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洋葱黄矮病毒RT-PCR和ELISA检测方法的建立
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作者 郭炎 李小宇 +3 位作者 苏颖 张春雨 周雪平 王永志 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期495-496,共2页
分麋洋葱Alliumcepa var.aggregatum俗称毛葱、鬼子葱,是北方地区特色经济作物,保健功效显著,其种植面积逐年增加。洋葱黄矮病毒(OBnion yellow dwarfvirus,OYDV)能够侵染分麋洋葱,造成其产量和品质下降。OYDV侵染分麋洋葱后,植株矮化,... 分麋洋葱Alliumcepa var.aggregatum俗称毛葱、鬼子葱,是北方地区特色经济作物,保健功效显著,其种植面积逐年增加。洋葱黄矮病毒(OBnion yellow dwarfvirus,OYDV)能够侵染分麋洋葱,造成其产量和品质下降。OYDV侵染分麋洋葱后,植株矮化,叶片变形褪绿、叶尖枯萎,后期整个叶片表现发黄、起皱及萎缩等症状。为能在发病早期及时快速地检测出OYDV,本研究利用特异性引物和已制备的单克隆抗体,通过优化参数确定最佳检测条件,建立OYDV的RT-PCR和ELISA检测方法,以期为分麋洋葱生产中农药减施提供技术保障。 展开更多
关键词 ELISA检测方法 洋葱黄矮病毒 RT-PCR 叶片变形 单克隆抗体 特异性引物 经济作物 地区特色
耐酸乳酸杆菌物种特异性引物设计及其在古井贡酒窖泥酒醅质量评价中的初步应用 预览
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作者 刘倩倩 李俊薇 +4 位作者 曹润洁 张会敏 何宏魁 李安军 张治洲 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期16-22,共7页
古井贡酒的酿造过程中,窖泥和酒醅中发现大量耐酵乳杆菌(Lactobacillus acetotolerans),对该菌快速特异性检测非常重要。该文利用L. acetotolerans菌及大量Lactobacillus类似菌种的全基因组序列与PRIMERBLAST方法,设计了几对L. acetotol... 古井贡酒的酿造过程中,窖泥和酒醅中发现大量耐酵乳杆菌(Lactobacillus acetotolerans),对该菌快速特异性检测非常重要。该文利用L. acetotolerans菌及大量Lactobacillus类似菌种的全基因组序列与PRIMERBLAST方法,设计了几对L. acetotolerans特异性引物,其中2对经过系列验证具有较好的特异性,可结合QPCR技术对不同质量和不同发酵阶段的窖泥进行L. acetotolerans含量的快速检测。结果表明,古井贡酒窖泥中L. acetotolerans含量总体明显低于酒醅,老窖泥中L. acetotolerans含量总体明显低于新窖池窖泥;而酒醅中老厂区和新厂区L. acetotolerans含量平均来看都很高,但样本之间存在明显波动。所用L. acetotolerans特异性引物可对浓香型白酒发酵样本中L. acetotolerans的相对含量测定并辅助评估窖泥酒醅质量。 展开更多
关键词 LACTOBACILLUS acetotolerans 古井贡酒 特异性引物 窖泥 酒醅
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桑树桑黄与杨树桑黄的分子辨别 预览
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作者 宋吉玲 陆娜 +5 位作者 王伟科 袁卫东 李海波 程俊文 亢学平 闫静 《四川大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期765-770,共6页
为准确鉴别桑黄(Sanghuangporus)近缘种桑树桑黄(S.sanghuang)与杨树桑黄(S.vaninii)、暴马桑黄(S.baumii),本研究基于核糖体基因rDNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分析技术,对桑黄真菌进行了系统发育分析与近缘... 为准确鉴别桑黄(Sanghuangporus)近缘种桑树桑黄(S.sanghuang)与杨树桑黄(S.vaninii)、暴马桑黄(S.baumii),本研究基于核糖体基因rDNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分析技术,对桑黄真菌进行了系统发育分析与近缘种的分子辨别研究.结果表明,在NJ系统发育树上,23个桑树桑黄、11个杨树桑黄和6个暴马桑黄菌株各自以很高的Bootstrap支持率聚为了三个独立的分支,种间差异明显.依据桑树桑黄和杨树桑黄的rDNA ITS序列差异,设计两对引物Sv_U1/Sv_L和Sv_U2/Sv_L,均可特异性地扩增杨树桑黄478 bp和651 bp的ITS片段,而不扩增桑树桑黄的ITS片段,因而可用于两个桑黄近缘种的快速分子辨别.本研究为探讨桑黄孔菌属真菌的系统发育关系提供了参考,并为桑黄种间的准确辨别提供了一种有效的分子辅助手段. 展开更多
关键词 桑黄 鉴别 分类 内转录间隔区 特异性引物
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我国外来入侵生物福寿螺种类的多重PCR鉴别方法
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作者 贺超 杨倩倩 +2 位作者 刘苏汶 刘光富 俞晓平 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期97-105,共9页
为研发能快速、准确地鉴别在我国为害严重的3种福寿螺——小管福寿螺Pomacea canaliculata、斑点福寿螺P.maculata和新发现入侵种Pomacea sp.的PCR技术,基于其线粒体全基因组序列,通过比对分析找到种间差异区段,分别设计并筛选了上述3... 为研发能快速、准确地鉴别在我国为害严重的3种福寿螺——小管福寿螺Pomacea canaliculata、斑点福寿螺P.maculata和新发现入侵种Pomacea sp.的PCR技术,基于其线粒体全基因组序列,通过比对分析找到种间差异区段,分别设计并筛选了上述3种福寿螺的特异性引物对,建立了多重PCR检测方法,对其特异性和灵敏度进行评价。结果表明,所设计的引物特异性强,能从不同地理种群的小管福寿螺、斑点福寿螺和Pomacea sp.中分别扩增出1 238、901和571 bp的特异性条带,阴性对照无条带;退火温度为60℃时,32个扩增循环的检测灵敏度可达1 ng样品DNA量。所构建的多重PCR体系可应用于福寿螺不同部位组织碎片、不同性别及不同发育阶段样品的鉴别,具有准确快速、灵敏高效的特点,可用于植保检疫及食品安全部门福寿螺种类的检测。 展开更多
关键词 福寿螺 特异性引物 分子鉴别 线粒体基因 多重PCR
市售三七粉中三七的DNA检测方法研究
5
作者 王巍 尚柯 +3 位作者 段庆梓 张彪 张玉 梁恒兴 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1399-1401,共3页
目的 建立基于PCR的三七真伪检测方法,并对三七粉进行检测。方法 对三七及其伪品的序列进行比对分析,在ITS区设计多组三七的特异性引物,对引物进行筛选,并对PCR反应条件进行优化,建立了三七的DNA检测方法。结果 建立了三七的DNA检测方法... 目的 建立基于PCR的三七真伪检测方法,并对三七粉进行检测。方法 对三七及其伪品的序列进行比对分析,在ITS区设计多组三七的特异性引物,对引物进行筛选,并对PCR反应条件进行优化,建立了三七的DNA检测方法。结果 建立了三七的DNA检测方法,并利用该方法对市场购买的三七粉进行检测,均能检测出三七药材成分。结论 该方法操作简单、特异性强、重复性好。 展开更多
关键词 三七 伪品 ITS 特异性引物 PCR
PCR过程中生成引物二聚体回收再利用的研究 预览
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作者 陈琪 刘晓峰 《江西医药》 CAS 2018年第8期897-898,900共3页
目的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)过程中生成的引物二聚体(Primer Dimer,PD)回收再利用。方法重组质粒pET28a(+)-ProDerf 1转化人大肠杆菌DH5x感受态细胞中,以ProDerf 1基因特异性引物PCR验证阳性菌落.PC... 目的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)过程中生成的引物二聚体(Primer Dimer,PD)回收再利用。方法重组质粒pET28a(+)-ProDerf 1转化人大肠杆菌DH5x感受态细胞中,以ProDerf 1基因特异性引物PCR验证阳性菌落.PCR产物行1%琼脂糖凝胶电泳,切胶回收菌落PCR过程中生成的引物二聚体,分光光度计260nm检测回收产物浓度:以重组质粒pET28a(+)-ProDerf 1为模版,不同浓度的回收产物为引物进行PCR扩增,产物行1%琼脂糖凝胶电泳,目的条带切胶回收并测序。结果回收产物为引物的PCR产物,在1000bp处出现特意条带,其核苷酸序列与ProDerf 1基因特异性引物PCR产物序列一致。结论PCR过程中生成的引物二聚体可以作为特异性引物回收再利用。 展开更多
关键词 PCR 特异性引物 引物二聚体 回收再利用
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利用转录组数据开发意大利蜜蜂的SSR分子标记 被引量:1
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作者 郭睿 陈华枝 +5 位作者 庄天艺 熊翠玲 郑燕珍 付中民 陈恒 陈大福 《安徽农业大学学报》 CSCD 2018年第3期404-408,共5页
意大利蜜蜂(简称意蜂)是自然界重要的授粉昆虫,广泛用于世界各国的养蜂生产,具有很高的生态和经济价值。为了开发意蜂的SSR分子标记,利用MISA软件对基于前期获得的意蜂幼虫肠道转录组数据组装得到的12 115条unigenes进行搜索,共预测... 意大利蜜蜂(简称意蜂)是自然界重要的授粉昆虫,广泛用于世界各国的养蜂生产,具有很高的生态和经济价值。为了开发意蜂的SSR分子标记,利用MISA软件对基于前期获得的意蜂幼虫肠道转录组数据组装得到的12 115条unigenes进行搜索,共预测出分布于2 149条unigenes的6 312个SSR位点,其中主要的重复类型为二核苷酸重复(54.42%)和三核苷酸重复(32.49%),主要基元为AT/AT(31.2%)和AG/CT(18.6%)。进一步利用软件设计出18 444对特异性引物,随机选取24对引物对国内3个不同来源的意蜂幼虫样品进行SSR位点扩增,有22对成功扩增出目的片段。研究开发出的SSR分子标记可用于意蜂的种群遗传和分子进化等研究,结果表明利用转录组数据鉴定非模式生物SSR位点的方法可行且高效。 展开更多
关键词 转录组 意大利蜜蜂 SSR 特异性引物
基于实时荧光定量PCR技术监测四川工业泡菜发酵过程中主要细菌的变化 预览 被引量:2
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作者 张亚豪 梁会朋 +2 位作者 常聪 尹礼国 张文学 《中国调味品》 北大核心 2018年第1期35-38,47共5页
采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术对四川工业泡菜发酵过程中变形菌门、厚壁茼门、乳杆菌属、盐单胞菌属、假单胞菌属和孤菌属的数量变化进行了检测。结果表明:变形菌门是泡菜发酵前期的优势菌门,而发酵中期和后期的优势菌门为厚壁菌... 采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术对四川工业泡菜发酵过程中变形菌门、厚壁茼门、乳杆菌属、盐单胞菌属、假单胞菌属和孤菌属的数量变化进行了检测。结果表明:变形菌门是泡菜发酵前期的优势菌门,而发酵中期和后期的优势菌门为厚壁菌门;在整个发酵过程中,乳杆菌属的含量呈现出明显的增加,假单胞菌属的含量有所降低,盐单胞菌属和弧菌属的含量均基本保持不变。该结果为四川泡菜工业化生产提供了一定的理论基础。 展开更多
关键词 四川工业泡菜 细菌 特异性引物 实时荧光定量PCR 数量变化
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基于PCR的冬虫夏草检测方法研究
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作者 梁恒兴 王巍 +3 位作者 段庆梓 张彪 尚柯 张玉 《中药材》 北大核心 2018年第3期546-550,共5页
目的:建立基于PCR的冬虫夏草真伪检测方法。方法:对冬虫夏草及其伪品的序列进行比对分析,在ITS区设计了冬虫夏草的特异性引物,并通过对PCR反应条件的优化,建立了冬虫夏草与常见伪品的PCR检测方法。结果:建立了冬虫夏草真伪鉴别的PCR检... 目的:建立基于PCR的冬虫夏草真伪检测方法。方法:对冬虫夏草及其伪品的序列进行比对分析,在ITS区设计了冬虫夏草的特异性引物,并通过对PCR反应条件的优化,建立了冬虫夏草与常见伪品的PCR检测方法。结果:建立了冬虫夏草真伪鉴别的PCR检测方法,并利用该方法对采集的虫草样品进行检测,实现了冬虫夏草与伪品的准确鉴别。结论:该方法操作简单、特异性强、重复性好。 展开更多
关键词 冬虫夏草 伪品 ITS 特异性引物 PCR
基于rDNA ITS序列的苹果异胫小卷蛾的分子鉴定 被引量:1
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作者 徐淼锋 权永兵 +4 位作者 黄永辉 迟远丽 林伟 廖力 张卫东 《植物检疫》 北大核心 2018年第1期36-40,共5页
本文首次测定了苹果异胫小卷蛾(Thaumatotibia leucotreta)、坚果异胫小卷蛾(Thaumatotibia batrachopa)、苹果蠹蛾(Cydia pomonella)、梨小食心虫(Grapholita molesta)等8种卷蛾的r DNA ITS的序列,以探索苹果异胫小卷蛾的分子... 本文首次测定了苹果异胫小卷蛾(Thaumatotibia leucotreta)、坚果异胫小卷蛾(Thaumatotibia batrachopa)、苹果蠹蛾(Cydia pomonella)、梨小食心虫(Grapholita molesta)等8种卷蛾的r DNA ITS的序列,以探索苹果异胫小卷蛾的分子鉴定方法。8种卷蛾的ITS1和ITS2区序列变异较大,其中ITS1区所分析307个位点中可变位点达到212个,ITS2区则在分析的203个位点中可变位点达到151个。根据8种卷蛾ITS区序列差异,设计了针对苹果异胫小卷蛾的特异性引物,应用特异性引物对样品进行PCR扩增,扩增产物经凝胶电泳分析,结果表明只有苹果异胫小卷蛾的样品有目的 DNA扩增条带,其余卷蛾无扩增条带。灵敏度试验结果显示,最低检测限量可达0.01 ng/μL。因此,采用本文设计的ITS区特异性引物可以对苹果异胫小卷蛾进行快速分子鉴定。 展开更多
关键词 苹果异胫小卷蛾 分子鉴定 特异性引物 RDNA ITS
烟草野火病菌特异性检测引物筛选及应用 预览
11
作者 陈瑞朋 卢凯 +5 位作者 张敏 刘元德 宗浩 牛纪军 刘文涛 徐后娟 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2018年第1期72-76,共5页
烟草野火病是山东烟区主要的细菌性病害之一,为了能够对该病害进行精确、快速的分子鉴定,本研究从NCBI基因组数据库中下载了假单胞菌属25个不同菌种和127个丁香假单胞菌属不同致病变种的全基因组数据,利用Mauve 2.3.1进行全基因组比... 烟草野火病是山东烟区主要的细菌性病害之一,为了能够对该病害进行精确、快速的分子鉴定,本研究从NCBI基因组数据库中下载了假单胞菌属25个不同菌种和127个丁香假单胞菌属不同致病变种的全基因组数据,利用Mauve 2.3.1进行全基因组比对,获得丁香假单胞菌烟草致病变种特异性区段。在此基础上利用Primer Premier 6.0进行引物设计,筛选出了一对丁香假单胞菌烟草致病变种的特异性检测引物40429。利用7株山东不同烟区的烟草野火病菌和4株分别来自于贵州、湖北、福建及云南的烟草野火病菌进行了该引物的适用性验证,结果表明该引物均可扩增得到大小为203 bp的单一目的条带。说明该引物对于烟草野火病菌的检测具有良好的适用性,可以用于野火病菌的分子鉴定。 展开更多
关键词 烟草野火病 丁香假单胞菌烟草致病变种 特异性引物 分子鉴定
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养殖水体三种大型爆发性海洋藻类孢子/配子实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用初探 预览 被引量:1
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作者 缪栋 苏蕾 +2 位作者 张倩倩 包卫洋 龚骏 《中国海洋大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第8期68-76,共9页
一些大型海洋藻类在近海养殖环境中快速生长且容易形成青苔,严重威胁到养殖生物的安全并可能带来巨大的经济损失。检测青苔孢子的数量与动态,理解青苔爆发的环境生态学机制是防控与预警的基础。使用PCR方法,利用特异性引物对非爆发期的... 一些大型海洋藻类在近海养殖环境中快速生长且容易形成青苔,严重威胁到养殖生物的安全并可能带来巨大的经济损失。检测青苔孢子的数量与动态,理解青苔爆发的环境生态学机制是防控与预警的基础。使用PCR方法,利用特异性引物对非爆发期的生物量进行检测,是监控有害藻类的有效方法。本工作针对海参养殖池塘三种常见的青苔藻(两种石莼Ulva cf.linza,Ulva sp.和萱藻Scytosiphon lomentaria)设计了以核糖体转录间隔区(ITS)为靶区域的种类特异性PCR引物,通过藻类和环境水样DNA对照实验检验其特异性和适用性。本工作建立了实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测养殖水体中藻类孢子/配子体含量,并实验得出该方法在三种藻类中的最低检出量,可最低检出200~400ITS rDNA拷贝。使用qPCR方法对烟台海参养殖水体2014年12月—2016年3月6个季度环境水样中的萱藻孢子/配子进行了定量检测,发现样品中萱藻孢子/配子ITS拷贝数的季节变化与青苔爆发规律呈现较高的吻合度,萱藻爆发前期伴随水体中孢子/配子量的增高,初步显示藻类爆发可用qPCR方法预测。 展开更多
关键词 藻类爆发 石莼 萱藻 特异性引物 孢子 配子 ITS rDNA 实时荧光定量PCR
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柑橘黑斑病菌的分子检测技术研究 预览
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作者 王兴红 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期130-135,共6页
为了快速区分柑橘黑斑病菌、亚洲柑橘叶点霉菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌,在ITS1和18S区域设计了针对柑橘黑斑病菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌的上游引物,以ITS4作为下游引物,并对所设计引物的特异性和退火温度进行了筛选... 为了快速区分柑橘黑斑病菌、亚洲柑橘叶点霉菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌,在ITS1和18S区域设计了针对柑橘黑斑病菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌的上游引物,以ITS4作为下游引物,并对所设计引物的特异性和退火温度进行了筛选,对引物的灵敏度进行了验证,并进行了果园疑似病斑的检测。结果表明,在退火温度为60℃时,引物Pc1/ITS4仅能从柑橘黑斑病菌中扩增出593 bp的特异性条带,引物Pct4/ITS4仅能从首都叶点霉菌中扩增出551 bp的条带,引物Pcc1/ITS4仅能从中国柑橘叶点霉菌中扩增出706 bp的条带,不能从柑橘常见病害病原菌中扩增出任何条带。特异性引物的灵敏度检测结果表明,引物Pc1/ITS4和Pct4/ITS4的检测灵敏度为200 pg,引物Pcc1/ITS4的检测灵敏度为20 pg。筛选的特异性引物Pc1/ITS4可以对果园疑似柑橘黑斑病病斑进行检测。因此,利用设计的特异性引物Pc1/ITS4、Pct4/ITS4和Pcc1/ITS4,结合简单的病原菌基因组DNA提取方法,可以在短时间内完成对病原菌的分子检测。 展开更多
关键词 柑橘黑斑病 柑橘黑斑病菌 中国柑橘叶点霉菌 首都叶点霉菌 特异性引物
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玉米圆斑病病原的快速检测 被引量:1
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作者 马庆周 李跃 +3 位作者 马乐乐 武海燕 耿月华 张猛 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期154-161,共8页
玉米生平脐蠕孢菌(Bipolaris zeicola)是引起玉米圆斑病的病原菌。本研究通过对玉米生平脐蠕孢菌及其近似种的EF-1α基因(elongation factor 1α)部分序列进行比对,设计出玉米生平脐蠕孢菌的特异性引物Y-EF-F和Y-EF-R,利用该引物可... 玉米生平脐蠕孢菌(Bipolaris zeicola)是引起玉米圆斑病的病原菌。本研究通过对玉米生平脐蠕孢菌及其近似种的EF-1α基因(elongation factor 1α)部分序列进行比对,设计出玉米生平脐蠕孢菌的特异性引物Y-EF-F和Y-EF-R,利用该引物可以从B.zeicola中扩增出137 bp的特异片段,而其余的17个参试菌株扩增结果为阴性。灵敏度实验表明该对引物可以检测到目标DNA的浓度为1 pg·μL-1。用B.zeicola接种玉米叶片、苞叶以及玉米粒,然后以接种发病的病组织DNA为模板,利用引物Y-EF-F和Y-EF-R进行PCR扩增,可以扩增出137 bp的特异性条带,而健康玉米组织DNA中未能扩增出任何条带。用B.zeicola孢子悬浮液接种大田玉米叶片,接种第3 d可以检测到未发病组织中有B.zeicola病原菌,第5 d可以看到明显的病斑。研究结果表明该方法可用于快速、准确和灵敏地检测玉米组织中的潜伏期玉米生平脐蠕孢菌,为玉米圆斑病的快速检测,进而及早采取防治措施提供积极的指导。 展开更多
关键词 玉米生平脐蠕孢 EF-1α序列 特异性引物 PCR检测
珠三角河网地区粪便污染源解析 预览 被引量:2
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作者 张杨 吴仁人 +4 位作者 张一敏 武兵文 吴孝情 陈中颖 李开明 《中国环境科学》 CSSCI CSCD 北大核心 2017年第9期3446-3454,共9页
准确识别水体中微生物污染物的宿主来源是进行针对性污染治理的基础.应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术筛选出适用于珠江三角洲河网地区的宿主特异性拟杆菌引物,并结合总细菌引物(BACT1369F/PROK1541R)、大肠埃希氏菌引物(EC23S857F/EC23S8... 准确识别水体中微生物污染物的宿主来源是进行针对性污染治理的基础.应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术筛选出适用于珠江三角洲河网地区的宿主特异性拟杆菌引物,并结合总细菌引物(BACT1369F/PROK1541R)、大肠埃希氏菌引物(EC23S857F/EC23S857R)、拟杆菌通用引物(GenBac3F/GenBac3R)及粪大肠菌群(Fecal coliform)和大肠埃希氏菌(Escherichia coli)等常规水质指标对研究区域的水体进行分析,结果表明:人源(qHS601F/qBac725R)、牛源(BacB2-590F/Bac708Rm)、猪源(Bac41F/Bac163R)及鸡源(qC160F-HU/qBac265R-HU)特异性拟杆菌引物在珠江三角洲地区同时具有较高的灵敏度和较强的特异性,适用于目标研究区域.选取的14处城市地表水均受到粪便污染,污染源分别为人、反刍动物和禽类粪便.水体中各污染源强度为人源>反刍动物>鸡源,其中人源特异性拟杆菌浓度与粪大肠菌群(Faecal coliform)、大肠埃希氏菌(Escherichia coli)及大肠埃希氏菌引物(EC23S857F/EC23S857R)浓度具有较好的相关性(P<0.05),说明人粪是各地表水中微生物污染的主要贡献源. 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 微生物污染 拟杆菌 特异性引物 珠江三角洲地区
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使用ERIC-PCR技术检测嗜酸乳杆菌 被引量:1
16
作者 侯少阳 张玉 +3 位作者 谢君 程娟 章朦玥 张怡轩 《沈阳药科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期783-787,795共6页
目的利用ERIC(enterobacterial repetitive intergenic consensus)-PCR技术,设计引物,特异性检测嗜酸乳杆菌。方法以本实验室保藏的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)SYP-B2340基因组DNA为模板,通过四因素三水平正交试验,优化嗜酸... 目的利用ERIC(enterobacterial repetitive intergenic consensus)-PCR技术,设计引物,特异性检测嗜酸乳杆菌。方法以本实验室保藏的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)SYP-B2340基因组DNA为模板,通过四因素三水平正交试验,优化嗜酸乳杆菌ERIC-PCR反应体系,对所获得的PCR条带进行测序和分析,进一步设计特异性引物,实现对嗜酸乳杆菌的特异性鉴别。结果通过四因素三水平正交实验,成功优化ERIC-PCR反应条件;根据ERIC-PCR片段,设计三对特异性引物,可在多种混合基因组DNA中灵敏鉴别出嗜酸乳杆菌。结论基于ERIC-PCR设计的特异性引物,可简便、快速的鉴定嗜酸乳杆菌。 展开更多
关键词 ERIC-PCR 嗜酸乳杆菌 特异性引物 鉴别
利用多重PCR技术同时检测6种棉花转化体的方法研究 预览 被引量:2
17
作者 李忆 尹全 刘勇 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期487-494,共8页
【目的】建立1种转基因棉花多重聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。【方法】试验选择6种转基因棉花作为多重PCR检测对象,通过引物终浓度配比和引物退火温度的两要素全组合优化多重PCR反应体系,并分析方法灵敏... 【目的】建立1种转基因棉花多重聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测方法。【方法】试验选择6种转基因棉花作为多重PCR检测对象,通过引物终浓度配比和引物退火温度的两要素全组合优化多重PCR反应体系,并分析方法灵敏度。【结果】多重PCR较优的MON1445、GHB614、MON15985、MON88913、LLCOTTON25、MON531引物终浓度为0.25、0.30、0.25、0.16、0.30、0.20μmol·L-1,较优引物退火温度为56℃,方法灵敏度为66个拷贝棉花基因组。利用盲样对上述体系的验证结果显示,所有盲样扩增条带与其含有的转基因转化体完全一致。【结论】本研究建立的体系可用于6种棉花转化体的快速检测。 展开更多
关键词 棉花 多重PCR 特异性引物 检测
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阿胶的半巢式-多重PCR鉴别方法研究 预览 被引量:2
18
作者 张慧 孙海新 +2 位作者 许娜 黄金发 孙丕春 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2016年第17期103-106,共4页
采用半巢式-多重PCR(聚合酶链式反应)法鉴别阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分。首先采用液氮研磨法从阿胶中提取高质量的DNA(脱氧核糖核酸),以通用引物P1和P2进行第一轮扩增,并将扩增产物作为第二轮PCR的模板;再以包含通用引物P1和4... 采用半巢式-多重PCR(聚合酶链式反应)法鉴别阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分。首先采用液氮研磨法从阿胶中提取高质量的DNA(脱氧核糖核酸),以通用引物P1和P2进行第一轮扩增,并将扩增产物作为第二轮PCR的模板;再以包含通用引物P1和4种物种(驴、马、猪和牛)特异性引物A、B、C和D的混合引物进行第二轮多重PCR扩增;最后电泳检测第二轮扩增产物,根据电泳条带的分子量大小,判断阿胶产品的动物原材料是否掺假。结果表明,采用本方法可观察到不同动物DNA分子量之间的明显差异,通过DNA电泳结果直接判断阿胶产品中是否掺假。 展开更多
关键词 半巢式-多重PCR法 阿胶 鉴别 通用引物 特异性引物
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利用多重PCR诊断水稻白叶枯病和细菌性条斑病的复合发生 被引量:3
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作者 李云飞 陈雪娇 +5 位作者 杨雪 张爱芳 谷春艳 高同春 陈雨 姚剑 《植物检疫》 北大核心 2016年第1期48-52,共5页
为准确检测水稻白叶枯病菌、细菌性条斑病菌及这两种病菌的复合发生,利用软件DNAStar分析比较这两种菌的部分核酸序列,设计了检测这两种病菌的特异性引物。引物Xoo F-Xoo R能特异性扩增出水稻白叶枯病菌中一条大小162 bp的条带;引物Xooc... 为准确检测水稻白叶枯病菌、细菌性条斑病菌及这两种病菌的复合发生,利用软件DNAStar分析比较这两种菌的部分核酸序列,设计了检测这两种病菌的特异性引物。引物Xoo F-Xoo R能特异性扩增出水稻白叶枯病菌中一条大小162 bp的条带;引物Xooc F1-Xooc R1和Xooc F2-Xooc R2能够分别特异性扩增出水稻细菌性条斑病菌中690 bp和945 bp的条带。通过优化PCR反应条件,成功建立了多重PCR技术,可以对不同国家的水稻白叶枯病菌和细菌性条斑病菌进行准确检测,对由这两种病菌引起的复合侵染实现了准确诊断。 展开更多
关键词 水稻白叶枯病菌 水稻细菌性条斑病菌 特异性引物 多重PCR 复合侵染
新疆4种林木腐烂病菌PCR快速检测技术研究 预览 被引量:1
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作者 郭开发 姚兆群 +2 位作者 吴彩兰 向本春 赵思峰 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1843-1849,共7页
【目的】建立新疆林木腐烂病菌的快速PCR检测方法,为新疆林木腐烂病的早期测报和防治提供技术依据。【方法】针对新疆林木腐烂病菌主要种苹果黑腐皮壳(Valsa mali),污黑腐皮壳(Valsa.sordida),Leucostoma niveum和Valsa.malicola的r... 【目的】建立新疆林木腐烂病菌的快速PCR检测方法,为新疆林木腐烂病的早期测报和防治提供技术依据。【方法】针对新疆林木腐烂病菌主要种苹果黑腐皮壳(Valsa mali),污黑腐皮壳(Valsa.sordida),Leucostoma niveum和Valsa.malicola的r DNA-ITS特异性区段设计属专化型引物和种特异性引物。【结果】属专化型引物VF/VR可以从腐烂病菌中扩增一条424 bp的条带,检测灵敏度为10 pg/m L;设计的4对种特异性引物分别可对4种腐烂病菌V.mali,V.sordida,L.niveum,V.malicola检测到263 bp、423 bp、307 bp、308 bp的条带,检测灵敏度均为10 pg/m L。【结论】采用腐烂病菌Valsa的r DNA-ITS特异性区段设计的引物及PCR方法,可用于新疆林木腐烂病的快速分子检测。 展开更多
关键词 林木 腐烂病菌 r DNA-ITS PCR检测 特异性引物
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