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基于分子生物学特异性扩增的方法鉴别菲牛蛭 预览
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作者 过立农 刘杰 +5 位作者 杨宝 昝珂 郑健 马双成 马宁 李昀铮 《中国药事》 CAS 2018年第9期1239-1244,共6页
目的:通过DNA条形码鉴定和建立特异性引物扩增的方法,有效区分菲牛蛭与其他水蛭品种。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对水蛭样品的COI序列进行扩增,利用MEGA 6.06软件通过建树法进行NJ树聚类分析,针对菲牛蛭素的编码基因序列、利用Pr... 目的:通过DNA条形码鉴定和建立特异性引物扩增的方法,有效区分菲牛蛭与其他水蛭品种。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对水蛭样品的COI序列进行扩增,利用MEGA 6.06软件通过建树法进行NJ树聚类分析,针对菲牛蛭素的编码基因序列、利用Primer Premier 5软件进行引物设计,对经设计、合成的8对引物通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳实验进行筛选,并确定特异性引物的最佳退火温度。结果:通过COI序列的NJ树聚类分析可以确定20批水蛭样品中的9批菲牛蛭样品,经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出8对引物进行合成,通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳预实验筛选出引物7、为最佳实验引物,且确定了引物7的最佳退火温度为49℃。结论:通过COI序列的DNA条形码研究,确定了样品中的菲牛蛭,通过特异性引物PCR扩增和电泳检测,有效地将菲牛蛭与其他水蛭样品进行区分,为菲牛蛭的分子生物学鉴定方法提供了参考。 展开更多
关键词 菲牛蛭 聚合酶链式反应(PCR) COⅠ DNA条形码 特异性扩增
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特异性扩增技术鉴定龟甲与鳖甲 预览
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作者 李楠 虞平添 +7 位作者 焦兆群 陈立群 郑阳 黄学贵 陈红杰 蔡宝昌 杨欢 沈玉萍 《中成药》 CSCD 北大核心 2018年第10期2328-2333,共6页
目的 基于特异性扩增建立动物药龟甲与鳖甲的真伪鉴定技术。方法 根据龟甲与鳖甲及3种常见伪品的全基因组序列的差异设计了5对特异性引物(PCR、PTS、PMS、PPS、PAF),采用SDS法、酚仿抽提法从龟甲与鳖甲中提取与纯化DNA,并通过聚合酶... 目的 基于特异性扩增建立动物药龟甲与鳖甲的真伪鉴定技术。方法 根据龟甲与鳖甲及3种常见伪品的全基因组序列的差异设计了5对特异性引物(PCR、PTS、PMS、PPS、PAF),采用SDS法、酚仿抽提法从龟甲与鳖甲中提取与纯化DNA,并通过聚合酶链式反应(PCR)对目标片段进行扩增,产物以琼脂糖凝胶电泳分析及凝胶成像系统检测,并根据电泳条带的有无及分子量大小以鉴定真伪。结果 龟甲与鳖甲及其常见伪品巴西龟、花龟、佛罗里达鳖的DNA经扩增后分别在120、120、81、105、114 bp处产生条带,且引物间无交叉反应,体现出很强的专属性,5个物种DNA的检出限为1 ng。自制药材、饮片、掺伪品均扩增出与目的片段相一致的条带。在市售样品中,18批龟甲和20批鳖甲经鉴定为正品,2批龟甲药材经鉴定为来源于巴西龟的伪品。结论 本文所建立的技术可准确、快速地鉴定龟甲与鳖甲的真伪,有助于监控其产品质量。 展开更多
关键词 龟甲 鳖甲 掺伪 特异性扩增
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快速鉴定新菠萝灰粉蚧的分子标记技术 预览
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作者 马光昌 王晓妮 +4 位作者 牛黎明 龚治 温海波 金启安 彭正强 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期893-897,共5页
新菠萝灰粉蚧Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley)是一种严重为害剑麻、番荔枝等经济作物的入侵性害虫。由于粉蚧类昆虫体型较小,且外部形态十分相似,难以达到快速准确识别。本文利用分子标记技术,研究了新菠萝灰粉蚧的快速鉴定方法... 新菠萝灰粉蚧Dysmicoccus neobrevipes(Beardsley)是一种严重为害剑麻、番荔枝等经济作物的入侵性害虫。由于粉蚧类昆虫体型较小,且外部形态十分相似,难以达到快速准确识别。本文利用分子标记技术,研究了新菠萝灰粉蚧的快速鉴定方法。通过对新菠萝灰粉蚧、扶桑绵粉蚧、双条拂粉蚧、杰克贝尔氏粉蚧、大洋臀纹粉蚧、木槿曼粉蚧、甘蔗粉蚧和木瓜粉蚧等8种粉蚧的序列进行分析,针对新菠萝灰粉蚧设计了1对特异性引物,其扩增片段大小为552 bp(Gen Bank登录号为MF 363108),该引物对其它7种粉蚧没有扩增能力。该引物不仅对新菠萝灰粉蚧成虫具有扩增效能,对1龄若虫、2龄若虫和3龄若虫都具有同样的扩增能力,其最低检出阈值为437.5 pg/μL。该技术的建立,实现了在剑麻等苗木调运过程中对新菠萝灰粉蚧的快速准确鉴定,同时对新菠萝灰粉蚧的检疫和监测也具有重要的意义。 展开更多
关键词 新菠萝灰粉蚧 分子标记 快速鉴定 特异性扩增
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Development of a reverse transcription quantitative polymerase chain reaction-based assay for broad coverage detection of African and Asian Zika virus lineages
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作者 Yang Yang Gary Wong +9 位作者 Baoguo Ye Shihua Li Shanqin Li Haixia Zheng Qiang Wang Mifang Liang George F Gao Lei Liu Yingxia Liu Yuhai Bi 《中国病毒学:英文版》 CAS CSCD 2017年第3期199-206,共8页
Zika 病毒(ZIKV ) 是在最近的时间以内全球很快传播了的一个树木病毒。正在积累把 ZIKV 感染与 Guillain-Barr 联系的证据?
关键词 逆转录聚合酶链反应 病毒检测 覆盖 血统 亚洲 非洲 反转录聚合酶链反应 特异性扩增
两种快速鉴定甘草方法的比较 被引量:2
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作者 马敏敏 杨志刚 +3 位作者 何芳 蒋丹 孟菊 黄耀江 《中药材》 CSCD 北大核心 2016年第12期2725-2729,共5页
目的:建立快速检测中药材甘草的荧光定量PCR和环介导等温核酸扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)两种技术,并对它们的特异性和灵敏性进行比较。方法:以中药材甘草作为实验对象,提取DNA后,用设计的PCR引物及LAMP引... 目的:建立快速检测中药材甘草的荧光定量PCR和环介导等温核酸扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)两种技术,并对它们的特异性和灵敏性进行比较。方法:以中药材甘草作为实验对象,提取DNA后,用设计的PCR引物及LAMP引物组合分别对甘草进行普通PCR、荧光定量PCR以及LAMP实验,检测引物的特异性,同时建立模板DNA的浓度梯度,对荧光定量PCR及LAMP的灵敏性进行检测。结果:甘草的特异性序列可以通过荧光定量PCR得到有效扩增,而与甘草相近的混伪品结果显示阴性。荧光定量PCR最低可检测到甘草的浓度为0.67×10^-4ng/μL。在LAMP特异性检测中,甘草出现浊度值,其他混伪品显示阴性。灵敏度性检测中,LAMP检测在60 min反应时间内同样检测到的甘草的最低DNA浓度为0.67×10^-4ng/μL,反应产物加入荧光染料SYBR GreenⅠ后反应液呈现肉眼可观察的明显的亮绿色。结论:LAMP检测和real-time PCR检测具有相似的特异性、灵敏度和精确性,但LAMP检测方法更为简单、方便,所需时间更短,而且不需要昂贵的仪器。因此,LAMP检测中药的方法更适合于对中药材甘草检测的推广使用。 展开更多
关键词 甘草 荧光定量PCR 环介导等温核酸扩增 特异性扩增 灵敏度
人结直肠癌BRAF基因V600E突变的检测方法 预览
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作者 徐显暑 《中国高新技术企业》 2016年第24期72-73,共2页
为了探讨人结直肠癌BRAF基因V600E突变的检测方法,文章通过等位基因特异性扩增技术检测80例结直肠癌石蜡标本的BRAFV600E突变性,且与Sanger测序法进行对比,得出结论:通过等位基因PCR技术检测人结直肠癌BRAF基因V600E突变,与测序法对比... 为了探讨人结直肠癌BRAF基因V600E突变的检测方法,文章通过等位基因特异性扩增技术检测80例结直肠癌石蜡标本的BRAFV600E突变性,且与Sanger测序法进行对比,得出结论:通过等位基因PCR技术检测人结直肠癌BRAF基因V600E突变,与测序法对比灵敏度、简便性、快速性更高,对人肿瘤BRAFV600E突变具有较高的筛查价值。 展开更多
关键词 人结直肠癌 等位基因 特异性扩增 BRAF基因 V600E突变
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Cross-specific amplification of microsatellite DNA markers in Shorea platyclados 预览
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作者 Asif J. Muhammad Charles H. Cannon Wickneswari Ratnam 《林业研究:英文版》 CAS CSCD 2016年第1期27-32,共6页
在东南亚洲的 megadiverse 森林里,几百木材种是经济地重要的,但是仅仅一些 taxa 的人口遗传被知道。在密切相关的 taxa 之中的 microsatellite loci 的跨 specific 扩大能提高我们的能力学习并且设法以前未学得的种类。我们成功地在 ... 在东南亚洲的 megadiverse 森林里,几百木材种是经济地重要的,但是仅仅一些 taxa 的人口遗传被知道。在密切相关的 taxa 之中的 microsatellite loci 的跨 specific 扩大能提高我们的能力学习并且设法以前未学得的种类。我们成功地在 Shorea platyclados 利用了 STMS 标记,原来为 Shorea curtisii 发展了。我们成功地试试的六教材对生产了期望的尺寸的 PCR 产品。观察的等位基因的数字从 10 ~ 14 , 12 等位基因的一般水准每地点被检测。高期望并且遵守杂合现象的 A 被观察,它越过测试的所有六 loci 在所有人口之中从 0.718 ~ 0.827 。Microsatellite DNA 标记对高产量高度多态、 co 主导、可再现、顺从基因分析。总的来说, microsatellite loci 的跨 specific 扩大看起来由众多的因素复杂。当途径可能为糟糕已知的种类的本地管理和保存是有效的时,结果必须小心地被解释。 展开更多
关键词 微卫星DNA标记 特异性扩增 微卫星位点 等位基因数 管理能力 生物多样性 群体遗传学 微卫星标记
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Multiplex PCR Assay Establishment for Detection of H5, H9 Subtypes Avian Influenza Virus and Duck Tembusu Virus 预览
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作者 Tang Weiguo Li Haiqin +2 位作者 Fu Guanghua Huang Yu Wei Qipeng 《动物与饲料科学:英文版》 CAS 2016年第1期31-33,共3页
The paper aimed to establish a rapid multiplex PCR assay for detection of H5,H9 subtype avian influenza virus( VIA) and duck Tembusu virus( DTMUV). According to the HA gene sequences of H5 and H9 AIV and NS5 gene of D... The paper aimed to establish a rapid multiplex PCR assay for detection of H5,H9 subtype avian influenza virus( VIA) and duck Tembusu virus( DTMUV). According to the HA gene sequences of H5 and H9 AIV and NS5 gene of DTMUV in Gen Bank,three sets of primer specific to these three kinds of viruses were designed,respectively. The multiplex PCR for simultaneous detection of AIV( H5,H9) and DTMUV was established,and was applied in clinical. The specificity and sensitivity of the multiplex PCR were tested. The results showed that the assay could specifically amplify the gene fragments of H5 AIV( 380 bp),H9AIV( 732 bp),and DTMUV( 250 bp),and were all negative for other duck viruses. This method showed the sensitivity of 533 pg / μL for H5 AIV,56 pg / μL for H9,and 6. 6 ng / μL for DTMUV. Additionally,the detection results of 200 clinical samples indicated that this multiplex PCR method was a rapid,sensitive and specific tool for clinical sample detection. 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 多重PCR检测 PCR检测方法 鸭病毒 H5亚型 特异性扩增 检测灵敏度 临床样品
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QPCR检测人细小病毒B19方法的建立及其在病毒去除工艺验证中的应用
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作者 许锬 吕家成 +2 位作者 容新宗 黄琰 郑朝共 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期916-919,共4页
目的建立1种检测人细小病毒(B19)的荧光定量PCR方法,并应用于纳米膜过滤去除病毒的工艺验证,评价在血液制品生产过程中纳米膜过滤去除B19的效果。方法用上游引物(P1)5’-GGC ACC TCT CAA AAC ACT-3’和下游引物(P2)5’-C CAC TCC ... 目的建立1种检测人细小病毒(B19)的荧光定量PCR方法,并应用于纳米膜过滤去除病毒的工艺验证,评价在血液制品生产过程中纳米膜过滤去除B19的效果。方法用上游引物(P1)5’-GGC ACC TCT CAA AAC ACT-3’和下游引物(P2)5’-C CAC TCC TTG CTG ATA CTC-3’,在95℃3min、95℃10s52℃10 s72℃10S条件下扩增40个循环,建立检测B19的QPCR方法并验证该方法的专一性、重复性和灵敏性;最后用该方法检测纳米膜过滤去除制品中B19的效果。结果该方法实验内和实验间的精密度均〈5%,最低检测限为50 copies/μL;经检测纳米膜过滤可使样品中B19滴度下降3.8Logs。结论成功建立了具有良好专一性、重复性和灵敏性的荧光定量PCR方法。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 特异性扩增 病毒去除 纳米膜过滤
金纳米粒子对聚合酶链式反应体系中长链DNA特异性扩增的效应 预览
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作者 刘美荣 朱树华 周杰 《山东农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2013年第3期391-395,共5页
以乙烯受体基因ETR1(2500bp)和山梨醇脱氢酶基因(SDH)(1100bp)为材料,研究了不同浓度金纳米粒子对聚合酶链式反应(PCR)体系中大于1000bp的长链DNA特异性扩增的效应。结果表明,金纳米粒子显著增强了ETR1和SDH在PCR时的特异性... 以乙烯受体基因ETR1(2500bp)和山梨醇脱氢酶基因(SDH)(1100bp)为材料,研究了不同浓度金纳米粒子对聚合酶链式反应(PCR)体系中大于1000bp的长链DNA特异性扩增的效应。结果表明,金纳米粒子显著增强了ETR1和SDH在PCR时的特异性扩增,有效降低了非特异性扩增。在ETR1和SDH的PCR中,金纳米粒子适宜浓度为0.4nmol·L^-1。在50℃-62℃的退火温度范围内,金纳米粒子均能够显著增强ETR1和SDH的特异性扩增。因此,金纳米粒子不仅提高了1000bp以上的长链DNA在PCR扩增的特异性,而且拓宽了PCR的退火温度范围。 展开更多
关键词 金纳米粒子 聚合酶链式反应 特异性扩增 特异性扩增 长链DNA
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Full screening and accurate subtyping of HLA-A*02 alleles through group-specific amplification and mono-allelic sequencing
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作者 Shengli Song Miaomiao Han Han Zhang Yuanxia Wang Hong Jiang 《中国免疫学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2013年第6期490-496,共7页
HLA-A&#x0002A; 02 是在人的最流行、多态的主要 histocompatibility 建筑群(MHC ) 等位基因家庭。功能的差别在子类型之中被揭示了,要求 HLA-A&#x0002A 的进一步的 subtyping; 02 在基本、临床的背景。然而,快成长多型性... HLA-A&#x0002A; 02 是在人的最流行、多态的主要 histocompatibility 建筑群(MHC ) 等位基因家庭。功能的差别在子类型之中被揭示了,要求 HLA-A&#x0002A 的进一步的 subtyping; 02 在基本、临床的背景。然而,快成长多型性使传统的基于教材或基于探查的打字方法变为不切实际并且导致在直接基于顺序的打字增加歧义。在这研究,我们联合了组特定的扩大并且为完全的屏蔽设计并且验证一个简单计划的单音突变而产生之遗传因子的定序,所有 540 的精确 subtyping 报导了 HLA-A&#x0002A; 02 等位基因。这个计划能在平淡的实验室被执行与对 HLA-A&#x0002A 的兴趣便于研究; 02。 展开更多
关键词 HLA-A 特异性扩增 分型方法 等位基因 基因测序 主要组织相容性复合体 筛选 基因家族
基于随机扩增多态DNA的序列特异性扩增标记法对乌苏里貉食毛症的分析 预览
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作者 魏来 付晶 +1 位作者 杨春山 白秀娟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2012年第3期 41-43,共3页
貉(Nyctereutes)在动物分类上属食肉目(Carnivora),犬科(Canidae),貉属(Nyctereutes genus),别名貉子,是珍贵的毛皮动物。其皮是制做皮大衣、皮领、皮帽的高级原料。食毛症是笼养貉的常见病,该病导致貉被毛粗乱,轻者造成针毛、... 貉(Nyctereutes)在动物分类上属食肉目(Carnivora),犬科(Canidae),貉属(Nyctereutes genus),别名貉子,是珍贵的毛皮动物。其皮是制做皮大衣、皮领、皮帽的高级原料。食毛症是笼养貉的常见病,该病导致貉被毛粗乱,轻者造成针毛、底绒参差不齐,尾根裸露;严重者皮肤外露,甚至出血、 展开更多
关键词 乌苏里貉 随机扩增多态DNA 食毛症 特异性扩增 标记法 序列 动物分类 毛皮动物
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SYBR荧光实时定量PCR检测非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平 预览 被引量:8
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作者 陈建 李敏伟 +2 位作者 张国兵 李菌 王临润 《浙江大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期,共6页
目的:建立荧光实时定量PCR技术,检测非小细胞肺癌组织与外周血RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平。方法:分别构建RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin质粒标准品,以SYBR荧光实时定量PCR分析,制备标准曲线,对非小细胞肺癌组织与外周血中R... 目的:建立荧光实时定量PCR技术,检测非小细胞肺癌组织与外周血RRM1和ERCC1及BRCA1基因表达水平。方法:分别构建RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin质粒标准品,以SYBR荧光实时定量PCR分析,制备标准曲线,对非小细胞肺癌组织与外周血中RRM1、ERCC1和BRCA1及管家基因β-actin的mRNA进行检测。结果:标准曲线呈良好的线性关系。标准品的熔解曲线均呈单峰,特异性良好,说明基本无非特异性扩增。结论:所建SYBR荧光实时定量PCR方法操作简便,费用低,特异性好,准确度、灵敏度高,为后续研究构建了理想的平台。 展开更多
关键词 SYBR 荧光实时定量 PCR检测 非小细胞 肺癌组织 外周血 RRM1 ERCC1 BRCA1基因 表达水平 Detection quantitative real-time peripheral blood lung cancer cell gene expression 特异性扩增 管家基因 标准曲线
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螺旋粉虱SCAR标记的建立与应用 被引量:5
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作者 张桂芬 吴霞 +3 位作者 郭建英 刘万学 彭正强 万方浩 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期385-390,共6页
螺旋粉虱Aleurodicus dispersus Russell是一种严重威胁果树、蔬菜和园林植物生产的入侵性害虫。由于该粉虱的卵和初孵若虫体型微小,与其它粉虱类害虫形态相似,且易于携带传播,难以快速准确鉴别,本研究采用特征序列扩增区域(SCAR)标记... 螺旋粉虱Aleurodicus dispersus Russell是一种严重威胁果树、蔬菜和园林植物生产的入侵性害虫。由于该粉虱的卵和初孵若虫体型微小,与其它粉虱类害虫形态相似,且易于携带传播,难以快速准确鉴别,本研究采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,通过对目的片段的克隆与测序,设计螺旋粉虱特征片段扩增引物,并对该引物的种特异性和灵敏性进行检验。结果显示,利用SCAR标记法获得了螺旋粉虱特异性片段(632bp,GenBank登录号为HM240855),根据此片段的碱基序列设计1对螺旋粉虱特异性引物,其扩增片段大小为307bp;该对引物只对螺旋粉虱具有扩增能力,对近缘种、属粉虱不具有扩增效果。该引物不仅对成虫具有良好的扩增效能,对单粒卵、1~3龄若虫和拟蛹等亦具有同样的扩增能力,其最低检出阈值为1/6400头成虫。从而表明,该SCAR标记技术完全可用于螺旋粉虱的鉴定识别及其检测和监测。 展开更多
关键词 螺旋粉虱 SCAR标记 分子检测 特异性扩增 口岸检疫
可用于黑刺粉虱快速鉴定的SCAR分子标记技术 被引量:8
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作者 刘循 万方浩 张桂芬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期895-900,共6页
针对粉虱类害虫难以准确快速地进行形态鉴别的问题,以局部发生的黑刺粉虱Aleurocanthus spiniferus(Quaintance)为对象,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,研究其快速分子检测技术。利用SCAR标记技术获得了长度为987bp的黑刺粉... 针对粉虱类害虫难以准确快速地进行形态鉴别的问题,以局部发生的黑刺粉虱Aleurocanthus spiniferus(Quaintance)为对象,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,研究其快速分子检测技术。利用SCAR标记技术获得了长度为987bp的黑刺粉虱特异性片段(GenBank登录号为FJ613323),根据此片段的碱基序列设计黑刺粉虱特异性引物1对(AS—F518/AS—R938),其扩增片段为421bp。种特异性检验结果显示,该对引物只对黑刺粉虱的基因组具有扩增能力,对同域发生的桔绿粉虱Dialeurodes citri(Ashmead)以及其他种类的粉虱如烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)B型、Q型、ZHJ-1型和ZHJ-2型,温室粉虱Trialeurodes vaporariorum(Westwood)以及螺旋粉虱Aleurodicus disperses(Russell)等的基因组不具有扩增效果。该引物不仅对成虫具有良好的扩增效能,对卵、2龄若虫和拟蛹等亦具有同样的扩增能力,其最低检出限为1/1920头成虫。该技术体系的建立在茶树和柑桔苗木调运的害虫检疫和监测/检测中具有重要意义。 展开更多
关键词 黑刺粉虱 RAPD SCAR 快速鉴定 特异性扩增
环介导等温扩增基因诊断技术及其在动物病毒病诊断中的应用 预览
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作者 信爱国 蒋文俊 《云南畜牧兽医》 2008年第4期 1-3,共3页
基因扩增诊断技术是分子生物学领域中的一项重要研究手段,人们已经建立了多种方法,其中PCR技术是众多方法中最为常用的一种,但是PCR在实际应用中存在许多不足之处:(1)目标靶基因容易被污染;(2)常引起非特异性扩增;(3)多种... 基因扩增诊断技术是分子生物学领域中的一项重要研究手段,人们已经建立了多种方法,其中PCR技术是众多方法中最为常用的一种,但是PCR在实际应用中存在许多不足之处:(1)目标靶基因容易被污染;(2)常引起非特异性扩增;(3)多种因素可以产生抑制扩增反应;(4)需要比较昂贵的PCR仪;(5)扩增反应时间较长。一般需要几个小时,不利于在基层实验室推广应用。为克服上述不足,2000年Notomi等建立了一种新的体外扩增特异性DNA片段的分子生物学技术,即环介导的等温扩增技术(Loop—mediated isothermal amplification,LAMP)。 展开更多
关键词 基因诊断技术 应用 等温 介导 分子生物学技术 病毒病 PCR技术 特异性扩增
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KRT14分子诊断中两种去除假基因干扰的扩增方法比较 预览
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作者 袁海昕 肖白 +1 位作者 梁燕 周艳 《医学研究杂志》 2007年第11期 107-109,共3页
目的已报道有3种方法可以去除KRT14P对于KRT14分子诊断的干扰,分别为从活检组织中提取RNA法、用识别KRT14P的限制性内切酶酶切基因组DNA法和长距离特异性扩增KRT14法。本文建立特异性扩增法并和内切酶法就能否完全去除假基因干扰做比... 目的已报道有3种方法可以去除KRT14P对于KRT14分子诊断的干扰,分别为从活检组织中提取RNA法、用识别KRT14P的限制性内切酶酶切基因组DNA法和长距离特异性扩增KRT14法。本文建立特异性扩增法并和内切酶法就能否完全去除假基因干扰做比较。方法据文献报道KRT14P外显子2上有AluI的酶切位点而KRT14外显子2上没有该位点,用AluI消化基因组DNA。部分消化和完全消化的酶切产物作为模板用于下一步KRT14的分子诊断。比对KRT14和KRT14P的区别,设计特殊引物对使其包括3’末端的碱基和KRT14P错配而和KRT14完全匹配,这些引物对在PCR过程中将只扩增KRT14而去除假基因的干扰。结果部分酶切消化的基因组DNA因为不能完全去除KRT14P可能导致假阳性结果。应用本文中的特殊引物对,能够很好地去除KRT14P的干扰。结论我们采用的特异性扩增法去除KRT14P较酶切法经济有效。 展开更多
关键词 角蛋白14 分子诊断 假基因 特异性扩增
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暗纹东方鲀基因组DNA提取及生长激素基因Exon4扩增 预览 被引量:2
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作者 黄军 陈国宏 +2 位作者 许盛海 朱金金 严美姣 《水利渔业》 北大核心 2007年第3期 21-23,共3页
以暗纹东方鲀的肌肉、尾鳍为样品,对基因组DNA的提取进行了初步研究,从尾鳍中提取的DNA质量较好。新鲜组织、无水乙醇处理的尾鳍样品得到的DNA完全满足后续实验的开展;而从10%福尔马林溶液处理的尾鳍样品中提取的DNA得率太低,10μg/mL... 以暗纹东方鲀的肌肉、尾鳍为样品,对基因组DNA的提取进行了初步研究,从尾鳍中提取的DNA质量较好。新鲜组织、无水乙醇处理的尾鳍样品得到的DNA完全满足后续实验的开展;而从10%福尔马林溶液处理的尾鳍样品中提取的DNA得率太低,10μg/mL以下。运用巢式PCR成功扩增了暗纹东方鲀生长激素基因外显子4,为下一步的SNPs检测以及克隆测序创造了必要条件。 展开更多
关键词 暗纹东方鲀 基因组DNA 特异性扩增 巢式PCR
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分析化学 预览
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《中国学术期刊文摘》 北大核心 2007年第23期 43-48,共6页
胃癌及胃炎的临床诊断中红外光谱方法研究;新型三维原子场全息相互作用矢量用于几类典型药物体系的QSAR研究;实时荧光等位基因特异性扩增法快速检测K-ras癌基因点突变;一种基于磁性纳米粒子PCR的高通量SNP分型方法;食品包装材料上... 胃癌及胃炎的临床诊断中红外光谱方法研究;新型三维原子场全息相互作用矢量用于几类典型药物体系的QSAR研究;实时荧光等位基因特异性扩增法快速检测K-ras癌基因点突变;一种基于磁性纳米粒子PCR的高通量SNP分型方法;食品包装材料上油墨中残留烷基苯成分分析及其迁移性的GC—MS研究. 展开更多
关键词 分析化学 磁性纳米粒子 食品包装材料 基因点突变 特异性扩增 临床诊断 QSAR 相互作用
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番茄溃疡病菌分子检测技术 预览 被引量:10
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作者 付鹏 郭亚辉 +1 位作者 张晓梅 郭坚华 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期 118-122,共5页
对中国三类检疫性有害生物番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis )进行PCR检测方法的研究.利用1对特异性引物ClaF1-ClaR2,对5个番茄溃疡病菌进行特异性扩增,得到了一段长250 bp的PCR产物,参试的其他棒形细菌以... 对中国三类检疫性有害生物番茄溃疡病菌(Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis )进行PCR检测方法的研究.利用1对特异性引物ClaF1-ClaR2,对5个番茄溃疡病菌进行特异性扩增,得到了一段长250 bp的PCR产物,参试的其他棒形细菌以及其他属的植物病原细菌均无扩增产物.该检测方法特异性强、灵敏度高,在 50 pg 的模板DNA浓度下还能检测到很强的条带.利用此引物可以检测到1×105个菌体. 展开更多
关键词 溃疡病菌 分子检测技术 番茄 检疫性有害生物 PCR检测方法 植物病原细菌 特异性引物 特异性扩增 PCR产物 DNA浓度 扩增产物 sp. sub 灵敏度
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