2
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作者 谢少利 王碧娟 +4 位作者 刘家有 李金穗 赵小波 邓世山 侯令密 《中国普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第11期1417-1423,共7页
目的:探讨降低泛素蛋白连接酶E3A(UBE3A)的表达对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:采用慢病毒载体分别将构建的3条UBE3A shRNA序列转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,检测干扰效率后,筛选出干扰效率最高的序列用于实验。分别... 目的:探讨降低泛素蛋白连接酶E3A(UBE3A)的表达对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:采用慢病毒载体分别将构建的3条UBE3A shRNA序列转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,检测干扰效率后,筛选出干扰效率最高的序列用于实验。分别采用CCK8法、Transwell小室实验、流式细胞术观察MDA-MB-231细胞经所选用的UBE3A shRNA序列转染后侵袭能力、增殖能力与细胞周期的变化,以转染阴性对照组序列和无处理的MDA-MB-231细胞作为阴性对照及空白对照。结果:成功构建UBE3A shRNA慢病毒表达载体并筛选出干扰率最高的UBE3A shRNA序列(UBE3A基因和蛋白表达抑制率分别为89.5%、45.3%)。与空白对照组细胞比较,下调UBE3A的MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭能力均明显降低,且细胞周期出现明显的S期阻滞(均P<0.05);阴性对照组细胞各项观察指标无统计学差异(均P>0.05)。结论:下调UBE3A表达能诱导三阴性乳腺癌细胞的细胞周期阻滞,从而抑制其增殖与侵袭能力,提示UBE3A在三阴性乳腺癌细胞的恶性生物学行为中发挥了重要作用。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 泛素蛋白连接酶 RNA干扰 细胞周期
泛素连接酶Smurf1促进Smurf2的Nedd化修饰
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作者 刘超 李海文 +2 位作者 韦荣飞 谢萍 张令强 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期86-89,共4页
目的探讨泛素连接酶Smad泛素化相关因子2(Smad ubiquitination-related factor 2,Smurf2)Nedd化修饰的机制。方法梯度过表达Nedd8检测Smuff2的蛋白水平变化,免疫共沉淀(IP)和Western印迹分析Smurf2的Nedd化修饰,GST融合蛋白沉降技术... 目的探讨泛素连接酶Smad泛素化相关因子2(Smad ubiquitination-related factor 2,Smurf2)Nedd化修饰的机制。方法梯度过表达Nedd8检测Smuff2的蛋白水平变化,免疫共沉淀(IP)和Western印迹分析Smurf2的Nedd化修饰,GST融合蛋白沉降技术(GST-pulldown)验证相互作用,分析Smurf1 C426A基因敲入(knock in)小鼠体内Smurf2在淋巴、脾、肝和肺组织的蛋白表达水平。结果 Smurf2可发生Nedd化修饰,过表达Nedd8可导致Smurf2蛋白水平下调,Smurf1和Smurf2能相互作用,且Smurf1可使Smurf2的Nedd化修饰增强。在Smurf1 C426A基因敲入小鼠的组织细胞中Smurf2蛋白水平上调。结论 Smurf1能促进Smurf2的Nedd化修饰。 展开更多
关键词 泛素蛋白连接酶 泛素 免疫沉淀法 Smurf1 SMURF2 Nedd8 nedd化
Pdlim2的研究进展 预览
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作者 彭兰 杜晓刚 范能全 《现代医药卫生》 2017年第5期709-712,共4页
Pdlim2蛋白是辅肌动蛋白关联的LIM蛋白(ALP)超家族的成员之一,存在于许多细胞的细胞核内,其在N末端含有一个PDZ结构域,在C末端含有一个LIM结构域。其中Pdlim2的PDZ结构域(Pdlim2-PDZ)作为一个蛋白-蛋白相互识别的功能模块,与蛋白复... Pdlim2蛋白是辅肌动蛋白关联的LIM蛋白(ALP)超家族的成员之一,存在于许多细胞的细胞核内,其在N末端含有一个PDZ结构域,在C末端含有一个LIM结构域。其中Pdlim2的PDZ结构域(Pdlim2-PDZ)作为一个蛋白-蛋白相互识别的功能模块,与蛋白复合物的装配有关,而其LIM结构域作为蛋白与蛋白之间相互作用的结构域。 展开更多
关键词 PDZ结构域 泛素蛋白连接酶 蛋白 细胞骨架 肿瘤 肾病 综述
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胰腺癌中Ring1B、LSD1及P16表达及其与预后的关系 被引量:3
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作者 陈辉星 陈实 +3 位作者 李小燕 陈明源 严茂林 黄龙 《中国普通外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期1148-1154,共7页
目的:探讨胰腺癌中E3泛素连接酶亚单位Ring1B、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)及细胞周期调节因子P16表达与及其与患者预后的关系。方法:用免疫组化法检测85例胰腺癌患者手术标本(癌组织与癌旁组织)中LSD1、Ring1B与P16蛋... 目的:探讨胰腺癌中E3泛素连接酶亚单位Ring1B、组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)及细胞周期调节因子P16表达与及其与患者预后的关系。方法:用免疫组化法检测85例胰腺癌患者手术标本(癌组织与癌旁组织)中LSD1、Ring1B与P16蛋白的表达及分布,并选取其中6对癌组织和癌旁组织,用qRT-PCR和Western blot法检测mRNA和蛋白表达;分析三者在胰腺癌组织中表达的相关性,及其与患者生存的关系。结果:免疫组化结果显示,Ring1B与LSD1蛋白主要表达于细胞浆,P16主要表达于胞核;Ring1B与LSD1在胰腺癌组织中表达明显高于癌旁组织,而P16的表达明显低于癌旁组织(均P〈0.05);在胰腺癌组织中Ring1B、LSD1的表达与P16的表达均呈负相关(r=-476;r=-0.673,均P〈0.05)。qRT-PCR结果显示,胰腺癌组织中Ring1B和LSD1的mRNA的平均相对表达量均明显高于癌旁组织(8.908 vs. 1.947;7.126 vs. 1.940,均P〈0.05),P16的mRNA的平均相对表达量明显低于癌旁组织(1.269 vs. 5.237,P〈0.05);Western blot结果显示,三者的蛋白表达趋势与mRNA表达一致。生存分析显示,Ring1B、LSD1高表达患者生存率均分别低于其低表达患者(χ2=8.958,P=0.012;χ2=8.856,P=0.010),而P16高表达患者生存率高于其低表达患者(χ2=7.867,P=0.024)。结论:胰腺癌组织中Ring1B与LSD1表达升高,P16表达降低;Ring1B、LSD1可能分别通过组蛋白泛素化和去甲基化调控P16的表达,从而影响胰腺癌预后。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 泛素蛋白连接酶 蛋白赖氨酸N-甲基转移 周期素依赖激抑制剂p16 预后
卵巢上皮性癌患者外周血BARD1基因单核苷酸多态性与BRCA1基因突变风险的关系
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作者 刘伟玲 赵九洲 +4 位作者 王志中 董兵 侯阳阳 吴新新 郭永军 《中华妇产科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期403-410,共8页
目的探讨BARD1基因Val507Met、Arg378Ser及Pro24Ser位点单核苷酸多态性(SNP)与卵巢上皮性癌(卵巢癌)BRCA1基因突变风险的关系。方法收集2016年1-10月郑州大学附属肿瘤医院经第2代基因测序(NGS)技术检测明确为BRCA1基因突变的卵巢... 目的探讨BARD1基因Val507Met、Arg378Ser及Pro24Ser位点单核苷酸多态性(SNP)与卵巢上皮性癌(卵巢癌)BRCA1基因突变风险的关系。方法收集2016年1-10月郑州大学附属肿瘤医院经第2代基因测序(NGS)技术检测明确为BRCA1基因突变的卵巢癌患者19例及BRCA1基因未突变的卵巢癌患者50例,所有患者均经病理检查确诊。(1)采用第2代基因测序(NGS)技术检测69例卵巢癌患者外周血BARD1基因的突变情况。(2)采用Pearson线性相关分析法对卵巢癌患者BARD1基因不同突变位点之间基因型改变的相关性进行分析。(3)采用非条件logistic回归法分析卵巢癌患者携带BARD1基因各突变位点其不同基因型的BRCA1基因突变风险。(4)采用χ^2检验或Fisher精确概率法对不同临床病理特征的卵巢癌患者其携带BARD1基因Val507Met、Arg378Ser及Pro24Ser位点不同基因型后的BRCA1基因突变风险进行分析。结果(1)NGS技术检测显示,69例卵巢癌患者共发现8个BARD1基因突变位点,其中Val507Met、Arg378Ser及Pro24Ser为最常见的基因突变位点,其突变率均为54%(37/69)。(2)Pearson线性相关分析显示,Val507Met与Arg378Ser位点(r=0.929,P〈0.01)、Val507Met与Pro24Ser位点(r=0.801,P〈0.01)、Arg378Ser与Pro24Ser位点(r=0.748,P〈0.01)之间的基因型改变均呈明显正相关。(3)携带BARD1基因的Val507Met位点AA基因型、Arg378Ser位点CC基因型、Pro24Ser位点TT基因型的卵巢癌患者的BRCA1基因突变风险明显增高(P〈0.05)。(4)携带BARD1基因各突变位点不同基因型,即Val507Met(GG、AA+GA)、Arg378Ser(GG、CC+GC)及Pro24Ser(CC、TT+CT)位点基因型与卵巢癌患者年龄、家族史、绝经与否、输卵管结扎史以及铂类药物敏感性无明显关系(P〉0.05);但其均与BRCA1基因突变明显有关(P〈0.05)。进一步分析显示,Val507Met及Arg378Ser位点发� 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 基因 BRCA1 基因 BARD1 泛素蛋白连接酶 多态性 单核苷酸 突变
RNF213基因多态性与颅内血管狭窄性疾病易感性的汇总分析
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作者 姚星妹 廖鑫 严俊霞 《国际脑血管病杂志》 2016年第10期865-871,共7页
目的探讨RNF213基因多态性(rsll2735431、m138130613及m148731719)与颅内血管狭窄性疾病易感性的关联。方法根据相关数据库,收集涉及RNF213基因多态性与颅内血管狭窄性疾病关联的研究文献,应用Stata12.0软件选用合适遗传模型,分... 目的探讨RNF213基因多态性(rsll2735431、m138130613及m148731719)与颅内血管狭窄性疾病易感性的关联。方法根据相关数据库,收集涉及RNF213基因多态性与颅内血管狭窄性疾病关联的研究文献,应用Stata12.0软件选用合适遗传模型,分析异质性并计算合并优势比(oddsratio,OR)及其95%可信区间(confidenceinterval,CI)。结果经筛选共纳入12篇相关文献。汇总分析结果显示,rsll2735431多态性与烟雾病易感性在各种遗传模型下均存在显著性关联,其中以显性模型最为显著(AA+GA基因型对GG基因型:OR101.46,95%C/59.41~173.27;P〈0.001),同时该位点多态性也与非烟雾病性颅内动脉狭窄/闭塞存在显著相关性(AA+GA基因型对GG基因型:OR13.82,95%C/4.48~42.61;P〈0.001);rsl38130613多态性在显性模型下与中国人群烟雾病易感性存在显著性关联(OR5j01,95%C/1.57~15.98;P=0.006);未发现rsl48731719多态性与烟雾病易感性有关联。结论RNF213基因rsll2735431多态性是烟雾病的易感因素,同时该位点多态性还与非烟雾病性颅内动脉狭窄形成有关。系统研究RNF213分子功能对此类血管狭窄性疾病的诊断和治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 泛素蛋白连接酶 多态现象 遗传学 脑动脉疾病 烟雾病 疾病遗传易感性 Meta分析 RNF213蛋白
泛素连接酶Cbl-b在黑素瘤组织和细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义 被引量:2
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作者 王小坡 温斯健 +5 位作者 粟倩雅 宋昊 倪娜娜 姜祎群 陈浩 孙建方 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期861-864,共4页
目的:探讨泛素连接酶Cbl-b在皮肤黑素瘤组织及黑素瘤细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义。方法收集69份黑素瘤、30份色素痣组织,采用免疫组化法检测Cbl-b蛋白表达水平。实时荧光定量PCR、免疫印迹法分别检测黑素瘤细胞系A375、M14、... 目的:探讨泛素连接酶Cbl-b在皮肤黑素瘤组织及黑素瘤细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义。方法收集69份黑素瘤、30份色素痣组织,采用免疫组化法检测Cbl-b蛋白表达水平。实时荧光定量PCR、免疫印迹法分别检测黑素瘤细胞系A375、M14、MV3及黑素细胞中Cbl-b mRNA及蛋白表达水平。结果69份皮肤黑素瘤标本中,52份(75.36%)表达Cbl-b;30份色素痣标本中,4份(13.33%)表达Cbl-b,两组Cbl-b蛋白表达水平差异有统计学意义(χ2=32.745,P〈0.01)。黑素瘤组织中Cbl-b表达水平与肿瘤进展程度、Clark分级和Breslow厚度均呈正相关(rs分别为0.569、0.654、0.727,均P〈0.01)。实时荧光定量PCR显示,A375、M14、MV3细胞Cbl-b mRNA表达差异有统计学意义(F=176.537,P〈0.01)。免疫印迹法显示,A375细胞Cbl-b蛋白表达水平最高,黑素细胞最低。结论 Cbl-b蛋白在皮肤黑素瘤组织及其细胞株中均高表达。 展开更多
关键词 泛素蛋白连接酶 黑色素瘤 黑素细胞 肿瘤侵润 肿瘤分级 CBL-B
泛素特异性蛋白酶在抗病毒感染免疫中的作用研究进展 预览 被引量:2
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作者 朱惠惠 赵西宝 +1 位作者 胡未伟 陈玮琳 《浙江大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期578-583,共6页
泛素特异性蛋白酶(USP)属于半胱氨酸蛋白酶,是去泛素化酶家族的重要成员之一。USP家族分子通过多种途径正向或负向调控I型干扰素的产生,从而启动或削弱抗病毒感染免疫应答。例如USP2b、USP3、USP18、USP25、U136USP和HAUSP发挥抗病... 泛素特异性蛋白酶(USP)属于半胱氨酸蛋白酶,是去泛素化酶家族的重要成员之一。USP家族分子通过多种途径正向或负向调控I型干扰素的产生,从而启动或削弱抗病毒感染免疫应答。例如USP2b、USP3、USP18、USP25、U136USP和HAUSP发挥抗病毒效应,而USP4、USP13、USP15和USP17则对机体的抗病毒免疫应答起负向调节的作用。本文对USP家族成员在抗病毒感染免疫应答中的调控作用及研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 泛素 半胱氨酸内肽 泛素蛋白连接酶 转录因子 单纯疱疹病毒属 综述
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